黄岑中酚性甙类对小鼠放射损伤防护作用的研究
作者：利国威 冼超贵 雷穗妮 陈昆田
单位：中山医科大学肿瘤防治中心
关键词：黄芩；酚性甙类；放射损伤防护剂；小鼠
癌症990420
【摘要】目的：探索黄苓中的放射损伤防护作用有效成分。方法：黄芩水提液酸化保温(80℃)50分钟，滤去析出的黄芩黄酮类(FSBG)，水溶液用经典分离法得一沉淀物(Ⅰ)、化学分析其结构类型；用60Co7.7Gy～8.7Gy全身照射纯系NIH雌性小鼠，照前35～45min每鼠腹腔注射(Ⅰ)1g/kg或2g/kg，观察生存防护效力、30天存活率和照射4.0Gy(2g/kg)后第4天和第12天的WBC、PLT、RBC和HGB。结果：(1)FSBG和(Ⅰ)均对三氯化铁、Molisch、Fehling试剂呈阳性反应，前者对浓硫酸、碱试液和盐酸镁粉呈阳性而(Ⅰ)呈阴性；(2)每鼠1g/kg和2g/kg剂量均显著提高生存防护效力(1.35～2.08治疗组30天存活时间和对照组30天存活时间之比值)和30天存率(治疗组为8.33～41.46%，对照组为0～2.50%)，2g/kg能明显增加4.0Gy照后第4天和第12天的WBC、PLT、RBC和HGB。结论：(1)对浓硫酸等的呈色反应差异表明(Ⅰ)和FSBG化学结构不同；对FeCl3等阳性反应提示(Ⅰ)的主要成分为酚性性甙类；(2)GSBG有显著的放射损伤护作用；(3)本研究为黄芩的新应用提供了重要依据。
, 百拇医药
中图分类号：R142.3；R730.52 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)04-0422-04
Study on the protective effect on radiation injury of mice by glycoside with phenolic hydroxyl group from Scutellaria baicalensis Georgi
LI Guo-wei, XIAN Chao-gui, LEI Sui-ni,et al.
Departemtn of Radiation Oncology,Cancer Center,Sun Yat-sen Uniuersity of Medical Sciences,Guangzhou 510060,P.R.China
【Abstract】 Objective：The effective principle with protective effect on radiation injury from Scutellaria baicalensis Georgi (SBG) was found and studied. Methods：The heated extracted aqueous liquid from SBG was acidified and kept hot for 50 minutes in 80℃ ， the flavonoids of SBG (FSBG) were precipitated and removed by filter.A precipitate (Ⅰ) from the filtered solution was obtained by the classical separation process.Tests were conducted on mice to detect whether (Ⅰ) is effective for protection against γ -ray irradiation.Intraperitoneal injection(ip) of (Ⅰ) 1 g/kg and 2 g/kg in NIH female mice 35～45 minutes befores 7.7～8.7 Gy of whole body 60Co irradiation were conducted,the survival effects,30 days survival rate and in case of ip of (Ⅰ) 2 g /kg the WBC,PLT,RBC and HGB were observed on 4th and 12th day after 4.0 Gy exposure. Results：Positive reactions were shown with following chemical reagents：ferric chloride,Molisch,Fehling reagents on FSBG and (Ⅰ),however,concentrated sulfuric acid,alkaline reagents and hydrochloric acid-Mg powder showed positive reaction on FSBG,but negative on (Ⅰ).Intraperitoneal injection of (Ⅰ) 1 g/kg and 2 g/kg increased the survival effects(1.35～2.08,the ratio of mean survival time in a treated group to that of the control group in 30 d after irradiation) and 30 days survival rate (8.33～41.46% in treated and 0～2.50% in control group,respectively) significantly in comparison with control mice.In cases of ip of (Ⅰ) 2 g/kg the WBC,PLT,RBC and HGb were all increased on 4 th and 12 th day after 4.0 Gy exposure as compared with control.Conclusions：1 The different coloration to chemical reagents (concentrated sulfuric acid and etc.) showed that there are different chemical structures between(Ⅰ) and FSBG.The positive reactions (ferric chloride and etc.) suggested that the main constituent of (Ⅰ) was a chemical type of glycoside with phenolic hydroxyl group. 2 The glycoside with phenolic hydroxyl group exhibited good radioprotective effect against whole-body lethal irradiation of mice.3 The study may be considered as new application of SBG.
