nm23－H1和层粘连蛋白表达预测声门上喉癌隐性颈淋巴结转移及其临床意义
作者：杨安奎 曾宗渊 陈福进
单位：中山医科大学肿瘤防治中心头颈科(广州，510060)
关键词：nm23-H1；层粘连蛋白；喉肿瘤；淋巴结转移
癌症990423
【摘要】目的：探讨声门上喉癌隐性颈淋巴结转移更好的预测方法。方法：应用免疫组化染色检测nm23-H1基因和层粘连蛋白的表达，回顾性分析129例声门上喉癌的病例资料。结果：nm23-H1和层粘连蛋白的表达与声门上型喉癌颈淋巴结转移呈负相关。结论：nm23-H1和层粘连蛋白的表达可用于指导临床对声门上型喉癌N0病例应用选择性颈清扫术。
中图分类号：R739.8 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)04-0432-03
, http://www.100md.com
Expression of nm23-H1 and laminin predict concealed cervical lymph node metastasis of supraglottic laryngeal carcinoma and its clinical significance
YANG An-kui，ZENG Zong-yuan，CHEN Fu-jin
Department of Head and Neck Surgery, Cancer Center, Sun Yat-sen University of Medical Science, Guangzhou 510060,P.R.China
【Abstract】 Objective：To search a better method to predict concealed cervical lymph node metastasis of supraglottic laryngeal carcinoma. Methods：One hundred and twenty-nine cases of supraglottic laryngeal carcinoma were retrospectively analysed through testing nm23-H1 and laminin expression by immunohistochemical staining. Results：Expression of nm23-H1 and laminin were negatively correlated with the cervical lymph node metastasis of supraglottic laryngeal carcinoma. Conclusion：As a criterion, the result can guide the clinical practices applying S selective neck dissection.
, 百拇医药
Key words：Nm23-H1; Laminin; Laryngeal neoplasms; Lymph node metastasis
颈淋巴结转移影响声门上喉癌预后，文献报道其转移率为30%～60%，还有部分临床颈淋巴结阴性病例(N0病例)存在隐性颈淋巴结转移。目前对已有颈淋巴结转移的声门上喉癌均主张行治疗性颈清扫术，但对N0病例是否需要行选择性颈清扫术尚有争议，主要是现有临床条件尚不能完全甄别出隐性颈淋巴结转移者。我们选择与肿瘤转移密切相关的两个分子生物学指标nm23-H1和层粘连蛋白(LN)，研究它们的表达与声门上喉癌颈淋巴结转移的关系，寻找预测声门上喉癌颈淋巴结转移的指标，从而指导临床进一步筛选出N0病例隐性颈淋巴结转移者，有针对性地应用选择性颈清扫术。
1 材料与方法
收集1980～1992年在我院手术治疗的129例声门上喉鳞癌病例的资料。初诊治疗时，颈淋巴结阴性(即N0)病例84例，其中27例在随访过程中出现颈淋巴结转移；另外45例初治时即有颈淋巴结转移，其中3例临床检查未发现有颈淋巴结肿大，术时分别发现喉前、喉旁、颈深上有肿大淋巴结，术后病理证实为转移。
, 百拇医药
