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编号:10237796
1998年下半年广州市12间医院葡萄球菌耐药性调查*
http://www.100md.com 《广州医学院学报》 1999年第4期
     作者:吴爱武 李红玉 熊剑辉 陈惠玲 杨银梅

    单位:吴爱武(广州医学院检验系);李红玉(中山医科大学第二附属医院);熊剑辉,陈惠玲,杨银梅(广州市第一人民医院)

    关键词:葡萄球菌;耐药性;微生物敏感性试验

    广州医学院学报990408 提要 目的:了解广州地区临床分离葡萄球菌的耐药水平。方法:对1998年下半年自广州市12间大医院临床分离的301株葡萄球菌进行了临床资料的分析及纸片扩散法微生物敏感性实验。结果:临床分离的葡萄球菌在病区、标本分布方面以外科和痰标本多见;苯唑西林耐药葡萄球菌(MRS)的分离率是47.8%(144/301);耐苯唑西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)占42.4%(72/170),耐苯唑西林的凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)占55.0%(72/131);耐苯唑西林的葡萄球菌(MRSA,MRCNS)表现为多重耐药性,其耐药率明显高于苯唑西林敏感的葡萄球菌;未发现对万古霉素耐药的葡萄球菌。
, 百拇医药
    中图分类号 R969.3

    An Investigation into the Characteristics of Drug-resistance of Staphylococcus in 12 Hospitals in Guangzhou District during the Latter Half of 1998

    Wu Aiwu

    (Department of Clinical Laboratory,Guangzhou Medical College,Guangzhou 510182)

    Li Hongyu

    (the Second Affiliated Hospital,Sun Yat Sen University of Medical Sciences)
, 百拇医药
    Xiong Jianhui

    (the Affiliated First People′s Hospital)

    Objective:To acquire the information of drug-resistance of clinical Staphylococcus isloates in Guangzhou district. Method:301 strains of Staphylococcus isolated clinically in 12 hospitals in Guangzhou district were tested for their drug-resistance with disk diffusion test,and the related clinical data wete also analysed. Results:Clinically isolated Staphylococci were distributed more often in surgery department than in other department,more often in sputum than in other kinds of specimens. The percentage of methicillin-resistant Staphylococcus (MRS),of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA),and of methicillin-resistant coagulase negative Staphylococcus (MRCNSA),were 47.8%(144/301),42.4%(72/170),and 55.0%(72/131),respectively. MRSA and MRCNS showed multiple resistance to antibiotics,the drug-resistant rate of which was significantly higher than that of methicillin-sensitive Staphylococcus (MSS). No strain was found to be resistant to Vancomycin.
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    Key words Staphylococcus;Drug resistance;Microbial sensitivity tests

    为了解广州地区临床常见病原菌耐药的基础水平,1998年下半年,广州市12间大医院(三甲医院)在市科委领导资助下,由组长单位广州市第一人民医院领头采用统一方案,开展对常见病原菌的耐药性调查工作,现将葡萄球菌的调查结果报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 菌株来源 1998年下半年广州市12间医院临床分离的葡萄球菌,按时间顺序收集,常规方法鉴定后按统一方法保存并送组长单位集中进行药物敏感性试验,集中后的菌株都再进行复检并剔除不合格的方进入药敏试验。总受试菌株301株,其中凝固酶阴性的葡萄球菌(CNS)131株,金黄色葡萄球菌(SA)170株。各医院菌株所占比例如表1所示。

    表1 301株葡萄球菌在12间医院的分布 医 院
, 百拇医药
    株 数

    %

    广医一院

    2.2

    7.3

    广医二院

    31

    10.3

    市红会医院

    21

    7.0

    华侨医院

    25
, 百拇医药
    8.3

    陆军总院

    16

    5.3

    南方医院

    27

    9.0

    省人民医院

    27

    9.0

    市一医院

    45

    15.0
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    市二医院

    13

    4.3

    中山医附一院

    20

    6.6

    中山医附二院

    23

    7.6

    珠江医院

    31

    10.3

    合计
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    301

    100.0

    1.2 抗生素敏感性试验 根据美国1997年NCCLS(National Committee for Clinical Laboratory Standard,NCCLS)选药规则、判读标准和质控要求进行葡萄球菌的药敏与判定[1]

