恶性肿瘤患者T细胞亚群和可溶性白介素-2受体检测及意义
作者：黄慧 易基群 曾波航
单位：广州医学院第二附属医院肿瘤科，广州 510260
关键词：恶性肿瘤；T淋巴细胞亚群；可溶性白介素-2受体；免疫功能
广州医学院学报990405 提要 目的：了解恶性肿瘤患者免疫功能的改变。方法：对200例恶性肿瘤患者及30例正常人的T淋巴细胞亚群和可溶性白介素-2受体(SIL-2R)进行了同步检验及相关性研究。结果：肿瘤患者CD3、CD4 、CD4/CD8均低于正常人(P<0.05)，SIL-2R、CD8均高于正常人(P<0.05)，其中CD4/CD8与SIL-2R呈负相关。结论：恶性肿瘤患者的免疫功能是低下的。
中图分类号 R730.3
, 百拇医药
The Significance of the Detection of T Lymphocyte Subsets and soluble Interleukin-2 in Patients with Malignant Tumor
Huang Hui,Yi Jiqun,Zhen Bohang
(Department of Oncology,the Second Affiliated Hospital,Guangzhou Medical College,Guangzhou 510260)
Objective: To investigate the alteration of immunologic function in patients with various malignant tumors. Methods: T lymphocyte subsets and soluble interleukin-2 receptors (SIL-2R) in 200 cases with malignant tumors and 30 cases of normal control were simultaneously detected. Results: CD3,CD4 and CD4/CDs ratio in patients with various malignant tumors were lower than that in the control (P<0.05),whereas CDs and SIL-2R were higher than that in the control (P<0.05). In these patients CD4/CDs ratio was negatively correlated with SIL-2R,the relation coefficient was -0.79. Conclusion: The immunologic function in patients with malignant tumor is depressed.
, 百拇医药
Key words Malignant tumor;T lymphocyte subsets;Soluble interleukin-2 receptor;Immunologic function
近年来，随着免疫学的深入研究，肿瘤与免疫关系越来越引起临床重视。机体的免疫功能，尤其是细胞免疫功能与肿瘤的发生、发展及预后有着密切相关。T淋巴细胞、可溶性白介素-2受体(SIL-2R)在细胞免疫调节中起着重要的作用，并成为对肿瘤患者监测病程和判断预后的辅助指标。本文对200例恶性肿瘤患者及30例正常人的T淋巴细胞亚群、SIL-2R水平进行同步检测及相关性研究，以探讨恶性肿瘤患者免疫水平与正常人群的差异，以及它们之间的相互关系。
1 材料和方法
1.1 研究对象
病例选择 取自本院住院和门诊确诊的肿瘤病人。其中男性118例，女性82例，年龄25～79(52.8±11.2)岁。其中胃癌25例、食道癌19例、肝癌38例、肠癌27例、肺癌42例、淋巴瘤19例、乳腺癌23例、其它恶性肿瘤4例。
, http://www.100md.com
正常对照 正常人30例，均系体格健康人群。其中男性16例、女性14例，年龄22～58(35.4±7.8)岁。
1.2 检验方法
取受检者静脉血4ml分别置于两支试管中，其中一管1ml，不抗凝，分离血清，保存于-20℃，待测SIL-2R。另一管3ml，用2%肝素抗凝，测定T亚群。
1.2.1 T亚群检测 采用由军事医学院生物制剂发展中心提供的T淋巴细胞亚群测试剂盒，用APAAP法，按常规方法用淋巴细胞分离液，分离出淋巴细胞，洗涤3次后调整细胞悬液浓度为3～5*109细胞/L。CD3、CD4、CD8及阴性对照各涂片一张，固定，滴加工作浓度的第一抗体(CD3、CD4、CD8)20μl，放温盒20～30min，PBS冲洗3次，甩片。每片滴加第二抗体20μl，室温20～30min，PBS冲洗3次，每次1min，甩片。每片滴加第三抗体复合物体20μl，室温20～30min，甩片，滴加碱性磷酸底物显色液20μl，37℃作用30min。苏木素复染1～3min，自来水冲洗，甘油明胶封片后镜检。细胞膜或胞浆有红色标记物为阳性细胞，共计数300个有核细胞，计数出阳性细胞的百分率。
