浸润性乳腺癌组织表达α－5、β－1整合蛋白的临床病理意义
作者：皋岚湘 丁华野 邓永江 刘光
单位：北京军区总医院病理科(北京，100700)
关键词：乳腺肿瘤；整合蛋白；免疫组织化学
癌症990435
中图分类号：R737.9 文献标识码：A
文献编号：1000-467X(1999)04-0465-01
整合蛋白(integrin)是一种特殊的细胞表面膜蛋白，为重要的细胞粘附因子[1～2]。它在结构上具有多态性，由α和β二个亚单位构成异源性二聚体复合物，其不同状态的复合物可与不同的粘附蛋白结合。我们最近研究发现，纤维粘连蛋白(fibronectinFN)在乳腺癌细胞外基质(ECM)中占较大比例，并且表达量多与患者预后好有明显关系[3]。国外研究证实α-5、β-1整合蛋白是大多数细胞表面较大的FN受体，它与FN之间的相互关系可对恶性肿瘤发生多方面的作用[1～2][4～5]。但它在乳腺癌实体瘤中的表达状况及意义还不十分明确。为了进一步证明其作用和意义，我们对α-5、β-1整合蛋白在乳腺癌的表达进行了初步研究和观察。
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1 材料和方法
1.1 材料
收集我院乳腺癌手术标本存档蜡块94例，均为10%甲醛固定及常规包埋。按着WHO分类标准进行病理分型。参照Elston和Ellis改良的Scarff-Bloom-Richardson分级法，对浸润性导管癌进行定量分级。
1.2 免疫组化染色
切片厚4μm。单克隆鼠抗人CD29(Intergrinα-5β-1链)抗体(克隆号35493，美国Pharmingen公司产品，购置于深圳晶美生物工程有限公司)，稀释度1∶100。采用S-P法染色，染色步骤按试剂盒(DAKO公司产品)说明书。滴加抗体前将切片进行微波抗原修复。用正常淋巴结切片作阳性对照；不加第一抗为阴性对照。
1.3 阳性结果判断
, 百拇医药
由2名医师分别对免疫组化切片进行评估。CD29阳性物质位于肿瘤细胞内，其强度从以下二个方面进行打分定量判断：①阳性着色：可见明确的浅黄色为1分，深黄色2分，棕黄色3分；②阳性细胞数：用高倍视野(HPF)在每张切片上计算1000个以上癌细胞，阳性细胞数10%～25%为1分、26%～50%为2分、51%～100%为3分。0分为阴性(-)，2为弱阳性(+)，3分为轻度阳性(++)，4～5分为中度阳性(+++)，6分为强度阳性(++++)。
1.4 统计学分析
所有资料建立在foxpro数据库中，采取卡方检验法，使用SAS软件进行统计学处理。
2 结果
2.1 α-5、β-1整合蛋白在乳腺癌及癌旁组织的表达情况
α-5、β-1整合蛋白可在乳腺正常小叶的肌上皮和腺上皮细胞、血管内皮和平滑肌、神经纤维、纤维母细胞和淋巴细胞中表达。本组乳腺癌表达率为84.0%，其中弱阳性16例(17.0%)，轻度阳性22例(23.4%)，中度阳性27例(28.7%)，强阳性14例(14.9%)。阳性物质主要位于癌细胞膜或胞浆中，呈颗粒和团块状，亦可在核内表达。
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2.2 α-5、β-1整合蛋白在浸润性乳腺癌中的表达与临床病理参数的关系(见表1)
表1 浸润性乳腺癌α-5、β-1整合蛋白表达与临床病理参数的关系 病理参数
例数
α-5、β-1整合蛋白表达
阳性率(%)
+(%)
2+(%)
3+(%)
4+(%)
分型
IDC
, 百拇医药
82
14(17.1)
17(20.7)
24(29.3)
13(15.9)
82.9
ILC
6
1(16.7)
4(66.7)
1(16.7)
0-
100
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MC
3
1(33.3)
1(33.3)
0-
0-
66.6
MYC
2
0-
0-
1(50.0)
1(50.0)
, http://www.100md.com
-
TC
1
0
0
1
0
-
肿瘤大小
≤3.0cm
44
8(18.2)
11(25.0)
, 百拇医药 12(27.3)
8(18.2)
88.6
>3.0cm
50
8(16.0)
11(22.0)
15(30.0)
6(12.0)
80.0
分级
Ⅰ
28
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5(17.9)
