Hp+十二指肠溃疡患者外周血T淋巴细胞亚群与组织学炎症及Gas，SS含量的相关性
作者：聂昭华 祝 扬 张 敏 冯方波 陈 悦 王宝珍 耿玉兰 陈秀珍
单位：解放军261医院消化科 北京市 100094
关键词：十二指肠溃疡；螺杆菌，幽门；T-淋巴细胞亚群
世界华人消化杂志990420 摘 要
目的 动态观察根除Hp前后外周血T淋巴细胞亚群与组织学急性炎症反应，以及与血清促胃液素(Gas)，血浆、胃液生长抑素(SS)含量之间的相关变化.
方法 Hp+十二指肠溃疡(DU)男性患者32例，年龄23岁～51岁. 对照组22例均为Hp-浅表性胃炎(CSG)男性患者，年龄22岁～49岁. 两组患者均于空腹下作内镜，留取胃液，并在胃窦取组织，常规作尿素酶试验和组织学检查. 同时取静脉血，采用APAAP方法和放射免疫法检测外周血T淋巴细胞亚群及血清Gas，血浆SS含量. DU组患者接受抗Hp三联治疗，并于治疗后60d分别重复上述检查.
, 百拇医药
结果 32例中，失访8例，余24例Hp根除20例(83.3%)，未根除4例(16.7%). 抗菌治疗前，32例DU患者T淋巴细胞亚群CD3(%)，CD4(%)及CD4/CD8比值(37.0±1.2，19.9±1.0， 1.0±0.1)显著低于对照组(50.5±1.5，P<0.01； 27.0±1.3，P<0.05； 1.7±0.1，P<0.01)；CD8(%)虽较对照组增高(25.5±2.1 vs 17.7±1.1)，但无统计学意义. 20例Hp根除者中，CD3(%)，CD4(%)及CD4/CD8比值上升的患者分别为16例(80%)，13例(65%)，18例(90%)；CD8则有18例(90%)降低. CD4(%)， CD4/CD8比值与治疗前相比有显著性差异(25.6±1.6 vs 19.9±1.0；1.7±0.2 vs 1.0±0.1，P<0.01). Hp+ DU患者，伴随胃粘膜炎性损害程度，CD8(%)细胞数的含量依次上升，各组间统计有显著差异(Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ：19.9±2.6，22.1±3.4，29.1±6.8，P<0.01). 20例DU患者治疗前血清Gas，胃液SS与CD4/CD8有显著相关(r=0.492，P<0.05；r=0.789，P<0.001)，CD8淋巴细胞显著增高的DU患者其血清Gas明显增加，胃液SS显著降低. 这种密切的相关性提示DU患者Gas，SS的分泌从某种程度上影响着体内免疫细胞的变化.
, 百拇医药
结论 Hp感染DU患者，其外周血T淋巴细胞亚群含量与胃粘膜组织学急性炎症改变及血清Gas，胃液SS水平存在着明显的相关性，提示在DU发病机制中神经内分泌参与了免疫调节.
中国图书资料分类号 R573.2
Relationship of T lymphocyte subsets in peripheral blood with gastric mucosal active inflammation, Gas and SS contents in patients with duodenal ulcer
NIE Zhao-Hua, ZHU Yang, ZHANG Min, FENG Fang-Bo, CHEN Yue, WANG Bao-Zhen, GENG Yu-Lan and CHEN Xiu-Zhen
Department of Gastroenterology, Chinese PLA 261 Hospital, Beijing 100094, China
, http://www.100md.com
Subject headings duodenal ulcer; Helicobacter pylori; T-lymphocyte subsets
Abstract
AIM To study the relationship of T lymphocyte subsets in peripheral blood, gastric mucosal active inflammation, serum Gas and SS in plasma and gastric juice before and after Hp eradication.
METHODS Thirty-two male patients with Hp positive duodenal ulcer (DU) and 22 patients with Hp negative chronic superificial gastritis (CSG) as controls were assessed by histology and rapid urease test. Mucosa and gastric juice were obtained with endoscopy. The patients with DU were treated by triple anti-Hp therapy. Hp and inflammation in gastric mucosa, T lymphocyte subsets in peripheral blood and Gas level in serum, SS content in plasma and gastric juice were measured before and after treatment.