    1.2.1 选用的抗生素包括红霉素(Erythromycin)、青霉素(Penicill G)万古霉素(Vancomycin)、环丙氟哌酸(Ciprofloxacin)、四环素(Tetracycline)、苯唑青霉素(Oxacillin)、氯林可霉素(Clindamycin)、庆大霉素(Gentmycin)共8种。

    1.2.2 方法 采用纸片扩散法,其中苯唑青霉素、万古霉素同时采用E-test方法,药敏纸片和药敏用的Mueller-Hinton琼脂均为英国OXOID公司生产。
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    1.2.3 判读 纸片扩散法要求35℃培养16~18h,苯唑青霉素24h方可判读结果。E-test方法用2个90mm平板,其中1个为MH琼脂加2%NaCl(高盐平板)。在高盐平板上:苯唑青霉素35℃、24h,CNS35℃、48h判读;在MH平板上:万古霉素35℃、24h判读。8种抗生素抑菌圈直径判定标准见表2。表2 8种抗生素对葡萄球菌的判定标准 抗 生 素

    英 文(缩写)

    纸片含量

    抑菌环直径,最近mm数 相应MIC(μg/ml)

    R

    I

    S

    R
, 百拇医药
    S

    青 霉 素

    Penicillin(P)

    10u

    ≤28

    -

    ≥29

    苯唑青霉素

    Oxacillin(OXA)

    1μg

    ≤10

    11~12

    ≥13
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    ≥4

    ≤2

    红 霉 素

    Erythromycin(E)

    15μg

    ≤13

    14~22

    ≥23

    庆大霉素

    Gentmycin(GM)

    10μg

    ≤12

    13~14
, 百拇医药
    ≥15

    氯林可霉素

    Clindamycin(DA)

    2μg

    ≤14

    15~20

    ≥21

    环丙沙星

    Ciprofloxacin(CIP)

    5μg

    ≤15

    16~20

, 百拇医药     ≥21

    万古霉素

    Vancomycin(VA)

    30μg

    -

    -

    ≥15

    ≥32

    ≤4

    四 环 素

    Tetracycline(TE)

    30μg

    ≤14
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    15~18

    ≥19

    1.3 数据分析 WHONET 4.0软件进行分析。

    1.4 质量保证 采用进金黄色葡萄球菌ATCC 25923作为质控菌株,每批实验至少进行两份质控,所选用的菌株严格按NCCLS标准进行,实验前,对本批号纸片都进行连续30天的质控,结果所用抗生素纸片均符合质量标准,未失控。2 结果

    2.1 未发现万古霉素耐药的葡萄球菌(VRS),纸片扩散法,万古霉素对葡萄球菌的抑菌圈直径平均为19mm;E-test法,万古霉素对葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)平均为1.84μg/ml,对苯唑西林耐药的葡萄球菌(MRS)的MIC平均为2.17μg/ml,对苯唑西林敏感的葡萄球菌(MSS)的MIC平均为1.56μg/ml,前者明显高于后者。

, 百拇医药     2.2 301株葡萄球菌的基本临床资料如表3所示。

    表3 301株葡萄球菌在临床标本及病区的分布

    标 本

    病 区

    痰

    血

    脓

    中段尿

    伤口分泌物

    分泌液

    男性生殖系统

    其它

, 百拇医药     合计

    外科

    内科

    儿科

    呼吸科

    ICU

    妇产科

    其它

    合计

    株数

    81

    59

    33

    25
, 百拇医药
    23

    17

    17

    46

    301

    87

    61

    33

    29

    22

    14

    55

    301

    %
, 百拇医药
    26.9

    19.7

    10.9

    8.2

    7.6

    5.6

    5.6

    15.5

    100.0

    28.9

    20.3

    11.0

    9.6
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    7.3

    4.6

    18.3

    100.0

    2.3 苯唑西林耐药的葡萄球菌(MRS)分离情况 共检出MRS 144株,占47.8%(144/301);金黄色葡萄球菌170株,其中耐苯唑西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)72株,占42.4%(72/170);凝固酶阴性的葡萄球菌131株,其中耐苯唑西林的凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)72株,占55.0%(72/131)。MRS在标本及病区的分布如表4所示。

