抗CEA单克隆抗体导向治疗大肠癌的病理学研究
作者：卢献平 李宝金 陈声乐 吕 斌 蒋宁一
单位：卢献平 吕 斌 蒋宁一 中山医科大学孙逸仙纪念医院1核医学科； 李宝金 陈声乐 外科 广东省广州市 510120
关键词：结肠肿瘤/治疗；直肠肿瘤/治疗；抗体，单克隆；丝裂霉素C/治疗应用
世界华人消化杂志990417 摘 要
目的 研究抗CEA单克隆抗体丝裂霉素治疗大肠癌的病理学改变，以提高大肠癌综合治疗的疗效.
方法 大肠腺癌患者20例，随机分成3组，分别进行化疗(iv 丝裂霉素8mg),iv抗CEA单克隆抗体-丝裂霉素(含丝裂霉素8mg)导向治疗以及顿服心得安10mg+iv抗CEA单克隆抗体-丝裂霉素(含丝裂霉素8mg)导向治疗. 其后3d对所有患者均行手术切取标本进行病理组织学观察，AgNOR检测及肿瘤浸润淋巴细胞计数.
, http://www.100md.com
结果 ①病理退变程度：化疗组有效率为71.4%，抗CEA单克隆抗体-丝裂霉素组有效率为85.7%，顿服心得安+抗CEA单克隆抗体-丝裂霉素组为83.3%，3组各组间无显著性差异(P>0.05). ②AgNOR检测：抗CEA单克隆抗体-丝裂霉素组与化疗组之间癌细胞AgNOR/核均数其差异有显著性(t'=2.70，P<0.05)；顿服心得安+抗CEA单克隆抗体-丝裂霉素组与化疗组比较，癌细胞AgNOR/核均数其差异也有显著性(t'=3.20，P<0.05)；两导向治疗组之间癌细胞AgNOR/核均数其差异无显著性(P>0.05). ③肿瘤浸润性淋巴细胞计数：各组中T细胞CD+3与B细胞CD+20之间有显著性差异(P<0.01)；而各组之间CD+3或CD+20经两两比较均无显著性差异(P>0.05)，而浸润淋巴细胞以T细胞CD+3为主.
, 百拇医药
结论 通过癌细胞AgNOR/核均数检测发现导向化疗与化疗比较，治疗效果较明显. 导向化疗与化疗均能导致肿瘤细胞退行性变，但两者的区别不明显. 肿瘤化疗后浸润性淋巴细胞主要为T细胞.
中国图书资料分类号 R735.34
Anti-CEA monoclonal antibody targeting therapy for colorectal carcinoma
LU Xian-Ping1, LI Bao-Jin2, CHEN Sheng-Le2, LU Bin1 and JIANG Ning-Yi1
1Department of Nuclear Medicine and 2Department of Surgery, Memorial Hospital, Sun Yat-Sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510120, Guangdong Province, China
, http://www.100md.com
Subject headings colonic neoplasms/therapy; rectal neoplasms/therapy; antibody, monoclonal; mitomycin C/therapeutic use
Abstract
AIM To study the pathohistological changes of colorectal carcinoma (CRC) after targeting therapy so as to improve the therapeutic effect for this tumor.
METHODS Twenty patients receiving 3-day preoperative chemotherapy were divided into three groups: group A (7 patients receiving mitomycin C 8mg), group B (7 patients receiving monoclonal antibody C50 2mg and mitomycin C 8mg) and group C (6 patients receiving inderal 10mg, C50 2mg and mitomycin C 8mg). Effect of the preoperative chemotherapy was assessed by histologic findings of the resected specimens, by silver-staining proteins score of the nucleolar organizer region (AgNOR) and by infiltrating lymphocytes' subsets and counts with streptavidin-peroxidase stain (SP).
, 百拇医药
RESULTS Apoptosis of CRC cells were found in five patients (71.4%) in group A, six patients (85.7%) in group B and five patients in group C, without significant difference among the groups (P>0.05). AgNOR score of the resected tumor was lower in group B than in group A with significant difference between the two groups (t'=2.70, P<0.05). There was no significant difference between groups B and C (P>0.05). The infiltrating lymphocytes were predominantly T lymphocytes (CD+3). There were no significant difference in the counts of T lymphocytes (CD+3) or B lymphocytes (CD+20) among groups (P>0.05). But there were significant differences between the counts of T lymphocytes (CD+3) and that of B lymphocytes (CD+20,P<0.01).