, 百拇医药
Key words：Scutellaria baicalensis Georgi; Glycoside with phenolic hydroxyl group; Protective agent on radiation injury mice
前文报道黄芩(ScutellariabaicalensisGeorgi,SBG)水提物有显著的放射损伤防护(RP)作用[1]，其功效与作者研制并经动物实验及临床应用效果显著的RP-2[2～6](黄芩为主药)相一致。本文报道进一步分离出一种黄芩酚性甙类(GlycosideofSBC,GS-BG)及其RP作用的研究结果。
1 材料和方法
1.1 GSBG的分离和化学检测
黄芩(产地河北省，购自广州赵秀药材分公司)水提液用盐酸调pH1～2。在80℃下保温50min，室温静置，滤去芩黄酮类(FlavoinoidesofSBG,FSBG)沉淀。滤液用经典分离法获得一沉淀物简称(Ⅰ)；将FSBG和(Ⅰ)进行化学检测以鉴别其化学结构类型。
, 百拇医药
1.2 动物实验和观察指标
1.2.1 动物为纯系NIH雌性小白鼠，广东省卫生厅医用实验动物场提供(广东省实验动物合格证97A017号和98A032号；广东省实验动物条件检测合格证97B008号98B013号)，体重18～22g。
1.2.2 (Ⅰ)对小鼠照射后30d存活的影响：动物随机分为(Ⅰ)+照射组，照射组和生理盐水正常组(正常饲养，不作任何处理)，照前35～45min前两组分别腹腔注射(Ⅰ)和同等容量的生理盐水。第1至第3次/实验(Ⅰ)的剂量为1g/kg，第4至第6次实验为2g/kg。第1至第3次每次实验3组动物各12只，第4次各14只，第5次各13只，第6次(Ⅰ)组14只，照射组和正常组各13只，观察：①生存防护效力(Ⅰ)+照射组30d平均存活天数/照射组30d平均存活天数)[7]；②30d存活率。
1.2.3 (Ⅰ)对小鼠照射后造血系统的影响：小鼠42只，随机分为3组：正常组(条件同上)12只，(Ⅰ)+照射组和照射组各15只。(Ⅰ)的剂量为每鼠2g/kg,照射前给药。照射后第4天和第12天取血，在Cell-Dyn1600血细胞自动分析仪上测定，第12天取血后颈椎脱臼处死小鼠秤体重、脾重和胸腺重。
, 百拇医药
1.2.4 醋酸扭体试验：小鼠24只，体重20～22g，随机分为对照组和(Ⅰ)组各12只，分别腹腔注射生理盐水和(Ⅰ)1.5g/kg,30min后，腹腔注射0.21mol/L醋酸0.01ml/g体重，记录20min内两组小鼠扭体次数。
1.2.5 对戊巴比妥钠阈下催眠剂量的影响：小鼠24只，体重20～22g，随机分两组各12只，分别腹腔注射生理盐水和(Ⅰ)1.5g/kg，30min后两组均腹腔注射0.12mol/L戊巴比妥钠0.01ml/g，观察30min内两组翻转反射消失的鼠数和持续时间。
1.2.6 照射条件：动物用Theratron780型60Co放射治疗机全射照射1次，剂量率为1.02～1.04Gy/min。照射量7.7～8.7Gy观察30d存活影响；4.0Gy观察造血系统的变化。源皮距为80cm，照射野为25cm×25cm。
1.3 统计方法
, 百拇医药
用两组t值进行统计。生存防护效力的P值是计得30d平均存活天数的P值后，据文献[7](见文中1.2.2)的计算式求出。
2 结果
2.1 (Ⅰ)的化学检测结果