    2.4 耐药率结果 根据葡萄球菌对苯唑西林耐药与否,将葡萄球菌分成MRSA(耐苯唑西林的金黄色葡萄球菌)、MSSA(苯唑西林敏感的葡萄球菌)、MRCNS(耐苯唑西林的凝固酶阴性葡萄球菌)、MSCNS(苯唑西林敏感的凝固酶阴性葡萄球菌),它们对8种抗生素的耐药率如表5所示。表4 144株MRS在临床标本及病区中的分布
, 百拇医药
    标 本

    病 区

    痰

    中段尿

    脓

    血液

    其它

    合计

    内科

    外科

    ICU

    烧伤

    儿科

    老年病房
, 百拇医药
    其它

    合计

    株数

    49

    24

    21

    18

    32

    144

    66

    28

    20

    8

    5
, 百拇医药
    3

    14

    144

    %

    34.0

    16.7

    14.6

    12.5

    22.2

    100.0

    45.8

    19.4

    13.9
, 百拇医药
    5.6

    3.5

    2.1

    9.7

    100.0

    表5 301株葡萄球菌对8种抗生素的耐药率 抗生素

    MRCNS(72株,苯唑西林中介3株)

    MSSA(95株)

    MRCNS(72株,苯唑西林中介12株)

    MSSA(47株)

    %R

    %I
, 百拇医药
    %S

    %R

    %I

    %S

    %R

    %I

    %S

    %R

    %I

    %S

    红霉素

    97.3

    1.3

    1.3
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    43.2

    2.1

    54.7

    79.8

    1.2

    19.0

    46.8

    0.0

    53.2

    青霉素G

    100.0

    0.0

    0.0
, 百拇医药
    92.6

    0.0

    7.4

    98.8

    0.0

    1.2

    85.1

    0.0

    14.9

    万古霉素

    0.0

    0.0

    100.0
, 百拇医药
    0.0

    0.0

    100.0

    0.0

    0.0

    100.0

    0.0

    0.0

    100.0

    环丙氟派酸

    96.0

    1.3

    2.7
, 百拇医药
    4.3

    10.6

    85.1

    64.3

    11.9

    23.8

    27.7

    4.3

    68.1

    四环素

    82.7

    0.0

    17.3
, 百拇医药
    46.3

    0.0

    53.7

    57.1

    0.0

    42.9

    48.9

    0.0

    51.1

    苯唑西林

    96.0

    4.0

    0.0
, 百拇医药
    0.0

    0.0

    100.0

    85.7

    14.3

    0.0

    0.0

    0.0

    100.0

    氯林可霉素

    77.3

    0.0

    22.7
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    18.1

    3.2

    78.7

    31.0

    1.2

    67.9

    6.4

    4.3

    89.4

    庆大霉素

    93.3

    0.0

    6.7
, 百拇医药
    9.6

    0.0

    90.4

    72.8

    7.4

    19.8

    25.5

    4.3

    70.2

    %R:耐药率;%I:中介率;%S:敏感率

    从表5可见,耐苯唑西林葡萄球菌(MRSA和MRCNS,含15株对苯唑西林中介的葡萄球菌)的耐药率明显高于苯唑西林敏感的葡萄球菌(MSSA和MSCNS),且表现为多重耐药性。3 讨论
, 百拇医药
    近年来,由于各种导管的植入和人造组织的使用,葡萄球菌已成为医院感染的重要病原菌,葡萄球菌中有强毒力菌(如金黄色葡萄球菌)和弱毒力菌(如凝固酶阴性的葡萄球菌)。[2]广州地区12间医院临床葡萄球菌分离株主要标本分布为痰、血液、脓及中段尿,痰标本易受上呼吸道污染,因此作为病原菌及定植菌的判定时有一定的困难,在今后继续监测中对待该类标本应当十分谨慎;在病区分布方面,外科来源较多(占28.9%),可能与外科是医院内感染高发区有关,手术后切口护理不当,导管的留置等等都易造成葡萄球菌的继发感染。