应用免疫组化方法(LSAB法)分别检测石蜡标本的nm23-H1基因的蛋白表达和基膜LN表达，所用试剂分别由Santa-Cruz和Dako公司提供。nm23-H1阳性表现为细胞中见棕褐色颗粒，每张切片阳性细胞<10%为-，10%～50%为+，>
表1 nm23-H1和LN表达与颈淋巴结转移关系 颈淋巴结转移
例数
阳性表达率
nm23
P
LN
P
nm23
LN
, 百拇医药
-
+
++
-
+
++
初治时阴性
84
78.6%
72.6%
18
49
17
<0.05
, 百拇医药
23
41
20
<0.05
阳性
45
53.3%
51.1%
21
18
6
22
20
, 百拇医药 3
随访时阴性
57
87.7%
78.9%
7
35
15
<0.01
12
26
19
<0.01
, 百拇医药 阳性
27
59.3%
59.3%
11
14
2
11
15
1
初治时阳性
45
53.3%
51.5%
, 百拇医药
21
18
6
>0.05
22
20
3
>0.05
随访时阳性
27
59.3%
59.3%
11
, 百拇医药
14
2
11
15
1
50%为++[1]。LN的免疫组化结果表现为基膜呈棕色线状结构，包绕瘤团周径3/4以上为++，1/4～3/4为+，1/4以内或缺失为-[2]。统计分析采用卡方检验。
2 结果
129例声门上喉癌中，nm23-H1表达++23例，+67例，-39例；阳性表达率69.8%。LN表达++23例，+61例，-45例；阳性表达率65.1%。二者表达均阳性81例，均阴性37例，表达符合率91.5%。其与颈淋巴结转移的关系见表1。资料显示nm23-H1表达和LN表达均与声门上喉癌颈淋巴结转移呈负相关。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 声门上喉癌颈淋巴结转移及治疗现状
声门上喉癌颈淋巴结转移率国内外报道一般为35%左右，本组资料为34.9%(45/129)。现今对颈淋巴结转移的诊断主要依靠临床检查和影像学检查，对颈部微小淋巴结转移难以判定。MaiJeffery[3]对声门上喉癌N0病例施行选择性颈清扫术，其颈淋巴结转移率为17%。时曜希等[4]报道对一组N0病例选择性颈清扫术标本行连续病理切片观察，转移率为33.3%；本组病例报告87例N0病例中有27例存在隐性或迟发颈淋巴结转移，占32.1%；若将术中发现颈淋巴结转移的3例也归于N0病例，则其转移率为34.5%(30/87)；与时曜希连续病理切片观察组的隐性转移率非常接近。连续病理切片虽能反映颈淋巴结转移的全貌，但非术前预测指标。目前对声门上喉癌N0病例的颈淋巴结处理存在争议。时曜希[4]认为由于术前难以检查出颈部极小的转移灶，提倡对N0病例行选择性颈清扫术。而声门上喉癌N0病例颈淋巴结转移率报道也为35%左右，若都行选择性颈清扫术，则有大半的患者是“牺牲品”；故有不少学者作了进一步的研究；建议有条件的行选择性颈清扫术。庄惠学等[5]认为应结合临床T分期来考虑，T1、T2可观察，或行颈动脉三角区探查术(淋巴结阳性者行颈清扫术)；T3、T4则一律行选择性颈清扫术。屠规益等[6]则认为声门上喉癌颈淋巴结转移绝大多数首先发生在颈深上组，主张术时行单颈或双颈局限性上颈清扫术以明确诊断，若淋巴结阳性则跟着行颈清扫术；否则不做。也有学者认为术中作颈深上淋巴结石腊和/或冰冻切片检查，未必能完全准确反映实际颈淋巴结转移的情况。Yuen等[7]则认为对于N0病例可以观察颈部，如有颈转移发生，二次手术还可挽救。以上研究仅从临床方面提供了帮助。我们则考虑引入分子生物学指标来处理这一问题，期望能进一步甄别出隐性颈淋巴结转移者。
, 百拇医药
3.2 声门上喉癌nm23-H1的表达及意义
nm23基因为一转移抑制基因，有nm23-H1和nm23-H2两个亚型，研究显示前者与肿瘤转移关系更密切；许多文献报道nm23-H1的mRNA和蛋白表达水平与淋巴结转移呈负相关。ScambiaG等[8]对106例卵巢癌进行了研究，结果显示淋巴结阴性的病人中nm23-H1表达阳性率(70%)较淋巴结阳性病人(44%)高(P<0.01)。
