急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因异构体的临床意义*
作者：刘陶文 黎金庆 周润华 莫东华 刘 健 马 越
单位：刘陶文 黎金庆 周润华 莫东华 刘 健 马 越(桂林医学院生物工程研究所、血液病研究室 广西桂林市 541001)
关键词：白血病；早幼粒细胞；聚合酶链反应；PML-RARα融合基因
华夏医学990406 摘要 目的：探讨急性早幼粒细胞白血病(APL)PML-RARα融合基因异构体及其临床关系。方法：用逆转录/聚合酶链反应(RT/PCR)检测21例初诊APL患者细胞中PML-RARα融合基因转录本，并分析其对临床特征的可能不同影响。结果：在ATRA诱导治疗过程中，短型PML-RARα异构体APL组的早期死亡和复发率(4/8)(50%)高于长型PML-RARα异构体组(2/13)(15.4%)；与长型异构体相反，存活期2月至2年患者含短型异构体的比例(75%)大于存活期2年以上组(33.3%)；未观察到患者血液学参数改变与不同PML-RARα异构体有关。结论：与长型PML-RARα异构体组APL患者相比，短型PML-RARα异构体组的预后可能更差。
, http://www.100md.com
中图分类号 R733.71
Clinical Relevance of PML-RARα Fusion Gene Isoforms in Patients with Acute Promyelocytic Leukemia
Liu Taowen,Li Jinqing,Zhou Runhua,et al.
Hematological Laboratory,Institute of Bioengineering.Guilin Medical College(Guilin 541001)
Abstract Objective:To illustrate the clinical relevance of distinct PML-RARα fusion gene isoforms in acute promyelocytic leukemia(APL).Methods:The retrotranscriptase/polymerase chain reaction(RT/PCR) was used to evaluate the clinical relevance of the long (L) or short (S) PML-RARα fusion mRNA isoforms in 21 initial patients with APL.Results:There were more early deaths during the all-transretinoic acid(ATRA) induction treatment and more relapses within 2 years of complete remission (CR) in the S-type (4 of 8 case) than that in the L-type group (2 of 13).Compared with L-type isoforms,the ratio of S-type was more in patients survived 2 months through 2 years than those survived beyond 2 years (75% Vs 33.3%). It was not found that relations between hematological parameters and PML-RARα isoforms.And PML-RARα isoforms were remained negative test in 4 cases of CR 3 years more.Conclusion:The S-type PML-RARα isoforms may be involved much poor prognosis than L-type PML-RARα isofoms in APL.
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Key words leukemia;promyelocyte;polymerase chain reaction;PML-RARα fusion gene
急性早幼粒细胞白血病(APL)是急性粒系白血病的一凶险亚型。其发病的分子基础是因特异性染色体t(15∶17)易位形成的PML-RARα融合基因[1，2]。由于PML基因的断裂点不同，而RARα断裂点恒定，导致可以产生相应的3种不同PML-RARα融合基因的异构体[3]。其中以长型和短型异构体为主[4，5]。这些融合基因异构体与APL血液病理特征的关系有何异同，国内外罕有报道。因此，本研究用RT-PCR方法检测一组APL患者白细胞中PML-RARα融合基因，以探讨其异质性的临床意义。
1 材料与方法
1.1 研究对象 APL 21例，男13例，女8例；年龄7～57岁，中位年龄32岁，诊断依据FAB标准。其中6例作染色体分析。所有患者均采用全反式维甲酸(ATRA)诱导治疗，剂量为45～60mg.(m2)-1.d-1，外周血WBC≥15×109/L时，加HA方案；巩固治疗用DA或HA方案和ATRA交替。
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1.2 试剂与仪器 本实验用于RT-PCR的引物由中国科学院上海细胞生物学研究所合成，其它试剂购于 Sigma、Fluka公司及国产分析纯。 PCR仪为 PE公司的PTCl00。
1.3 实验方法