, 百拇医药
RESULTS CD3 (%), CD4 (%) and CD4/CD8 in 32 DU patients (37.0±1.2, 19.9±1.0, 1.0±0.2) were significantly lower than those of 22 CSG controls (50.5±1.5, P<0.01; 27.0±1.3, P<0.05; 1.7±0.1, P<0.01 respectively). CD8 (%) in DU patients was higher than that of the controls (25.5±2.1 vs 17.7±1.1), but the difference was not significant. Of 20 DU patients after Hp eradication, CD3(%) and CD4/CD8 were improved in 16 (80%), 13 (65%) and 18 (90%) patients respectively. CD8 (%) was decreased in 18 (90%) patients. There were significant differences in CD4 (%) and CD4/CD8 ratio before and after treatment. Accompanying by the degree of acute inflammation of gastric mucosa, the CD8 (%) was gradually increased in patients with Hp positive. There were significant differences among three degrees of acute inflammation group (Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ, 19.9±2.6, 22.1±3.4, 29.1±6.8, P<0.01). Before Hp eradication, CD4/CD8 was inversely correlated with the contents of Gas in serum and SS in plasma and gastric juice (r=0.492, P<0.05; r=0.789, P<0.001) in DU patients. The close relationship suggested that the secretions of Gas and SS had an important effect on immune cells in DU patients under certain circumstances.
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CONCLUSION In Hp+ DU patients, T lymphocyte subsets in peripheral blood are obviously correlated with gastric active inflammation and Gas in serum and SS in plasma and gastric juice, indicating that enteric nerve system plays a role in immune regulation.
0 引言
DU患者外周血T淋巴细胞亚群及血清促胃液素(gastrin, Gas)，血浆、胃液生长抑素(somatostatin,SS)含量会发生不同程度的变化[1-3]. 这些变化均提示DU患者体内存在着不同程度的免疫功能紊乱及胃肠道激素分泌的异常. 为了进一步从神经内分泌-免疫角度探讨DU的发病机制，我们对一组Hp+ DU患者作了前瞻性研究，动态观察了根除Hp前后外周血T淋巴细胞亚群与组织学急性炎症反应，以及与血清Gas，血浆胃液SS含量之间相关的变化.
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1 材料和方法
1.1 对象 经胃镜检查及尿素酶和组织病理学确诊的Hp+ DU男性患者32例，除外溃疡合并症及其他脏器疾病. 年龄23岁～51岁. 对照组为22例Hp- CSG患者，均为男性，年龄22岁～49岁. DU组患者给予抗Hp 的三联治疗：洛赛克(奥美拉唑)20mg，1次/d×28d+阿莫西林0.5g，甲硝唑0.2g，4次/d×14d. 结束后继续给予洛赛克20mg，1次/d×28d. 停药后60d重复胃镜及实验室检查.
1.2 方法
1.2.1 标本采集 两组检测对象均于空腹采取静脉血8mL，其中2mL留取血清，测定Gas，3mL置入含100g/L EDTA和抑肽酶1000U的试管内，测定血浆SS；另将3mL放入采用肝素抗凝处理的试管内，进行T淋巴细胞亚群测定. 胃镜检查时在胃窦取组织4块，常规作尿素酶试验和组织学检查，于粘液湖内抽取胃液5mL，经处理上清液，与血液标本-20℃贮存备测.
, 百拇医药
1.2.2 标本测定 所得外周血用淋巴细胞分离液分离出外周单个核细胞，用鼠抗人T淋巴细胞亚群单克隆抗体，按常规APAAP方法，测定外周血T淋巴细胞水平. APAAP方法所用试剂购自中国军事医学科学院生物制剂发展中心. 血清、血浆及胃液Gas，SS含量采用放射免疫药盒测定，药盒分别由中国原子能科学研究所及北京海科锐公司提供. 组织活检按常规病理标本处理切片后作Warthin-Starry/HE染色查Hp；急性炎症反应按Kaneko分级法[4]，即：0级，无多形核白细胞浸润；1级，整个视野偶见多形核白细胞浸润；2级，多形核白细胞呈中度散布，介于1～3级之间；3级：整个视野可见大量多形核白细胞浸润.
统计学处理 采用F检验、t检验、相关系数的显著性检验.
2 结果
DU患者32例中失访8例，余24例中Hp根除者20例(83.3%)，Hp未根除者4例(16.7%). 抗菌治疗前DU患者T淋巴细胞亚群CD3，CD4及CD4/CD8比值显著低于对照组(P<0.05； P<0.01； P<0.01)，CD8高于对照组，但无统计学处理显著意义(表1). 20例Hp根除者中，CD3，CD4及CD4/CD8比值明显上升的病例分别为16例(80%)，13例(65%)，18例(90%)，CD8则有18例降低(90%). CD4，CD4/CD8比值与治疗前相比有显著差异(P<0.01，表1).
