HHV-8阳性的原发渗出性淋巴瘤
作者：吴裕丹 陈燕
单位：同济医科大学附属协和医院血液病研究所 邮政编码：武汉，430022
关键词：淋巴瘤，原发渗出性；人类免疫缺陷病毒
临床血液学杂志990423 原发渗出性淋巴瘤(Primary effusion lymphoma,PEL)也称浆膜腔隙型淋巴瘤(body cavity-based lymphoma)，作为非霍奇金淋巴瘤一种新的类型，正逐渐被人们所认识。Knowles于1989年首次报道此病。它主要见于人类免疫缺陷病毒(HIV)血清学阳性的艾滋病患者。无1例外地生长于浆膜腔(如胸腔、腹腔及心包腔)。临床表现为严重的浆膜腔积液及淋巴瘤细胞渗出。整个病程通常缺乏明显的淋巴瘤肿块或淋巴结腺病的证据。对全身化疗效果不佳，预后极差。大多数患者同时属艾滋病晚期，平均生存期2～6个月。本病最独特的特征是感染有新近发现的人类疱疹病毒-8 chuman herpersuirus-8,HHV-8，也称为卡波肉瘤相关性疱疹病毒(kapo′s sarcoma-associated herpervirus)。此病也常同时感染EB病毒。已从患艾滋病相关性PEL(AIDS-associated PEL)和患非艾滋病相关性PEL(Non.AIDS associated PEL)患者的腹水、胸水及外周血中建立起一系列的PEL细胞系，因而为研究PEL的发病机理等提供了体外模型。现将此类细胞系的生物学特点介绍如下：
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1 临床资料及培养条件
现已从9名男性PEL患者的胸、腹水及外周血中建立起11株PEL细胞系。令人吃惊的是到目前为止，已建立的240种人类肿瘤细胞系中，包括白血病细胞系，只有PEL细胞系是HHV-8阳性。7例患者为AIDS相关性PEL，2例为非AIDS相关性PEL。年龄分布31～94岁，4例患者确诊PEL前已患有卡波肉瘤。所有患者已确诊PEL后生存期非常短，考虑到大多数患者同时也处于艾滋病晚期，故浆膜腔的大量淋巴瘤细胞渗出并不被认为是此病的直接死亡原因。4例细胞系建立于胸水渗出物，2例于腹水渗出物，1例为非特异性渗出物和1例外周血。所有细胞系均可不需额外因子刺激，在常规胎牛血清培养液中呈单细胞悬液自发性生长。
2 形态学特征
Mory-Giunwald-Giemsa染色涂片，细胞呈高度异质性，大而圆，中等至丰富的胞浆，嗜碱性强，核呈圆形成卵圆形，多有切迹或卷曲，可见1个或多个大而清晰的核仁，许多细胞似浆细胞样，其它的呈典型的免疫母细胞样或退行性变，也可见到大的多形性带有不规则或小叶状核的细胞，多数为双叶核和多叶核巨大细胞，分裂核多见，提示倍增时间很短。
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3 病毒学检查
11株PEL细胞系均为HHV-8阳性，采用半定量PCR分析及Southern Blot分析发现，PEL细胞中含有相对高的HHV-8 DNA拷贝数(每个细胞约含40～50个)，且在适当刺激下，HHV-8病毒立即被激活而自我复制，有6株PEL细胞系同时EB病毒阳性，其余5株为阴性。说明EB病毒感染并非PEL发病机制所必须的条件，且大多数EB病毒阳性的PEL细胞仅表达有限的EB病毒抗原，两个常见的EB病毒编码的转录抗原为阳性，所有的PEL细胞系均未检出其它种类的疱疹病毒如CMV，HHV-6，HHV-7，HSV-1及HSV-2，以及反转录病毒HIV，FITLV-1，HTLV-2。
4 免疫学标志
