再生障碍性贫血患者骨髓Fas抗原和凋亡率测定及意义
作者：刘希民 孙晓明
单位：济南军区总医院血液科 邮政编码：济南，250031
关键词：贫血，再生障碍性；Fas抗原；细胞凋亡
摘要 目的摘要 目的：探讨Fas抗原和凋亡率与再生障碍性贫血(再障)发病机制的关系。方法：应用流式细胞仪测定26例再障患者骨髓单个核细胞(MNC)Fas表达率及凋亡率，其中急性再障11例，慢性再障15例，10例正常人作对照。结果：再障患者Fas表达率及凋亡率均高于对照(P<0.05)；急性再障Fas表达率及凋亡率高于慢性再障，但差异无显著性(P>0.05)。结论：再障骨髓MNC的Fas表达率和凋亡率增高，推测与再障发病机制有关。
Determination and Significance of Fas Antigen and Apoptotic Rates in Aplastic Anemia
, 百拇医药
Liu Ximin,Sun Xiaoming
Department of Hematology,Jinan Command Hospital,Jinan,250031
Abstract Objective:To explore the relationship between Fas antigen and apoptotic rates and pathological mechanism of aplastic anemia.Method:Determining Fas antigen expressing rates and apoptotic rates of marrow mononuclear cells(MNC) by flow cytometry in 26 patients with aplastic anemia(AA),including acute AA (AAA) 11 cases and chronic AA (CAA) 15 cases ,10 healthy subjects acted as controls.Result:Fas antigen expressing rates and apoptotic rates of AA were higher than those of controls.P<0.05;Fas antigen expressing rates and apoptotic rates of AAA were higher than those of CAA,but there was no significant difference,P>0.05.Conclusion:Fas antigen expressing rate and apoptotic rates increased in marrow MNCs of AA,which presumedly related to pathological mechanism of AA.
, 百拇医药
Key words Aplastic anemia Fas antigen Apoptosis
再障发病机制与造血干细胞损伤、骨髓微环境缺陷及抑制性淋巴细胞和体液抑制因子存在有关，近年来发现再障Fas表达增加，造血细胞凋亡增高，且与再障病情相关。本文测定再障患者骨髓Fas表达率及调亡水平。
1 材料与方法
1.1 病例 收集本院门诊及住院初发再障患者26例，男17例，女9例，年龄14～45岁，中位年龄27岁。设10例献血员做对照，年龄及性别与患者相似。再障诊断符合1987年第四届全国再障学术会议修订标准，其中急性再障11例，慢性再障15例。
1.2 试剂 抗Fas单抗为法国国际免疫公司产品，碘化丙锭为Sigma公司产品，流式细胞仪 FACS can型，美国BD公司产品。
, http://www.100md.com
1.3 方法 取骨髓4～5 ml，肝素抗凝，用Ficoll-Hypaque分离骨髓单个核细胞，PBS缓冲液漂洗，将细胞悬液调至1×109/ml，取细胞悬液0.5 ml，加入抗Fas单抗，室温下反应20 min，PBS缓冲液冲洗2次，除去未结合的荧光抗体；另取0.5 ml，碘化丙锭染色，用流式细胞仪检测凋亡细胞。流式细胞仪检测：上机前先以标准荧光微球调整仪器，使变异系数稳定在2%，上机后收集2万个细胞，荧光强度对数放大，光散数据存软盘，测试完后应用Cell QutstPlot软件分析数据。
1.4 统计方法 t检验。
2 结果
①对照组Fas阳性率为15.33±6.34%，急性再障Fas阳性率33.79±9.88%，慢性再障Fas阳性率27.65±7.43%，急性与慢性再障Fas阳性率较对照组明显增高，t值分别为2.34和2.13，P<0.05；急性与慢性再障之间Fas阳性率差异无显著性，t=0.82，P>0.05。②对照组凋亡率为0.62±0.04%，急性再障凋亡率3.68±1.13%，慢性再障凋亡率2.79±0.96%，急性与慢性再障凋亡率较对照组明显增高，经t检验P<0.05，t值分别为2.46和2.23，而急性与慢性再障之间凋亡率差异无显著性，t=0.94，P>0.05。
, 百拇医药
3 讨论