1.3.1 标本采集及RNA抽提：标本分别取自APL患者治疗前、中、后或缓解后0.5，1，2年及3年以上。用 Ficoll-Hypaque液分离骨髓单个核细胞，即刻提取RNA[6]，加保护剂，置-20℃待用。
1.3.2 逆转录反应的引物:(a)：TGG ATG CTG CGG AAG AAG CCC TTG CAG
扩增及检测PML-RARα融合基因转录本的引物：
第1轮PCR：5’引物(b)：GTC ATA GGA AGT GAG GTC TTC或(c)：CCG ATG GCT TCG ACG AGT TC
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3’引物(d)：CTC ACA GGC GCT GAC CCC AT
第2轮PCR：5'引物(e)：AAC AGC AAC CAC GTG GCC AG或(f)：TTC AAG GTG GCG CCT GCA GGA
3’引物(g)：AGC CTG AGG ACT TGT CCT GA
扩增正常RARα转录本的引物：
第1轮PCR：5’引物(i)：GCC TCC CTA CGC CTT CTT CT
3’引物(j)：AAA GCA AGG CTT GTA GAT GC
第2轮PCR：5’引物(k)：GAC CAC TCT CCA GCA CCA
, 百拇医药
3’引物(1)：GCT GGG GCA CTA TCT CTT CAG
1.3.3 套式RT-PCR检测：参照陈赛娟等介绍的方法[3]。A：逆转录反应(RT)。RNAlug，逆转录酶2u，45℃反应90min。B：筑巢式PCR。 RT产物10μl或第1轮PCR产物5μl，dNTP200μmol/L，Taq酶1.5U，反应总体积50μl。引物c、d和f、g扩增出短型(163bp) PML-RARα融合基因；引物b、d和 e、g扩增出长型(151bp) PML-RARα融合基因。扩增条件：94℃变性45s，55℃退火60s，72℃延伸60s，循环30周，最后1周于72℃延伸10min。每次扩增都作内对照(正常RARα)，引物用i、j和k、l，产物为100bp，以排除假阴性。并同时作一个正常对照(非M3RNA)及一个空白对照(无RNA)以排除假阳性。 C：PCR产物分析。取10μl第2轮PCR产物，在1.5%琼脂糖凝胶电泳，用phi×174DNA/HaeⅢ作分子量标准带，鉴别PCR产物的位置，溴乙锭染色，紫外透析仪上观察。
, 百拇医药
2 结果
2.1 PML-RARα融合基因异构体的分布 21例初诊APL患者中，长型PML-RARα融合基因为13例(61.9%)，短型PML-RARα融合基因为8例(38.1%)。
2.2 不同PML-RARα融合基因与治疗反应的关系 21例APL患者中除4例接受治疗后早期死亡外，17例于治疗开始后19～32d达到完全缓解，长型PML-RARα及短型PML-RARα融合基因的完全缓解率分别为92.3%、62.5%。在早期死亡和复发方面，长型基因占15.4%(2/13)，短型基因占50%(4/8)，但两者比较统计学上未见明显差异(表1)。
表1 21例初诊APL患者PML-RARα融合基因异构体与临床特征、治疗反应的关系 PML-RARα
异构体类型
, 百拇医药
例数
性别
(男/女)
年龄
(岁)
WBC
(×109/L)
完全缓解
(%)
早期死亡
复发
长型基因
13
, 百拇医药
8/5
5～57(33)
7.7～40.1(8.2)
12(92)
1
1
短型基因
8
5/3
18～54(32)
6.9～28.1(8.8)
5(62.5)
, 百拇医药 3
1
2.3 PML～RARα融合基因与APL患者血液学病理改变的关系：未观察到APL患者年龄、性别及外周血Hb、WBC、BPC、FDP、Fgn等与不同类型 PML-RARα异物体存在相关性。
2.4 不同PML-RARα异构体与APL患者存活期的关系：对可以随访的14例APL患者中，迄今存活两年以上的6例，其中属于长型 PML-RARα4例(66.7%)、短型PML-RARα2例(33.3%)；而存活仅2月至2年的8例APL患者中，属于长型 PML-RARα 2例(25%)、短型 PML-RARα6例(75%)，两组比较统计学上未见明显差异。
2.5 PML-RARα异构体与APL患者先全缓解和复发的关系：目前，完全缓解达3年以上的4例患者其PMI-RARα融合基因转录本检测为阴性。而另2例分别于完全缓解后2年9个月、2年7个月复发，发现其PML-RARα融合基因呈阳性(长型、短型PML-RARα各l例)。
, 百拇医药
3 讨论
近年来，急性早幼粒细胞白血病(APL)的两个特点引起血液肿瘤学界的高度关注：存在特异融合基因 PML-RARα，以及ATRA对该基因的针对性作用而达到可喜的诱导分化疗效[7]。业已证实，PML-RARα融合基因是 APL发病和对ATRA起反应的分子学基础。RARα基因的断裂点恒定于其A、B结构域的外显子之间，而 PML基因则有3个不同断裂丛集区，即bcr1(内含子6)、bcr2(外显子6)和bcr3(内含子3)；bcr1和bcr3的发生率相等，共占90%～95%，bcr2约占5%～7%[4]。上海血液学研究所报道bcrl和bcr3共占98%以上[5]。按PML断裂点不同，可与RARα形成3种不同的PML-RARα融合基因异构体，经转录分别编码87KD、98KD和103KD蛋白质[8]。这些多功能蛋白质可能通过不同途径发生病理效应，阻止细胞分化[9]。