本组资料中，nm23-H1表达阳性率为69.8%，其表达与声门上喉癌颈淋巴结转移呈负相关，从而提示nm23基因在抑制声门上喉癌颈淋巴结转移方面发挥作用。这与SoonLee等[9]报道的结果相符。另一方面，初治时颈淋巴结阳性组与N0病例隐性淋巴结转移组其nm23-H1表达无差别(P>0.05)；也就是说颈淋巴结阳性患者与隐性颈淋巴结转移患者nm23-H1表达无差别。由此可见，nm23-H1表达可以反映出声门上喉癌颈淋巴结转移的状况，可用来指导临床对N0病例颈淋巴结的处理，以弥补单纯临床指标的局限性。若N0病例nm23-H1表达阳性，则颈部可考虑观察；反之则要考虑选择性颈清扫术。
, 百拇医药
3.3 声门上喉癌LN的表达及意义
在肿瘤转移过程中肿瘤细胞至少3次通过基膜，而层粘连蛋白(LN)是基膜中一种大分子非胶原性糖蛋白，与肿瘤细胞穿过基膜关系密切。基膜LN的表达与肿瘤细胞的浸润转移密切相关，这已被许多研究所证实。高志安等[10]在食管鳞癌研究中显示LN表达与癌组织血管、神经侵犯和淋巴结转移有密切关系。
本组资料中LN表达阳性率为65.1%，其表达与颈淋巴结转移呈负相关；另外，初治时颈淋巴结阳性组与N0病例隐性淋巴结转移组其LN表达无差别(P>0.05)，也就是说颈淋巴结转移阳性患者与存在隐性颈淋巴结转移患者LN表达无差别。
由上所见，LN表达也能反映出声门上喉癌颈淋巴结转移的状况，从而为临床筛选N0病例隐性颈淋巴结转移者提供了另一个有价值的分子生物学指标。
显然，在临床研究的基础上加上nm23-H1表达和LN表达这两个分子生物学指标，有助于判定N0病例隐性或迟发颈淋巴结转移者，使得选择性颈清扫术的应用更加准确无误。
, 百拇医药
参考文献
1 王盛乾,吴若华,洪东旭.nm23-H1基因蛋白在大肠癌中表达与预后的关系[J].癌症,1996,15,(5)：324～325.
2 陈秀鉴,郑玫,孙振国.乳腺癌层粘连蛋白表达的病理分析[J].肿瘤5,22(4)：209～211.
3 Resnick JM ,Uhlman D, Niehans GA, et al. Cervical lymph node status and survival in laryngeal carcinoma：prognostic factors [J] . Ann Otol Rhinol Laryngol, 1995,104：685～694.
4 时曜希,关超,陈兆琳,等.声门上喉癌颈淋巴结转移临床病理研究[J].中华耳鼻咽喉科杂志,1990,25(4)：234～236.
, 百拇医药
5 庄惠学,朱萍,梁树新,等.颈廓清术在声门上喉癌治疗中的临床研究[J].中华耳鼻咽喉科杂志,1992,27(6)：360～362.
6 屠规益,徐震纲,唐平章.头颈部鳞癌颈部N0的处理—声门上型喉癌[J].耳鼻咽喉-头颈外科,1997,4(1)：4～8.
7 Yuen APW, Wei WI, Wong SHW, et al. Critical appraisal of watchful waiting policy in the management of N0 neck of advanced laryngeal carcinoma [J] . Arch Otolaryngol Head Neck Surg, 1996,122(7)：742～745.
8 Scambia G, Ferrandina G, Marone M, et al. Nm23 in ovarian cancer：correlation with clinical outcome and other clinicopathologic and biochemical prognostic parameters [J] . J Clin Oncol, 1996,14(2)334～342.
9 Lee CS,Redshaw A,Boag G, et al. Nm23-H1 protein immunoreactivity in laryngeal carcinoma [J] . Cancer 1996,77：2246～2250.
10 高志安,张连珊,冼美生.食管鳞癌层粘连蛋白表达的意义[J].癌症,1995,14(1)：27～29.
