原发性胆囊癌抑癌基因P53蛋白表达及其意义
作者：邬剑华 王鲁 蔡端
单位：上海医科大学附属华山医院普外科(200040)
关键词：胆囊癌；抑癌基因；P53蛋白；免疫组织化学
肝胆胰外科杂志990417 摘 要 目的 探讨抑癌基因P53蛋白在原发性胆囊癌的表达及意义。方法 采用免疫组织化学方法检测了60例原发性胆囊癌抑癌基因P53蛋白的表达。结果 胆囊癌肿瘤细胞P53蛋白的阳性反应率为33.3%(20/60)，慢性胆囊炎及癌旁正常粘阳性反应率均为0，两者比较差异有显著意义(P<0.005)。结论 P53蛋白的表达与肿瘤的分化程度有一定的关系，低分化胆囊腺癌中P53蛋白阳性表达率明显高于高分化腺癌(P<0.005)，提示P53基因的表达参与胆囊癌发生发展过程。
, http://www.100md.com
肿瘤分子生物学研究发现抑癌基因P53在细胞生长分化过程中起着负性调节因子的作用。本实验采用免疫组织化学方法检测原发性胆囊癌中P53蛋白的表达，旨在探讨P53蛋白在胆囊癌中的表达特征及其临床意义。
1 材料和方法
1.1 一般资料 收集我院自1988年至1996年手术切除胆囊癌标本60例，年龄36至81岁，平均56岁，男23例，女37例，男女比例为1∶1.6。经病理证实均为胆囊腺癌。按1991年WHO病理分类标准，其中高分化的18例，分化中等的28例，分化差的14例。取同期慢性胆囊炎标本37例作为对照组。
1.2 试剂 小鼠抗人P53单克隆抗体(购自DaKo公司产品)，生物素化兔抗小鼠IgG及ABC复合物(购自美国Vecter公司产品)。
, 百拇医药
1.3 方法 标本经10%福尔马林固定，梯度酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、普通切片机作连续切片，厚5μm，分别行HE染色和ABC免疫组化染色，后者主要步骤如下：石蜡切片常规脱蜡到水；0.6% H2O2-甲醇阻断内源性过氧化物酶活性；滴加小鼠抗人P53(工作浓度为1∶100)4℃过夜；滴加生物素化兔抗小鼠IgG(工作浓度1∶100)；最后滴加ABC复合物，上述各步均以PBC溶液洗片三次。DAB溶液显色后，苏木素复染细胞核，脱水树胶封片。
1.4 结果判断 光镜下观察细胞核内出现明显的棕褐色颗粒为P53蛋白阳性细胞。每张切片随机观察10个高倍视野，按肿瘤细胞着色强度及阳性细胞占肿瘤细胞百分率分为三个等级：+(10%～30%)，
(30%～60%)，
(>60%)。
, 百拇医药
2 结果
2.1 胆囊癌的P53蛋白阳性率及分布特征：经ABC免疫组化染色后，60例胆囊腺癌中有P53蛋白表达的20例，其阳性率为33.3%(20/60)，胆囊癌P53蛋白阳性物质主要位于细胞核，呈粗细不等深浅不一的棕色颗粒，仅有1例同时有胞浆阳性着色。其中强阳性()12例，阳性()5例，弱阳性(+)3例，而37例慢性胆囊炎及癌旁胆囊粘膜组织内均无P53蛋白表达，两者比较，差异有显著意义(P<0.005)。
2.2 P53蛋白阳性反应与胆囊癌分化程度的关系见表1。经ABC免疫组化染色后P53蛋白阳性反应20例的胆囊癌中，P53蛋白表达阳性率随着胆囊癌分化程度的降低而逐渐增高，其中分化差的胆囊癌阳性表达率为71.4%(10/14)，而高分化和中等分化胆囊腺癌阳性表达率分别为22.2%(4/18)和21.3%(6/26)，差异有显著性意义(P<0.005)。
, 百拇医药
表1 P53蛋白表达与胆囊癌分化程度 胆囊癌组织类型
例数
P53蛋白(-)
P53蛋白(+)
高分化腺癌
18
14
4*
中分化腺癌
28
22
, 百拇医药 6
低分化腺癌
14
4
10
Fisher精确检验，与低分化腺癌比：*P<0.05
2.3 P53蛋白阳性反应与肿瘤临床病理分期的关系。在本组60例胆囊癌中，按照1987年UICC的胆囊癌TNM分期标准分期，Ⅰ期19例，Ⅱ期15例，Ⅲ期17例，Ⅳ期9例，P53蛋白在各分期胆囊癌中有不同程度的表达，其间差异无显著性意义(P>0.05)(见表2)。
表2 P53蛋白表达与胆囊癌临床分期的关系 临床分期
, 百拇医药
例数
P53蛋白(-)
P53蛋白(+)
Ⅰ期
19
11
7
Ⅱ期
15
11
4
Ⅲ期
17
, http://www.100md.com
12
5
Ⅳ期
9
6
4
2×4表格χ2检验，P>0.05
3 讨论
