复发难治急性白血病Bcl-2、P170的表达及意义
作者：段宝华 刘少君
单位：段宝华 河南医科大学二附院血液内科 邮政编码：郑州，450053；刘少君 河南医科大学一附院血液内科 邮政编码：郑州，450052
关键词：白血病；Bcl-2；P170；MDR
临床血液学杂志990407 摘要 目的：探讨Bcl-2、P170在复发难治急性白血病表达的临床意义。方法：用ABC免疫细胞化学方法检测77例急性白血病Bcl-2、P170的表达。结果：复发难治的急性白血病Bcl-2、P170的表达显著高于初治者。Bcl-2、P170高表达的急性白血病完全缓解率低，早期复发率高，预后差。Bcl-2或P170高表达者，50%为难治性白血病，二者同时高表达者均为难治性白血病。Bcl-2与急性白血病预后的阳性符合率90.9%，较P170略高。Bcl-2与P170的表达呈轻度正相关(r=0.386，P<0.001)。结论：Bcl-2、P170的高表达是反映急性白血病复发、难治的重要指标。Bcl-2的预测敏感性较高。不同的MDR机制之间可能存在联系。
, 百拇医药
Study on the Clinical Significance of Bcl-2 and P170 in Relapsed Refractory Acute Leukemia and Their Correlation
Duan Baohua,Liu Shaojun
Department of Hematology,Second Affliated Hospital,Henan Medical University,450052
Abstract Objective:To investigate the clinical significance of Bcl-2 and P170 in relapsed refractoy acute leukemia.Method:The expression of Bcl-2 and P170 were detected by Avidin-Biotin-peroxidase immunocytochemistry technique in 77 cases of acute leukemia patients.Result:The expression of Bcl-2 and P170 were higher in patients with relapsed/refractory AL than that of patients with AL untreated.The low CR rate and high early recurrent rate were found in the patients with overexpression of Bcl-2 or P170.Half of the patients with high expression of Bcl-2 or P170 were refractory,and when the two markers were all overexpression,these patients were surely refractory.The coincident rate of Bcl-2 with the prognosis of AL was 90.9%,which was little higher than that of P170.There were light positive correlation between Bcl-2 and P170 (r=0.386，P<0.001).Conclusion:The highexpression of Bcl-2 or P170 was one of the important indexes reflecting the recurrence or refraction of AL.Bcl-2 has more predictive sensitivity.There might be correlation among different MDR mechanisms.
, 百拇医药
Key words Leukemia Bcl-2 P170 MDR
白血病细胞多药耐药性(MDR)的产生十分复杂，迄今发现的MDR机制已有多种。对各种MDR机制相关性的研究结果目前尚不一致。抗凋亡基因bcl-2的高表达与mdrl基因一样可导致白血病细胞MDR〔1～3〕，并且二者均和细胞内某些信息传递分子(如PKC、Ca2+等)有关。基于此，我们检测急性白血病Bcl-2、P170的表达，探讨其临床价值，并分析二者的相关性。
1 对象与方法
1.1 研究对象 急性白血病77例(初治组39例，复发难治组22例，完全缓解(CR)期16例)，其中急性髓细胞白血病(AML)55例，急性淋巴细胞白血病(ALL)22例。急性初治白血病疗效判定按照1987年全国白血病化学治疗讨论会制订标准。正常对照7例。阳性对照：HL-60细胞系(本学院组胚实验室提供)作为Bcl-2的阳性对照；正常结肠组织粘膜上皮细胞病理切片(本学院病理教研室提供)作为P170的阳性对照。
, 百拇医药
1.2 研究方法 主要试剂：Bcl-2单抗为NEOMARKER公司(美)产品，P170单抗为ZYMED公司(美)产品，ABC试剂盒为VECTOR公司(美)产品。方法：参照文献〔4〕，骨髓单个核细胞涂片，固定后，ABC免疫细胞化学法进行检测。油镜下计数300个细胞。每次均设置阳性对照，替代对照。
1.3 结果判定 阳性细胞为胞浆或胞膜呈棕黄色颗粒。Bcl-2、P170阳性着色细胞≥10%定为高表达。
1.4 统计学处理 均数用
