肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡过程中核基质的改变及意义
作者：李娟 罗绍凯 张国材 彭爱华
单位：中山医科大学附属第一医院血液内科(广州,510080)
关键词：核基质蛋白；肿瘤坏死因子；凋亡；白血病细胞株
癌症990448
中图分类号：R733.75 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(1999)04-0451-01
真核细胞核内的核基质结构和功能复杂,已知核基质的功能与细胞的分化、增殖等生命活动过程有关,且与细胞的癌变和凋亡有关[1]，我们比较了肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡前及凋亡过程核基质蛋白的改变,并分析了核基质蛋白在K562细胞凋亡过程的可能作用及其意义。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 K562细胞的培养
K562细胞为本实验室冻存复苏,细胞培养用含10%小牛血清的RPMI1640液。
1.2 肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡
参照文献Voelkd-Johnson等[2]介绍的方法,用还原反应测定肿瘤细胞存活率,细胞DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳按常规方法进行,细胞形态学观察凋亡细胞。
1.3 细胞核基质蛋白的提取
用肿瘤坏死因子前及用肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡过程细胞核基质蛋白的提取按照Fey[3]等介绍的方法。
, 百拇医药 1.4 SDS-PAGE电泳
每个样品用10μg进行SDS-PAGE电泳,胶用银染色。
2 结果
用肿瘤坏死因子前及用肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡过程核基质蛋白的电泳结果见图1。
图1 A：标准分子量；
B：K562细胞凋亡前核基质蛋白的电泳结果
C：K562细胞凋亡过程核基质蛋白的电泳结果
通过图1比较用肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡前及凋亡过程核基质的改变,主要表现为核基质蛋白在分子量为25、26、35、97.4Kd区带的蛋白质的消失,分子量为40、42、55、60、68Kd区带的蛋白量减少。
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3 讨论
肿瘤坏死因子是由激活的巨噬、单核细胞产生的具有抑制肿瘤、抗感染和调节机体免疫功能的细胞因子,肿瘤坏死因子通过增加细胞内Ca2+浓度和DNA的断裂来诱导细胞的凋亡,K562细胞株对肿瘤坏死因子是敏感的[4]。核基质(NuclearMatrix)或称核骨架(NuclearSkeleton)是指细胞核内除核膜、Lemina、染色质与核仁以外存在的精密网架体系,核基质的成分复杂,已测定核基质中,蛋白质占98%以上,主要是非组蛋白的不溶性纤维蛋白[5],核基质不仅提供了DNA超螺旋袢附着点,而且与DNA的转录、复制过程是不可分割的,核基质的成分与细胞的分化、癌细胞的发生有密切关系,并参与了肿瘤细胞的凋亡过程[1]。K562细胞是具有急性红白血病特性的细胞株,由本实验结果可以看出,在肿瘤坏死因子诱导的K562细胞的凋亡过程中,分子量为25、26、35、97.4Kd区带的蛋白质的消失,分子量为40、42、55、60、68Kd区带的蛋白量减少,提示分子量为25、26、35、97.4、40、42、55、60、68Kd区带的核基质蛋白质与肿瘤坏死因子诱导的K562细胞的凋亡有关系,K562细胞核基质蛋白参与了肿瘤坏死因子诱导的K562细胞的凋亡过程,这些分子量的核基质蛋白可能与K562细胞的凋亡基因的抑制有关,对这些分子量的核基质蛋白功能的进一步研究,有助于了解肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡的机制。
, 百拇医药
基金项目：国家自然科学基金资助课题(39870327)
参考文献
1 Monique MFJ,Marie-Helere JH,Guul PM,et al.Alterations in cytosketal and nuclear matrix-associated proteins during apoptosis[J] .European Journal of Cell Biology,1995,68：35～46.
2 Voelkd-Johnson C,Entingh AJ,Wold WSM， et al.Activation of intracellular proteuses is an early event in TNF-induced apoptosis[J] .J Immunal,1995,154：1707～1716.
, 百拇医药
3 Fey EG,Penman S.Nuclear matrix proteins reflect cell type of origin in cultured human cells[J] .Proc Natl Acad Aci USA,1988,85：121～125.
4 李龙,罗绍凯,张国材，等.重组人TNF介导白血病细胞程序性死亡及其临床意义[J].癌症，1998,17(3)：175
5 Stuurman N, Meijne AML, Vanderpol AJ,et al.The nuclear matrix from cells of different origin [J] . The J of Biol Chemistry， 1990,265：5460～5465.