当大多数细胞为CD+45时，细胞主要表现为：CD-2，CD-3，CD-4，CD-5，CD-7，CD-8，CD-10，CD-19，CD-20，CD-21，CD-22，CD-40，CD-72，CD79，a/b-和SmIg-，所有细胞系为CD+38。提示细胞分化阻滞于前B细胞或浆细胞阶段。某些细胞表达活化标志如HLA-DR，CD23，CD25，CD30及CD38，6株细胞表达上皮膜抗原，还有些细胞表达粘附抗原。
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5 细胞基因学特征
9株PEL细胞获得了完整的基因图谱，主要为：细胞含有多种克隆性染色体异常及复杂的高倍体核型。在弥漫性大细胞性淋巴瘤，Bur-killt肉瘤，帽状淋巴瘤、滤泡样淋巴瘤和ALCL中，常见的基因异常如t(2.57) cp 23;q 35,t(3.14)(q 37,q 32),t(8,14)(q 24,q 32),t(11,14)(q 13,q 32)或t(14,18)(q 32,q 21)在PEL细胞中都未检测到。相反常可见到三倍体7，三倍体12和染色体(q21-q25)易位。这些染色体异常所代表的基因位点目前仍然不清。
6 分子基因学特征
采用Southeh Blot杂交分析揭示存在着免疫球蛋白重链及轻链重排。无常见原癌基因c-myc,bcl-1,bcl-2,bcl-6重排。肿瘤抑制基因P53多为野生型，无点突变。有趣的是，8株PEL细胞系中，7株出现bcl-65′非编码端突变，其内在含义不清。
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7 功能性特征
a、异移植性：向SCID鼠腹腔或皮下注射PEL细胞(BCBL-1)可诱发腹水和大量和血管样实体瘤，此现象同Casetman′s病的血管源性反应类似。对NOD/SCID小鼠静脉或腹内注入PEL细胞(Bcp-1或Hol-6)可出现腹水及多脏器的淋巴瘤细胞渗出。若在某些小鼠皮下植入BCP-1细胞，产生实体淋瘤及血管样增生，而对三联免疫缺陷BNX鼠注入PEL细胞(KS-1)，可诱发大量腹水。
8 病毒类功能蛋白
HHV-8是唯一能编码一系列模拟细胞周期调节蛋白受体、信号传导蛋白的病毒，如它可产生一系列蛋白模拟白介素(IL-6)，α/β巨噬细胞炎性蛋白-1(MIP-1 α/β)，干扰素调节因子(IRF)，白介素8受体(IL-8R)，补体受体-2(CR2/CD21)粘附分子NCAM CD56，抗凋亡原癌基因bcl-2，细胞周期素D(cyclin D)的功能。病毒类IL-6有62%的氨基酸与人类相同，尽管病毒IL-6与人类IL-6存在序列差异，它却具有相同生物学特性。使鼠浆细胞瘤B9和人类骨髓瘤细胞系INA-6在缺乏IL-6条件下耐受凋亡。病毒类IL-8受体具有构成活性，决定磷酸肌醇通路的功能性信号传递。PEL细胞常高表达bcl-2基因，因而使早期感染病毒的细胞耐受凋亡。HHV-8的bcl-2与其它的细胞类或病毒类蛋白共同作用，可加强细胞内的信号传递。HHV-8编码细胞周期素D可使RB磷酸化，加速了细胞增殖过程。由于细胞抵抗病毒感染通常涉及细胞周期阻滞和细胞凋亡，HHV-8编码的bcl-2，Cyclin-D，IL-6等一系列产物通过抑制上述过程致受病毒感染的细胞异常增殖直至瘤性扩张，已报道HHV-8亚基因片段可使NIH3T3细胞瘤性转化。当然，也许PEL的发病过程亦需其它致病因素。
9 细胞因子的产生和对细胞因子的反应
某些PEL细胞(BC-1，BC-2和KS-1细胞系)可产生高水平的人类IL-6，IL-10并表达IL-6R，但不产生纤维母细胞生长因子(6FGF)，粒单克隆刺激因子(GM-CSF)，IL-1β，IL-8，IL-12或血小板生长因子(PDGF)。干扰素α及γ均可抑制PEL细胞的克隆生成，而GM-CSF，IL-4，IL-6，IL-10却对它无影响。人类IL-6抗血清寡核苷酸可拮抗IL-6的产生及克隆的形成，TPA可抑制构成性IL-6产生。