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CONCLUSION The therapeutic effect is better in patients receiving antibody-drug conjugate (C50-MMC or inderal+C50-MMC) than in those only receiving mitomycin C. The treatment with MMC and C50-MMC can cause apoptosis of the CRC cells. The infiltrating lymphocytes are predominantly T lymphocytes after treatment of MMC, C50-MMC, and inderal and C50-MMC.
0 引言
大肠癌术后超过半数的患者复发或转移. 目前常用的化疗药物对肿瘤的杀伤作用缺乏特异性，导致明显的副作用. 因此寻找特异性高的药物和特异性定位于肿瘤的方法对提高肿瘤的综合治疗效果有重要意义. 我们将抗CEA单克隆抗体(C50)与丝裂霉素(MMC)交连后(C50-MMC)iv进行结肠癌治疗，并与iv MMC化疗进行了比较，现报道如下.
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1 材料和方法
1.1 对象 大肠癌患者20例，均为腺癌，其中男13例，女7例. 年龄28岁～75岁，平均52岁. 随机分成3组：MMC组7例，男6例，女1例，年龄30岁～75岁，平均53岁；C50-MMC组7例，男4例，女3例，年龄37岁～68岁，平均54岁；心得安+C50-MMC组6例，男3例，女3例，年龄28岁～65岁，平均49岁；所有患者在注射药物后3d行手术切取病理标本.
1.2 方法
1.2.1 C50-MMC的制备 首先取葡聚糖1.0g，加入200mL蒸馏水后加高碘酸钠0.33g，室温下避光反应过夜，使葡聚糖充分氧化为多醛基葡聚糖(PAD)，蒸馏水充分透析后冻干，置于-20℃低温下保存备用；注射前2d取PAD 10mg加入0.15mol/L (pH 7.2)的磷酸缓冲液(PBS)2mL中，加MMC(日本Kyowa公司)8mg，室温下反应24h后，再加入已纯化的C50(无锡第二制药厂)10mg，4℃环境下搅拌反应用24h；注射前在上述反应混合物中加硼氢化钠0.25mg在4℃下还原2h，离心后经Sephadex G-150层析柱过柱，收集首峰即可. 交联物制备过程中应注意严格无菌操作，对制备后的交联物在经细菌培养、热原试验及急性动物毒性试验证实无菌，无热原，无毒后方可使用.
, 百拇医药
1.2.2 方法 化疗组给MMC 8mg，3d后行手术并取病理标本；C50-MMC组使用C50-MMC(含10mg C50， 8mg MMC)加生理盐水250mL中iv，iv前应进行C50皮试，并iv地塞米松5mg；心得安+C50-MMC组首先给予10mg心得安一次顿服，之后iv C50-MMC交联物，其方法与C50-MMC组相同.
1.2.3 病理检测 对所取病理组织行HE染色、AgNOR染色及SP免疫组化染色. AgNOR染色方法按Ploton法[1]，AgNOR计数按Croker法[2]，而肿瘤浸润淋巴细胞测定及计数方法根据文献[3]提供的方法进行. 常规HE染色观察治疗后癌细胞变性、溶解、坏死的程度和数量参照大星章一的标准，将癌细胞在光镜下的形态变化分为3级. 1级：癌细胞变化不明显或有轻度细胞肿胀，散在性癌细胞核固缩、碎裂，范围小于切片的1/4；2级：癌细胞明显肿胀，空泡变性，出现较多核固缩、碎裂，范围占切片的1/4～1/2或许多癌腔内有较多的坏死物，可存在小片状坏死，范围在切片的1/4内；3级：大部分癌细胞高度变性，多数细胞出现核固缩、碎裂，有大片凝固坏死和多处小片状坏死，范围超过切片的1/4，或癌巢全部崩解和消失，仅残存小量癌细胞甚至无癌细胞存在. 一般将其中的1级定为无效，2级和3级定为有效.
