nm23与p53在皮肤癌中的表达及其临床意义
作者：张刚 汤少明 梁杰 陈坤 罗少军
单位：广东医学院整形外科研究所，湛江 524001
关键词：nm23基因；p53基因；皮肤肿瘤；淋巴结转移
广东医学院学报990402 摘要 目的：探讨nm23与p53在皮肤癌中的表达及其临床意义。方法：应用链霉卵白素(SP)免疫组化技术对41例皮肤癌标本染色。结果：nm23阴性表达者肿瘤浸润深度及区域淋巴结转移率明显高于阳性表达者(P均<0.01)；p53阳性表达者肿瘤浸润深度及区域淋巴结转移率明显高于阴性表达者(P均<0.05)。结论：nm23基因缺失和p53基因突变可能在皮肤癌的浸润及淋巴结转移中起重要作用。
Expression of nm23 and p53 proteins in
skin cancer and its clinical significance
, http://www.100md.com
Zhang Gang Tang Shaoming Liang Jie et al
Instituts of Plastic Surgery，Guangdong Medical College，Zhanjiang 524001
Abstract Objective：To investigate the expression of nm23 and p53 proteins in skin cancer and its clinical significance.Methods：Forty-one paraffin embedded specimens of skin cancer were stained by immunohistochemistry.Results：The depth of tumor invasion and the rate of regional lymph node metastasis in specimens of negative expression of nm23 were higher than those in specimens of positive expression (P<0.01，P<0.01，respectively)；the depth of tumor invasion and the rate of regional lymph node metastasis in specimens of positive expression of p53 were higher than those in specimens of negative expression(P<0.05，P<0.05，respectively).Conclusion：Deletion of nm23 gene and mutation of p53 gene play an important role in the tumor invasion and lymph node metastasis in skin cancer.
, 百拇医药
Key words：nm23；p53；skin neoplasms；lymph node metastasis
nm23基因是近年来发现的与肿瘤转移抑制相关的基因，p53基因则是迄今发现的与人类肿瘤相关性最密切的基因，两者表达的变化在肿瘤的发生发展中所起的作用日渐受到重视[1，2]，但其与皮肤癌的关系仍鲜见报道。本文采用链霉卵白素(SP)免疫组化技术，探讨nm23和p53蛋白在皮肤癌中的表达及与皮肤癌的浸润和淋巴结转移的关系。
1 材料与方法
1.1材料 取自我院1995年3月至1998年12月的皮肤癌切除标本41例，正常皮肤标本30例。所有患者术前未经放疗和化疗。新鲜标本常规福尔马林固定，24h内取材，石蜡包埋，连续5μm厚度切片，HE染色。
1.2 nm23、p53免疫组化染色 采用SP免疫组化技术，全部试剂盒购自美国Maxim公司，操作按说明书进行。PBS代替第一标本作阴性对照。
, 百拇医药
1.3 nm23、p53阳性细胞的判断及统计 以细胞浆内(nm23)或细胞核内(p53)出现棕黄色颗粒或团块为阳性细胞，光镜下随机观察5个高倍视野共计500个细胞中的阳性细胞数。当nm 23阳性染色的癌细胞数≤30%时定为阴性表达，>30%时定为阳性表达。p53阳性染色的癌细胞数>10%时定为阳性表达。
1.4 统计学处理 采用χ2或校正χ2检检和t检验