, 百拇医药
表1 DU患者T淋巴细胞亚群分析 (±s，%) 组别
n
CD3
CD4
CD8
CD4/CD8
Hp- CSG组
22
50.5±1.5
27.0±1.3
17.7±1.1
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1.7±0.1
Hp+ DU治疗前
32
37.0±1.2af
19.9±1.0bf
25.3±2.0
1.0±0.1bf
Hp根除组
20
43.0±1.8
25.6±1.6d
, 百拇医药
17.5±1.6
1.7±0.2d
aP<0.05，bP<0.01，vs CSG；dP<0.01，vs Hp+ DU(Q检验)；fP<0.01 (F检验).
Hp根除前，伴随胃粘膜炎性损害程度，CD8细胞数的含量依次上升，各组间统计有显著差异(P<0.01，表2). Hp根除后组织学改善的明显特点之一是中性粒细胞浸润的消失和慢性炎症的持续存在，而4例Hp未根除者，组织学仍可见中性粒细胞的浸润.
表2 Hp+ DU患者T细胞亚群与胃炎病变活动性的相关变化 (±s,%) 分级
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n
CD3
CD4
CD8
CD4/CD8
Ⅰ
15
37.7±4.0
18.9±0.8
19.8±2.6b
1.0±0.1
Ⅱ
11
, 百拇医药
35.0±2.2
22.4±2.6
22.2±3.4
1.0±0.2
Ⅲ
6
37.8±1.8
20.5±3.1
29.1±6.8d
0.9±0.02
bP<0.01，(F检验)；dP<0.01，vs Ⅰ组(Q检验).
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DU患者20例中，治疗前Gas水平上升，而血浆、胃液SS水平则呈下降；随着Hp的根除，血清Gas下降至正常水平(P<0.001)，血浆SS上升(P<0.001)，血浆SS与血清Gas呈显著负相关(r=-0.847，P<0.001)，而胃液SS虽呈上升趋势，但经统计学处理无显著差异(表3). 有关CD4/CD8比值与Gas，SS的相关分析显示，治疗前血清Gas，胃液SS有显著相关(P<0.05，P<0.001)，而血浆SS与CD4/CD8之间无相关性(表4).
表3 DU Hp根除前后血清Gas，血浆胃液SS含量的变化 (±s,μg/L) 组别
n
血清Gas
SS
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血浆
胃液
治疗前
20
140±7
4.6±0.7
13.3±2.0
治疗后
20
65±4b
12.5±1.7b
19.9±3.1
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bP<0.001，vs 治疗前(t检验).
表4 DU患者20例Hp根除前后CD4/CD8水平与Gas及SS相关分析
治疗前
治疗后
r值
P值
r值
P值
血清Gas
0.492
<0.05
0.339
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>0.05
血浆SS
0.282
>0.05
0.056
>0.05
胃液SS
0.789
<0.001
0.185
>0.05
3 讨论
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DU的发病可能与胃肠道神经内分泌-免疫细胞反应异常有关. 胃道中存在着大量的免疫细胞和内分泌细胞，它们在胃肠粘膜中呈弥漫分布，相互间联系密切[5]. 其中免疫反应由复杂的T淋巴细胞间相关网调节，T淋巴细胞群体内，免疫调节细胞相互协同，又相互拮抗，以维持免疫应答的相对平衡. CD4/CD8比值被公认为是免疫系统调节中一个很有价值的指标. 本结果显示，Hp感染状态下，DU患者外周血CD8细胞(抑制/细胞毒细胞)明显增高，而CD3(总T细胞)及CD4细胞(辅助性T细胞)显著降低，从而导致CD4/CD8比值异常. 这种免疫调节紊乱的状况与国内外文献报道是一致的[6，7]. 此外，观察中还发现，外周血CD8细胞数的增加与Hp感染所致胃粘膜组织学急性炎症反应程度呈同步性(P<0.01). 根除Hp后，急性炎症改善，免疫功能逐步恢复，CD8细胞数下降，CD4/CD8比值趋于正常. 由此提示DU患者体内存在免疫细胞反应抑制和免疫功能失衡. T淋巴细胞功能的降低不仅参与了Hp+ DU患者胃粘膜急性炎症发生、发展和转归过程，而且与胃粘膜病变的受累活动和病变程度密切相关.