(Ⅰ)和FSBG对三氯化铁、α-萘酚(Molish)、碱性酒石酸铜(Fehling)试剂呈强阳性反应。其酸水解液有絮状沉淀物产生且对Fehling产生的砖红色沉淀比水解前显著增多，提示两者均为酚性甙类；FSBG对盐酸镁粉微红、反应后溶液黄色。对浓氨水(纸片上)呈深棕黄色、在2537Å和3650Å紫外光下显深棕色。对1%碳酸钠(纸片上)呈淡棕黄色、在同上紫外光下显深棕色。对氢氧化钠液呈橙棕色。对浓硫酸显深亮黄色。对醋酸镁(纸片上)呈淡黄色。而(Ⅰ)对以上试剂均呈阴性反应；又FSBG对醋酸铅产生橙黄色絮状沉淀。对碱式醋酸铅产生橙红色絮状沉淀、放置后上层液黄色混浊。而(Ⅰ)对前一试剂产生棕色絮状沉淀，对后者产生橙棕色絮状沉淀、放置后上液无色澄明；FSBG对各种试剂显示了其黄芩黄酮类的特征性反应，而(Ⅰ)则有显著差异，提示(Ⅰ)的化学结构与FSBG不同，推定其为黄芩中的一种酚性甙类(GSBG)。
, 百拇医药
2.2 (Ⅰ)对小鼠照射后30d存活的影响
从表1可见，生理盐水正常组小鼠30天存活率为100%且体重明显增加(26～29g)。照射组呈现食欲下降、消瘦、活动减少、松毛、稀便等随之死亡的时间比GSBG组显著提前，GSBG组的30天存活时间、存活率均明显高于照射组，其生存防护效力高达2.08，存活率为照射组的16.58倍。
2.3 对造血系统的影响
和照射组比较：GSBG组在照射后第4天，其红、白细胞(含嗜中性和中间细胞)、血色素和血小板均有统计学显著差异，在第12天，以上各项(淋巴细胞亦P<0.05)多为显示差异有显著或非常显著意义(见表2)。照射后第12天，胸腺指数与照射组(3.22±0.76)比较，(Ⅰ)+照射组为4.00±0.71，正常组为4.06±0.35，t分别为2.57和2.47，P值均<0.05。两组脾指数无统计学显著差异。
, 百拇医药
表1 GSBG对小鼠照后30d存活的影响 组别(只)
给药剂量(g/kg)
30d平均存活时间
生存防护效力
30d存活率(%)
存活率倍比(倍)
照射组(36)
0.0
9.77±1.76
-
0
-
, 百拇医药
GSBG组(36)
1.0
13.16±3.54
1.35
8.33
-
生理盐水正常组(36)
0.0
30.00±0.00
-
100.00
-
照射组(40)
, 百拇医药
0.0
9.34±2.46
-
2.50
-
GSBG组(41)
2.0
19.40±4.76
2.08
41.46
16.58
生理盐水正常组(40)
0.0
, 百拇医药
30.00±0.00
-
100.00
40.00
与照射组比较，GSBG2个剂量组分别t=5.15,P<0.001和 t=11.90,P±S) 组别
(只)
放射后时间
(d)
白细胞数(×109/L)
, http://www.100md.com
细胞数
(×1012/L)
血色素
(g/L)
血小板数
(×109/L)
总数
淋巴细胞数
嗜中性细胞
中间细胞
照射组
(15)
, http://www.100md.com
4
1.73±0.66
1.15±0.47
0.33±0.13
0.25±010
6.80±0.74
111.88±13.48
707.00±142.60
12
3.12±0.70
2.69±0.58
0.18±0.09
, 百拇医药
0.27±0.10
6.34±0.75
114.13±16.30
608.33±173.40
GSBG组
(15)
4
2.59±0.94
t=2.90,P<0.01
1.53±0.66
t=1.82，P<0.05
0.47±0.19
, http://www.100md.com
t=2.36，P<0.05
0.59±0.17
t=6.68，P<0.001
7.45±0.85
t=2.23,P<0.05
125.07±14.77
t=2.56，P<0.05
816.08±146.39
t=2.07.P<0.05
12
3.88±0.61
, 百拇医药
t=2.01,P<0.01
3.11±0.49