Fas及其配体FasL是介导细胞凋亡的膜蛋白分子，Fas为跨膜蛋白，其胞内区有约70个氨基酸组成的结构域，为传导凋亡信号所必需。当细胞表面的FasL及抗Fas抗体与细胞表面Fas结合后，致该Fas阳性细胞凋亡。Fas广泛表达于造血组织细胞。Maciejewski等〔1〕发现再障患者骨髓CD34阳性细胞上Fas表达明显高于正常对照，患者Fas表达增高与TNF和IFN诱导有关，而且对Tc细胞的杀伤敏感性增高，正常骨髓CD34阳性细胞对Fas介导的凋亡不敏感，故而推测Fas/FasL与再障骨髓衰竭的病理机制有关〔1，2〕。众所周知，TNF和IFN为造血抑制因子，再障患者体内这两种因子水平增高，故推测TNF和IFN通过调控Fas/FasL，诱导骨髓造血细胞凋亡，来实现对骨髓造血的抑制。Philptt等〔3〕利用7-氨基放线菌素D(7AAD)对凋亡细胞染色，应用流式细胞仪测定凋亡细胞，发现骨髓单个核细胞凋亡率在患者和正常人间差异无显著性，而再障骨髓CD34阳性细胞凋亡明显升高，且CD34阳性细胞数量越少，则其凋亡率越高，病情越严重。他们认为，再障造血细胞凋亡增加，导致造血细胞减少。本文应用碘化丙锭对凋亡细胞染色，流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果表明，再障患者骨髓单个核细胞Fas表达及凋亡增加，但凋亡率与病情严重性之间无明确关系。Philptt〔3〕所用标记凋亡细胞的染料与本文不同，造成测定凋亡细胞的敏感度存在差别，这可能是结果不同的原因。再障骨髓单个核细胞凋亡增高的机理考虑与Fas表达增高有直接关系。研究表明T细胞(主要是Tc)既表达Fas，又表达FasL，T细胞上FasL与骨髓造血细胞上Fas结合，引起骨髓细胞凋亡〔4〕。也可能与骨髓内刺激造血细胞生长因子如GMCSF等不足，抑制凋亡因素减弱有关。因骨髓MNC内既包含CD34阳性的造血细胞，也含有长寿命的淋巴细胞，故与直接测定CD34阳性细胞凋亡率不完全相符，与再障病情轻重无一致性。
, 百拇医药
参考文献
1 Maciejewski JP,Selleri C,Sato T,et al.Increased expression of Fas antigen on bone marrow CD+34 cells of patients with aplastic anaemia.Br J Haematol,1995,91:245～248
2 Maciejewski JP,Selleri C,Anderson S,et al.Fas antigen expression on CD34 human marrow cells is induced by interferon γ and tumor necrosis factor α and potentiates cytokine-mediated hematopoietic suppression in vitro.Blood,1995,85:3183～3186
3 Phipott NJ,Scopes J,Marsh JCW,et al.Increased apoptosis in aplastic anemia bone progenitor cells.Exp Hematol,1995,23:1642～1649
4 贾克明.加强Fas和Fas配体的研究.中华内科杂志.1997，36：651～653
(1998-09-29 收稿), http://www.100md.com
单位：济南军区总医院血液科 邮政编码：济南，250031
关键词：贫血，再生障碍性；Fas抗原；细胞凋亡
摘要 目的摘要 目的：探讨Fas抗原和凋亡率与再生障碍性贫血(再障)发病机制的关系。方法：应用流式细胞仪测定26例再障患者骨髓单个核细胞(MNC)Fas表达率及凋亡率，其中急性再障11例，慢性再障15例，10例正常人作对照。结果：再障患者Fas表达率及凋亡率均高于对照(P<0.05)；急性再障Fas表达率及凋亡率高于慢性再障，但差异无显著性(P>0.05)。结论：再障骨髓MNC的Fas表达率和凋亡率增高，推测与再障发病机制有关。
Determination and Significance of Fas Antigen and Apoptotic Rates in Aplastic Anemia
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Liu Ximin,Sun Xiaoming
Department of Hematology,Jinan Command Hospital,Jinan,250031
Abstract Objective:To explore the relationship between Fas antigen and apoptotic rates and pathological mechanism of aplastic anemia.Method:Determining Fas antigen expressing rates and apoptotic rates of marrow mononuclear cells(MNC) by flow cytometry in 26 patients with aplastic anemia(AA),including acute AA (AAA) 11 cases and chronic AA (CAA) 15 cases ,10 healthy subjects acted as controls.Result:Fas antigen expressing rates and apoptotic rates of AA were higher than those of controls.P<0.05;Fas antigen expressing rates and apoptotic rates of AAA were higher than those of CAA,but there was no significant difference,P>0.05.Conclusion:Fas antigen expressing rate and apoptotic rates increased in marrow MNCs of AA,which presumedly related to pathological mechanism of AA.