2 结果
2.1nm23表达与皮肤癌临床病理特征的关系 见表1。41例皮肤癌中，nm23阴性表达占31.7%(13/41)，正常人皮肤呈nm23阳性表达。nm23阴性表达与患者性别、年龄和皮肤癌的病理分型及分化程度无关，而与其浸润深度和淋巴结转移有明显关系(P均<0.01)，即nm23阴性表达者的浸润深度和淋巴结转移率明显高于阳性表达者。
, 百拇医药
表1 nm23和p53表达与皮肤癌临床病理特征的关系 项目
nm23染色
P值
p53染色
P值
(-)
(+)
(-)
(+)
性别
男
9
, http://www.100md.com 17
>0.05
16
10
>0.05
女
4
11
10
5
年龄(岁)
56.9±3.6
58.5±2.8
, http://www.100md.com
>0.05
58.8±2.9
56.5±4.6
>0.05
病理分型
基底细胞癌
4
13
>0.05
12
5
>0.05
鳞状细胞癌
, 百拇医药
9
15
14
10
分化程度
高中分化
10
19
>0.05
21
8
>0.05
低分化
, http://www.100md.com 3
9
5
7
浸润深度
皮内
3
24
<0.01
21
6
<0.05
皮下
5
, 百拇医药
3
3
5
肌肉、骨骼
5
1
2
4
淋巴结转移
有
7
2
<0.01
1
, http://www.100md.com
8
<0.05
无
6
26
25
7
2.2 p53表达与皮肤癌临床病理特征的关系 见表1。41例皮肤癌中，p53阳性表达占36.6%(15/41)，正常皮肤未见染色。p53阳性表达与患者的性别、年龄、皮肤癌病理分型、分化程度无明显关系，而与皮肤癌的浸润深度及淋巴结转移有明显关系(P均<0.05)，即p53阳性表达者肿瘤的浸润深度及淋巴结转移率明显高于阴性表达者。
3 讨论
, 百拇医药
nm23基因为人类正常基因，定位于17号染色体长臂(17q21)。Steeg等[3]首先分离鉴定了 nm23基因，其编码产物为NDPK，并证实其与肿瘤转移抑制有关。nm23在某些肿瘤基因组中存在丢失、扩增和突变，并与转移相关。Tokunaga[4]、雷文东等[5]在乳癌、肺癌研究中均发现nm23与淋巴结转移呈负相关，提示nm 23基因具有抑制肿瘤转移的作用，nm23基因缺失或突变，可导致其产物表达降低[6]。本文应用SP免疫组化法研究nm 23在皮肤癌的表达变化，发现nm 23阴性表达变化与患者性别、年龄、肿瘤的分型及分化程度无关，而与皮肤癌的浸润深度和淋巴转移有明显的关系。nm 23阴性表达者皮肤癌的浸润深度和淋巴结转移率大于nm 23阳性表达者，提示nm 23基因在皮肤癌的浸润和转移抑制表型中起重要作用。nm 23如何影响皮肤癌的浸润和淋巴结转移的确切机制尚不清楚。文献报道[7]，nm23抑制肿瘤转移的作用可能通过如下几种方式：(1)通过其蛋白产物NDPK的作用，促进细胞分裂及参与G蛋白介导的信号传递并与微管聚合有关；(2)参与GTP激活蛋白(GAP)的作用；(3)nm23蛋白产物以分泌方式作用于细胞，以调节细胞分化；(4)通过亮氨酸重复顺序形成亮氨酸拉链调节蛋白之间二聚体的形成，进而影响转录水平。
, 百拇医药
p 53基因被认为是目前人类肿瘤中最常发生变化的基因[8]，它位于染色体17P13，1，编码53000的核酸蛋白，此蛋白通过P21(WAFI/GiPI/SdiI)蛋白参与细胞周期的调控，阻止细胞从G1期进入S期，对细胞分裂和增殖起负调节作用。若p53基因突变，则最终使细胞生长和分化的调节失控，导致细胞持续分裂和癌变[9，10]。野生型p53基因蛋白产物的半衰期仅为6～10 min，而肿瘤组织中存在的突变型p53蛋白半衰期明显延长，可达4～8 h，因此一般认为用免疫组化法检测到的p53蛋白均为突变型蛋白。本文应用SP免疫组化法研究p53在皮肤癌中的表达，发现p53的表达与患者性别、年龄、肿瘤的分型及分化程度无关，而与皮肤癌的浸润深度和淋巴转移具有显著关系，p 53阳性表达者皮肤癌的浸润深度和淋巴结转移率大于p 53阴性表达者，提示p 53基因突变在皮肤癌的发展和淋巴结转移过程起着重要作用。
因此，联合检测nm 23及p 53表达对判断肿瘤的恶性程度，早期预测淋巴结转移趋势，指导临床治疗方案的选择，改善患者预后有重要参考价值。
, 百拇医药
本文免疫组化技术得到本院病理科李岩松主治医师大力相助，特此致谢!