    MRS出现于60年代初,此后,检出率在世界范围内逐渐上升。在美国,到1992年止已有90%以上SA耐青霉素及其它β-内酰胺类抗生素[3];北京友谊医院1988~1991年,MRSA的分离率分别为12%、22%、31%、36%[4]。细菌细胞壁上存在的青霉素结合蛋白(PBP)在细菌细胞壁的合成过程中有很重要的作用,β-内酰胺类抗生素可与细菌细胞壁上的PBP结合,使细菌细胞壁的合成受阻,从而可以杀死细菌,MRS的耐β-内酰胺类药物的机制在于该类菌株能产生新型的青霉素结合蛋白(PBP2a),PBP2a与β-内酰胺类药物亲和力很低,因而很少或不被β-内酰胺类药物结合,仍能起合成细菌细胞壁的作用[4]。根据NCCLS标准,苯唑西林对葡萄球菌的药敏测定非常关键,为所有β-内酰胺类抗生素的指示药,凡是耐苯唑西林的葡萄球菌,对所有的β-内酰胺类抗生素都耐药[1]
, 百拇医药
    从实验结果看,本次调查MRSA和MRCNS的检出率分别是42.4%(72/170)和55.0%(72/131),总的MRS检出率为47.8%(144/301),应予以关注。144株MRS在标本中主要来源于痰,其次为尿,可能与医院感染好发生于这些部位有关;在病区分布上,MRS集中于内科(占45.8%),内科病人尤其是老年病房、重症监护室、血液病病房患者大多伴有严重的呼吸道疾病、肿瘤和血液病等基础疾病,抗生素、激素、免疫抑制剂的使用,以及放疗、化疗、骨髓移植等各种治疗手段的采用,易发生微生物包括MRS引起的感染。从对8种抗生素的耐药性看,MRSA和MRCNS耐药性明显高于MSSA和MSCNS,表现为多种耐药性,它们除对万古霉素完全敏感外,对其他几种抗生素均表现为不同程度的耐药(其中,对MRSA敏感性最高的是氯林可霉素,敏感率仅为22.7%,对MRCNS敏感性最高的亦为氯林可霉素,但其敏感率较高为67.9%)。因此,今后对MRS所致感染(尤其是血液感染)的经验治疗应首选万古霉素,同时还应考虑联合用药(如氯林可霉素的选用)。无论在临床还是在实验室,都应将MRSA和MRCNS与MSSA和MSCNS严格区分,以有利于疾病的治疗。
, 百拇医药
    在这次调查中,广州地区尚未发现万古霉素耐药的葡萄球菌菌株,但葡萄球菌的广泛多重耐药结果及高检出率提醒我们,要合理使用抗生素以减缓其对细菌耐药的压力,同时要控制耐药性细菌的广泛传播。

    * 广州市科委科研重点项目(1998-z-01-002)

    参考文献:

    [1]National Committee for Clinical Laboratory Standard.Performance Standards for)Antimicrobiol Susceptibility Testing:Eighth Informational Supplement.NCCLS document M-100-S8, NCCLS,Pennsyvania,USA,1998

    [2]俞树荣.微生物学和微生物学检验.第二版.北京:人民卫生出版社,1997:144~147

    [3]Panlilo AL,Culver DH,Gaynes RP,et al.Methicillin-resistant Staphylococcus aureus in U.S.hospitals 1975~1991.Infection Control and Hospital Epidemiology, 1992;13:582~85

    [4]马纪平,苏建云,靳景图.耐甲氧西林葡萄球菌.中华医学检验,1996;19:186~88

    (收稿:1999-08-01), 百拇医药