, 百拇医药
统计学处理 各组别病理退变程度的差异采用确切概率法检测；肿瘤淋巴细胞浸润的差异采用t检验；而AgNOR计数的差异统计采用t检验.
2 结果
2.1 病理退变程度 有效率化疗组71.4%，C50-MMC组85.7%，心得安+C50-MMC组83.3%，各组间无显著差异(P>0.05，表1).
表1 C50-MMC治疗大肠癌病理退变程度 (n) 组别
n
病理退变程度
有效(2级+3级)
1级
2级
, 百拇医药
3级
n
有效率(%)
化疗组
7
2
5
5
71.4
C50-MMC组
7
1
4
2
, 百拇医药
6
85.7
心得安+C50-MMC组
6
1
3
2
5
83.3
合计
20
4
12
, http://www.100md.com 4
16
80.0
2.2 AgNOR核计数 C50-MMC与MMC组间差异有显著性(t'=2.70，P<0.05)；心得安+C50-MMC组与MMC组间差异有显著性(t'=3.20，P<0.05)；两导向治疗组间差异无显著性(P>0.05，表2).表2 C50-MMC治疗大肠癌后细胞核内AgNORs分布 (
±s) 组别
n
AgNOR数/核
肿瘤组织
肠道正常组织
, 百拇医药
化疗组
7
3.12±0.19
1.87±0.26
C50-MMC组
7
2.28±0.80
1.83±0.43
心得安+C50-MMC组
6
2.29±0.66
1.76±0.21
, 百拇医药
2.3 肿瘤浸润性淋巴细胞数 各组中T细胞CD3与B细胞CD20之间有显著性差异(P<0.01)；而各组之间CD3或CD20经两两比较均无显著性差异(P>0.05)，而浸润淋巴细胞以T细胞CD3为主(表3).表3 C50-MMC治疗大肠癌肿瘤浸润淋巴细胞分布 (±s,%) 组别
n
CD+3
CD+20
化疗组
7
, 百拇医药
62.5±8.2
10.7±7.3
C50-MMC组
7
78.5±9.9
14.3 ±10.0
心得安+C50-MMC组
6
76.6±9.0
13.0±9.2
bP<0.01, vs CD+20组.
, 百拇医药
3 讨论
抗CEA单克隆抗体具有特异性定位大肠肿瘤的能力，我们采用的抗CEA单克隆抗体C50属于IgG. 与大肠癌组织进行免疫组织化学染色，其反应阳性率达90%以上[4]，而在临床放射免疫显象中也发现C50有特异的定位能力[5]，甚至对于肝脏转移灶也有比较好的特异性[6].
对于化疗药物与单抗交联进行导向治疗，Takahashi et al[7]在实验的基础上对77例结肠癌患者进行了导向治疗，认为使用MMC与单抗交联后，能保持抗体的活性，而交联物的细胞毒性比单独使用MMC强. 在本研究中，C50-MMC组，心得安+C50-MMC组及化疗组3组病例在给药3d后行手术切取病理标本进行了显微镜检测，发现各组病例中癌细胞退变程度分别为85.7%(6/7)，83.3%(5/6)以及71.4%(5/7)，虽然它们之间的差异无显著性(P>0.05)，但前两组中各有两例其癌细胞退变程度达3级，而单纯静脉注射MMC组所有出现癌细胞退变的病例均为2级，可以认为单克隆抗体与MMC交联后将有助于MMC向肿瘤部位聚集且产生相对强的细胞毒作用.
, 百拇医药
AgNOR数目的多少反映了细胞基因转录活性的强弱[8]. 本研究中，采用C50-MMC交联物的两组肿瘤组织中AgNOR/核均数比单纯注射MMC组的肿瘤组织中AgNOR/核均数低，经统计学处理发现其差异有显著性(P<0.05)，而正常肠道组织中3组的AgNOR/核均数之间的差异无显著性，说明注射含等量MMC的C50-MMC交联物比单纯注射MMC能更有效的抑制肿瘤细胞的基因转录，从而减少肿瘤细胞的过度分裂，对于正常肠道组织细胞却没有明显的影响. 而这种效果主要可能由于①MMC是一种小分子物质，与C50交联后分子明显增大，在动力学上其血液清除减慢，对肿瘤的作用时间延长；②C50本身对肿瘤组织的细胞毒性作用；③C50将更多的抗肿瘤药物带到了肿瘤组织中，使肿瘤组织局部化疗药物的浓度增高. 这些尚有待进一步研究.