, 百拇医药
1.2.2 SIL-2R检验 采用酶标双抗体夹心ELISA法，试剂盒由白求恩医科大学免疫室提供。用抗IL-2R (P55)单克隆抗体1ml/L包被96孔软板过夜，封闭后加入标准液或待测样本，37℃反应2h，洗涤后加入兔抗IL-2R多克隆抗体，37℃反应2h，洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的驴抗兔IgG,37℃反应2h后加入底物反应液显色，以2mol/L硫酸终止反应，用酶标检测仪490mm测OD值。用标准品OD值减去空白OD值绘制标准曲线，对照标准曲线得出样本的SIL-2R浓度。
1.3 统计方法
所有化验结果均以均值±标准差表示，采用t检验和直线相关分析。
2 结果
2.1 恶性肿瘤患者及健康人T亚群、SIL-2R比较。结果见表1
表1 200例肿瘤患者T亚群和SIL-2R
, 百拇医药
SIL-2R(u/ml)
CD3(%)
CD4(%)
CD8(%)
CD4/CD8
对照组
283.2±9.63
61.7±5.72
42.2±3.36
22.3±2.48
1.50±0.32
, 百拇医药
肿瘤组
573.8±28.3
42.19±4.35
33.13±3.19
31.08±2.98
1.07±0.19
P
<0.001
<0.05
<0.05
<0.05
<0.05
, http://www.100md.com
从表1、2可知不同类型肿瘤患者CD3、CD4明显低于对照组，差异有显著性(P<0.05),而CD8 、SIL-2R则高于对照组(P<0.05)，CD4/CD8比值较正常对照组降低(P<0.05)。以上结果表明，肿瘤患者有免疫功能下降存在。
表2 不同类型肿瘤患者T亚群和SIL-2R 分组
例数
SIL-2R(u/ml)
CD3(%)
CD4(%)
CD8(%)
, 百拇医药
CD4/CD8
对照组
30
283.2±9.63
61.7±5.72
42.2±3.36
22.3±2.48
1.50±0.30
胃癌
25
578.1±31.3
43.2±4.85
, http://www.100md.com
32.1±4.12
30.9±3.52
1.01±0.20
食道癌
19
589.6±41.2
45.8±3.76
35.1±3.25
28.2±2.83
1.18±0.18
肝癌
38
, 百拇医药
587.3±32.8
39.2±3.65
28.3±2.95
33.2±4.15
1.01±0.16
肠癌
27
561.7±29.8
41.7±4.12
29.1±3.10
32.1±2.83
1.19±0.23
, http://www.100md.com
肺癌
42
592.3±31.8
40.8±3.95
28.5±3.21
29.1±4.05
1.15±0.19
淋巴癌
19
552.9±29.3
40.1±4.11
30.3±3.32
, http://www.100md.com
30.1±3.65
1.05±0.16
乳腺癌
26
528.1±27.8
39.2±2.98
29.8±3.15
34.1±3.78
1.08±0.21
其他
4
570.3±29.5
, 百拇医药
40.3±3.32
33.5±4.16
31.1±2.93
1.03±0.17
从表3可知，27例肠癌患者中，术前或复发患者CD3、CD4、CD8较术后患者降低(P<0.05)，而CD4/CD8、SIL-2R则升高(P<0.05)，提示病情不同，其免疫功能也有差别。
表3 不同病期肠癌患者的T亚群和SIL-2R 分期
例数
SIL-2R(u/ml)
, 百拇医药
CD3(%)
CD4(%)
CD8(%)
CD4/CD8
术前或复发
19
542.7±27.8
43.63±4.78
32.38±3.23
30.12±2.76
1.10±0.23
, http://www.100md.com
术后
8
328.6±15.3
59.60±4.56
41.86±3.98
23.98±2.97
1.41±0.29
P
<0.05
<0.05
<0.05
<0.05
, 百拇医药
<0.05
2.2 肿瘤患者T亚群与SIL-2R的相关性
采用直线相关分析，肿瘤患者CD4/CD8与SIL-2R间存在负相关关系(r=-0.79，P<0.05)。但T淋巴细胞各亚群CD3、CD4、CD8与SIL-2R水平无相关关系(P>0.05)。
3 讨论
研究证实，恶性肿瘤患者常伴有免疫功能障碍。肿瘤免疫反应以细胞免疫占主导地位，T淋巴细胞是机体免疫系统内功能最重要的一大细胞群。检测T亚群是观察机体细胞免疫的重要方法之一。应用单克隆抗体，可把T细胞分为两大亚群，正常机体中各T亚群相互作用，维持着机体的正常免疫功能。当不同淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时，机体就可导致免疫紊乱并发生疾病。恶性肿瘤形成发展过程中，产生或分泌可溶性免疫抑制因子，诱导CD8(抑制/杀伤性T细胞)的产生，同时阻止CD4(辅助性细胞)的形成和成熟，表现为CD4数值减少，CD8数值增加，CD4/CD8比值降低，使机体免疫水平处于抑制状态而容易导致肿瘤的发生。[1～2]