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本研究对21例初诊APL患者的 PML-RARα融合基因用 RT-PCR检测，未发现其 PML-RARα异构体对治疗反应有明显差异；在早期死亡和复发方面，于长型 PML-RARα融合基因组占15.3%，而短型 PML-RARα融合基因组中占50%，但两组作统计学比较未见明显差异(P>0.05)。与长型PML-RARα相反，存活期2月至2年组患者的短型PML-RARα所占比例(6/8)大于存活期2年以上的患者(2/6)。结果于一定程度反映短型基因组的 APL预后不如长型基因组者。在发病年龄、性别、血液学特征方面，与不同 PML-RARα异构体未见存在相关性。此外，完全缓解3年以上的4例APL患者，未检测到PML-RARα融合基因。以上类似于上海血液学研究所的研究发现[10]。但异同于吴兴中小组的报道[11]。我们未观察到WBC与PML-RARα异构体存在关系[12]。而且，实验尚显示，PML-RARα由阴性转为阳性，则预示 APL患者复发。因此，认为 PML-RARα融合基因除对 APL具有诊断和监控价值外，其不同异构体的生物学意义不尽相同，导致相应 APL患者临床预后的差异。也许本组观察对象尚少，以致不足以在统计学显示不同PML-RARα异构体对临床病理特征影响的差异，故宜增加受试APL患者，以进一步比较分析。
, 百拇医药
参考文献
1 Kakizuka A，Miller Jr WH，Umesono K，et al.Chromosomal translocationt(15;17) in human acute promyelocytic leukemia fuses RARα with a novel putative transcription factor，PML.Cell,1991，66：663
2 de The H，Lavau C，Marchio A，et al.The PML-RARα fusion mRNA generated by the t(15；17) translocation in acute promyelocytic leukemia encodes a functionally altered RAR.Cell，1991，66：675
3 Chen SJ，Chen Z，Chen A，et al.Occurrence of distinct PML-RARα fusion gene isoforms in patients with acute promyelocytic leukemia detected by reverse transcriptase/polymerase chain reaction.Oncogene，1992，7：1223
, http://www.100md.com
4 Pandolfi PP.Genomic variability and alternative splicing generate multiple PML-RARα transcripts that encode aberrant PML proteins in APL.EMBO J，1992，11：1397
5 Geng JP,Tong JH,Dong S，et a1.Localization of the chromosome 15 breakpoints and expression of multiple PML-RARα transcripts in acute promyelocytic leukemia:A study of 28 Chinese patients.Leukaemia,1993,7:20
6 Chomczynski P,Sacchi N.Single step method of RNA isolation by acid guanidnium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.Anal Biochem,1987,162:156
, http://www.100md.com
7 Grignaini F,Fagioli M,Alcalay M,et al.Acute promyelocytic leukemia:from genetics to treatment.Blood,1994,83:10
8 Borrow J,Goddard AD,Gibbons B,et al.Diagnosis of acute promyelocytic leukaemia by RT-PCR:detection of PML-RARα and RARα-PML fusion transcripts.Brit J Haematol,1992,82:529
9 Grignani FR,Ferrucci PF,Testa U,et al.The acute promyeloctic leukemia specific PML/RARα protein inhibits differentiation and promotes survival of myeloid precursor cells.Cell,1993,74:423
, 百拇医药
10 Huang W,Sun GL,Li XS,et al.Acute promyelocytic leukemia:Clinical relevance of two major PML-RARα isoforms and detection of minimal residual disease by retrotranscriptase/polymerase chain reaction to predict relapse.Blood,1993,82:1264
11 吴兴中，王学文，应江山，等.PCR检测急性早幼粒细肋白血病缓解后微量残留白血病.中华血液学杂志，1994，15：357
12 李秀松，孙关林，张芬琴，等.APL用ATRA缓解中白细胞增高以及PML-RARα异构体检测的意 义.上海第二医科大学学报.1995，15：43
(收稿 1999-04-26), 百拇医药
单位：刘陶文 黎金庆 周润华 莫东华 刘 健 马 越(桂林医学院生物工程研究所、血液病研究室 广西桂林市 541001)
关键词：白血病；早幼粒细胞；聚合酶链反应；PML-RARα融合基因