研究肿瘤淋巴细胞浸润情况可以看到，大肠癌组织内浸润的淋巴细胞主要为CD+3，也就是说大肠癌患者的机体免疫反应主要是以T淋巴细胞为主的细胞免疫. C50导向化疗时，单抗除了作为载体外，其本身将激活补体以及激活机体细胞及体液免疫作用. 本研究中，导向化疗组CD+3及CD+20的数目虽然均较化疗组多，但它们之间的差异无统计学意义，可能是因为①注射交联物前滴注的地塞米松对机体免疫的抑制；②本组病例数量不够，未能正确反映单克隆抗体的免疫激活作用.
, 百拇医药
作者简介：卢献平，男，1963-01-14生，湖南省桃江县人，汉族. 1987年中山医科大学毕业，临床核医学讲师，主要从事核医学诊断及治疗，肿瘤的诊断及治疗研究，发表学术论文21篇.
通讯作者 卢献平，510120，广东省广州市沿江西路107号，中山医科大学孙逸仙纪念医院核医学科.
Correspondence to:LU Xian-Ping, Department of Nuclear Medicine, Memorial Hospital, Sun Yat-Sen University of Medical Sciences, 107 Yanjiang Xilu, Guangzhou 510120, Guangdong Province, China
Tel. +86.20.81882012 Ext. 3515
, 百拇医药
作者单位：
4 参考文献
[1] Ploton D, Menager M, Jeannesson P, Himber G, Pigeon J, Adnet JJ. Improvement the staining proteins of the nucleolar organizer region at the optical level. Histochem J, 1986;18:5-14
[2] Croker J, Boldy D, Egan M. How should we count AgNORs J Pathol, 1989;158:185-188
[3] 杨廷彬，尹学念，主编. 实用免疫学. 第1版. 长春：长春出版社，1994：568-569
, 百拇医药
[4] 卢献平，吕斌，蒋宁一，颜登国. 影响99mTc-抗CEA单克隆抗体肠癌放免显像的因素研究. 核技术，1996；19：281-284
[5] 卢献平，吕斌，蒋宁一，颜登国，陈声乐，邵季书 et al. 99mTc-C50肠癌放免显像的初步临床应用. 中华核医学杂志，1995；15：208-210
[6] 卢献平，吕斌，蒋宁一. 99mTc-抗CEA单抗肠癌肝转移的诊断价值. 现代临床医学生物工程学杂志，1995；1：30-32
[7] Takahashi T, Yamaguchi T, Kitamura K, Noguchi A, Honda M, Otsuji E. Follow-up study of patients treated with monoclonal antibody-drug conjugate: report of 77 cases with colorectal cancer. Jpn J Cancer Res, 1993;84:976-981
[8] NORs-A new method for the pathologist. Lancet, 1987;1:1413-1414
收稿日期 1998-06-10, 百拇医药
单位：卢献平 吕 斌 蒋宁一 中山医科大学孙逸仙纪念医院1核医学科； 李宝金 陈声乐 外科 广东省广州市 510120
关键词：结肠肿瘤/治疗；直肠肿瘤/治疗；抗体，单克隆；丝裂霉素C/治疗应用
世界华人消化杂志990417 摘 要
目的 研究抗CEA单克隆抗体丝裂霉素治疗大肠癌的病理学改变，以提高大肠癌综合治疗的疗效.
方法 大肠腺癌患者20例，随机分成3组，分别进行化疗(iv 丝裂霉素8mg),iv抗CEA单克隆抗体-丝裂霉素(含丝裂霉素8mg)导向治疗以及顿服心得安10mg+iv抗CEA单克隆抗体-丝裂霉素(含丝裂霉素8mg)导向治疗. 其后3d对所有患者均行手术切取标本进行病理组织学观察，AgNOR检测及肿瘤浸润淋巴细胞计数.