, 百拇医药
导致机体T淋巴细胞免疫功能低下的机理尚不完全清楚，推测SIL-2R是一种与细胞免疫密切相关的免疫抑制物质，它由活化的淋巴细胞膜IL-2Rα键部分脱落形成，与MIL-2R竞争结合IL-2，作用类似封闭因子，中和活化T细胞周围的IL-2，减弱机体的自分泌效应，引起免疫水平降低。[3～5]
综上可知，肿瘤患者T淋巴亚群、SIL-2R状态的异常可能是其机体发生肿瘤的因素之一，且其水平高低可能与病情严重程度有关。同步检测这些指标，了解其免疫功能的状态，可作为病情观察、疗效监测、预后判断的有用指标。[6]
参考文献：
[1]田谓涛，马树俊，龙振洲等.应用OKT单克隆抗体检测健康成人外周血T淋巴细胞亚群分布.中华微生物学和免疫学杂志，1987；2：73～76
[2]鲁智，王圣应，潘家华等.恶性肿瘤患者外周血NK细胞及T细胞亚群检测的临床意义.蚌埠医学院学报，1994；19(4)：306～307
, http://www.100md.com
[3]Lissoni P,Barnis,Rovelli F,et al.The biological significance of soluble interleukin-2 receptors in solid tumors.Eur J Cancer,1990;26:33～36
[4]富宁.王莉.杨贵贞等.单克隆双抗体夹心测定血清可溶性IL-2受体.中国免疫学杂志，1991；7(5)：278～281
[5]白岚.可溶性白介素2受体的功能、检测和应用.上海免疫学杂志，1994；14(5)：312～314
[6]Lissoni P,Barnis,Rovelli F,et al.Correlation of serum interleukin-2 levels,soluble interleukin-2 receptors and T lymphocyte subsets in cancer patients.Tumori,1990 ；76(1)：14～17
(收稿：1999-06-17), 百拇医药
单位：广州医学院第二附属医院肿瘤科，广州 510260
关键词：恶性肿瘤；T淋巴细胞亚群；可溶性白介素-2受体；免疫功能
广州医学院学报990405 提要 目的：了解恶性肿瘤患者免疫功能的改变。方法：对200例恶性肿瘤患者及30例正常人的T淋巴细胞亚群和可溶性白介素-2受体(SIL-2R)进行了同步检验及相关性研究。结果：肿瘤患者CD3、CD4 、CD4/CD8均低于正常人(P<0.05)，SIL-2R、CD8均高于正常人(P<0.05)，其中CD4/CD8与SIL-2R呈负相关。结论：恶性肿瘤患者的免疫功能是低下的。
中图分类号 R730.3
, 百拇医药
The Significance of the Detection of T Lymphocyte Subsets and soluble Interleukin-2 in Patients with Malignant Tumor
Huang Hui,Yi Jiqun,Zhen Bohang
(Department of Oncology,the Second Affiliated Hospital,Guangzhou Medical College,Guangzhou 510260)
Objective: To investigate the alteration of immunologic function in patients with various malignant tumors. Methods: T lymphocyte subsets and soluble interleukin-2 receptors (SIL-2R) in 200 cases with malignant tumors and 30 cases of normal control were simultaneously detected. Results: CD3,CD4 and CD4/CDs ratio in patients with various malignant tumors were lower than that in the control (P<0.05),whereas CDs and SIL-2R were higher than that in the control (P<0.05). In these patients CD4/CDs ratio was negatively correlated with SIL-2R,the relation coefficient was -0.79. Conclusion: The immunologic function in patients with malignant tumor is depressed.