华夏医学990406 摘要 目的：探讨急性早幼粒细胞白血病(APL)PML-RARα融合基因异构体及其临床关系。方法：用逆转录/聚合酶链反应(RT/PCR)检测21例初诊APL患者细胞中PML-RARα融合基因转录本，并分析其对临床特征的可能不同影响。结果：在ATRA诱导治疗过程中，短型PML-RARα异构体APL组的早期死亡和复发率(4/8)(50%)高于长型PML-RARα异构体组(2/13)(15.4%)；与长型异构体相反，存活期2月至2年患者含短型异构体的比例(75%)大于存活期2年以上组(33.3%)；未观察到患者血液学参数改变与不同PML-RARα异构体有关。结论：与长型PML-RARα异构体组APL患者相比，短型PML-RARα异构体组的预后可能更差。
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中图分类号 R733.71
Clinical Relevance of PML-RARα Fusion Gene Isoforms in Patients with Acute Promyelocytic Leukemia
Liu Taowen,Li Jinqing,Zhou Runhua,et al.
Hematological Laboratory,Institute of Bioengineering.Guilin Medical College(Guilin 541001)
Abstract Objective:To illustrate the clinical relevance of distinct PML-RARα fusion gene isoforms in acute promyelocytic leukemia(APL).Methods:The retrotranscriptase/polymerase chain reaction(RT/PCR) was used to evaluate the clinical relevance of the long (L) or short (S) PML-RARα fusion mRNA isoforms in 21 initial patients with APL.Results:There were more early deaths during the all-transretinoic acid(ATRA) induction treatment and more relapses within 2 years of complete remission (CR) in the S-type (4 of 8 case) than that in the L-type group (2 of 13).Compared with L-type isoforms,the ratio of S-type was more in patients survived 2 months through 2 years than those survived beyond 2 years (75% Vs 33.3%). It was not found that relations between hematological parameters and PML-RARα isoforms.And PML-RARα isoforms were remained negative test in 4 cases of CR 3 years more.Conclusion:The S-type PML-RARα isoforms may be involved much poor prognosis than L-type PML-RARα isofoms in APL.
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Key words leukemia;promyelocyte;polymerase chain reaction;PML-RARα fusion gene
急性早幼粒细胞白血病(APL)是急性粒系白血病的一凶险亚型。其发病的分子基础是因特异性染色体t(15∶17)易位形成的PML-RARα融合基因[1，2]。由于PML基因的断裂点不同，而RARα断裂点恒定，导致可以产生相应的3种不同PML-RARα融合基因的异构体[3]。其中以长型和短型异构体为主[4，5]。这些融合基因异构体与APL血液病理特征的关系有何异同，国内外罕有报道。因此，本研究用RT-PCR方法检测一组APL患者白细胞中PML-RARα融合基因，以探讨其异质性的临床意义。
1 材料与方法
1.1 研究对象 APL 21例，男13例，女8例；年龄7～57岁，中位年龄32岁，诊断依据FAB标准。其中6例作染色体分析。所有患者均采用全反式维甲酸(ATRA)诱导治疗，剂量为45～60mg.(m2)-1.d-1，外周血WBC≥15×109/L时，加HA方案；巩固治疗用DA或HA方案和ATRA交替。
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1.2 试剂与仪器 本实验用于RT-PCR的引物由中国科学院上海细胞生物学研究所合成，其它试剂购于 Sigma、Fluka公司及国产分析纯。 PCR仪为 PE公司的PTCl00。
1.3 实验方法
1.3.1 标本采集及RNA抽提：标本分别取自APL患者治疗前、中、后或缓解后0.5，1，2年及3年以上。用 Ficoll-Hypaque液分离骨髓单个核细胞，即刻提取RNA[6]，加保护剂，置-20℃待用。
1.3.2 逆转录反应的引物:(a)：TGG ATG CTG CGG AAG AAG CCC TTG CAG
扩增及检测PML-RARα融合基因转录本的引物：