4 参考文献
1 Kodera Y，Isobe KI，Yamauchi M，et al.Expression of nm23 H-1 RNA levels in human gastric cancer tissues：A negative correlation with nodal metastasis.Cancer，1994，73：259
2 Kakeji Y，Korenaga D，Tsujitani S，et al.Gastric cancer with p53 over expression has high potential for metastasis to lymph nodes.Br J Cancer，1993，64：589
, 百拇医药 3 Steeg PS，Bevilacqua G，Kopper L，et al.Evidence for a novel gene associated with low metastatic potential.J Natl Cancer Inst，1988，80：200
4 Tokunaga Y，Urano T，Furukawa K，et al.Reduced expression of nm23-H1，but not of nm23-H2，is concordant with the frequency of lymph-node metastasis of human breast cancer.Int J Cancer 1993，55：66
5 雷文东，张汝刚.nm 23基因在人肺癌中的表达及其与肺癌淋巴结转移的关系.中华肿瘤杂志，1994，16：277
6 Leone A，Seeger RC，Hong CM，et al.Evidence for nm23 RNA overexperession，DNA amplification and mutation in aggressive childhood neuroblastomas.Oncogene，1993，8：855
, 百拇医药
7 张丽萍，许良中.nm23基因在人体肿瘤研究的现状.实用癌症杂志，1995，10：281
8 Levine AJ.The tumor suppressor genes.Ann Rev Biochem，1993.62：623
9 姚开泰.抑瘤基因、细胞周期，DNA修复与肿瘤易感性.中国科学基金，1995，2：17
10 朱焕章，张新立，陈意生.突变型P53蛋白在二乙基亚硝胺诱发发大鼠肝癌前病变中的表达.中华肿瘤杂志，1997，19：23
收稿日期：1999-04-22, 百拇医药
单位：广东医学院整形外科研究所，湛江 524001
关键词：nm23基因；p53基因；皮肤肿瘤；淋巴结转移
广东医学院学报990402 摘要 目的：探讨nm23与p53在皮肤癌中的表达及其临床意义。方法：应用链霉卵白素(SP)免疫组化技术对41例皮肤癌标本染色。结果：nm23阴性表达者肿瘤浸润深度及区域淋巴结转移率明显高于阳性表达者(P均<0.01)；p53阳性表达者肿瘤浸润深度及区域淋巴结转移率明显高于阴性表达者(P均<0.05)。结论：nm23基因缺失和p53基因突变可能在皮肤癌的浸润及淋巴结转移中起重要作用。
Expression of nm23 and p53 proteins in
skin cancer and its clinical significance
, http://www.100md.com
Zhang Gang Tang Shaoming Liang Jie et al
Instituts of Plastic Surgery，Guangdong Medical College，Zhanjiang 524001
Abstract Objective：To investigate the expression of nm23 and p53 proteins in skin cancer and its clinical significance.Methods：Forty-one paraffin embedded specimens of skin cancer were stained by immunohistochemistry.Results：The depth of tumor invasion and the rate of regional lymph node metastasis in specimens of negative expression of nm23 were higher than those in specimens of positive expression (P<0.01，P<0.01，respectively)；the depth of tumor invasion and the rate of regional lymph node metastasis in specimens of positive expression of p53 were higher than those in specimens of negative expression(P<0.05，P<0.05，respectively).Conclusion：Deletion of nm23 gene and mutation of p53 gene play an important role in the tumor invasion and lymph node metastasis in skin cancer.