, 百拇医药
Key words Malignant tumor;T lymphocyte subsets;Soluble interleukin-2 receptor;Immunologic function
近年来，随着免疫学的深入研究，肿瘤与免疫关系越来越引起临床重视。机体的免疫功能，尤其是细胞免疫功能与肿瘤的发生、发展及预后有着密切相关。T淋巴细胞、可溶性白介素-2受体(SIL-2R)在细胞免疫调节中起着重要的作用，并成为对肿瘤患者监测病程和判断预后的辅助指标。本文对200例恶性肿瘤患者及30例正常人的T淋巴细胞亚群、SIL-2R水平进行同步检测及相关性研究，以探讨恶性肿瘤患者免疫水平与正常人群的差异，以及它们之间的相互关系。
1 材料和方法
1.1 研究对象
病例选择 取自本院住院和门诊确诊的肿瘤病人。其中男性118例，女性82例，年龄25～79(52.8±11.2)岁。其中胃癌25例、食道癌19例、肝癌38例、肠癌27例、肺癌42例、淋巴瘤19例、乳腺癌23例、其它恶性肿瘤4例。
, http://www.100md.com
正常对照 正常人30例，均系体格健康人群。其中男性16例、女性14例，年龄22～58(35.4±7.8)岁。
1.2 检验方法
取受检者静脉血4ml分别置于两支试管中，其中一管1ml，不抗凝，分离血清，保存于-20℃，待测SIL-2R。另一管3ml，用2%肝素抗凝，测定T亚群。
1.2.1 T亚群检测 采用由军事医学院生物制剂发展中心提供的T淋巴细胞亚群测试剂盒，用APAAP法，按常规方法用淋巴细胞分离液，分离出淋巴细胞，洗涤3次后调整细胞悬液浓度为3～5*109细胞/L。CD3、CD4、CD8及阴性对照各涂片一张，固定，滴加工作浓度的第一抗体(CD3、CD4、CD8)20μl，放温盒20～30min，PBS冲洗3次，甩片。每片滴加第二抗体20μl，室温20～30min，PBS冲洗3次，每次1min，甩片。每片滴加第三抗体复合物体20μl，室温20～30min，甩片，滴加碱性磷酸底物显色液20μl，37℃作用30min。苏木素复染1～3min，自来水冲洗，甘油明胶封片后镜检。细胞膜或胞浆有红色标记物为阳性细胞，共计数300个有核细胞，计数出阳性细胞的百分率。
, 百拇医药
1.2.2 SIL-2R检验 采用酶标双抗体夹心ELISA法，试剂盒由白求恩医科大学免疫室提供。用抗IL-2R (P55)单克隆抗体1ml/L包被96孔软板过夜，封闭后加入标准液或待测样本，37℃反应2h，洗涤后加入兔抗IL-2R多克隆抗体，37℃反应2h，洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的驴抗兔IgG,37℃反应2h后加入底物反应液显色，以2mol/L硫酸终止反应，用酶标检测仪490mm测OD值。用标准品OD值减去空白OD值绘制标准曲线，对照标准曲线得出样本的SIL-2R浓度。
1.3 统计方法
所有化验结果均以均值±标准差表示，采用t检验和直线相关分析。
2 结果
2.1 恶性肿瘤患者及健康人T亚群、SIL-2R比较。结果见表1
表1 200例肿瘤患者T亚群和SIL-2R
, 百拇医药
SIL-2R(u/ml)
CD3(%)
CD4(%)
CD8(%)
CD4/CD8
对照组
283.2±9.63
61.7±5.72
42.2±3.36
22.3±2.48
1.50±0.32
, 百拇医药
肿瘤组
573.8±28.3
42.19±4.35
33.13±3.19
31.08±2.98
1.07±0.19
P
<0.001
<0.05
<0.05
<0.05
<0.05
, http://www.100md.com
从表1、2可知不同类型肿瘤患者CD3、CD4明显低于对照组，差异有显著性(P<0.05),而CD8 、SIL-2R则高于对照组(P<0.05)，CD4/CD8比值较正常对照组降低(P<0.05)。以上结果表明，肿瘤患者有免疫功能下降存在。
表2 不同类型肿瘤患者T亚群和SIL-2R 分组
例数
SIL-2R(u/ml)
CD3(%)
CD4(%)
CD8(%)
, 百拇医药
CD4/CD8
对照组
30
283.2±9.63
61.7±5.72
42.2±3.36
22.3±2.48
1.50±0.30
胃癌
25
578.1±31.3
43.2±4.85
, http://www.100md.com
32.1±4.12
30.9±3.52
1.01±0.20
食道癌
19
589.6±41.2
45.8±3.76
35.1±3.25
28.2±2.83
1.18±0.18
肝癌
38
, 百拇医药
587.3±32.8
39.2±3.65
28.3±2.95
33.2±4.15
1.01±0.16
肠癌
27
561.7±29.8