t=2.01，P<0.05
0.29±0.14
t=2.56，P<0.05
0.57±0.15
t=6.45，P<0.001
7.39±0.57
t=4.32,P<0.001
135.87±8.53
t=4.85，P<0.001
, 百拇医药
829.53±98.43
t=4.30,P<0.001
正常组
(12)
4
8.26±1.08
t=19.38,P<0.001
6.99±1.24
t=16.85，P<0.001
0.45±0.14
t=2.30，P<0.05
, http://www.100md.com 0.84±0.20
t=10.00，P<0.001
8.57±0.65
t=6.51,P<0.001
139±12.42
t=5.38，P<0.001
830.40±116.31
t=2.42,P<0.05
12
8.23±1.46
t=12.10,P<0.001
, 百拇医药
7.08±1.33
t=11.55，P<0.001
0.36±0.07
t=5.68，P<0.01
0.86±0.17
t=11.35，P<0.001
8.85±0.18
t=11.30,P<0.001
150.75±2.61
t=7.68，P<0.001
870.75±71.93
, http://www.100md.com
t=4.90,P<0.001
表中t值和P值均与照射比较
2.4 镇痛作用
对照组对醋酸作用全部扭体，为(46.7±15.3)次，(Ⅰ)组全部无扭体。
2.5 镇静作用
(Ⅰ)组在腹腔注射戊巴比妥钠后2～6min全部翻转反射消失并熟睡(91.5±29.0)min；对照组全部无消失。
3 讨论
研究表明，临床上有显著RP作用的RP-2[2～6]中的黄芩似为疗效的主要贡献者，其有效部位为其水提物[1]。由于动物实验显示FSBG无RP效果，而进一步提纯所得的GSBG显示其RP作用高于RB-2及黄芩水提物，提示其RP有效成分为化学结构有别于FSBG的另一种酚性甙类。其生存防护效力(2.08)相当高，又能提高受照射小鼠的白细胞(含淋巴细胞等)、血小板、还使红细胞和血色素增加。这对于保护癌症放疗或化疗患者的免疫功能意义重大[8]。迄今未见报道黄芩有镇痛作用，却认为其煎剂的扭体试验无镇痛效果[9]。本实验显示了GSBG具有明显的镇痛作用并有很强的镇静效果，尤其以RP为主的多种功效可能与临床上RP-2显示明显减缓病人的放射反应及致射痛的效果相关。
, 百拇医药
放射痛属难治之症，为世界卫生组织《癌痛治疗》项目之一。GSBG具备了国际上要求RP剂须具有效低毒的条件。因可从水液中分离出来，而不是得自无RP作用的醇提液[10]，其提取工艺简单、操作安全成本低，适于工业生产，其RP作用和非麻醉性镇痛剂效果的发现，为药源丰富而价廉的黄芩的新应用、提高社会效益和经济效益和提供了重要依据。
基金项目：中山医科大学肿瘤防治中心资助课题(第296号)
参考文献
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2 利国威，陈昆田，梁培根，等.中药RP-2对临床放射反应的实验研究[J].中华放射医学与防护杂志，1996，16(2)：95.
, http://www.100md.com
3 陈昆田，利国威，曹新平，等.中药RP-2灌肠预防放射性肠炎[J].广东省医学，1998，19(8)：631～632.
4 曹新平，陈昆田，何智纯，等.中药合剂RP-2减少食管癌后装放射治疗副作用的追踪研究[J].亚洲医药，1997，5(5～6)：129.
5 冼超贵，王思阳.林焕新，等.纯中药RP-2防护放射性皮炎的临床效果[J].中华放射肿瘤学杂志，1996，5(3)：200.