, 百拇医药
Key words：nm23；p53；skin neoplasms；lymph node metastasis
nm23基因是近年来发现的与肿瘤转移抑制相关的基因，p53基因则是迄今发现的与人类肿瘤相关性最密切的基因，两者表达的变化在肿瘤的发生发展中所起的作用日渐受到重视[1，2]，但其与皮肤癌的关系仍鲜见报道。本文采用链霉卵白素(SP)免疫组化技术，探讨nm23和p53蛋白在皮肤癌中的表达及与皮肤癌的浸润和淋巴结转移的关系。
1 材料与方法
1.1材料 取自我院1995年3月至1998年12月的皮肤癌切除标本41例，正常皮肤标本30例。所有患者术前未经放疗和化疗。新鲜标本常规福尔马林固定，24h内取材，石蜡包埋，连续5μm厚度切片，HE染色。
1.2 nm23、p53免疫组化染色 采用SP免疫组化技术，全部试剂盒购自美国Maxim公司，操作按说明书进行。PBS代替第一标本作阴性对照。
, 百拇医药
1.3 nm23、p53阳性细胞的判断及统计 以细胞浆内(nm23)或细胞核内(p53)出现棕黄色颗粒或团块为阳性细胞，光镜下随机观察5个高倍视野共计500个细胞中的阳性细胞数。当nm 23阳性染色的癌细胞数≤30%时定为阴性表达，>30%时定为阳性表达。p53阳性染色的癌细胞数>10%时定为阳性表达。
1.4 统计学处理 采用χ2或校正χ2检检和t检验
2 结果
2.1nm23表达与皮肤癌临床病理特征的关系 见表1。41例皮肤癌中，nm23阴性表达占31.7%(13/41)，正常人皮肤呈nm23阳性表达。nm23阴性表达与患者性别、年龄和皮肤癌的病理分型及分化程度无关，而与其浸润深度和淋巴结转移有明显关系(P均<0.01)，即nm23阴性表达者的浸润深度和淋巴结转移率明显高于阳性表达者。
, 百拇医药
表1 nm23和p53表达与皮肤癌临床病理特征的关系 项目
nm23染色
P值
p53染色
P值
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性别
男
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年龄(岁)
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58.5±2.8
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58.8±2.9
56.5±4.6
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病理分型
基底细胞癌
4
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鳞状细胞癌
, 百拇医药
9
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分化程度
高中分化
10
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低分化
, http://www.100md.com 3
9
5
7
浸润深度
皮内
3
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<0.01
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<0.05
皮下
5
, 百拇医药
3
3
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肌肉、骨骼
5
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淋巴结转移
有
7
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<0.01
1
, http://www.100md.com
8
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无
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7
2.2 p53表达与皮肤癌临床病理特征的关系 见表1。41例皮肤癌中，p53阳性表达占36.6%(15/41)，正常皮肤未见染色。p53阳性表达与患者的性别、年龄、皮肤癌病理分型、分化程度无明显关系，而与皮肤癌的浸润深度及淋巴结转移有明显关系(P均<0.05)，即p53阳性表达者肿瘤的浸润深度及淋巴结转移率明显高于阴性表达者。
3 讨论
, 百拇医药