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既往有关Hp感染对宿主免疫抑制发生机制的研究大多强调了炎性递质对机体免疫调节的影响，而免疫调节过程中免疫细胞和胃肠神经内分泌之间的相关变化却少有报道. 由于胃肠内分泌细胞大多分布于上皮细胞和基膜之间，因此长期胃粘膜上皮的损害同样亦可造成胃肠神经内分泌细胞的损害，从而出现胃窦局部胃肠激素分泌异常. 本实验侧重观察了上述变化，证实Hp感染导致DU患者机体免疫防御功能失调，并严重影响了胃肠神经内分泌细胞和免疫网络的调控过程. 不少学者已证实了Hp感染伴随高促胃液素血症[8]，而粘膜下丛神经末梢释放的促胃液素亦能影响胃肠神经支配的肥大细胞、浆细胞等免疫细胞和神经内分泌细胞，刺激胃粘膜局部的免疫反应. 与胃酸分泌抑制相关的SS，其受体则多位于具有抑制/杀伤表型的T淋巴细胞上. SS能促进细胞分裂和免疫球蛋白合成. 同时，不少免疫细胞也能产生和分泌胃肠肽，如：巨嗜细胞分泌SS、蛙皮素等. 本实验也显示，DU患者Hp感染后血清Gas显著上升，血浆、胃液SS明显下降，经三联抗菌治疗后，伴随组织学胃粘膜急性炎症的好转，血清Gas下降，血浆、胃液SS均上升；Hp根除后，血浆SS与血清Gas水平呈显著负相关(P<0.001). 此外，研究还详细观察了外周血T淋巴细胞亚群与胃肠激素Gas，SS相互的关系. Hp感染DU患者血清Gas明显上升，血浆SS及胃液SS下降，CD4/CD8比值明显受到了抑制. 部分患者Gas含量越高，免疫抑制作用越强. DU患者治疗前血清Gas和胃液SS与外周血CD4/CD8比值的改变直接相关(P<0.05，P<0.001)，CD8淋巴细胞显著增高的DU患者其血清Gas明显增加，胃液SS显著降低. 这种密切的相关性提示DU患者Gas,SS的分泌从某种程度上影响着体内免疫细胞的变化. DU患者Hp根除后，虽然血清Gas水平下降，胃液SS水平上升，但它们与CD4/CD8淋巴细胞比值之间尚未达到显著相关性，这种无明显改善可能源于：①分泌Gas和SS的胃窦G细胞和D细胞异常状况先于感染；②一些与Hp感染相关的严重慢性炎症造成胃窦G细胞和D细胞不可逆的病变；③由于慢性炎症持续存在影响了胃肠免疫的微环境，其完全的恢复则有待于Hp感染后所造成的其他组织学病变的消失. 这一发现也可部分解释，Hp感染的DU患者，即使在Hp根除后其Gas，SS释放的逆转并非与免疫指标呈同步性. 胃肠激素Gas，SS的完全恢复则可能与胃粘膜慢性炎症的分级好转更为相关[4，9]. 因此，后者的恢复将是一个缓慢的过程.
, 百拇医药
近年来，神经内分泌参与免疫调节已成共识. 由于胃肠粘膜富含肽能神经和淋巴组织，因此肽类和免疫系统的相互关系在胃肠道尤显重要. 本研究仅是初步的观察，目前还尚难以肯定DU发病与细胞免疫和胃肠道激素分泌紊乱的因果关系. 本实验的结论：Hp感染DU患者，其外周血T淋巴细胞亚群含量与胃粘膜组织学急性炎症改变及血清Gas，胃液SS水平存在着明显的相关性，提示在DU发病机制中神经内分泌参与了免疫调节.
作者简介:聂昭华，女，1951-05-19生，河北晋县人，汉族. 1974年湖北医学院医疗系毕业，1993年考取军队临床医学中青年人才培养基金班，副主任医师，主要从事消化系疾病的研究，发表论文68篇.
通讯作者 聂昭华，100094，北京市5100信箱，解放军261医院消化科.