P53基因是至今发现与人类肿瘤相关性最高的基因，野生型(Wild Type)P53基因位于人类第17号染色体短臂13区带(17P13.1)上，全长约16～20kb，由11个外显子和10个内显子组成。编码393个氨基酸残基组成的核内磷酸蛋白，分子量53kDa，即称为P53蛋白。P53基因是一种重要的肿瘤抑制基因，其通过调节细胞生长、监护细胞DNA完整性、诱导DNA损伤且不能修复的细胞发生凋亡，阻止具有癌变倾向的基因突变细胞产生，从而发挥其抑癌作用[1]。P53基因突变、缺失或失活是许多肿瘤发生的原因[2]，突变型P53基因的蛋白产物半衰期长达4～12小时不等，而野生型P53基因蛋白产物的半衰期仅为6～12分钟。P53基因突变、P53蛋白与病毒癌蛋白结合和P53蛋白与特殊扩增的细胞基因产物结合，使P53基因由抑癌基因转变为癌基因。用免疫组化方法实际检测到的是存积在肿瘤细胞内突变型P53蛋白，该P53蛋白具有促癌作用。
, 百拇医药
日前应用免疫组化方法已在乳腺癌、结肠直癌、肺癌等较多人类肿瘤中检出P53蛋白，但P53蛋白在胆囊癌中的表达改变及其意义的文献报道尚少。本实验应用鼠抗人P53单克隆抗体检测胆囊癌中的P53蛋白表达，结果发现胆囊癌的P53蛋白表达阳性率为33.3%，而对照组慢性胆囊炎和癌旁正常组织中均为阴性，提示胆囊癌组织内有P53蛋白的存积，表明P53基因突变与胆囊的发生发展有着密切关系。众多研究发现P53过度表达与组织细胞分化有关，分化越差的恶性肿瘤，P53表达率越高。本实验结果亦发现：P53蛋白在低分化胆囊腺癌中的阳性表达率明显高于高、中分化的胆囊癌(P<0.05)，提示P53蛋白的阳性表达与胆囊腺癌的分化程度有关，即分化越差，P53蛋白阳性表达越高，表达P53蛋白表达水平是反映肿瘤分化程度的一个较客观指标。本实验发现P53蛋白在各临床分期的胆囊腺癌均有不同程度表达，但其间差异无显著性意义(P>0.05)。
参考文献
1 Lane DP.Cancer,P53,guardia of the genone.Nature,1992,358(6381)∶15～6
2 Younes M,Lebouifz M,Bomner E,et al.P53accumalation in benign breast biosy specimens.Hum Pathal,1995,26∶135
(收稿：1998-11-26), http://www.100md.com
单位：上海医科大学附属华山医院普外科(200040)
关键词：胆囊癌；抑癌基因；P53蛋白；免疫组织化学
肝胆胰外科杂志990417 摘 要 目的 探讨抑癌基因P53蛋白在原发性胆囊癌的表达及意义。方法 采用免疫组织化学方法检测了60例原发性胆囊癌抑癌基因P53蛋白的表达。结果 胆囊癌肿瘤细胞P53蛋白的阳性反应率为33.3%(20/60)，慢性胆囊炎及癌旁正常粘阳性反应率均为0，两者比较差异有显著意义(P<0.005)。结论 P53蛋白的表达与肿瘤的分化程度有一定的关系，低分化胆囊腺癌中P53蛋白阳性表达率明显高于高分化腺癌(P<0.005)，提示P53基因的表达参与胆囊癌发生发展过程。
, http://www.100md.com
肿瘤分子生物学研究发现抑癌基因P53在细胞生长分化过程中起着负性调节因子的作用。本实验采用免疫组织化学方法检测原发性胆囊癌中P53蛋白的表达，旨在探讨P53蛋白在胆囊癌中的表达特征及其临床意义。
1 材料和方法
1.1 一般资料 收集我院自1988年至1996年手术切除胆囊癌标本60例，年龄36至81岁，平均56岁，男23例，女37例，男女比例为1∶1.6。经病理证实均为胆囊腺癌。按1991年WHO病理分类标准，其中高分化的18例，分化中等的28例，分化差的14例。取同期慢性胆囊炎标本37例作为对照组。
1.2 试剂 小鼠抗人P53单克隆抗体(购自DaKo公司产品)，生物素化兔抗小鼠IgG及ABC复合物(购自美国Vecter公司产品)。
, 百拇医药
1.3 方法 标本经10%福尔马林固定，梯度酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、普通切片机作连续切片，厚5μm，分别行HE染色和ABC免疫组化染色，后者主要步骤如下：石蜡切片常规脱蜡到水；0.6% H2O2-甲醇阻断内源性过氧化物酶活性；滴加小鼠抗人P53(工作浓度为1∶100)4℃过夜；滴加生物素化兔抗小鼠IgG(工作浓度1∶100)；最后滴加ABC复合物，上述各步均以PBC溶液洗片三次。DAB溶液显色后，苏木素复染细胞核，脱水树胶封片。
