荧光分光光度法测定人血清一氧化氮含量
作者：刘慧明 丁航 凌光鑫 祝其锋
单位：广东医学院生化教研室，湛江 524023
关键词：
广东医学院学报990464 近年来的研究表明，一氧化氮(NO)作为机体细胞间的信息分子和血管舒张因子，在维持血管张力的恒定、神经传导和免疫调节等方面都有重要的生理功能。机体内NO含有一个不成对电子，化学性质不稳定，其半衰期合成后3～5 s即被氧化成NO2，以硝酸根和亚硝酸根的形式存在细胞内外液中[1]。目前，一般常用Griess法检测亚硝酸根[2]，但方法灵敏度低。为此，作者采用荧光分光光度法测定NO含量，现将方法及结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂 LS-50 B荧光分光光度计(PE公司)；4-羟基香豆素(Sigma公司)，其它试剂为国产分析纯。
1.2 分析步骤[3，4] 取静脉血2mL，l h内4°C 2000 r/min离心10min，分离血清，于-20°C保存。取血清0.1mL，加入0.15mol/L硫酸锌溶液0.4mL，混匀。再依次加入0.11mol/L氢氧化钠溶液1.0mL，双蒸水0.5mL，混匀后，放置 30min，10000r/min离心5min。取上清液1.0mL，加入0.02% 4-羟基香豆素溶液0.5mL，冰浴5min，再加入8%硫代硫酸钠溶液0.05mL，室温放置5min，最后加入1.5mol/L氢氧化钠溶液0.5mL。用荧光分光光度计激发波长340 nm，发射波长453nm检测NO荧光强度(INT)。
1.3 计算
2 结果
2.1 线性范围和检测限 用NaNO2作校正曲线，500～4000nmol/L范围内线性良好。回归方程y＝0.137x+67.95，r＝0.9997。最低检测限为3.1×10-8 mol/L。
2.2 精密度试验 取同一份血清，相同实验条件下检测20次，批内误差CV%＝3.98%。另一份血清，连续测定10d，每日检测3次，取平均值计算批间误差CV%＝6.8%。
2.3 回收率试验 加入浓度为5.0×10-7mol/L和2.0×10-6mol/L NaNO2标准溶液于血清样品中进行回收试验，回收率分别为87.9%和93.3%。
2.4 正常参考值 用本方法测定30例正常人(本院体检学生)血清，结果NO含量为(1041.1±160.1)nmol/L。
3 讨论
本方法操作简便，灵敏度高，最小检测限为3.1×10-8 mol/L，测定范围在500～4 000 nmol/L有良好的线性关系，平均回收率为90.6%，可初步应用于临床一些常见疾病血清NO水平的测定。
4 参考文献
1 陈崇远，马达，张岭主编.中国临床医药(下册).成都：科技大学出版社，1995.945～946
2 王成彬，沈文梅，田亚平.铜离子活化镉还原法测定血清中硝酸盐浓度.中华医学检验杂志，1996，19(5)：281～283
3 金镇，王景华，李守柔.正常妊娠和妊高征孕妇血浆一氧化氮的变化.中华妇产科杂志，1996，31(10)：594～596
4 Kader A，Frazzni VI，Solomon RA，et al.Nitei oxide peoduction during focal cerebralischemia in rat.Stroke，1993，24：1709
收稿日期：1999-06-24, http://www.100md.com
单位：广东医学院生化教研室，湛江 524023
关键词：
广东医学院学报990464 近年来的研究表明，一氧化氮(NO)作为机体细胞间的信息分子和血管舒张因子，在维持血管张力的恒定、神经传导和免疫调节等方面都有重要的生理功能。机体内NO含有一个不成对电子，化学性质不稳定，其半衰期合成后3～5 s即被氧化成NO2，以硝酸根和亚硝酸根的形式存在细胞内外液中[1]。目前，一般常用Griess法检测亚硝酸根[2]，但方法灵敏度低。为此，作者采用荧光分光光度法测定NO含量，现将方法及结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂 LS-50 B荧光分光光度计(PE公司)；4-羟基香豆素(Sigma公司)，其它试剂为国产分析纯。
1.2 分析步骤[3，4] 取静脉血2mL，l h内4°C 2000 r/min离心10min，分离血清，于-20°C保存。取血清0.1mL，加入0.15mol/L硫酸锌溶液0.4mL，混匀。再依次加入0.11mol/L氢氧化钠溶液1.0mL，双蒸水0.5mL，混匀后，放置 30min，10000r/min离心5min。取上清液1.0mL，加入0.02% 4-羟基香豆素溶液0.5mL，冰浴5min，再加入8%硫代硫酸钠溶液0.05mL，室温放置5min，最后加入1.5mol/L氢氧化钠溶液0.5mL。用荧光分光光度计激发波长340 nm，发射波长453nm检测NO荧光强度(INT)。
1.3 计算
2 结果
2.1 线性范围和检测限 用NaNO2作校正曲线，500～4000nmol/L范围内线性良好。回归方程y＝0.137x+67.95，r＝0.9997。最低检测限为3.1×10-8 mol/L。
2.2 精密度试验 取同一份血清，相同实验条件下检测20次，批内误差CV%＝3.98%。另一份血清，连续测定10d，每日检测3次，取平均值计算批间误差CV%＝6.8%。
2.3 回收率试验 加入浓度为5.0×10-7mol/L和2.0×10-6mol/L NaNO2标准溶液于血清样品中进行回收试验，回收率分别为87.9%和93.3%。
2.4 正常参考值 用本方法测定30例正常人(本院体检学生)血清，结果NO含量为(1041.1±160.1)nmol/L。
3 讨论
本方法操作简便，灵敏度高，最小检测限为3.1×10-8 mol/L，测定范围在500～4 000 nmol/L有良好的线性关系，平均回收率为90.6%，可初步应用于临床一些常见疾病血清NO水平的测定。
4 参考文献
1 陈崇远，马达，张岭主编.中国临床医药(下册).成都：科技大学出版社，1995.945～946
2 王成彬，沈文梅，田亚平.铜离子活化镉还原法测定血清中硝酸盐浓度.中华医学检验杂志，1996，19(5)：281～283
3 金镇，王景华，李守柔.正常妊娠和妊高征孕妇血浆一氧化氮的变化.中华妇产科杂志，1996，31(10)：594～596
4 Kader A，Frazzni VI，Solomon RA，et al.Nitei oxide peoduction during focal cerebralischemia in rat.Stroke，1993，24：1709
收稿日期：1999-06-24, http://www.100md.com