6 刘桂荣，利国威，李振炎，等.放射损伤防护剂2号预防放射性皮肤损伤的临床研究[J].护理学杂志，1998，13(3)：144～145.
7 王诚明，太田节子，筱田雅人，他.放射线障害防护药剂に关ずる研究(第27报)放射线障害に对ずる各种流方方剂のメクノルエキの延合效果[J].药学杂志(日文)，1989，109(12)：949～9530.
8 刘菊年，程丙权，张建荣，等.枸杞多糖对恶性肿瘤放疗患者免疫功能的影响[J].中华放射医学与防护杂志，1996，16(1)：18～20.
9 黄黎，刘菊福，李德风，等.黄芩汤的组方配伍研究[J].中国药杂志，1991，16(3)：177～181.
10 太田节子，樱井信子，井上隆夫，他.放射线障害防护药剂に关ずゐ研究(第25报)生药类の放射线障害防护效力[J].药学杂志(日文)，1987，107(1)：70～74.
收稿日期：1998-07-20；修回日期：1998-09-21, 百拇医药
单位：中山医科大学肿瘤防治中心
关键词：黄芩；酚性甙类；放射损伤防护剂；小鼠
癌症990420
【摘要】目的：探索黄苓中的放射损伤防护作用有效成分。方法：黄芩水提液酸化保温(80℃)50分钟，滤去析出的黄芩黄酮类(FSBG)，水溶液用经典分离法得一沉淀物(Ⅰ)、化学分析其结构类型；用60Co7.7Gy～8.7Gy全身照射纯系NIH雌性小鼠，照前35～45min每鼠腹腔注射(Ⅰ)1g/kg或2g/kg，观察生存防护效力、30天存活率和照射4.0Gy(2g/kg)后第4天和第12天的WBC、PLT、RBC和HGB。结果：(1)FSBG和(Ⅰ)均对三氯化铁、Molisch、Fehling试剂呈阳性反应，前者对浓硫酸、碱试液和盐酸镁粉呈阳性而(Ⅰ)呈阴性；(2)每鼠1g/kg和2g/kg剂量均显著提高生存防护效力(1.35～2.08治疗组30天存活时间和对照组30天存活时间之比值)和30天存率(治疗组为8.33～41.46%，对照组为0～2.50%)，2g/kg能明显增加4.0Gy照后第4天和第12天的WBC、PLT、RBC和HGB。结论：(1)对浓硫酸等的呈色反应差异表明(Ⅰ)和FSBG化学结构不同；对FeCl3等阳性反应提示(Ⅰ)的主要成分为酚性性甙类；(2)GSBG有显著的放射损伤护作用；(3)本研究为黄芩的新应用提供了重要依据。
, 百拇医药
中图分类号：R142.3；R730.52 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)04-0422-04
Study on the protective effect on radiation injury of mice by glycoside with phenolic hydroxyl group from Scutellaria baicalensis Georgi
LI Guo-wei, XIAN Chao-gui, LEI Sui-ni,et al.