nm23基因为人类正常基因，定位于17号染色体长臂(17q21)。Steeg等[3]首先分离鉴定了 nm23基因，其编码产物为NDPK，并证实其与肿瘤转移抑制有关。nm23在某些肿瘤基因组中存在丢失、扩增和突变，并与转移相关。Tokunaga[4]、雷文东等[5]在乳癌、肺癌研究中均发现nm23与淋巴结转移呈负相关，提示nm 23基因具有抑制肿瘤转移的作用，nm23基因缺失或突变，可导致其产物表达降低[6]。本文应用SP免疫组化法研究nm 23在皮肤癌的表达变化，发现nm 23阴性表达变化与患者性别、年龄、肿瘤的分型及分化程度无关，而与皮肤癌的浸润深度和淋巴转移有明显的关系。nm 23阴性表达者皮肤癌的浸润深度和淋巴结转移率大于nm 23阳性表达者，提示nm 23基因在皮肤癌的浸润和转移抑制表型中起重要作用。nm 23如何影响皮肤癌的浸润和淋巴结转移的确切机制尚不清楚。文献报道[7]，nm23抑制肿瘤转移的作用可能通过如下几种方式：(1)通过其蛋白产物NDPK的作用，促进细胞分裂及参与G蛋白介导的信号传递并与微管聚合有关；(2)参与GTP激活蛋白(GAP)的作用；(3)nm23蛋白产物以分泌方式作用于细胞，以调节细胞分化；(4)通过亮氨酸重复顺序形成亮氨酸拉链调节蛋白之间二聚体的形成，进而影响转录水平。
, 百拇医药
p 53基因被认为是目前人类肿瘤中最常发生变化的基因[8]，它位于染色体17P13，1，编码53000的核酸蛋白，此蛋白通过P21(WAFI/GiPI/SdiI)蛋白参与细胞周期的调控，阻止细胞从G1期进入S期，对细胞分裂和增殖起负调节作用。若p53基因突变，则最终使细胞生长和分化的调节失控，导致细胞持续分裂和癌变[9，10]。野生型p53基因蛋白产物的半衰期仅为6～10 min，而肿瘤组织中存在的突变型p53蛋白半衰期明显延长，可达4～8 h，因此一般认为用免疫组化法检测到的p53蛋白均为突变型蛋白。本文应用SP免疫组化法研究p53在皮肤癌中的表达，发现p53的表达与患者性别、年龄、肿瘤的分型及分化程度无关，而与皮肤癌的浸润深度和淋巴转移具有显著关系，p 53阳性表达者皮肤癌的浸润深度和淋巴结转移率大于p 53阴性表达者，提示p 53基因突变在皮肤癌的发展和淋巴结转移过程起着重要作用。
因此，联合检测nm 23及p 53表达对判断肿瘤的恶性程度，早期预测淋巴结转移趋势，指导临床治疗方案的选择，改善患者预后有重要参考价值。
, 百拇医药
本文免疫组化技术得到本院病理科李岩松主治医师大力相助，特此致谢!
4 参考文献
1 Kodera Y，Isobe KI，Yamauchi M，et al.Expression of nm23 H-1 RNA levels in human gastric cancer tissues：A negative correlation with nodal metastasis.Cancer，1994，73：259
2 Kakeji Y，Korenaga D，Tsujitani S，et al.Gastric cancer with p53 over expression has high potential for metastasis to lymph nodes.Br J Cancer，1993，64：589
, 百拇医药 3 Steeg PS，Bevilacqua G，Kopper L，et al.Evidence for a novel gene associated with low metastatic potential.J Natl Cancer Inst，1988，80：200
4 Tokunaga Y，Urano T，Furukawa K，et al.Reduced expression of nm23-H1，but not of nm23-H2，is concordant with the frequency of lymph-node metastasis of human breast cancer.Int J Cancer 1993，55：66
5 雷文东，张汝刚.nm 23基因在人肺癌中的表达及其与肺癌淋巴结转移的关系.中华肿瘤杂志，1994，16：277
6 Leone A，Seeger RC，Hong CM，et al.Evidence for nm23 RNA overexperession，DNA amplification and mutation in aggressive childhood neuroblastomas.Oncogene，1993，8：855
, 百拇医药
7 张丽萍，许良中.nm23基因在人体肿瘤研究的现状.实用癌症杂志，1995，10：281
8 Levine AJ.The tumor suppressor genes.Ann Rev Biochem，1993.62：623
9 姚开泰.抑瘤基因、细胞周期，DNA修复与肿瘤易感性.中国科学基金，1995，2：17
10 朱焕章，张新立，陈意生.突变型P53蛋白在二乙基亚硝胺诱发发大鼠肝癌前病变中的表达.中华肿瘤杂志，1997，19：23
收稿日期：1999-04-22, 百拇医药