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结果 ①病理退变程度：化疗组有效率为71.4%，抗CEA单克隆抗体-丝裂霉素组有效率为85.7%，顿服心得安+抗CEA单克隆抗体-丝裂霉素组为83.3%，3组各组间无显著性差异(P>0.05). ②AgNOR检测：抗CEA单克隆抗体-丝裂霉素组与化疗组之间癌细胞AgNOR/核均数其差异有显著性(t'=2.70，P<0.05)；顿服心得安+抗CEA单克隆抗体-丝裂霉素组与化疗组比较，癌细胞AgNOR/核均数其差异也有显著性(t'=3.20，P<0.05)；两导向治疗组之间癌细胞AgNOR/核均数其差异无显著性(P>0.05). ③肿瘤浸润性淋巴细胞计数：各组中T细胞CD+3与B细胞CD+20之间有显著性差异(P<0.01)；而各组之间CD+3或CD+20经两两比较均无显著性差异(P>0.05)，而浸润淋巴细胞以T细胞CD+3为主.
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结论 通过癌细胞AgNOR/核均数检测发现导向化疗与化疗比较，治疗效果较明显. 导向化疗与化疗均能导致肿瘤细胞退行性变，但两者的区别不明显. 肿瘤化疗后浸润性淋巴细胞主要为T细胞.
中国图书资料分类号 R735.34
Anti-CEA monoclonal antibody targeting therapy for colorectal carcinoma
LU Xian-Ping1, LI Bao-Jin2, CHEN Sheng-Le2, LU Bin1 and JIANG Ning-Yi1
1Department of Nuclear Medicine and 2Department of Surgery, Memorial Hospital, Sun Yat-Sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510120, Guangdong Province, China
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Subject headings colonic neoplasms/therapy; rectal neoplasms/therapy; antibody, monoclonal; mitomycin C/therapeutic use
Abstract
AIM To study the pathohistological changes of colorectal carcinoma (CRC) after targeting therapy so as to improve the therapeutic effect for this tumor.
METHODS Twenty patients receiving 3-day preoperative chemotherapy were divided into three groups: group A (7 patients receiving mitomycin C 8mg), group B (7 patients receiving monoclonal antibody C50 2mg and mitomycin C 8mg) and group C (6 patients receiving inderal 10mg, C50 2mg and mitomycin C 8mg). Effect of the preoperative chemotherapy was assessed by histologic findings of the resected specimens, by silver-staining proteins score of the nucleolar organizer region (AgNOR) and by infiltrating lymphocytes' subsets and counts with streptavidin-peroxidase stain (SP).
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RESULTS Apoptosis of CRC cells were found in five patients (71.4%) in group A, six patients (85.7%) in group B and five patients in group C, without significant difference among the groups (P>0.05). AgNOR score of the resected tumor was lower in group B than in group A with significant difference between the two groups (t'=2.70, P<0.05). There was no significant difference between groups B and C (P>0.05). The infiltrating lymphocytes were predominantly T lymphocytes (CD+3). There were no significant difference in the counts of T lymphocytes (CD+3) or B lymphocytes (CD+20) among groups (P>0.05). But there were significant differences between the counts of T lymphocytes (CD+3) and that of B lymphocytes (CD+20,P<0.01).
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CONCLUSION The therapeutic effect is better in patients receiving antibody-drug conjugate (C50-MMC or inderal+C50-MMC) than in those only receiving mitomycin C. The treatment with MMC and C50-MMC can cause apoptosis of the CRC cells. The infiltrating lymphocytes are predominantly T lymphocytes after treatment of MMC, C50-MMC, and inderal and C50-MMC.
0 引言
大肠癌术后超过半数的患者复发或转移. 目前常用的化疗药物对肿瘤的杀伤作用缺乏特异性，导致明显的副作用. 因此寻找特异性高的药物和特异性定位于肿瘤的方法对提高肿瘤的综合治疗效果有重要意义. 我们将抗CEA单克隆抗体(C50)与丝裂霉素(MMC)交连后(C50-MMC)iv进行结肠癌治疗，并与iv MMC化疗进行了比较，现报道如下.
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1 材料和方法
1.1 对象 大肠癌患者20例，均为腺癌，其中男13例，女7例. 年龄28岁～75岁，平均52岁. 随机分成3组：MMC组7例，男6例，女1例，年龄30岁～75岁，平均53岁；C50-MMC组7例，男4例，女3例，年龄37岁～68岁，平均54岁；心得安+C50-MMC组6例，男3例，女3例，年龄28岁～65岁，平均49岁；所有患者在注射药物后3d行手术切取病理标本.