Correspondence to:NIE Zhao-Hua, Department of Gastroenterology, Chinese PLA 261 Hospital, P.O. Box 5100, Beijing, 100094, China
, 百拇医药
Tel. +86.10.66366529 Ext. 210
4 参考文献
[1] Ernst PB, Jin Y, Reyes VE, Crowe SE. The role of the local immune response in the pathogenesis of peptic ulcer formation. Scand J Gastroenterol, 1994;29(Suppl 205):22-28
[2] Martin J. Hypothese on the pathogenesis and natural history of Helicobacter pylori-induced inflammation. Gastroenterology, 1992;102:720-727
, 百拇医药
[3] Queiroz DMM, Mendes EN, Rocha GA. Effect of Helicobacter pylori eradication on antral gastrin-and somatostatin-immunoreactive cell density and gastrin and somatostatin concentrations. Scand J Gastroenterol, 1993;28:858-864
[4] Kaneko H, Nakada K, Mitsama T, Uchida K, Furasama A, Maeda Y, Morise K. Helicobacter pylori infection induces a decrease in immunoreactive- somatostatin concentrations of human stomach. Dig Dis Sci, 1992;37:409-416
, http://www.100md.com
[5] 扬贵波，高杰英. 胃肠粘膜神经内分泌免疫网络研究进展(综述). 上海免疫学杂志，1996；16：253-257
[6] Fan XJ, Chua A, Shahi CN, Mcdevitt J, Keeling PW, Kelleher D. Gastric T lymphocyte responses to Helicobacter pylori in patients with H.pylori colonisation. Gut, 1994;35:1379-1384
[7] 舒进昌，杨绮红，钟小仕，沈雁. 十二指肠球部溃疡出血患者外周血T淋巴细胞亚群的测定. 胃肠病学和肝脏病学杂志，1997；6：166-168
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[9] 聂昭华，郑文尧，郭荣斌. 根除幽门螺杆菌前后消化性溃疡患者胃窦粘膜组织学及胃泌素，生长抑素，表皮生长因子等相关变化的研究. 中华消化杂志，1996；16：294-295
收稿日期 1998-11-26, 百拇医药
单位：解放军261医院消化科 北京市 100094
关键词：十二指肠溃疡；螺杆菌，幽门；T-淋巴细胞亚群
世界华人消化杂志990420 摘 要
目的 动态观察根除Hp前后外周血T淋巴细胞亚群与组织学急性炎症反应，以及与血清促胃液素(Gas)，血浆、胃液生长抑素(SS)含量之间的相关变化.
方法 Hp+十二指肠溃疡(DU)男性患者32例，年龄23岁～51岁. 对照组22例均为Hp-浅表性胃炎(CSG)男性患者，年龄22岁～49岁. 两组患者均于空腹下作内镜，留取胃液，并在胃窦取组织，常规作尿素酶试验和组织学检查. 同时取静脉血，采用APAAP方法和放射免疫法检测外周血T淋巴细胞亚群及血清Gas，血浆SS含量. DU组患者接受抗Hp三联治疗，并于治疗后60d分别重复上述检查.
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结果 32例中，失访8例，余24例Hp根除20例(83.3%)，未根除4例(16.7%). 抗菌治疗前，32例DU患者T淋巴细胞亚群CD3(%)，CD4(%)及CD4/CD8比值(37.0±1.2，19.9±1.0， 1.0±0.1)显著低于对照组(50.5±1.5，P<0.01； 27.0±1.3，P<0.05； 1.7±0.1，P<0.01)；CD8(%)虽较对照组增高(25.5±2.1 vs 17.7±1.1)，但无统计学意义. 20例Hp根除者中，CD3(%)，CD4(%)及CD4/CD8比值上升的患者分别为16例(80%)，13例(65%)，18例(90%)；CD8则有18例(90%)降低. CD4(%)， CD4/CD8比值与治疗前相比有显著性差异(25.6±1.6 vs 19.9±1.0；1.7±0.2 vs 1.0±0.1，P<0.01). Hp+ DU患者，伴随胃粘膜炎性损害程度，CD8(%)细胞数的含量依次上升，各组间统计有显著差异(Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ：19.9±2.6，22.1±3.4，29.1±6.8，P<0.01). 20例DU患者治疗前血清Gas，胃液SS与CD4/CD8有显著相关(r=0.492，P<0.05；r=0.789，P<0.001)，CD8淋巴细胞显著增高的DU患者其血清Gas明显增加，胃液SS显著降低. 这种密切的相关性提示DU患者Gas，SS的分泌从某种程度上影响着体内免疫细胞的变化.
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结论 Hp感染DU患者，其外周血T淋巴细胞亚群含量与胃粘膜组织学急性炎症改变及血清Gas，胃液SS水平存在着明显的相关性，提示在DU发病机制中神经内分泌参与了免疫调节.
中国图书资料分类号 R573.2
Relationship of T lymphocyte subsets in peripheral blood with gastric mucosal active inflammation, Gas and SS contents in patients with duodenal ulcer
NIE Zhao-Hua, ZHU Yang, ZHANG Min, FENG Fang-Bo, CHEN Yue, WANG Bao-Zhen, GENG Yu-Lan and CHEN Xiu-Zhen
Department of Gastroenterology, Chinese PLA 261 Hospital, Beijing 100094, China
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Subject headings duodenal ulcer; Helicobacter pylori; T-lymphocyte subsets
Abstract
AIM To study the relationship of T lymphocyte subsets in peripheral blood, gastric mucosal active inflammation, serum Gas and SS in plasma and gastric juice before and after Hp eradication.