收稿日期：1998-12-29；修回日期：1999-03-26, http://www.100md.com
单位：中山医科大学肿瘤防治中心头颈科(广州，510060)
关键词：nm23-H1；层粘连蛋白；喉肿瘤；淋巴结转移
癌症990423
【摘要】目的：探讨声门上喉癌隐性颈淋巴结转移更好的预测方法。方法：应用免疫组化染色检测nm23-H1基因和层粘连蛋白的表达，回顾性分析129例声门上喉癌的病例资料。结果：nm23-H1和层粘连蛋白的表达与声门上型喉癌颈淋巴结转移呈负相关。结论：nm23-H1和层粘连蛋白的表达可用于指导临床对声门上型喉癌N0病例应用选择性颈清扫术。
中图分类号：R739.8 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)04-0432-03
, http://www.100md.com
Expression of nm23-H1 and laminin predict concealed cervical lymph node metastasis of supraglottic laryngeal carcinoma and its clinical significance
YANG An-kui，ZENG Zong-yuan，CHEN Fu-jin
Department of Head and Neck Surgery, Cancer Center, Sun Yat-sen University of Medical Science, Guangzhou 510060,P.R.China
【Abstract】 Objective：To search a better method to predict concealed cervical lymph node metastasis of supraglottic laryngeal carcinoma. Methods：One hundred and twenty-nine cases of supraglottic laryngeal carcinoma were retrospectively analysed through testing nm23-H1 and laminin expression by immunohistochemical staining. Results：Expression of nm23-H1 and laminin were negatively correlated with the cervical lymph node metastasis of supraglottic laryngeal carcinoma. Conclusion：As a criterion, the result can guide the clinical practices applying S selective neck dissection.
, 百拇医药
Key words：Nm23-H1; Laminin; Laryngeal neoplasms; Lymph node metastasis
颈淋巴结转移影响声门上喉癌预后，文献报道其转移率为30%～60%，还有部分临床颈淋巴结阴性病例(N0病例)存在隐性颈淋巴结转移。目前对已有颈淋巴结转移的声门上喉癌均主张行治疗性颈清扫术，但对N0病例是否需要行选择性颈清扫术尚有争议，主要是现有临床条件尚不能完全甄别出隐性颈淋巴结转移者。我们选择与肿瘤转移密切相关的两个分子生物学指标nm23-H1和层粘连蛋白(LN)，研究它们的表达与声门上喉癌颈淋巴结转移的关系，寻找预测声门上喉癌颈淋巴结转移的指标，从而指导临床进一步筛选出N0病例隐性颈淋巴结转移者，有针对性地应用选择性颈清扫术。
1 材料与方法
收集1980～1992年在我院手术治疗的129例声门上喉鳞癌病例的资料。初诊治疗时，颈淋巴结阴性(即N0)病例84例，其中27例在随访过程中出现颈淋巴结转移；另外45例初治时即有颈淋巴结转移，其中3例临床检查未发现有颈淋巴结肿大，术时分别发现喉前、喉旁、颈深上有肿大淋巴结，术后病理证实为转移。
, 百拇医药