1.2 方法
1.2.1 C50-MMC的制备 首先取葡聚糖1.0g，加入200mL蒸馏水后加高碘酸钠0.33g，室温下避光反应过夜，使葡聚糖充分氧化为多醛基葡聚糖(PAD)，蒸馏水充分透析后冻干，置于-20℃低温下保存备用；注射前2d取PAD 10mg加入0.15mol/L (pH 7.2)的磷酸缓冲液(PBS)2mL中，加MMC(日本Kyowa公司)8mg，室温下反应24h后，再加入已纯化的C50(无锡第二制药厂)10mg，4℃环境下搅拌反应用24h；注射前在上述反应混合物中加硼氢化钠0.25mg在4℃下还原2h，离心后经Sephadex G-150层析柱过柱，收集首峰即可. 交联物制备过程中应注意严格无菌操作，对制备后的交联物在经细菌培养、热原试验及急性动物毒性试验证实无菌，无热原，无毒后方可使用.
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1.2.2 方法 化疗组给MMC 8mg，3d后行手术并取病理标本；C50-MMC组使用C50-MMC(含10mg C50， 8mg MMC)加生理盐水250mL中iv，iv前应进行C50皮试，并iv地塞米松5mg；心得安+C50-MMC组首先给予10mg心得安一次顿服，之后iv C50-MMC交联物，其方法与C50-MMC组相同.
1.2.3 病理检测 对所取病理组织行HE染色、AgNOR染色及SP免疫组化染色. AgNOR染色方法按Ploton法[1]，AgNOR计数按Croker法[2]，而肿瘤浸润淋巴细胞测定及计数方法根据文献[3]提供的方法进行. 常规HE染色观察治疗后癌细胞变性、溶解、坏死的程度和数量参照大星章一的标准，将癌细胞在光镜下的形态变化分为3级. 1级：癌细胞变化不明显或有轻度细胞肿胀，散在性癌细胞核固缩、碎裂，范围小于切片的1/4；2级：癌细胞明显肿胀，空泡变性，出现较多核固缩、碎裂，范围占切片的1/4～1/2或许多癌腔内有较多的坏死物，可存在小片状坏死，范围在切片的1/4内；3级：大部分癌细胞高度变性，多数细胞出现核固缩、碎裂，有大片凝固坏死和多处小片状坏死，范围超过切片的1/4，或癌巢全部崩解和消失，仅残存小量癌细胞甚至无癌细胞存在. 一般将其中的1级定为无效，2级和3级定为有效.
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统计学处理 各组别病理退变程度的差异采用确切概率法检测；肿瘤淋巴细胞浸润的差异采用t检验；而AgNOR计数的差异统计采用t检验.
2 结果
2.1 病理退变程度 有效率化疗组71.4%，C50-MMC组85.7%，心得安+C50-MMC组83.3%，各组间无显著差异(P>0.05，表1).
表1 C50-MMC治疗大肠癌病理退变程度 (n) 组别
n
病理退变程度
有效(2级+3级)
1级
2级
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3级
n
有效率(%)
化疗组
7
2
5
5
71.4
C50-MMC组
7
1
4
2
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6
85.7
心得安+C50-MMC组
6
1
3
2
5
83.3
合计
20
4
12
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16
80.0
2.2 AgNOR核计数 C50-MMC与MMC组间差异有显著性(t'=2.70，P<0.05)；心得安+C50-MMC组与MMC组间差异有显著性(t'=3.20，P<0.05)；两导向治疗组间差异无显著性(P>0.05，表2).表2 C50-MMC治疗大肠癌后细胞核内AgNORs分布 (
±s) 组别n
AgNOR数/核
肿瘤组织
肠道正常组织
, 百拇医药
化疗组
7
3.12±0.19
1.87±0.26
C50-MMC组
7
2.28±0.80
1.83±0.43
心得安+C50-MMC组
6
2.29±0.66
1.76±0.21
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2.3 肿瘤浸润性淋巴细胞数 各组中T细胞CD3与B细胞CD20之间有显著性差异(P<0.01)；而各组之间CD3或CD20经两两比较均无显著性差异(P>0.05)，而浸润淋巴细胞以T细胞CD3为主(表3).表3 C50-MMC治疗大肠癌肿瘤浸润淋巴细胞分布 (
±s,%) 组别n
CD+3
CD+20
化疗组
7
, 百拇医药
62.5±8.2
10.7±7.3
C50-MMC组
7
78.5±9.9
14.3 ±10.0
心得安+C50-MMC组
6
76.6±9.0
13.0±9.2
bP<0.01, vs CD+20组.