Departemtn of Radiation Oncology,Cancer Center,Sun Yat-sen Uniuersity of Medical Sciences,Guangzhou 510060,P.R.China
【Abstract】 Objective：The effective principle with protective effect on radiation injury from Scutellaria baicalensis Georgi (SBG) was found and studied. Methods：The heated extracted aqueous liquid from SBG was acidified and kept hot for 50 minutes in 80℃ ， the flavonoids of SBG (FSBG) were precipitated and removed by filter.A precipitate (Ⅰ) from the filtered solution was obtained by the classical separation process.Tests were conducted on mice to detect whether (Ⅰ) is effective for protection against γ -ray irradiation.Intraperitoneal injection(ip) of (Ⅰ) 1 g/kg and 2 g/kg in NIH female mice 35～45 minutes befores 7.7～8.7 Gy of whole body 60Co irradiation were conducted,the survival effects,30 days survival rate and in case of ip of (Ⅰ) 2 g /kg the WBC,PLT,RBC and HGB were observed on 4th and 12th day after 4.0 Gy exposure. Results：Positive reactions were shown with following chemical reagents：ferric chloride,Molisch,Fehling reagents on FSBG and (Ⅰ),however,concentrated sulfuric acid,alkaline reagents and hydrochloric acid-Mg powder showed positive reaction on FSBG,but negative on (Ⅰ).Intraperitoneal injection of (Ⅰ) 1 g/kg and 2 g/kg increased the survival effects(1.35～2.08,the ratio of mean survival time in a treated group to that of the control group in 30 d after irradiation) and 30 days survival rate (8.33～41.46% in treated and 0～2.50% in control group,respectively) significantly in comparison with control mice.In cases of ip of (Ⅰ) 2 g/kg the WBC,PLT,RBC and HGb were all increased on 4 th and 12 th day after 4.0 Gy exposure as compared with control.Conclusions：1 The different coloration to chemical reagents (concentrated sulfuric acid and etc.) showed that there are different chemical structures between(Ⅰ) and FSBG.The positive reactions (ferric chloride and etc.) suggested that the main constituent of (Ⅰ) was a chemical type of glycoside with phenolic hydroxyl group. 2 The glycoside with phenolic hydroxyl group exhibited good radioprotective effect against whole-body lethal irradiation of mice.3 The study may be considered as new application of SBG.
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Key words：Scutellaria baicalensis Georgi; Glycoside with phenolic hydroxyl group; Protective agent on radiation injury mice