收稿日期：1998-09-01；修回日期：1999-01-19, 百拇医药
单位：中山医科大学附属第一医院血液内科(广州,510080)
关键词：核基质蛋白；肿瘤坏死因子；凋亡；白血病细胞株
癌症990448
中图分类号：R733.75 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(1999)04-0451-01
真核细胞核内的核基质结构和功能复杂,已知核基质的功能与细胞的分化、增殖等生命活动过程有关,且与细胞的癌变和凋亡有关[1]，我们比较了肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡前及凋亡过程核基质蛋白的改变,并分析了核基质蛋白在K562细胞凋亡过程的可能作用及其意义。
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1 材料与方法
1.1 K562细胞的培养
K562细胞为本实验室冻存复苏,细胞培养用含10%小牛血清的RPMI1640液。
1.2 肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡
参照文献Voelkd-Johnson等[2]介绍的方法,用还原反应测定肿瘤细胞存活率,细胞DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳按常规方法进行,细胞形态学观察凋亡细胞。
1.3 细胞核基质蛋白的提取
用肿瘤坏死因子前及用肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡过程细胞核基质蛋白的提取按照Fey[3]等介绍的方法。
, 百拇医药 1.4 SDS-PAGE电泳
每个样品用10μg进行SDS-PAGE电泳,胶用银染色。
2 结果
用肿瘤坏死因子前及用肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡过程核基质蛋白的电泳结果见图1。
图1 A：标准分子量；
B：K562细胞凋亡前核基质蛋白的电泳结果
C：K562细胞凋亡过程核基质蛋白的电泳结果
通过图1比较用肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡前及凋亡过程核基质的改变,主要表现为核基质蛋白在分子量为25、26、35、97.4Kd区带的蛋白质的消失,分子量为40、42、55、60、68Kd区带的蛋白量减少。
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3 讨论
肿瘤坏死因子是由激活的巨噬、单核细胞产生的具有抑制肿瘤、抗感染和调节机体免疫功能的细胞因子,肿瘤坏死因子通过增加细胞内Ca2+浓度和DNA的断裂来诱导细胞的凋亡,K562细胞株对肿瘤坏死因子是敏感的[4]。核基质(NuclearMatrix)或称核骨架(NuclearSkeleton)是指细胞核内除核膜、Lemina、染色质与核仁以外存在的精密网架体系,核基质的成分复杂,已测定核基质中,蛋白质占98%以上,主要是非组蛋白的不溶性纤维蛋白[5],核基质不仅提供了DNA超螺旋袢附着点,而且与DNA的转录、复制过程是不可分割的,核基质的成分与细胞的分化、癌细胞的发生有密切关系,并参与了肿瘤细胞的凋亡过程[1]。K562细胞是具有急性红白血病特性的细胞株,由本实验结果可以看出,在肿瘤坏死因子诱导的K562细胞的凋亡过程中,分子量为25、26、35、97.4Kd区带的蛋白质的消失,分子量为40、42、55、60、68Kd区带的蛋白量减少,提示分子量为25、26、35、97.4、40、42、55、60、68Kd区带的核基质蛋白质与肿瘤坏死因子诱导的K562细胞的凋亡有关系,K562细胞核基质蛋白参与了肿瘤坏死因子诱导的K562细胞的凋亡过程,这些分子量的核基质蛋白可能与K562细胞的凋亡基因的抑制有关,对这些分子量的核基质蛋白功能的进一步研究,有助于了解肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡的机制。
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基金项目：国家自然科学基金资助课题(39870327)
参考文献
1 Monique MFJ,Marie-Helere JH,Guul PM,et al.Alterations in cytosketal and nuclear matrix-associated proteins during apoptosis[J] .European Journal of Cell Biology,1995,68：35～46.
2 Voelkd-Johnson C,Entingh AJ,Wold WSM， et al.Activation of intracellular proteuses is an early event in TNF-induced apoptosis[J] .J Immunal,1995,154：1707～1716.
, 百拇医药
3 Fey EG,Penman S.Nuclear matrix proteins reflect cell type of origin in cultured human cells[J] .Proc Natl Acad Aci USA,1988,85：121～125.
4 李龙,罗绍凯,张国材，等.重组人TNF介导白血病细胞程序性死亡及其临床意义[J].癌症，1998,17(3)：175
5 Stuurman N, Meijne AML, Vanderpol AJ,et al.The nuclear matrix from cells of different origin [J] . The J of Biol Chemistry， 1990,265：5460～5465.
收稿日期：1998-09-01；修回日期：1999-01-19, 百拇医药