±s表示，t检验、χ2检验、方差分析进行显著性检验和相关关系的分析。
2 结果
2.1 Bcl-2、P170的表达与患者一般情况的关系 白血病细胞Bcl-2、P170的表达与患者年龄、性别、外周血WBC及骨髓原始细胞数无相关性。
, 百拇医药
2.2 Bcl-2、P170在急性白血病的表达 见附表。
附表 急性白血病Bcl-2、P170的表达 组别
例数
Bcl-2
P170
表达率
高表达率
表达率
高表达率
复发/难治组
22
12.8±7.7
, 百拇医药
68.2
9.7±6.1
54.6
初治组
39
5.8±5.7
23.1
6.0±5.4
28.2
完全缓解组＃
16
1.1±0.9
, 百拇医药
0
2.6±2.3
0
正常组＃＃
7
0.8±0.7
0
1.3±1.2
0
注：与＃，＃＃相比P<0.01，与＃，＃＃以及与相比P<0.052.3 Bcl-2、P170的表达与急性白血病疗效、预后的关系 Bcl-2、P170高表达者和低表达或不表达者CR率分别为45.5%和77.4%，50.0%和78.6%(P<0.05)，未CR和早期复发率分别为81.8%和29.0%，78.6%和25.0%(P<0.05)。化疗2个疗程达CR者和1个疗程达CR者，Bcl-2、P170的高表达率分别为36.4%和5.6%，45.5%和11.1%(P<0.05)。Bcl-2或P170高表达者50%为难治性白血病，两者同时高表达者均为难治性白血病。
, 百拇医药
2.4 Bcl-2、P170预测急性白血病疗效、预后的价值 Bcl-2与急性白血病预后的阳性、阴性符合率分别为90.9%，67.7%，P170分别为78.6%，67.9%。
2.5 白血病细胞Bcl-2、P170表达的相关性 Bcl-2与P170的表达呈轻度正相关(r=0.386，P<0.001)。
3 讨论
MDR产生的复杂性给白血病的治疗及疗效预测带来一定的困难。对MDR的检测和不同机制相关性的研究将有助于指导临床治疗。本研究结果显示，复发难治组急性白血病Bcl-2、P170的表达均显著高于初治组。Bcl-2、P170高表达者CR率低于低表达或不表达者，预后差。Bcl-2、P170一项高表达者，50%为难治性白血病，两者同时高表达者均为难治性白血病，说明Bcl-2、P170的高表达是反映急性白血病复发、难治的重要指标。Bcl-2与急性白血病预后的阳性符合率较高(90.9%)而P170较低(78.6%)，提示P170预测白血病MDR的敏感性略低于Bcl-2，但二者阴性符合率均较低，可能与诸因素均可影响白血病预后有关。因此多指标联合检测，综合判断能更好的指导临床治疗。
, 百拇医药
目前认为抗凋亡基因bcl-2和mdrl基因是两种不同的MDR机制〔5〕。但有研究显示，造血细胞bcl-2和mdrl的表达与细胞分化程度相关，并均在CD+34细胞表达增高。进一步研究表明细胞内某些信息传递分子如PKC，Ca2+等参与bcl-2、P170的表达调控〔6，7〕。基于以上研究，本文分析了bcl-2基因和mdrl基因产物Bcl-2、P170表达的相关性，发现二者呈轻度正相关。由此推测，这两种机制之间可能存在某种联系，可能是两者具有部分共同的调控途径或二者之间通过一个或多个环节相互调控。白血病细胞Bcl-2和P170的表达增高反映其具有了存活优势和MDR。
参考文献
1 Williams GT.Programmed cell death:A poptosis and on cogene cell,1991,65(7):1097～1098
, 百拇医药
2 Bernard D.Anticancer drug resistance and inhibition of apoptosis.Anticancer Res,1994,14:2291～2294
3 Miyashita T,Reed JC.Bcl-2 oncoprotein blocks chemotherapy in duced apoptosis in human leukemic cell line.Blood,1993,81:151～157
4 司徒镇强，吴军正.培养细胞的免疫组化染色技术.见：司徒镇强，吴军正主编.细胞培养.北京：世界图书出版公司，1996，202～203
5 Lotem J and Sachs L.Regulation by bcl-2,c-myc and P53 of susceptibility to indution of apoptosis by heat shock and cancer chemtherapy compounds in differentiation competent and defective myeloid leukemic cells.Cell Growth Differ,1993,4:41～47
, http://www.100md.com
6 Hanada M,Krajewski S,Tanakas A,et al.Regulation of Bcl-2 oncoprotein levels with differentiation of human neuroblastoma cells.Cancer Res,1993,53:4978～4986
7 Chambers TC,Pohl J,Raynor RL,et al.Indentification of specific sites in human P-glycoprotein phosphorylated by protein kinese.J Biol Chem,1993,268:4592～4595
(1998-09-28 收稿), 百拇医药