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3 讨论
抗CEA单克隆抗体具有特异性定位大肠肿瘤的能力，我们采用的抗CEA单克隆抗体C50属于IgG. 与大肠癌组织进行免疫组织化学染色，其反应阳性率达90%以上[4]，而在临床放射免疫显象中也发现C50有特异的定位能力[5]，甚至对于肝脏转移灶也有比较好的特异性[6].
对于化疗药物与单抗交联进行导向治疗，Takahashi et al[7]在实验的基础上对77例结肠癌患者进行了导向治疗，认为使用MMC与单抗交联后，能保持抗体的活性，而交联物的细胞毒性比单独使用MMC强. 在本研究中，C50-MMC组，心得安+C50-MMC组及化疗组3组病例在给药3d后行手术切取病理标本进行了显微镜检测，发现各组病例中癌细胞退变程度分别为85.7%(6/7)，83.3%(5/6)以及71.4%(5/7)，虽然它们之间的差异无显著性(P>0.05)，但前两组中各有两例其癌细胞退变程度达3级，而单纯静脉注射MMC组所有出现癌细胞退变的病例均为2级，可以认为单克隆抗体与MMC交联后将有助于MMC向肿瘤部位聚集且产生相对强的细胞毒作用.
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AgNOR数目的多少反映了细胞基因转录活性的强弱[8]. 本研究中，采用C50-MMC交联物的两组肿瘤组织中AgNOR/核均数比单纯注射MMC组的肿瘤组织中AgNOR/核均数低，经统计学处理发现其差异有显著性(P<0.05)，而正常肠道组织中3组的AgNOR/核均数之间的差异无显著性，说明注射含等量MMC的C50-MMC交联物比单纯注射MMC能更有效的抑制肿瘤细胞的基因转录，从而减少肿瘤细胞的过度分裂，对于正常肠道组织细胞却没有明显的影响. 而这种效果主要可能由于①MMC是一种小分子物质，与C50交联后分子明显增大，在动力学上其血液清除减慢，对肿瘤的作用时间延长；②C50本身对肿瘤组织的细胞毒性作用；③C50将更多的抗肿瘤药物带到了肿瘤组织中，使肿瘤组织局部化疗药物的浓度增高. 这些尚有待进一步研究.
研究肿瘤淋巴细胞浸润情况可以看到，大肠癌组织内浸润的淋巴细胞主要为CD+3，也就是说大肠癌患者的机体免疫反应主要是以T淋巴细胞为主的细胞免疫. C50导向化疗时，单抗除了作为载体外，其本身将激活补体以及激活机体细胞及体液免疫作用. 本研究中，导向化疗组CD+3及CD+20的数目虽然均较化疗组多，但它们之间的差异无统计学意义，可能是因为①注射交联物前滴注的地塞米松对机体免疫的抑制；②本组病例数量不够，未能正确反映单克隆抗体的免疫激活作用.
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作者简介：卢献平，男，1963-01-14生，湖南省桃江县人，汉族. 1987年中山医科大学毕业，临床核医学讲师，主要从事核医学诊断及治疗，肿瘤的诊断及治疗研究，发表学术论文21篇.
通讯作者 卢献平，510120，广东省广州市沿江西路107号，中山医科大学孙逸仙纪念医院核医学科.
Correspondence to:LU Xian-Ping, Department of Nuclear Medicine, Memorial Hospital, Sun Yat-Sen University of Medical Sciences, 107 Yanjiang Xilu, Guangzhou 510120, Guangdong Province, China
Tel. +86.20.81882012 Ext. 3515
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作者单位：
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收稿日期 1998-06-10, 百拇医药