METHODS Thirty-two male patients with Hp positive duodenal ulcer (DU) and 22 patients with Hp negative chronic superificial gastritis (CSG) as controls were assessed by histology and rapid urease test. Mucosa and gastric juice were obtained with endoscopy. The patients with DU were treated by triple anti-Hp therapy. Hp and inflammation in gastric mucosa, T lymphocyte subsets in peripheral blood and Gas level in serum, SS content in plasma and gastric juice were measured before and after treatment.
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RESULTS CD3 (%), CD4 (%) and CD4/CD8 in 32 DU patients (37.0±1.2, 19.9±1.0, 1.0±0.2) were significantly lower than those of 22 CSG controls (50.5±1.5, P<0.01; 27.0±1.3, P<0.05; 1.7±0.1, P<0.01 respectively). CD8 (%) in DU patients was higher than that of the controls (25.5±2.1 vs 17.7±1.1), but the difference was not significant. Of 20 DU patients after Hp eradication, CD3(%) and CD4/CD8 were improved in 16 (80%), 13 (65%) and 18 (90%) patients respectively. CD8 (%) was decreased in 18 (90%) patients. There were significant differences in CD4 (%) and CD4/CD8 ratio before and after treatment. Accompanying by the degree of acute inflammation of gastric mucosa, the CD8 (%) was gradually increased in patients with Hp positive. There were significant differences among three degrees of acute inflammation group (Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ, 19.9±2.6, 22.1±3.4, 29.1±6.8, P<0.01). Before Hp eradication, CD4/CD8 was inversely correlated with the contents of Gas in serum and SS in plasma and gastric juice (r=0.492, P<0.05; r=0.789, P<0.001) in DU patients. The close relationship suggested that the secretions of Gas and SS had an important effect on immune cells in DU patients under certain circumstances.
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CONCLUSION In Hp+ DU patients, T lymphocyte subsets in peripheral blood are obviously correlated with gastric active inflammation and Gas in serum and SS in plasma and gastric juice, indicating that enteric nerve system plays a role in immune regulation.
0 引言
DU患者外周血T淋巴细胞亚群及血清促胃液素(gastrin, Gas)，血浆、胃液生长抑素(somatostatin,SS)含量会发生不同程度的变化[1-3]. 这些变化均提示DU患者体内存在着不同程度的免疫功能紊乱及胃肠道激素分泌的异常. 为了进一步从神经内分泌-免疫角度探讨DU的发病机制，我们对一组Hp+ DU患者作了前瞻性研究，动态观察了根除Hp前后外周血T淋巴细胞亚群与组织学急性炎症反应，以及与血清Gas，血浆胃液SS含量之间相关的变化.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 对象 经胃镜检查及尿素酶和组织病理学确诊的Hp+ DU男性患者32例，除外溃疡合并症及其他脏器疾病. 年龄23岁～51岁. 对照组为22例Hp- CSG患者，均为男性，年龄22岁～49岁. DU组患者给予抗Hp 的三联治疗：洛赛克(奥美拉唑)20mg，1次/d×28d+阿莫西林0.5g，甲硝唑0.2g，4次/d×14d. 结束后继续给予洛赛克20mg，1次/d×28d. 停药后60d重复胃镜及实验室检查.
1.2 方法
1.2.1 标本采集 两组检测对象均于空腹采取静脉血8mL，其中2mL留取血清，测定Gas，3mL置入含100g/L EDTA和抑肽酶1000U的试管内，测定血浆SS；另将3mL放入采用肝素抗凝处理的试管内，进行T淋巴细胞亚群测定. 胃镜检查时在胃窦取组织4块，常规作尿素酶试验和组织学检查，于粘液湖内抽取胃液5mL，经处理上清液，与血液标本-20℃贮存备测.
, 百拇医药
1.2.2 标本测定 所得外周血用淋巴细胞分离液分离出外周单个核细胞，用鼠抗人T淋巴细胞亚群单克隆抗体，按常规APAAP方法，测定外周血T淋巴细胞水平. APAAP方法所用试剂购自中国军事医学科学院生物制剂发展中心. 血清、血浆及胃液Gas，SS含量采用放射免疫药盒测定，药盒分别由中国原子能科学研究所及北京海科锐公司提供. 组织活检按常规病理标本处理切片后作Warthin-Starry/HE染色查Hp；急性炎症反应按Kaneko分级法[4]，即：0级，无多形核白细胞浸润；1级，整个视野偶见多形核白细胞浸润；2级，多形核白细胞呈中度散布，介于1～3级之间；3级：整个视野可见大量多形核白细胞浸润.