单位：段宝华 河南医科大学二附院血液内科 邮政编码：郑州，450053；刘少君 河南医科大学一附院血液内科 邮政编码：郑州，450052
关键词：白血病；Bcl-2；P170；MDR
临床血液学杂志990407 摘要 目的：探讨Bcl-2、P170在复发难治急性白血病表达的临床意义。方法：用ABC免疫细胞化学方法检测77例急性白血病Bcl-2、P170的表达。结果：复发难治的急性白血病Bcl-2、P170的表达显著高于初治者。Bcl-2、P170高表达的急性白血病完全缓解率低，早期复发率高，预后差。Bcl-2或P170高表达者，50%为难治性白血病，二者同时高表达者均为难治性白血病。Bcl-2与急性白血病预后的阳性符合率90.9%，较P170略高。Bcl-2与P170的表达呈轻度正相关(r=0.386，P<0.001)。结论：Bcl-2、P170的高表达是反映急性白血病复发、难治的重要指标。Bcl-2的预测敏感性较高。不同的MDR机制之间可能存在联系。
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Study on the Clinical Significance of Bcl-2 and P170 in Relapsed Refractory Acute Leukemia and Their Correlation
Duan Baohua,Liu Shaojun
Department of Hematology,Second Affliated Hospital,Henan Medical University,450052
Abstract Objective:To investigate the clinical significance of Bcl-2 and P170 in relapsed refractoy acute leukemia.Method:The expression of Bcl-2 and P170 were detected by Avidin-Biotin-peroxidase immunocytochemistry technique in 77 cases of acute leukemia patients.Result:The expression of Bcl-2 and P170 were higher in patients with relapsed/refractory AL than that of patients with AL untreated.The low CR rate and high early recurrent rate were found in the patients with overexpression of Bcl-2 or P170.Half of the patients with high expression of Bcl-2 or P170 were refractory,and when the two markers were all overexpression,these patients were surely refractory.The coincident rate of Bcl-2 with the prognosis of AL was 90.9%,which was little higher than that of P170.There were light positive correlation between Bcl-2 and P170 (r=0.386，P<0.001).Conclusion:The highexpression of Bcl-2 or P170 was one of the important indexes reflecting the recurrence or refraction of AL.Bcl-2 has more predictive sensitivity.There might be correlation among different MDR mechanisms.
, 百拇医药
Key words Leukemia Bcl-2 P170 MDR
白血病细胞多药耐药性(MDR)的产生十分复杂，迄今发现的MDR机制已有多种。对各种MDR机制相关性的研究结果目前尚不一致。抗凋亡基因bcl-2的高表达与mdrl基因一样可导致白血病细胞MDR〔1～3〕，并且二者均和细胞内某些信息传递分子(如PKC、Ca2+等)有关。基于此，我们检测急性白血病Bcl-2、P170的表达，探讨其临床价值，并分析二者的相关性。
1 对象与方法
1.1 研究对象 急性白血病77例(初治组39例，复发难治组22例，完全缓解(CR)期16例)，其中急性髓细胞白血病(AML)55例，急性淋巴细胞白血病(ALL)22例。急性初治白血病疗效判定按照1987年全国白血病化学治疗讨论会制订标准。正常对照7例。阳性对照：HL-60细胞系(本学院组胚实验室提供)作为Bcl-2的阳性对照；正常结肠组织粘膜上皮细胞病理切片(本学院病理教研室提供)作为P170的阳性对照。
, 百拇医药
1.2 研究方法 主要试剂：Bcl-2单抗为NEOMARKER公司(美)产品，P170单抗为ZYMED公司(美)产品，ABC试剂盒为VECTOR公司(美)产品。方法：参照文献〔4〕，骨髓单个核细胞涂片，固定后，ABC免疫细胞化学法进行检测。油镜下计数300个细胞。每次均设置阳性对照，替代对照。
1.3 结果判定 阳性细胞为胞浆或胞膜呈棕黄色颗粒。Bcl-2、P170阳性着色细胞≥10%定为高表达。
1.4 统计学处理 均数用
±s表示，t检验、χ2检验、方差分析进行显著性检验和相关关系的分析。2 结果