第1轮PCR：5’引物(b)：GTC ATA GGA AGT GAG GTC TTC或(c)：CCG ATG GCT TCG ACG AGT TC
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3’引物(d)：CTC ACA GGC GCT GAC CCC AT
第2轮PCR：5'引物(e)：AAC AGC AAC CAC GTG GCC AG或(f)：TTC AAG GTG GCG CCT GCA GGA
3’引物(g)：AGC CTG AGG ACT TGT CCT GA
扩增正常RARα转录本的引物：
第1轮PCR：5’引物(i)：GCC TCC CTA CGC CTT CTT CT
3’引物(j)：AAA GCA AGG CTT GTA GAT GC
第2轮PCR：5’引物(k)：GAC CAC TCT CCA GCA CCA
, 百拇医药
3’引物(1)：GCT GGG GCA CTA TCT CTT CAG
1.3.3 套式RT-PCR检测：参照陈赛娟等介绍的方法[3]。A：逆转录反应(RT)。RNAlug，逆转录酶2u，45℃反应90min。B：筑巢式PCR。 RT产物10μl或第1轮PCR产物5μl，dNTP200μmol/L，Taq酶1.5U，反应总体积50μl。引物c、d和f、g扩增出短型(163bp) PML-RARα融合基因；引物b、d和 e、g扩增出长型(151bp) PML-RARα融合基因。扩增条件：94℃变性45s，55℃退火60s，72℃延伸60s，循环30周，最后1周于72℃延伸10min。每次扩增都作内对照(正常RARα)，引物用i、j和k、l，产物为100bp，以排除假阴性。并同时作一个正常对照(非M3RNA)及一个空白对照(无RNA)以排除假阳性。 C：PCR产物分析。取10μl第2轮PCR产物，在1.5%琼脂糖凝胶电泳，用phi×174DNA/HaeⅢ作分子量标准带，鉴别PCR产物的位置，溴乙锭染色，紫外透析仪上观察。
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2 结果
2.1 PML-RARα融合基因异构体的分布 21例初诊APL患者中，长型PML-RARα融合基因为13例(61.9%)，短型PML-RARα融合基因为8例(38.1%)。
2.2 不同PML-RARα融合基因与治疗反应的关系 21例APL患者中除4例接受治疗后早期死亡外，17例于治疗开始后19～32d达到完全缓解，长型PML-RARα及短型PML-RARα融合基因的完全缓解率分别为92.3%、62.5%。在早期死亡和复发方面，长型基因占15.4%(2/13)，短型基因占50%(4/8)，但两者比较统计学上未见明显差异(表1)。
表1 21例初诊APL患者PML-RARα融合基因异构体与临床特征、治疗反应的关系 PML-RARα
异构体类型
, 百拇医药
例数
性别
(男/女)
年龄
(岁)
WBC
(×109/L)
完全缓解
(%)
早期死亡
复发
长型基因
13
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8/5
5～57(33)
7.7～40.1(8.2)
12(92)
1
1
短型基因
8
5/3
18～54(32)
6.9～28.1(8.8)
5(62.5)
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1
2.3 PML～RARα融合基因与APL患者血液学病理改变的关系：未观察到APL患者年龄、性别及外周血Hb、WBC、BPC、FDP、Fgn等与不同类型 PML-RARα异物体存在相关性。
2.4 不同PML-RARα异构体与APL患者存活期的关系：对可以随访的14例APL患者中，迄今存活两年以上的6例，其中属于长型 PML-RARα4例(66.7%)、短型PML-RARα2例(33.3%)；而存活仅2月至2年的8例APL患者中，属于长型 PML-RARα 2例(25%)、短型 PML-RARα6例(75%)，两组比较统计学上未见明显差异。
2.5 PML-RARα异构体与APL患者先全缓解和复发的关系：目前，完全缓解达3年以上的4例患者其PMI-RARα融合基因转录本检测为阴性。而另2例分别于完全缓解后2年9个月、2年7个月复发，发现其PML-RARα融合基因呈阳性(长型、短型PML-RARα各l例)。
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3 讨论
近年来，急性早幼粒细胞白血病(APL)的两个特点引起血液肿瘤学界的高度关注：存在特异融合基因 PML-RARα，以及ATRA对该基因的针对性作用而达到可喜的诱导分化疗效[7]。业已证实，PML-RARα融合基因是 APL发病和对ATRA起反应的分子学基础。RARα基因的断裂点恒定于其A、B结构域的外显子之间，而 PML基因则有3个不同断裂丛集区，即bcr1(内含子6)、bcr2(外显子6)和bcr3(内含子3)；bcr1和bcr3的发生率相等，共占90%～95%，bcr2约占5%～7%[4]。上海血液学研究所报道bcrl和bcr3共占98%以上[5]。按PML断裂点不同，可与RARα形成3种不同的PML-RARα融合基因异构体，经转录分别编码87KD、98KD和103KD蛋白质[8]。这些多功能蛋白质可能通过不同途径发生病理效应，阻止细胞分化[9]。