5(17.9)
8(28.6)
6(21.4)
85.7
Ⅱ
25
2(8.0)
6(24.0)
10(40.0)
5(20.0)
92.0
Ⅲ
, 百拇医药
29
7(24.1)
6(20.7)
6(20.7)
2(6.9)
72.4
淋巴结转移
有
55
7(12.7)
14(25.5)
18(32.7)
8(14.5)
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85.5
无
38
9(23.6)
8(21.0)
9(23.7)
6(15.8)
84.2
注：IDC为漫润性导管癌，LIC为漫润性小叶癌，MYC为粘液癌MC，为髓样癌，TC为管状癌
本组除浸润性导管乳腺癌外，因其它类型例数太少，各型之间未做统计学分析。病理分级为Ⅰ和Ⅱ级者中度以上表达率明显高于Ⅲ级(χ2=6.57，P<0.05)。本组此蛋白的表达与肿瘤大小和淋巴结转移无显著相关性 。
, 百拇医药
2.3 α-5、β-1整合蛋白的表达与浸润性乳腺癌患者预后的关系
本组获得2年以上随访材料者45例(最长者为144个月)。其表达情况见表2，2+以上者生存组(90.4%)比死亡组(58%)明显增高，4+者两组之间有显著性差异的趋势(χ2=3.18，P=0.0765)。
3 讨论
整合蛋白是细胞间和细胞与ECM间相互粘附不可缺少的受体，肿瘤要维持肿块的完整性亦需要这种受体的存在。本组结果显示大多数乳腺癌有α-5、β-1整合蛋白的表达(84%)，表明此种蛋白在乳腺癌的形成和发展中具有重要的作用。本组显示表达强度与乳腺癌的分化程度有明显的关系，分化差的表达强度较弱。因而可以引起分化差的乳腺癌：①腺管形成得少，细胞之间粘附性差；②肿瘤细胞增殖性强(核异形性大，核分裂多)，有研究表明整合蛋白的表达与细胞增殖呈相反的关系[5]。本组表达强度与患者预后也有一定的相关性趋势，表达弱者预后较差。表明此蛋白表达水平低，易发生远处转移而引起死亡。但本组结果也有相矛盾之处，即其表达强度与淋巴结转移无明显关系。肿瘤细胞在进入血管和淋巴管道时，其参与调节细胞粘附和迁移的因子是否存在不同?α-5、β-1整合蛋白是否不能单独评价肿瘤的生物学特性?这一问题有待进一步观察。
, 百拇医药
表2 α-5、β-1整合蛋白的表达与浸润性乳腺癌患者预后的关系 组别
例数
α-5、β-1整合蛋白的表达
阳性率(%)
1+(%)
2+(%)
3+(%)
4+(%)
生存组
21
0
5(23.8)
, 百拇医药
7(33.3)
7(33.3)
90.4
死亡组
22
1(4.3)
3(13.6)
8(36.4)
2(9.0)
72.7
基金项目：解放军医药卫生科研基金资助(编号96M009)
参考文献
, 百拇医药
1 Akiyama SK,Olden K,Yamada KM.Fibronectin and integrins in invasion and metastasis [J] .Cancer and Metastasis Rev,1995,14:173～189.
2 Ruoslahti E.Cell adhesion and tumor metastasis [J] .Princess Takamatsu Symp,1994,24:99～105.
3 皋岚湘，陈乐真，丁华野，等.纤维连接蛋白、Ⅳ型胶原和层粘连蛋白在浸润性乳腺癌组织中的表达及意义[J].解放军医学杂志，1998，23(3)：181.
4 Nista A,Leonetti C,Bernardini G,et al.Functional role of alpha 4 beta 1 and alpha 5 beta1 integrin fibronectin receptors expressed on adriamycinresistant MCF-7 human mammary carcinoma cells [J] .Int J Cancer,1997,79:133～141.
6 Varner JA,Emerson DA,Juliano RL.Integrin alpha 5 beta 1 expression negatively regulates cell growth:reversal by attachment to fironectin [J] .Mol Biol Cell,1995,6:725～740.
