缺血预处理诱导大鼠海马CA1区神经元HSP70提前表达
作者：崔 敏 许复郁 亓桂菊 郑国玲 杨明峰 夏作理 陈连璧
单位：崔 敏 亓桂菊 郑国玲 陈连壁 250012 山东省济南市，山东医科大学生理教研室；许复郁 山东省济南市，山东医科大学附属医院病理科；杨明峰 夏作理 山东省泰安市，泰山医学院微循环研究所
关键词：脑缺血/再灌注；预处理；神经元；HSP70
目的 前脑缺血再灌注可引起大鼠海马迟发性神经元死亡
目的 前脑缺血再灌注可引起大鼠海马迟发性神经元死亡。但若在致死性缺血前，预先给予短暂的非致死性缺血刺激，即缺血预处理(ischemic preconditioning，IPC)，则可对其后的长时间致死性缺血产生耐受，此现象称为缺血耐受。HSP70基因的转录被认为是细胞应激反应的基因标志，其基因产物HSP70具有细胞保护作用。本研究旨在探讨缺血预处理引起的缺血耐受中HSP70表达的变化。方法 (1) 建立动物模型： 选用健康成年雄性Wistar大鼠，参照Pulsinelli的四血管阻断法建立前脑缺血模型。动物分三组： 单纯缺血再灌注组(IR组)，给予假手术3d后行8min致死性缺血；缺血预处理组(IPC组)，先给予3min非致死性缺血，3d后再给予8min缺血；对照组，只给予假手术，不给予缺血刺激。(2) 免疫组化检测： 于缺血再灌注2h，取脑制备冰冻切片，用SABC法检测各组海马CA1区神经元HSP70的表达。(3) 流氏细胞术检测： 于缺血再灌注24h，迅速取两背侧新鲜海马组织，用流氏细胞仪检测海马CA1区神经元HSP70的阳性表达率。(4) 病理学检查： 再灌注7d时取脑制备石蜡切片，行尼氏染色，光镜下观察海马CA1区神经元形态学改变。结果 免疫组化检测显示，对照组及IR组在前脑缺血8min再灌注2h时，海马CA1区神经元未见HSP70表达。而IPC组该区神经元HSP70强烈表达。免疫活性颗粒分布于胞核及胞浆中。流氏细胞术检测显示，对照组、IR组及IPC组缺血再灌注24h时，海马CA1区HSP70阳性细胞率分别为4.10±1.60%，7.03±2.11%和39.28±11.14%。IR组及IPC组均显著高于对照组(P<0.05，P<0.001)。而IPC组HSP70阳性细胞率明显高于IR组(P<0.001)。病理学检查显示，缺血再灌注7d时，IR组海马CA1区锥体细胞大部分死亡，而IPC组该区神经元大部分存活，神经元密度显著高于IR组(P<0.001)。结论 (1) 缺血预处理可在缺血再灌注早期诱导海马CA1区缺血敏感神经元HSP70提前表达，增强了神经元对缺血损伤的耐受性。(2) HSP70的提前表达是预示缺血损伤神经元能够存活的一个敏感指标。, 百拇医药
单位：崔 敏 亓桂菊 郑国玲 陈连壁 250012 山东省济南市，山东医科大学生理教研室；许复郁 山东省济南市，山东医科大学附属医院病理科；杨明峰 夏作理 山东省泰安市，泰山医学院微循环研究所
关键词：脑缺血/再灌注；预处理；神经元；HSP70
目的 前脑缺血再灌注可引起大鼠海马迟发性神经元死亡
目的 前脑缺血再灌注可引起大鼠海马迟发性神经元死亡。但若在致死性缺血前，预先给予短暂的非致死性缺血刺激，即缺血预处理(ischemic preconditioning，IPC)，则可对其后的长时间致死性缺血产生耐受，此现象称为缺血耐受。HSP70基因的转录被认为是细胞应激反应的基因标志，其基因产物HSP70具有细胞保护作用。本研究旨在探讨缺血预处理引起的缺血耐受中HSP70表达的变化。方法 (1) 建立动物模型： 选用健康成年雄性Wistar大鼠，参照Pulsinelli的四血管阻断法建立前脑缺血模型。动物分三组： 单纯缺血再灌注组(IR组)，给予假手术3d后行8min致死性缺血；缺血预处理组(IPC组)，先给予3min非致死性缺血，3d后再给予8min缺血；对照组，只给予假手术，不给予缺血刺激。(2) 免疫组化检测： 于缺血再灌注2h，取脑制备冰冻切片，用SABC法检测各组海马CA1区神经元HSP70的表达。(3) 流氏细胞术检测： 于缺血再灌注24h，迅速取两背侧新鲜海马组织，用流氏细胞仪检测海马CA1区神经元HSP70的阳性表达率。(4) 病理学检查： 再灌注7d时取脑制备石蜡切片，行尼氏染色，光镜下观察海马CA1区神经元形态学改变。结果 免疫组化检测显示，对照组及IR组在前脑缺血8min再灌注2h时，海马CA1区神经元未见HSP70表达。而IPC组该区神经元HSP70强烈表达。免疫活性颗粒分布于胞核及胞浆中。流氏细胞术检测显示，对照组、IR组及IPC组缺血再灌注24h时，海马CA1区HSP70阳性细胞率分别为4.10±1.60%，7.03±2.11%和39.28±11.14%。IR组及IPC组均显著高于对照组(P<0.05，P<0.001)。而IPC组HSP70阳性细胞率明显高于IR组(P<0.001)。病理学检查显示，缺血再灌注7d时，IR组海马CA1区锥体细胞大部分死亡，而IPC组该区神经元大部分存活，神经元密度显著高于IR组(P<0.001)。结论 (1) 缺血预处理可在缺血再灌注早期诱导海马CA1区缺血敏感神经元HSP70提前表达，增强了神经元对缺血损伤的耐受性。(2) HSP70的提前表达是预示缺血损伤神经元能够存活的一个敏感指标。, 百拇医药