2.1 Bcl-2、P170的表达与患者一般情况的关系 白血病细胞Bcl-2、P170的表达与患者年龄、性别、外周血WBC及骨髓原始细胞数无相关性。
, 百拇医药
2.2 Bcl-2、P170在急性白血病的表达 见附表。
附表 急性白血病Bcl-2、P170的表达 组别
例数
Bcl-2
P170
表达率
高表达率
表达率
高表达率
复发/难治组
22
12.8±7.7
, 百拇医药
68.2
9.7±6.1
54.6
初治组
39
5.8±5.7
23.1
6.0±5.4
28.2
完全缓解组＃
16
1.1±0.9
, 百拇医药
0
2.6±2.3
0
正常组＃＃
7
0.8±0.7
0
1.3±1.2
0
注：与＃，＃＃相比P<0.01，与＃，＃＃以及与相比P<0.052.3 Bcl-2、P170的表达与急性白血病疗效、预后的关系 Bcl-2、P170高表达者和低表达或不表达者CR率分别为45.5%和77.4%，50.0%和78.6%(P<0.05)，未CR和早期复发率分别为81.8%和29.0%，78.6%和25.0%(P<0.05)。化疗2个疗程达CR者和1个疗程达CR者，Bcl-2、P170的高表达率分别为36.4%和5.6%，45.5%和11.1%(P<0.05)。Bcl-2或P170高表达者50%为难治性白血病，两者同时高表达者均为难治性白血病。
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2.4 Bcl-2、P170预测急性白血病疗效、预后的价值 Bcl-2与急性白血病预后的阳性、阴性符合率分别为90.9%，67.7%，P170分别为78.6%，67.9%。
2.5 白血病细胞Bcl-2、P170表达的相关性 Bcl-2与P170的表达呈轻度正相关(r=0.386，P<0.001)。
3 讨论
MDR产生的复杂性给白血病的治疗及疗效预测带来一定的困难。对MDR的检测和不同机制相关性的研究将有助于指导临床治疗。本研究结果显示，复发难治组急性白血病Bcl-2、P170的表达均显著高于初治组。Bcl-2、P170高表达者CR率低于低表达或不表达者，预后差。Bcl-2、P170一项高表达者，50%为难治性白血病，两者同时高表达者均为难治性白血病，说明Bcl-2、P170的高表达是反映急性白血病复发、难治的重要指标。Bcl-2与急性白血病预后的阳性符合率较高(90.9%)而P170较低(78.6%)，提示P170预测白血病MDR的敏感性略低于Bcl-2，但二者阴性符合率均较低，可能与诸因素均可影响白血病预后有关。因此多指标联合检测，综合判断能更好的指导临床治疗。
, 百拇医药
目前认为抗凋亡基因bcl-2和mdrl基因是两种不同的MDR机制〔5〕。但有研究显示，造血细胞bcl-2和mdrl的表达与细胞分化程度相关，并均在CD+34细胞表达增高。进一步研究表明细胞内某些信息传递分子如PKC，Ca2+等参与bcl-2、P170的表达调控〔6，7〕。基于以上研究，本文分析了bcl-2基因和mdrl基因产物Bcl-2、P170表达的相关性，发现二者呈轻度正相关。由此推测，这两种机制之间可能存在某种联系，可能是两者具有部分共同的调控途径或二者之间通过一个或多个环节相互调控。白血病细胞Bcl-2和P170的表达增高反映其具有了存活优势和MDR。
参考文献
1 Williams GT.Programmed cell death:A poptosis and on cogene cell,1991,65(7):1097～1098
, 百拇医药
2 Bernard D.Anticancer drug resistance and inhibition of apoptosis.Anticancer Res,1994,14:2291～2294
3 Miyashita T,Reed JC.Bcl-2 oncoprotein blocks chemotherapy in duced apoptosis in human leukemic cell line.Blood,1993,81:151～157
4 司徒镇强，吴军正.培养细胞的免疫组化染色技术.见：司徒镇强，吴军正主编.细胞培养.北京：世界图书出版公司，1996，202～203
5 Lotem J and Sachs L.Regulation by bcl-2,c-myc and P53 of susceptibility to indution of apoptosis by heat shock and cancer chemtherapy compounds in differentiation competent and defective myeloid leukemic cells.Cell Growth Differ,1993,4:41～47
, http://www.100md.com
6 Hanada M,Krajewski S,Tanakas A,et al.Regulation of Bcl-2 oncoprotein levels with differentiation of human neuroblastoma cells.Cancer Res,1993,53:4978～4986
7 Chambers TC,Pohl J,Raynor RL,et al.Indentification of specific sites in human P-glycoprotein phosphorylated by protein kinese.J Biol Chem,1993,268:4592～4595
(1998-09-28 收稿), 百拇医药