收稿日期：1998-10-12；修回日期：1998-12-17, 百拇医药
单位：北京军区总医院病理科(北京，100700)
关键词：乳腺肿瘤；整合蛋白；免疫组织化学
癌症990435
中图分类号：R737.9 文献标识码：A
文献编号：1000-467X(1999)04-0465-01
整合蛋白(integrin)是一种特殊的细胞表面膜蛋白，为重要的细胞粘附因子[1～2]。它在结构上具有多态性，由α和β二个亚单位构成异源性二聚体复合物，其不同状态的复合物可与不同的粘附蛋白结合。我们最近研究发现，纤维粘连蛋白(fibronectinFN)在乳腺癌细胞外基质(ECM)中占较大比例，并且表达量多与患者预后好有明显关系[3]。国外研究证实α-5、β-1整合蛋白是大多数细胞表面较大的FN受体，它与FN之间的相互关系可对恶性肿瘤发生多方面的作用[1～2][4～5]。但它在乳腺癌实体瘤中的表达状况及意义还不十分明确。为了进一步证明其作用和意义，我们对α-5、β-1整合蛋白在乳腺癌的表达进行了初步研究和观察。
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1 材料和方法
1.1 材料
收集我院乳腺癌手术标本存档蜡块94例，均为10%甲醛固定及常规包埋。按着WHO分类标准进行病理分型。参照Elston和Ellis改良的Scarff-Bloom-Richardson分级法，对浸润性导管癌进行定量分级。
1.2 免疫组化染色
切片厚4μm。单克隆鼠抗人CD29(Intergrinα-5β-1链)抗体(克隆号35493，美国Pharmingen公司产品，购置于深圳晶美生物工程有限公司)，稀释度1∶100。采用S-P法染色，染色步骤按试剂盒(DAKO公司产品)说明书。滴加抗体前将切片进行微波抗原修复。用正常淋巴结切片作阳性对照；不加第一抗为阴性对照。
1.3 阳性结果判断
, 百拇医药
由2名医师分别对免疫组化切片进行评估。CD29阳性物质位于肿瘤细胞内，其强度从以下二个方面进行打分定量判断：①阳性着色：可见明确的浅黄色为1分，深黄色2分，棕黄色3分；②阳性细胞数：用高倍视野(HPF)在每张切片上计算1000个以上癌细胞，阳性细胞数10%～25%为1分、26%～50%为2分、51%～100%为3分。0分为阴性(-)，2为弱阳性(+)，3分为轻度阳性(++)，4～5分为中度阳性(+++)，6分为强度阳性(++++)。
1.4 统计学分析
所有资料建立在foxpro数据库中，采取卡方检验法，使用SAS软件进行统计学处理。
2 结果
2.1 α-5、β-1整合蛋白在乳腺癌及癌旁组织的表达情况
α-5、β-1整合蛋白可在乳腺正常小叶的肌上皮和腺上皮细胞、血管内皮和平滑肌、神经纤维、纤维母细胞和淋巴细胞中表达。本组乳腺癌表达率为84.0%，其中弱阳性16例(17.0%)，轻度阳性22例(23.4%)，中度阳性27例(28.7%)，强阳性14例(14.9%)。阳性物质主要位于癌细胞膜或胞浆中，呈颗粒和团块状，亦可在核内表达。
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2.2 α-5、β-1整合蛋白在浸润性乳腺癌中的表达与临床病理参数的关系(见表1)
表1 浸润性乳腺癌α-5、β-1整合蛋白表达与临床病理参数的关系 病理参数
例数
α-5、β-1整合蛋白表达
阳性率(%)
+(%)
2+(%)
3+(%)
4+(%)
分型
IDC
, 百拇医药
82
14(17.1)
17(20.7)
24(29.3)
13(15.9)
82.9
ILC
6
1(16.7)
4(66.7)
1(16.7)
0-
100
, http://www.100md.com
MC
3
1(33.3)
1(33.3)
0-
0-
66.6
MYC
2
0-
0-
1(50.0)
1(50.0)
, http://www.100md.com
-
TC
1
0
0
1
0
-
肿瘤大小
≤3.0cm
44
8(18.2)
11(25.0)
, 百拇医药 12(27.3)
8(18.2)
88.6
>3.0cm
50
8(16.0)
11(22.0)
15(30.0)
6(12.0)
80.0
分级
Ⅰ
28
, http://www.100md.com
5(17.9)
5(17.9)
8(28.6)
6(21.4)
85.7
Ⅱ
25
2(8.0)