(1999-01-26 收稿), 百拇医药
单位：同济医科大学附属协和医院血液病研究所 邮政编码：武汉，430022
关键词：淋巴瘤，原发渗出性；人类免疫缺陷病毒
临床血液学杂志990423 原发渗出性淋巴瘤(Primary effusion lymphoma,PEL)也称浆膜腔隙型淋巴瘤(body cavity-based lymphoma)，作为非霍奇金淋巴瘤一种新的类型，正逐渐被人们所认识。Knowles于1989年首次报道此病。它主要见于人类免疫缺陷病毒(HIV)血清学阳性的艾滋病患者。无1例外地生长于浆膜腔(如胸腔、腹腔及心包腔)。临床表现为严重的浆膜腔积液及淋巴瘤细胞渗出。整个病程通常缺乏明显的淋巴瘤肿块或淋巴结腺病的证据。对全身化疗效果不佳，预后极差。大多数患者同时属艾滋病晚期，平均生存期2～6个月。本病最独特的特征是感染有新近发现的人类疱疹病毒-8 chuman herpersuirus-8,HHV-8，也称为卡波肉瘤相关性疱疹病毒(kapo′s sarcoma-associated herpervirus)。此病也常同时感染EB病毒。已从患艾滋病相关性PEL(AIDS-associated PEL)和患非艾滋病相关性PEL(Non.AIDS associated PEL)患者的腹水、胸水及外周血中建立起一系列的PEL细胞系，因而为研究PEL的发病机理等提供了体外模型。现将此类细胞系的生物学特点介绍如下：
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1 临床资料及培养条件
现已从9名男性PEL患者的胸、腹水及外周血中建立起11株PEL细胞系。令人吃惊的是到目前为止，已建立的240种人类肿瘤细胞系中，包括白血病细胞系，只有PEL细胞系是HHV-8阳性。7例患者为AIDS相关性PEL，2例为非AIDS相关性PEL。年龄分布31～94岁，4例患者确诊PEL前已患有卡波肉瘤。所有患者已确诊PEL后生存期非常短，考虑到大多数患者同时也处于艾滋病晚期，故浆膜腔的大量淋巴瘤细胞渗出并不被认为是此病的直接死亡原因。4例细胞系建立于胸水渗出物，2例于腹水渗出物，1例为非特异性渗出物和1例外周血。所有细胞系均可不需额外因子刺激，在常规胎牛血清培养液中呈单细胞悬液自发性生长。
2 形态学特征
Mory-Giunwald-Giemsa染色涂片，细胞呈高度异质性，大而圆，中等至丰富的胞浆，嗜碱性强，核呈圆形成卵圆形，多有切迹或卷曲，可见1个或多个大而清晰的核仁，许多细胞似浆细胞样，其它的呈典型的免疫母细胞样或退行性变，也可见到大的多形性带有不规则或小叶状核的细胞，多数为双叶核和多叶核巨大细胞，分裂核多见，提示倍增时间很短。
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3 病毒学检查
11株PEL细胞系均为HHV-8阳性，采用半定量PCR分析及Southern Blot分析发现，PEL细胞中含有相对高的HHV-8 DNA拷贝数(每个细胞约含40～50个)，且在适当刺激下，HHV-8病毒立即被激活而自我复制，有6株PEL细胞系同时EB病毒阳性，其余5株为阴性。说明EB病毒感染并非PEL发病机制所必须的条件，且大多数EB病毒阳性的PEL细胞仅表达有限的EB病毒抗原，两个常见的EB病毒编码的转录抗原为阳性，所有的PEL细胞系均未检出其它种类的疱疹病毒如CMV，HHV-6，HHV-7，HSV-1及HSV-2，以及反转录病毒HIV，FITLV-1，HTLV-2。
4 免疫学标志