前文报道黄芩(ScutellariabaicalensisGeorgi,SBG)水提物有显著的放射损伤防护(RP)作用[1]，其功效与作者研制并经动物实验及临床应用效果显著的RP-2[2～6](黄芩为主药)相一致。本文报道进一步分离出一种黄芩酚性甙类(GlycosideofSBC,GS-BG)及其RP作用的研究结果。
1 材料和方法
1.1 GSBG的分离和化学检测
黄芩(产地河北省，购自广州赵秀药材分公司)水提液用盐酸调pH1～2。在80℃下保温50min，室温静置，滤去芩黄酮类(FlavoinoidesofSBG,FSBG)沉淀。滤液用经典分离法获得一沉淀物简称(Ⅰ)；将FSBG和(Ⅰ)进行化学检测以鉴别其化学结构类型。
, 百拇医药
1.2 动物实验和观察指标
1.2.1 动物为纯系NIH雌性小白鼠，广东省卫生厅医用实验动物场提供(广东省实验动物合格证97A017号和98A032号；广东省实验动物条件检测合格证97B008号98B013号)，体重18～22g。
1.2.2 (Ⅰ)对小鼠照射后30d存活的影响：动物随机分为(Ⅰ)+照射组，照射组和生理盐水正常组(正常饲养，不作任何处理)，照前35～45min前两组分别腹腔注射(Ⅰ)和同等容量的生理盐水。第1至第3次/实验(Ⅰ)的剂量为1g/kg，第4至第6次实验为2g/kg。第1至第3次每次实验3组动物各12只，第4次各14只，第5次各13只，第6次(Ⅰ)组14只，照射组和正常组各13只，观察：①生存防护效力(Ⅰ)+照射组30d平均存活天数/照射组30d平均存活天数)[7]；②30d存活率。
1.2.3 (Ⅰ)对小鼠照射后造血系统的影响：小鼠42只，随机分为3组：正常组(条件同上)12只，(Ⅰ)+照射组和照射组各15只。(Ⅰ)的剂量为每鼠2g/kg,照射前给药。照射后第4天和第12天取血，在Cell-Dyn1600血细胞自动分析仪上测定，第12天取血后颈椎脱臼处死小鼠秤体重、脾重和胸腺重。
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1.2.4 醋酸扭体试验：小鼠24只，体重20～22g，随机分为对照组和(Ⅰ)组各12只，分别腹腔注射生理盐水和(Ⅰ)1.5g/kg,30min后，腹腔注射0.21mol/L醋酸0.01ml/g体重，记录20min内两组小鼠扭体次数。
1.2.5 对戊巴比妥钠阈下催眠剂量的影响：小鼠24只，体重20～22g，随机分两组各12只，分别腹腔注射生理盐水和(Ⅰ)1.5g/kg，30min后两组均腹腔注射0.12mol/L戊巴比妥钠0.01ml/g，观察30min内两组翻转反射消失的鼠数和持续时间。
1.2.6 照射条件：动物用Theratron780型60Co放射治疗机全射照射1次，剂量率为1.02～1.04Gy/min。照射量7.7～8.7Gy观察30d存活影响；4.0Gy观察造血系统的变化。源皮距为80cm，照射野为25cm×25cm。
1.3 统计方法
, 百拇医药
用两组t值进行统计。生存防护效力的P值是计得30d平均存活天数的P值后，据文献[7](见文中1.2.2)的计算式求出。
2 结果
2.1 (Ⅰ)的化学检测结果
(Ⅰ)和FSBG对三氯化铁、α-萘酚(Molish)、碱性酒石酸铜(Fehling)试剂呈强阳性反应。其酸水解液有絮状沉淀物产生且对Fehling产生的砖红色沉淀比水解前显著增多，提示两者均为酚性甙类；FSBG对盐酸镁粉微红、反应后溶液黄色。对浓氨水(纸片上)呈深棕黄色、在2537Å和3650Å紫外光下显深棕色。对1%碳酸钠(纸片上)呈淡棕黄色、在同上紫外光下显深棕色。对氢氧化钠液呈橙棕色。对浓硫酸显深亮黄色。对醋酸镁(纸片上)呈淡黄色。而(Ⅰ)对以上试剂均呈阴性反应；又FSBG对醋酸铅产生橙黄色絮状沉淀。对碱式醋酸铅产生橙红色絮状沉淀、放置后上层液黄色混浊。而(Ⅰ)对前一试剂产生棕色絮状沉淀，对后者产生橙棕色絮状沉淀、放置后上液无色澄明；FSBG对各种试剂显示了其黄芩黄酮类的特征性反应，而(Ⅰ)则有显著差异，提示(Ⅰ)的化学结构与FSBG不同，推定其为黄芩中的一种酚性甙类(GSBG)。
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2.2 (Ⅰ)对小鼠照射后30d存活的影响
从表1可见，生理盐水正常组小鼠30天存活率为100%且体重明显增加(26～29g)。照射组呈现食欲下降、消瘦、活动减少、松毛、稀便等随之死亡的时间比GSBG组显著提前，GSBG组的30天存活时间、存活率均明显高于照射组，其生存防护效力高达2.08，存活率为照射组的16.58倍。
2.3 对造血系统的影响
和照射组比较：GSBG组在照射后第4天，其红、白细胞(含嗜中性和中间细胞)、血色素和血小板均有统计学显著差异，在第12天，以上各项(淋巴细胞亦P<0.05)多为显示差异有显著或非常显著意义(见表2)。照射后第12天，胸腺指数与照射组(3.22±0.76)比较，(Ⅰ)+照射组为4.00±0.71，正常组为4.06±0.35，t分别为2.57和2.47，P值均<0.05。两组脾指数无统计学显著差异。
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表1 GSBG对小鼠照后30d存活的影响 组别(只)
给药剂量(g/kg)
30d平均存活时间
生存防护效力
30d存活率(%)
存活率倍比(倍)
照射组(36)
0.0
9.77±1.76
-
0
-
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GSBG组(36)