应用免疫组化方法(LSAB法)分别检测石蜡标本的nm23-H1基因的蛋白表达和基膜LN表达，所用试剂分别由Santa-Cruz和Dako公司提供。nm23-H1阳性表现为细胞中见棕褐色颗粒，每张切片阳性细胞<10%为-，10%～50%为+，>
表1 nm23-H1和LN表达与颈淋巴结转移关系 颈淋巴结转移
例数
阳性表达率
nm23
P
LN
P
nm23
LN
, 百拇医药
-
+
++
-
+
++
初治时阴性
84
78.6%
72.6%
18
49
17
<0.05
, 百拇医药
23
41
20
<0.05
阳性
45
53.3%
51.1%
21
18
6
22
20
, 百拇医药 3
随访时阴性
57
87.7%
78.9%
7
35
15
<0.01
12
26
19
<0.01
, 百拇医药 阳性
27
59.3%
59.3%
11
14
2
11
15
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初治时阳性
45
53.3%
51.5%
, 百拇医药
21
18
6
>0.05
22
20
3
>0.05
随访时阳性
27
59.3%
59.3%
11
, 百拇医药
14
2
11
15
1
50%为++[1]。LN的免疫组化结果表现为基膜呈棕色线状结构，包绕瘤团周径3/4以上为++，1/4～3/4为+，1/4以内或缺失为-[2]。统计分析采用卡方检验。
2 结果
129例声门上喉癌中，nm23-H1表达++23例，+67例，-39例；阳性表达率69.8%。LN表达++23例，+61例，-45例；阳性表达率65.1%。二者表达均阳性81例，均阴性37例，表达符合率91.5%。其与颈淋巴结转移的关系见表1。资料显示nm23-H1表达和LN表达均与声门上喉癌颈淋巴结转移呈负相关。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 声门上喉癌颈淋巴结转移及治疗现状
声门上喉癌颈淋巴结转移率国内外报道一般为35%左右，本组资料为34.9%(45/129)。现今对颈淋巴结转移的诊断主要依靠临床检查和影像学检查，对颈部微小淋巴结转移难以判定。MaiJeffery[3]对声门上喉癌N0病例施行选择性颈清扫术，其颈淋巴结转移率为17%。时曜希等[4]报道对一组N0病例选择性颈清扫术标本行连续病理切片观察，转移率为33.3%；本组病例报告87例N0病例中有27例存在隐性或迟发颈淋巴结转移，占32.1%；若将术中发现颈淋巴结转移的3例也归于N0病例，则其转移率为34.5%(30/87)；与时曜希连续病理切片观察组的隐性转移率非常接近。连续病理切片虽能反映颈淋巴结转移的全貌，但非术前预测指标。目前对声门上喉癌N0病例的颈淋巴结处理存在争议。时曜希[4]认为由于术前难以检查出颈部极小的转移灶，提倡对N0病例行选择性颈清扫术。而声门上喉癌N0病例颈淋巴结转移率报道也为35%左右，若都行选择性颈清扫术，则有大半的患者是“牺牲品”；故有不少学者作了进一步的研究；建议有条件的行选择性颈清扫术。庄惠学等[5]认为应结合临床T分期来考虑，T1、T2可观察，或行颈动脉三角区探查术(淋巴结阳性者行颈清扫术)；T3、T4则一律行选择性颈清扫术。屠规益等[6]则认为声门上喉癌颈淋巴结转移绝大多数首先发生在颈深上组，主张术时行单颈或双颈局限性上颈清扫术以明确诊断，若淋巴结阳性则跟着行颈清扫术；否则不做。也有学者认为术中作颈深上淋巴结石腊和/或冰冻切片检查，未必能完全准确反映实际颈淋巴结转移的情况。Yuen等[7]则认为对于N0病例可以观察颈部，如有颈转移发生，二次手术还可挽救。以上研究仅从临床方面提供了帮助。我们则考虑引入分子生物学指标来处理这一问题，期望能进一步甄别出隐性颈淋巴结转移者。
, 百拇医药
3.2 声门上喉癌nm23-H1的表达及意义
nm23基因为一转移抑制基因，有nm23-H1和nm23-H2两个亚型，研究显示前者与肿瘤转移关系更密切；许多文献报道nm23-H1的mRNA和蛋白表达水平与淋巴结转移呈负相关。ScambiaG等[8]对106例卵巢癌进行了研究，结果显示淋巴结阴性的病人中nm23-H1表达阳性率(70%)较淋巴结阳性病人(44%)高(P<0.01)。