6(24.0)
10(40.0)
5(20.0)
92.0
Ⅲ
, 百拇医药
29
7(24.1)
6(20.7)
6(20.7)
2(6.9)
72.4
淋巴结转移
有
55
7(12.7)
14(25.5)
18(32.7)
8(14.5)
, http://www.100md.com
85.5
无
38
9(23.6)
8(21.0)
9(23.7)
6(15.8)
84.2
注：IDC为漫润性导管癌，LIC为漫润性小叶癌，MYC为粘液癌MC，为髓样癌，TC为管状癌
本组除浸润性导管乳腺癌外，因其它类型例数太少，各型之间未做统计学分析。病理分级为Ⅰ和Ⅱ级者中度以上表达率明显高于Ⅲ级(χ2=6.57，P<0.05)。本组此蛋白的表达与肿瘤大小和淋巴结转移无显著相关性 。
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2.3 α-5、β-1整合蛋白的表达与浸润性乳腺癌患者预后的关系
本组获得2年以上随访材料者45例(最长者为144个月)。其表达情况见表2，2+以上者生存组(90.4%)比死亡组(58%)明显增高，4+者两组之间有显著性差异的趋势(χ2=3.18，P=0.0765)。
3 讨论
整合蛋白是细胞间和细胞与ECM间相互粘附不可缺少的受体，肿瘤要维持肿块的完整性亦需要这种受体的存在。本组结果显示大多数乳腺癌有α-5、β-1整合蛋白的表达(84%)，表明此种蛋白在乳腺癌的形成和发展中具有重要的作用。本组显示表达强度与乳腺癌的分化程度有明显的关系，分化差的表达强度较弱。因而可以引起分化差的乳腺癌：①腺管形成得少，细胞之间粘附性差；②肿瘤细胞增殖性强(核异形性大，核分裂多)，有研究表明整合蛋白的表达与细胞增殖呈相反的关系[5]。本组表达强度与患者预后也有一定的相关性趋势，表达弱者预后较差。表明此蛋白表达水平低，易发生远处转移而引起死亡。但本组结果也有相矛盾之处，即其表达强度与淋巴结转移无明显关系。肿瘤细胞在进入血管和淋巴管道时，其参与调节细胞粘附和迁移的因子是否存在不同?α-5、β-1整合蛋白是否不能单独评价肿瘤的生物学特性?这一问题有待进一步观察。
, 百拇医药
表2 α-5、β-1整合蛋白的表达与浸润性乳腺癌患者预后的关系 组别
例数
α-5、β-1整合蛋白的表达
阳性率(%)
1+(%)
2+(%)
3+(%)
4+(%)
生存组
21
0
5(23.8)
, 百拇医药
7(33.3)
7(33.3)
90.4
死亡组
22
1(4.3)
3(13.6)
8(36.4)
2(9.0)
72.7
基金项目：解放军医药卫生科研基金资助(编号96M009)
参考文献
, 百拇医药
1 Akiyama SK,Olden K,Yamada KM.Fibronectin and integrins in invasion and metastasis [J] .Cancer and Metastasis Rev,1995,14:173～189.
2 Ruoslahti E.Cell adhesion and tumor metastasis [J] .Princess Takamatsu Symp,1994,24:99～105.
3 皋岚湘，陈乐真，丁华野，等.纤维连接蛋白、Ⅳ型胶原和层粘连蛋白在浸润性乳腺癌组织中的表达及意义[J].解放军医学杂志，1998，23(3)：181.
4 Nista A,Leonetti C,Bernardini G,et al.Functional role of alpha 4 beta 1 and alpha 5 beta1 integrin fibronectin receptors expressed on adriamycinresistant MCF-7 human mammary carcinoma cells [J] .Int J Cancer,1997,79:133～141.
6 Varner JA,Emerson DA,Juliano RL.Integrin alpha 5 beta 1 expression negatively regulates cell growth:reversal by attachment to fironectin [J] .Mol Biol Cell,1995,6:725～740.
收稿日期：1998-10-12；修回日期：1998-12-17, 百拇医药