1.0
13.16±3.54
1.35
8.33
-
生理盐水正常组(36)
0.0
30.00±0.00
-
100.00
-
照射组(40)
, 百拇医药
0.0
9.34±2.46
-
2.50
-
GSBG组(41)
2.0
19.40±4.76
2.08
41.46
16.58
生理盐水正常组(40)
0.0
, 百拇医药
30.00±0.00
-
100.00
40.00
与照射组比较，GSBG2个剂量组分别t=5.15,P<0.001和 t=11.90,P
(只)
放射后时间
(d)
白细胞数(×109/L)
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细胞数
(×1012/L)
血色素
(g/L)
血小板数
(×109/L)
总数
淋巴细胞数
嗜中性细胞
中间细胞
照射组
(15)
, http://www.100md.com
4
1.73±0.66
1.15±0.47
0.33±0.13
0.25±010
6.80±0.74
111.88±13.48
707.00±142.60
12
3.12±0.70
2.69±0.58
0.18±0.09
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0.27±0.10
6.34±0.75
114.13±16.30
608.33±173.40
GSBG组
(15)
4
2.59±0.94
t=2.90,P<0.01
1.53±0.66
t=1.82，P<0.05
0.47±0.19
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t=2.36，P<0.05
0.59±0.17
t=6.68，P<0.001
7.45±0.85
t=2.23,P<0.05
125.07±14.77
t=2.56，P<0.05
816.08±146.39
t=2.07.P<0.05
12
3.88±0.61
, 百拇医药
t=2.01,P<0.01
3.11±0.49
t=2.01，P<0.05
0.29±0.14
t=2.56，P<0.05
0.57±0.15
t=6.45，P<0.001
7.39±0.57
t=4.32,P<0.001
135.87±8.53
t=4.85，P<0.001
, 百拇医药
829.53±98.43
t=4.30,P<0.001
正常组
(12)
4
8.26±1.08
t=19.38,P<0.001
6.99±1.24
t=16.85，P<0.001
0.45±0.14
t=2.30，P<0.05
, http://www.100md.com 0.84±0.20
t=10.00，P<0.001
8.57±0.65
t=6.51,P<0.001
139±12.42
t=5.38，P<0.001
830.40±116.31
t=2.42,P<0.05
12
8.23±1.46
t=12.10,P<0.001
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7.08±1.33
t=11.55，P<0.001
0.36±0.07
t=5.68，P<0.01
0.86±0.17
t=11.35，P<0.001
8.85±0.18
t=11.30,P<0.001
150.75±2.61
t=7.68，P<0.001
870.75±71.93
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t=4.90,P<0.001
表中t值和P值均与照射比较
2.4 镇痛作用
对照组对醋酸作用全部扭体，为(46.7±15.3)次，(Ⅰ)组全部无扭体。
2.5 镇静作用
(Ⅰ)组在腹腔注射戊巴比妥钠后2～6min全部翻转反射消失并熟睡(91.5±29.0)min；对照组全部无消失。
3 讨论
研究表明，临床上有显著RP作用的RP-2[2～6]中的黄芩似为疗效的主要贡献者，其有效部位为其水提物[1]。由于动物实验显示FSBG无RP效果，而进一步提纯所得的GSBG显示其RP作用高于RB-2及黄芩水提物，提示其RP有效成分为化学结构有别于FSBG的另一种酚性甙类。其生存防护效力(2.08)相当高，又能提高受照射小鼠的白细胞(含淋巴细胞等)、血小板、还使红细胞和血色素增加。这对于保护癌症放疗或化疗患者的免疫功能意义重大[8]。迄今未见报道黄芩有镇痛作用，却认为其煎剂的扭体试验无镇痛效果[9]。本实验显示了GSBG具有明显的镇痛作用并有很强的镇静效果，尤其以RP为主的多种功效可能与临床上RP-2显示明显减缓病人的放射反应及致射痛的效果相关。
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放射痛属难治之症，为世界卫生组织《癌痛治疗》项目之一。GSBG具备了国际上要求RP剂须具有效低毒的条件。因可从水液中分离出来，而不是得自无RP作用的醇提液[10]，其提取工艺简单、操作安全成本低，适于工业生产，其RP作用和非麻醉性镇痛剂效果的发现，为药源丰富而价廉的黄芩的新应用、提高社会效益和经济效益和提供了重要依据。
基金项目：中山医科大学肿瘤防治中心资助课题(第296号)
参考文献
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收稿日期：1998-07-20；修回日期：1998-09-21, 百拇医药