本组资料中，nm23-H1表达阳性率为69.8%，其表达与声门上喉癌颈淋巴结转移呈负相关，从而提示nm23基因在抑制声门上喉癌颈淋巴结转移方面发挥作用。这与SoonLee等[9]报道的结果相符。另一方面，初治时颈淋巴结阳性组与N0病例隐性淋巴结转移组其nm23-H1表达无差别(P>0.05)；也就是说颈淋巴结阳性患者与隐性颈淋巴结转移患者nm23-H1表达无差别。由此可见，nm23-H1表达可以反映出声门上喉癌颈淋巴结转移的状况，可用来指导临床对N0病例颈淋巴结的处理，以弥补单纯临床指标的局限性。若N0病例nm23-H1表达阳性，则颈部可考虑观察；反之则要考虑选择性颈清扫术。
, 百拇医药
3.3 声门上喉癌LN的表达及意义
在肿瘤转移过程中肿瘤细胞至少3次通过基膜，而层粘连蛋白(LN)是基膜中一种大分子非胶原性糖蛋白，与肿瘤细胞穿过基膜关系密切。基膜LN的表达与肿瘤细胞的浸润转移密切相关，这已被许多研究所证实。高志安等[10]在食管鳞癌研究中显示LN表达与癌组织血管、神经侵犯和淋巴结转移有密切关系。
本组资料中LN表达阳性率为65.1%，其表达与颈淋巴结转移呈负相关；另外，初治时颈淋巴结阳性组与N0病例隐性淋巴结转移组其LN表达无差别(P>0.05)，也就是说颈淋巴结转移阳性患者与存在隐性颈淋巴结转移患者LN表达无差别。
由上所见，LN表达也能反映出声门上喉癌颈淋巴结转移的状况，从而为临床筛选N0病例隐性颈淋巴结转移者提供了另一个有价值的分子生物学指标。
显然，在临床研究的基础上加上nm23-H1表达和LN表达这两个分子生物学指标，有助于判定N0病例隐性或迟发颈淋巴结转移者，使得选择性颈清扫术的应用更加准确无误。
, 百拇医药
参考文献
1 王盛乾,吴若华,洪东旭.nm23-H1基因蛋白在大肠癌中表达与预后的关系[J].癌症,1996,15,(5)：324～325.
2 陈秀鉴,郑玫,孙振国.乳腺癌层粘连蛋白表达的病理分析[J].肿瘤5,22(4)：209～211.
3 Resnick JM ,Uhlman D, Niehans GA, et al. Cervical lymph node status and survival in laryngeal carcinoma：prognostic factors [J] . Ann Otol Rhinol Laryngol, 1995,104：685～694.
4 时曜希,关超,陈兆琳,等.声门上喉癌颈淋巴结转移临床病理研究[J].中华耳鼻咽喉科杂志,1990,25(4)：234～236.
, 百拇医药
5 庄惠学,朱萍,梁树新,等.颈廓清术在声门上喉癌治疗中的临床研究[J].中华耳鼻咽喉科杂志,1992,27(6)：360～362.
6 屠规益,徐震纲,唐平章.头颈部鳞癌颈部N0的处理—声门上型喉癌[J].耳鼻咽喉-头颈外科,1997,4(1)：4～8.
7 Yuen APW, Wei WI, Wong SHW, et al. Critical appraisal of watchful waiting policy in the management of N0 neck of advanced laryngeal carcinoma [J] . Arch Otolaryngol Head Neck Surg, 1996,122(7)：742～745.
8 Scambia G, Ferrandina G, Marone M, et al. Nm23 in ovarian cancer：correlation with clinical outcome and other clinicopathologic and biochemical prognostic parameters [J] . J Clin Oncol, 1996,14(2)334～342.
9 Lee CS,Redshaw A,Boag G, et al. Nm23-H1 protein immunoreactivity in laryngeal carcinoma [J] . Cancer 1996,77：2246～2250.
10 高志安,张连珊,冼美生.食管鳞癌层粘连蛋白表达的意义[J].癌症,1995,14(1)：27～29.
收稿日期：1998-12-29；修回日期：1999-03-26, http://www.100md.com