统计学处理 采用F检验、t检验、相关系数的显著性检验.
2 结果
DU患者32例中失访8例，余24例中Hp根除者20例(83.3%)，Hp未根除者4例(16.7%). 抗菌治疗前DU患者T淋巴细胞亚群CD3，CD4及CD4/CD8比值显著低于对照组(P<0.05； P<0.01； P<0.01)，CD8高于对照组，但无统计学处理显著意义(表1). 20例Hp根除者中，CD3，CD4及CD4/CD8比值明显上升的病例分别为16例(80%)，13例(65%)，18例(90%)，CD8则有18例降低(90%). CD4，CD4/CD8比值与治疗前相比有显著差异(P<0.01，表1).
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表1 DU患者T淋巴细胞亚群分析 (
±s，%) 组别n
CD3
CD4
CD8
CD4/CD8
Hp- CSG组
22
50.5±1.5
27.0±1.3
17.7±1.1
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1.7±0.1
Hp+ DU治疗前
32
37.0±1.2af
19.9±1.0bf
25.3±2.0
1.0±0.1bf
Hp根除组
20
43.0±1.8
25.6±1.6d
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17.5±1.6
1.7±0.2d
aP<0.05，bP<0.01，vs CSG；dP<0.01，vs Hp+ DU(Q检验)；fP<0.01 (F检验).
Hp根除前，伴随胃粘膜炎性损害程度，CD8细胞数的含量依次上升，各组间统计有显著差异(P<0.01，表2). Hp根除后组织学改善的明显特点之一是中性粒细胞浸润的消失和慢性炎症的持续存在，而4例Hp未根除者，组织学仍可见中性粒细胞的浸润.
表2 Hp+ DU患者T细胞亚群与胃炎病变活动性的相关变化 (
±s,%) 分级, http://www.100md.com
n
CD3
CD4
CD8
CD4/CD8
Ⅰ
15
37.7±4.0
18.9±0.8
19.8±2.6b
1.0±0.1
Ⅱ
11
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35.0±2.2
22.4±2.6
22.2±3.4
1.0±0.2
Ⅲ
6
37.8±1.8
20.5±3.1
29.1±6.8d
0.9±0.02
bP<0.01，(F检验)；dP<0.01，vs Ⅰ组(Q检验).
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DU患者20例中，治疗前Gas水平上升，而血浆、胃液SS水平则呈下降；随着Hp的根除，血清Gas下降至正常水平(P<0.001)，血浆SS上升(P<0.001)，血浆SS与血清Gas呈显著负相关(r=-0.847，P<0.001)，而胃液SS虽呈上升趋势，但经统计学处理无显著差异(表3). 有关CD4/CD8比值与Gas，SS的相关分析显示，治疗前血清Gas，胃液SS有显著相关(P<0.05，P<0.001)，而血浆SS与CD4/CD8之间无相关性(表4).
表3 DU Hp根除前后血清Gas，血浆胃液SS含量的变化 (
±s,μg/L) 组别n
血清Gas
SS
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血浆
胃液
治疗前
20
140±7
4.6±0.7
13.3±2.0
治疗后
20
65±4b
12.5±1.7b
19.9±3.1
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bP<0.001，vs 治疗前(t检验).
表4 DU患者20例Hp根除前后CD4/CD8水平与Gas及SS相关分析
治疗前
治疗后
r值
P值
r值
P值
血清Gas
0.492
<0.05
0.339
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>0.05
血浆SS
0.282
>0.05
0.056
>0.05
胃液SS
0.789
<0.001
0.185
>0.05
3 讨论
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DU的发病可能与胃肠道神经内分泌-免疫细胞反应异常有关. 胃道中存在着大量的免疫细胞和内分泌细胞，它们在胃肠粘膜中呈弥漫分布，相互间联系密切[5]. 其中免疫反应由复杂的T淋巴细胞间相关网调节，T淋巴细胞群体内，免疫调节细胞相互协同，又相互拮抗，以维持免疫应答的相对平衡. CD4/CD8比值被公认为是免疫系统调节中一个很有价值的指标. 本结果显示，Hp感染状态下，DU患者外周血CD8细胞(抑制/细胞毒细胞)明显增高，而CD3(总T细胞)及CD4细胞(辅助性T细胞)显著降低，从而导致CD4/CD8比值异常. 这种免疫调节紊乱的状况与国内外文献报道是一致的[6，7]. 此外，观察中还发现，外周血CD8细胞数的增加与Hp感染所致胃粘膜组织学急性炎症反应程度呈同步性(P<0.01). 根除Hp后，急性炎症改善，免疫功能逐步恢复，CD8细胞数下降，CD4/CD8比值趋于正常. 由此提示DU患者体内存在免疫细胞反应抑制和免疫功能失衡. T淋巴细胞功能的降低不仅参与了Hp+ DU患者胃粘膜急性炎症发生、发展和转归过程，而且与胃粘膜病变的受累活动和病变程度密切相关.