41.7±4.12
29.1±3.10
32.1±2.83
1.19±0.23
, http://www.100md.com
肺癌
42
592.3±31.8
40.8±3.95
28.5±3.21
29.1±4.05
1.15±0.19
淋巴癌
19
552.9±29.3
40.1±4.11
30.3±3.32
, http://www.100md.com
30.1±3.65
1.05±0.16
乳腺癌
26
528.1±27.8
39.2±2.98
29.8±3.15
34.1±3.78
1.08±0.21
其他
4
570.3±29.5
, 百拇医药
40.3±3.32
33.5±4.16
31.1±2.93
1.03±0.17
从表3可知，27例肠癌患者中，术前或复发患者CD3、CD4、CD8较术后患者降低(P<0.05)，而CD4/CD8、SIL-2R则升高(P<0.05)，提示病情不同，其免疫功能也有差别。
表3 不同病期肠癌患者的T亚群和SIL-2R 分期
例数
SIL-2R(u/ml)
, 百拇医药
CD3(%)
CD4(%)
CD8(%)
CD4/CD8
术前或复发
19
542.7±27.8
43.63±4.78
32.38±3.23
30.12±2.76
1.10±0.23
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术后
8
328.6±15.3
59.60±4.56
41.86±3.98
23.98±2.97
1.41±0.29
P
<0.05
<0.05
<0.05
<0.05
, 百拇医药
<0.05
2.2 肿瘤患者T亚群与SIL-2R的相关性
采用直线相关分析，肿瘤患者CD4/CD8与SIL-2R间存在负相关关系(r=-0.79，P<0.05)。但T淋巴细胞各亚群CD3、CD4、CD8与SIL-2R水平无相关关系(P>0.05)。
3 讨论
研究证实，恶性肿瘤患者常伴有免疫功能障碍。肿瘤免疫反应以细胞免疫占主导地位，T淋巴细胞是机体免疫系统内功能最重要的一大细胞群。检测T亚群是观察机体细胞免疫的重要方法之一。应用单克隆抗体，可把T细胞分为两大亚群，正常机体中各T亚群相互作用，维持着机体的正常免疫功能。当不同淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时，机体就可导致免疫紊乱并发生疾病。恶性肿瘤形成发展过程中，产生或分泌可溶性免疫抑制因子，诱导CD8(抑制/杀伤性T细胞)的产生，同时阻止CD4(辅助性细胞)的形成和成熟，表现为CD4数值减少，CD8数值增加，CD4/CD8比值降低，使机体免疫水平处于抑制状态而容易导致肿瘤的发生。[1～2]
, 百拇医药
导致机体T淋巴细胞免疫功能低下的机理尚不完全清楚，推测SIL-2R是一种与细胞免疫密切相关的免疫抑制物质，它由活化的淋巴细胞膜IL-2Rα键部分脱落形成，与MIL-2R竞争结合IL-2，作用类似封闭因子，中和活化T细胞周围的IL-2，减弱机体的自分泌效应，引起免疫水平降低。[3～5]
综上可知，肿瘤患者T淋巴亚群、SIL-2R状态的异常可能是其机体发生肿瘤的因素之一，且其水平高低可能与病情严重程度有关。同步检测这些指标，了解其免疫功能的状态，可作为病情观察、疗效监测、预后判断的有用指标。[6]
参考文献：
[1]田谓涛，马树俊，龙振洲等.应用OKT单克隆抗体检测健康成人外周血T淋巴细胞亚群分布.中华微生物学和免疫学杂志，1987；2：73～76
[2]鲁智，王圣应，潘家华等.恶性肿瘤患者外周血NK细胞及T细胞亚群检测的临床意义.蚌埠医学院学报，1994；19(4)：306～307
, http://www.100md.com
[3]Lissoni P,Barnis,Rovelli F,et al.The biological significance of soluble interleukin-2 receptors in solid tumors.Eur J Cancer,1990;26:33～36
[4]富宁.王莉.杨贵贞等.单克隆双抗体夹心测定血清可溶性IL-2受体.中国免疫学杂志，1991；7(5)：278～281
[5]白岚.可溶性白介素2受体的功能、检测和应用.上海免疫学杂志，1994；14(5)：312～314
[6]Lissoni P,Barnis,Rovelli F,et al.Correlation of serum interleukin-2 levels,soluble interleukin-2 receptors and T lymphocyte subsets in cancer patients.Tumori,1990 ；76(1)：14～17
(收稿：1999-06-17), 百拇医药