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本研究对21例初诊APL患者的 PML-RARα融合基因用 RT-PCR检测，未发现其 PML-RARα异构体对治疗反应有明显差异；在早期死亡和复发方面，于长型 PML-RARα融合基因组占15.3%，而短型 PML-RARα融合基因组中占50%，但两组作统计学比较未见明显差异(P>0.05)。与长型PML-RARα相反，存活期2月至2年组患者的短型PML-RARα所占比例(6/8)大于存活期2年以上的患者(2/6)。结果于一定程度反映短型基因组的 APL预后不如长型基因组者。在发病年龄、性别、血液学特征方面，与不同 PML-RARα异构体未见存在相关性。此外，完全缓解3年以上的4例APL患者，未检测到PML-RARα融合基因。以上类似于上海血液学研究所的研究发现[10]。但异同于吴兴中小组的报道[11]。我们未观察到WBC与PML-RARα异构体存在关系[12]。而且，实验尚显示，PML-RARα由阴性转为阳性，则预示 APL患者复发。因此，认为 PML-RARα融合基因除对 APL具有诊断和监控价值外，其不同异构体的生物学意义不尽相同，导致相应 APL患者临床预后的差异。也许本组观察对象尚少，以致不足以在统计学显示不同PML-RARα异构体对临床病理特征影响的差异，故宜增加受试APL患者，以进一步比较分析。
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参考文献
1 Kakizuka A，Miller Jr WH，Umesono K，et al.Chromosomal translocationt(15;17) in human acute promyelocytic leukemia fuses RARα with a novel putative transcription factor，PML.Cell,1991，66：663
2 de The H，Lavau C，Marchio A，et al.The PML-RARα fusion mRNA generated by the t(15；17) translocation in acute promyelocytic leukemia encodes a functionally altered RAR.Cell，1991，66：675
3 Chen SJ，Chen Z，Chen A，et al.Occurrence of distinct PML-RARα fusion gene isoforms in patients with acute promyelocytic leukemia detected by reverse transcriptase/polymerase chain reaction.Oncogene，1992，7：1223
, http://www.100md.com
4 Pandolfi PP.Genomic variability and alternative splicing generate multiple PML-RARα transcripts that encode aberrant PML proteins in APL.EMBO J，1992，11：1397
5 Geng JP,Tong JH,Dong S，et a1.Localization of the chromosome 15 breakpoints and expression of multiple PML-RARα transcripts in acute promyelocytic leukemia:A study of 28 Chinese patients.Leukaemia,1993,7:20
6 Chomczynski P,Sacchi N.Single step method of RNA isolation by acid guanidnium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.Anal Biochem,1987,162:156
, http://www.100md.com
7 Grignaini F,Fagioli M,Alcalay M,et al.Acute promyelocytic leukemia:from genetics to treatment.Blood,1994,83:10
8 Borrow J,Goddard AD,Gibbons B,et al.Diagnosis of acute promyelocytic leukaemia by RT-PCR:detection of PML-RARα and RARα-PML fusion transcripts.Brit J Haematol,1992,82:529
9 Grignani FR,Ferrucci PF,Testa U,et al.The acute promyeloctic leukemia specific PML/RARα protein inhibits differentiation and promotes survival of myeloid precursor cells.Cell,1993,74:423
, 百拇医药
10 Huang W,Sun GL,Li XS,et al.Acute promyelocytic leukemia:Clinical relevance of two major PML-RARα isoforms and detection of minimal residual disease by retrotranscriptase/polymerase chain reaction to predict relapse.Blood,1993,82:1264
11 吴兴中，王学文，应江山，等.PCR检测急性早幼粒细肋白血病缓解后微量残留白血病.中华血液学杂志，1994，15：357
12 李秀松，孙关林，张芬琴，等.APL用ATRA缓解中白细胞增高以及PML-RARα异构体检测的意 义.上海第二医科大学学报.1995，15：43
(收稿 1999-04-26), 百拇医药