1.4 结果判断 光镜下观察细胞核内出现明显的棕褐色颗粒为P53蛋白阳性细胞。每张切片随机观察10个高倍视野，按肿瘤细胞着色强度及阳性细胞占肿瘤细胞百分率分为三个等级：+(10%～30%)，
(30%～60%)，(>60%)。, 百拇医药
2 结果
2.1 胆囊癌的P53蛋白阳性率及分布特征：经ABC免疫组化染色后，60例胆囊腺癌中有P53蛋白表达的20例，其阳性率为33.3%(20/60)，胆囊癌P53蛋白阳性物质主要位于细胞核，呈粗细不等深浅不一的棕色颗粒，仅有1例同时有胞浆阳性着色。其中强阳性(
)12例，阳性()5例，弱阳性(+)3例，而37例慢性胆囊炎及癌旁胆囊粘膜组织内均无P53蛋白表达，两者比较，差异有显著意义(P<0.005)。2.2 P53蛋白阳性反应与胆囊癌分化程度的关系见表1。经ABC免疫组化染色后P53蛋白阳性反应20例的胆囊癌中，P53蛋白表达阳性率随着胆囊癌分化程度的降低而逐渐增高，其中分化差的胆囊癌阳性表达率为71.4%(10/14)，而高分化和中等分化胆囊腺癌阳性表达率分别为22.2%(4/18)和21.3%(6/26)，差异有显著性意义(P<0.005)。
, 百拇医药
表1 P53蛋白表达与胆囊癌分化程度 胆囊癌组织类型
例数
P53蛋白(-)
P53蛋白(+)
高分化腺癌
18
14
4*
中分化腺癌
28
22
, 百拇医药 6
低分化腺癌
14
4
10
Fisher精确检验，与低分化腺癌比：*P<0.05
2.3 P53蛋白阳性反应与肿瘤临床病理分期的关系。在本组60例胆囊癌中，按照1987年UICC的胆囊癌TNM分期标准分期，Ⅰ期19例，Ⅱ期15例，Ⅲ期17例，Ⅳ期9例，P53蛋白在各分期胆囊癌中有不同程度的表达，其间差异无显著性意义(P>0.05)(见表2)。
表2 P53蛋白表达与胆囊癌临床分期的关系 临床分期
, 百拇医药
例数
P53蛋白(-)
P53蛋白(+)
Ⅰ期
19
11
7
Ⅱ期
15
11
4
Ⅲ期
17
, http://www.100md.com
12
5
Ⅳ期
9
6
4
2×4表格χ2检验，P>0.05
3 讨论
P53基因是至今发现与人类肿瘤相关性最高的基因，野生型(Wild Type)P53基因位于人类第17号染色体短臂13区带(17P13.1)上，全长约16～20kb，由11个外显子和10个内显子组成。编码393个氨基酸残基组成的核内磷酸蛋白，分子量53kDa，即称为P53蛋白。P53基因是一种重要的肿瘤抑制基因，其通过调节细胞生长、监护细胞DNA完整性、诱导DNA损伤且不能修复的细胞发生凋亡，阻止具有癌变倾向的基因突变细胞产生，从而发挥其抑癌作用[1]。P53基因突变、缺失或失活是许多肿瘤发生的原因[2]，突变型P53基因的蛋白产物半衰期长达4～12小时不等，而野生型P53基因蛋白产物的半衰期仅为6～12分钟。P53基因突变、P53蛋白与病毒癌蛋白结合和P53蛋白与特殊扩增的细胞基因产物结合，使P53基因由抑癌基因转变为癌基因。用免疫组化方法实际检测到的是存积在肿瘤细胞内突变型P53蛋白，该P53蛋白具有促癌作用。
, 百拇医药
日前应用免疫组化方法已在乳腺癌、结肠直癌、肺癌等较多人类肿瘤中检出P53蛋白，但P53蛋白在胆囊癌中的表达改变及其意义的文献报道尚少。本实验应用鼠抗人P53单克隆抗体检测胆囊癌中的P53蛋白表达，结果发现胆囊癌的P53蛋白表达阳性率为33.3%，而对照组慢性胆囊炎和癌旁正常组织中均为阴性，提示胆囊癌组织内有P53蛋白的存积，表明P53基因突变与胆囊的发生发展有着密切关系。众多研究发现P53过度表达与组织细胞分化有关，分化越差的恶性肿瘤，P53表达率越高。本实验结果亦发现：P53蛋白在低分化胆囊腺癌中的阳性表达率明显高于高、中分化的胆囊癌(P<0.05)，提示P53蛋白的阳性表达与胆囊腺癌的分化程度有关，即分化越差，P53蛋白阳性表达越高，表达P53蛋白表达水平是反映肿瘤分化程度的一个较客观指标。本实验发现P53蛋白在各临床分期的胆囊腺癌均有不同程度表达，但其间差异无显著性意义(P>0.05)。
参考文献
1 Lane DP.Cancer,P53,guardia of the genone.Nature,1992,358(6381)∶15～6
2 Younes M,Lebouifz M,Bomner E,et al.P53accumalation in benign breast biosy specimens.Hum Pathal,1995,26∶135
(收稿：1998-11-26), http://www.100md.com