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既往有关Hp感染对宿主免疫抑制发生机制的研究大多强调了炎性递质对机体免疫调节的影响，而免疫调节过程中免疫细胞和胃肠神经内分泌之间的相关变化却少有报道. 由于胃肠内分泌细胞大多分布于上皮细胞和基膜之间，因此长期胃粘膜上皮的损害同样亦可造成胃肠神经内分泌细胞的损害，从而出现胃窦局部胃肠激素分泌异常. 本实验侧重观察了上述变化，证实Hp感染导致DU患者机体免疫防御功能失调，并严重影响了胃肠神经内分泌细胞和免疫网络的调控过程. 不少学者已证实了Hp感染伴随高促胃液素血症[8]，而粘膜下丛神经末梢释放的促胃液素亦能影响胃肠神经支配的肥大细胞、浆细胞等免疫细胞和神经内分泌细胞，刺激胃粘膜局部的免疫反应. 与胃酸分泌抑制相关的SS，其受体则多位于具有抑制/杀伤表型的T淋巴细胞上. SS能促进细胞分裂和免疫球蛋白合成. 同时，不少免疫细胞也能产生和分泌胃肠肽，如：巨嗜细胞分泌SS、蛙皮素等. 本实验也显示，DU患者Hp感染后血清Gas显著上升，血浆、胃液SS明显下降，经三联抗菌治疗后，伴随组织学胃粘膜急性炎症的好转，血清Gas下降，血浆、胃液SS均上升；Hp根除后，血浆SS与血清Gas水平呈显著负相关(P<0.001). 此外，研究还详细观察了外周血T淋巴细胞亚群与胃肠激素Gas，SS相互的关系. Hp感染DU患者血清Gas明显上升，血浆SS及胃液SS下降，CD4/CD8比值明显受到了抑制. 部分患者Gas含量越高，免疫抑制作用越强. DU患者治疗前血清Gas和胃液SS与外周血CD4/CD8比值的改变直接相关(P<0.05，P<0.001)，CD8淋巴细胞显著增高的DU患者其血清Gas明显增加，胃液SS显著降低. 这种密切的相关性提示DU患者Gas,SS的分泌从某种程度上影响着体内免疫细胞的变化. DU患者Hp根除后，虽然血清Gas水平下降，胃液SS水平上升，但它们与CD4/CD8淋巴细胞比值之间尚未达到显著相关性，这种无明显改善可能源于：①分泌Gas和SS的胃窦G细胞和D细胞异常状况先于感染；②一些与Hp感染相关的严重慢性炎症造成胃窦G细胞和D细胞不可逆的病变；③由于慢性炎症持续存在影响了胃肠免疫的微环境，其完全的恢复则有待于Hp感染后所造成的其他组织学病变的消失. 这一发现也可部分解释，Hp感染的DU患者，即使在Hp根除后其Gas，SS释放的逆转并非与免疫指标呈同步性. 胃肠激素Gas，SS的完全恢复则可能与胃粘膜慢性炎症的分级好转更为相关[4，9]. 因此，后者的恢复将是一个缓慢的过程.
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近年来，神经内分泌参与免疫调节已成共识. 由于胃肠粘膜富含肽能神经和淋巴组织，因此肽类和免疫系统的相互关系在胃肠道尤显重要. 本研究仅是初步的观察，目前还尚难以肯定DU发病与细胞免疫和胃肠道激素分泌紊乱的因果关系. 本实验的结论：Hp感染DU患者，其外周血T淋巴细胞亚群含量与胃粘膜组织学急性炎症改变及血清Gas，胃液SS水平存在着明显的相关性，提示在DU发病机制中神经内分泌参与了免疫调节.
作者简介:聂昭华，女，1951-05-19生，河北晋县人，汉族. 1974年湖北医学院医疗系毕业，1993年考取军队临床医学中青年人才培养基金班，副主任医师，主要从事消化系疾病的研究，发表论文68篇.
通讯作者 聂昭华，100094，北京市5100信箱，解放军261医院消化科.
Correspondence to:NIE Zhao-Hua, Department of Gastroenterology, Chinese PLA 261 Hospital, P.O. Box 5100, Beijing, 100094, China
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Tel. +86.10.66366529 Ext. 210
4 参考文献
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收稿日期 1998-11-26, 百拇医药