当大多数细胞为CD+45时，细胞主要表现为：CD-2，CD-3，CD-4，CD-5，CD-7，CD-8，CD-10，CD-19，CD-20，CD-21，CD-22，CD-40，CD-72，CD79，a/b-和SmIg-，所有细胞系为CD+38。提示细胞分化阻滞于前B细胞或浆细胞阶段。某些细胞表达活化标志如HLA-DR，CD23，CD25，CD30及CD38，6株细胞表达上皮膜抗原，还有些细胞表达粘附抗原。
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5 细胞基因学特征
9株PEL细胞获得了完整的基因图谱，主要为：细胞含有多种克隆性染色体异常及复杂的高倍体核型。在弥漫性大细胞性淋巴瘤，Bur-killt肉瘤，帽状淋巴瘤、滤泡样淋巴瘤和ALCL中，常见的基因异常如t(2.57) cp 23;q 35,t(3.14)(q 37,q 32),t(8,14)(q 24,q 32),t(11,14)(q 13,q 32)或t(14,18)(q 32,q 21)在PEL细胞中都未检测到。相反常可见到三倍体7，三倍体12和染色体(q21-q25)易位。这些染色体异常所代表的基因位点目前仍然不清。
6 分子基因学特征
采用Southeh Blot杂交分析揭示存在着免疫球蛋白重链及轻链重排。无常见原癌基因c-myc,bcl-1,bcl-2,bcl-6重排。肿瘤抑制基因P53多为野生型，无点突变。有趣的是，8株PEL细胞系中，7株出现bcl-65′非编码端突变，其内在含义不清。
, 百拇医药
7 功能性特征
a、异移植性：向SCID鼠腹腔或皮下注射PEL细胞(BCBL-1)可诱发腹水和大量和血管样实体瘤，此现象同Casetman′s病的血管源性反应类似。对NOD/SCID小鼠静脉或腹内注入PEL细胞(Bcp-1或Hol-6)可出现腹水及多脏器的淋巴瘤细胞渗出。若在某些小鼠皮下植入BCP-1细胞，产生实体淋瘤及血管样增生，而对三联免疫缺陷BNX鼠注入PEL细胞(KS-1)，可诱发大量腹水。
8 病毒类功能蛋白
HHV-8是唯一能编码一系列模拟细胞周期调节蛋白受体、信号传导蛋白的病毒，如它可产生一系列蛋白模拟白介素(IL-6)，α/β巨噬细胞炎性蛋白-1(MIP-1 α/β)，干扰素调节因子(IRF)，白介素8受体(IL-8R)，补体受体-2(CR2/CD21)粘附分子NCAM CD56，抗凋亡原癌基因bcl-2，细胞周期素D(cyclin D)的功能。病毒类IL-6有62%的氨基酸与人类相同，尽管病毒IL-6与人类IL-6存在序列差异，它却具有相同生物学特性。使鼠浆细胞瘤B9和人类骨髓瘤细胞系INA-6在缺乏IL-6条件下耐受凋亡。病毒类IL-8受体具有构成活性，决定磷酸肌醇通路的功能性信号传递。PEL细胞常高表达bcl-2基因，因而使早期感染病毒的细胞耐受凋亡。HHV-8的bcl-2与其它的细胞类或病毒类蛋白共同作用，可加强细胞内的信号传递。HHV-8编码细胞周期素D可使RB磷酸化，加速了细胞增殖过程。由于细胞抵抗病毒感染通常涉及细胞周期阻滞和细胞凋亡，HHV-8编码的bcl-2，Cyclin-D，IL-6等一系列产物通过抑制上述过程致受病毒感染的细胞异常增殖直至瘤性扩张，已报道HHV-8亚基因片段可使NIH3T3细胞瘤性转化。当然，也许PEL的发病过程亦需其它致病因素。
9 细胞因子的产生和对细胞因子的反应
某些PEL细胞(BC-1，BC-2和KS-1细胞系)可产生高水平的人类IL-6，IL-10并表达IL-6R，但不产生纤维母细胞生长因子(6FGF)，粒单克隆刺激因子(GM-CSF)，IL-1β，IL-8，IL-12或血小板生长因子(PDGF)。干扰素α及γ均可抑制PEL细胞的克隆生成，而GM-CSF，IL-4，IL-6，IL-10却对它无影响。人类IL-6抗血清寡核苷酸可拮抗IL-6的产生及克隆的形成，TPA可抑制构成性IL-6产生。
(1999-01-26 收稿), 百拇医药