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Key words Aplastic anemia Fas antigen Apoptosis
再障发病机制与造血干细胞损伤、骨髓微环境缺陷及抑制性淋巴细胞和体液抑制因子存在有关，近年来发现再障Fas表达增加，造血细胞凋亡增高，且与再障病情相关。本文测定再障患者骨髓Fas表达率及调亡水平。
1 材料与方法
1.1 病例 收集本院门诊及住院初发再障患者26例，男17例，女9例，年龄14～45岁，中位年龄27岁。设10例献血员做对照，年龄及性别与患者相似。再障诊断符合1987年第四届全国再障学术会议修订标准，其中急性再障11例，慢性再障15例。
1.2 试剂 抗Fas单抗为法国国际免疫公司产品，碘化丙锭为Sigma公司产品，流式细胞仪 FACS can型，美国BD公司产品。
, http://www.100md.com
1.3 方法 取骨髓4～5 ml，肝素抗凝，用Ficoll-Hypaque分离骨髓单个核细胞，PBS缓冲液漂洗，将细胞悬液调至1×109/ml，取细胞悬液0.5 ml，加入抗Fas单抗，室温下反应20 min，PBS缓冲液冲洗2次，除去未结合的荧光抗体；另取0.5 ml，碘化丙锭染色，用流式细胞仪检测凋亡细胞。流式细胞仪检测：上机前先以标准荧光微球调整仪器，使变异系数稳定在2%，上机后收集2万个细胞，荧光强度对数放大，光散数据存软盘，测试完后应用Cell QutstPlot软件分析数据。
1.4 统计方法 t检验。
2 结果
①对照组Fas阳性率为15.33±6.34%，急性再障Fas阳性率33.79±9.88%，慢性再障Fas阳性率27.65±7.43%，急性与慢性再障Fas阳性率较对照组明显增高，t值分别为2.34和2.13，P<0.05；急性与慢性再障之间Fas阳性率差异无显著性，t=0.82，P>0.05。②对照组凋亡率为0.62±0.04%，急性再障凋亡率3.68±1.13%，慢性再障凋亡率2.79±0.96%，急性与慢性再障凋亡率较对照组明显增高，经t检验P<0.05，t值分别为2.46和2.23，而急性与慢性再障之间凋亡率差异无显著性，t=0.94，P>0.05。
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3 讨论
Fas及其配体FasL是介导细胞凋亡的膜蛋白分子，Fas为跨膜蛋白，其胞内区有约70个氨基酸组成的结构域，为传导凋亡信号所必需。当细胞表面的FasL及抗Fas抗体与细胞表面Fas结合后，致该Fas阳性细胞凋亡。Fas广泛表达于造血组织细胞。Maciejewski等〔1〕发现再障患者骨髓CD34阳性细胞上Fas表达明显高于正常对照，患者Fas表达增高与TNF和IFN诱导有关，而且对Tc细胞的杀伤敏感性增高，正常骨髓CD34阳性细胞对Fas介导的凋亡不敏感，故而推测Fas/FasL与再障骨髓衰竭的病理机制有关〔1，2〕。众所周知，TNF和IFN为造血抑制因子，再障患者体内这两种因子水平增高，故推测TNF和IFN通过调控Fas/FasL，诱导骨髓造血细胞凋亡，来实现对骨髓造血的抑制。Philptt等〔3〕利用7-氨基放线菌素D(7AAD)对凋亡细胞染色，应用流式细胞仪测定凋亡细胞，发现骨髓单个核细胞凋亡率在患者和正常人间差异无显著性，而再障骨髓CD34阳性细胞凋亡明显升高，且CD34阳性细胞数量越少，则其凋亡率越高，病情越严重。他们认为，再障造血细胞凋亡增加，导致造血细胞减少。本文应用碘化丙锭对凋亡细胞染色，流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果表明，再障患者骨髓单个核细胞Fas表达及凋亡增加，但凋亡率与病情严重性之间无明确关系。Philptt〔3〕所用标记凋亡细胞的染料与本文不同，造成测定凋亡细胞的敏感度存在差别，这可能是结果不同的原因。再障骨髓单个核细胞凋亡增高的机理考虑与Fas表达增高有直接关系。研究表明T细胞(主要是Tc)既表达Fas，又表达FasL，T细胞上FasL与骨髓造血细胞上Fas结合，引起骨髓细胞凋亡〔4〕。也可能与骨髓内刺激造血细胞生长因子如GMCSF等不足，抑制凋亡因素减弱有关。因骨髓MNC内既包含CD34阳性的造血细胞，也含有长寿命的淋巴细胞，故与直接测定CD34阳性细胞凋亡率不完全相符，与再障病情轻重无一致性。
, 百拇医药
参考文献
1 Maciejewski JP,Selleri C,Sato T,et al.Increased expression of Fas antigen on bone marrow CD+34 cells of patients with aplastic anaemia.Br J Haematol,1995,91:245～248
2 Maciejewski JP,Selleri C,Anderson S,et al.Fas antigen expression on CD34 human marrow cells is induced by interferon γ and tumor necrosis factor α and potentiates cytokine-mediated hematopoietic suppression in vitro.Blood,1995,85:3183～3186
3 Phipott NJ,Scopes J,Marsh JCW,et al.Increased apoptosis in aplastic anemia bone progenitor cells.Exp Hematol,1995,23:1642～1649
4 贾克明.加强Fas和Fas配体的研究.中华内科杂志.1997，36：651～653
(1998-09-29 收稿), http://www.100md.com