肿瘤浸润淋巴细胞免疫治疗胃癌的疗效*
作者：刘振华 王清水 林孟波 蓝 兰 林秋华
单位：福建省立医院肿瘤科(福州 350001)
关键词：胃癌；肿瘤浸润淋巴细胞；免疫治疗
福建医科大学学报990408
目的 对胃癌患者实施肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)免疫治疗。 方法 培养收获TIL细胞，并回输患者。 结果 TIL治疗能使部分患者瘤体缩小，生存期延长，一般症状显著改善。治疗前后免疫学参数(CD3/CD4，自体LAK活性，血清SIL-2R水平)表明，TIL治疗可以提高患者机体免疫功能，增强抗癌抑癌能力。 结论 对胃癌患者综合治疗，TIL免疫治疗值得临床进一步扩大应用。
Therapeutic Efficacy of Tumor lnfiltrating Lymphocytes
, http://www.100md.com
Against Gastric Carcinoma
Liu Zhenhua， Wang Qingshui， Lin Mengbo， et al
(Department of Oncology， Fujian Provincial Hospital， Fuzhou， 350001)
Objective To study the effect of immunotherapy with tumor infiltrating lymphocytes(TIL) for late gastric carcinoma. Methods TIL were cultured and harvested,then reinfused into the patients. Results TIL therapy could partially reduce the tumor size,prolong the survival time and improve the general clinical symptoms of the patients. The observations on immunological index(CD3/CD4 ratio,serum SIL-2R level and autologous LAK activity) revealed that TIL therapy could enhance the immunological function,and promote the antitumor activity of the patients. Conclusion TIL therapy was thought to be one of the main methods for combined treatment of the patients with late gastric carcinoma,it may regulate the immunological function,relief the sufferings of the patients and prolong the survival time.
, 百拇医药
Key words gastric carcinoma; tumor infiltrating lymphocyte; immunotherapy
用淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)细胞和大剂量白细胞介素2(IL-2)联合治疗肿瘤，已取得了一定成效[1],但疗法繁琐，费用昂贵,大剂量IL-2带来水钠潴留等毒副反应难以避免，且抗瘤又无特异性，限制了该疗法在临床应用中的推广。Rosenberg等研究证实，在荷瘤小鼠中，肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)抗肿瘤作用比LAK强50～100倍，只需小量IL-2就可发挥抗瘤作用，给肿瘤过继免疫治疗带来了新曙光[2]。笔者在研究TIL分离培养途径后[3，4]，在1996年12月～1998年6月进行TIL临床应用，报道如下。
1 材料与方法
1.1 对象 经外科手术不能切除癌肿的本院住院患者,分为两组。TIL治疗组(20例),因2例培养过程中污染,可评估病例18例,男性11例,女性7例,年龄51.69±8.36岁。手术中取小块肿瘤组织及2～3个浸润淋巴结,作TIL分离培养扩增及治疗,辅以对症支持治疗，未行放疗及化疗。对照组11例,男性6例,女性5例,年龄52.7±5.39岁。手术关腹后,只作对症支持治疗,未行放疗及化疗。
, 百拇医药
以上病例均经病理检查确诊。两组在术前及术后3个月至6个月分别作CT或B超检测，记录一般症状、体征及免疫功能情况。疗效评估按WHO标准进行。
1.2 方法
1.2.1 TIL培养分离及回输 取少量肿瘤组织及浸润淋巴结,在体外消化分离，所用DNA酶、胶原酶、透明质酸酶为Sigma公司产品。将TIL置37℃、5%CO2培养箱中扩增培养。按本室建立的高效培养扩增体系方法[5]，TIL达到治疗数量级后，给病人进行自体回输，一般为5～7次，回输同时全身应用rIL-2(TIL细胞量在4.0×109～1.2×1010之间,rIL-2为300万IU左右)。
1.2.2 CD3/CD4检测 细胞样品上流式细胞仪(FCM)检测。OKT单抗为美国Coulter公司产品。
, 百拇医药
1.2.3 自体LAK活性检测[6] MNK45细胞引自上海中科院细胞生物所，本研究室培养传代。
1.2.4 SIL-2R检测 按试剂盒方法。试剂盒由第四军医大学免疫学教研室提供。
1.2.5 疗效判定 按WHO标准。
2 结 果
2.1 TIL免疫治疗前后免疫功能变化(表1) 胃癌患者在接受TIL治疗前后,其CD3/CD4、自体LAK活性差异显著，可溶性IL-2受体水平差异极显著(P<0.001)。
表1 TIL免疫治疗前后对照组与TIL组免疫功能指标
对照组(n=11)
, http://www.100md.com
TIL组(n=18)
治疗前
治疗后
CD3/CD4
1.34±0.27
1.36±0.18
1.64±0.12**
LAK活性(%)
18.88±1.62
23.92±3.80
45.77±6.34**
, http://www.100md.com
SIL-2R(IU/ml)
871.00±275.13
864.30±257.26
319.23±102.16***
与治疗前比,**:P<0.01,***:P<0.001.
2.2 TIL组治疗后3～6个月与对照组免疫功能比较(表2) 免疫功能仍存在显著差异。
表2 TIL治疗后3～6个月对照组与TIL组免疫功能指标
对照组
TIL组
CD3/CD4
, 百拇医药
1.36±0.20
1.64±0.12*
LAK活性(%)
21.08±2.31
45.77±6.34**
SIL-2R(IU/ml)
910.02±258.36
319.23±102.16**
与对照组比,*:P<0.05, **:P<0.01.
2.3 TIL治疗后症状体征改变
, http://www.100md.com
TIL组患者大多数食欲改善(12例,66.6%),体力增加(11例,61.1%),体重增加(9例,50%),疼痛减轻(10例,55.5%);对照组上述症状体征无明显变化。
2.4 TIL治疗与生存期关系
对照组11例,存活时间最长为10个月,最短3.5个月;TIL组18例,2例死亡,其余存活,生存>1年8例,最长者达22个月,1年以上生存率为44.4%。按WHO实体瘤标准评价，二组中均无治愈病例，但TIL组好转6例(33.3%),而对照组仅1例(9.1%),差异有显著性(P<0.05)。
3 讨 论
TIL细胞因其杀瘤活性强，又具相对特异性，不需要大量IL-2诱导维持，为免疫治疗工作者关注。笔者在实验研究基础上[3～5]，建立了体外高效扩增体系，对进展期胃癌进行TIL治疗的临床观察结果比较满意。
, http://www.100md.com
临床观察显示，采用TIL免疫治疗辅以对症支持措施，可使部分胃癌患者出现食欲增强、体重增加、体力增强、疼痛减轻，并使部分患者瘤体部分缩小，生存期延长。本研究中，TIL治疗胃癌好转率为33.3%,因而,TIL免疫治疗胃癌不失为一种有意义的综合手段，尤其在延长生存方面有一定的临床意义。
CD3/CD4水平反映机体细胞免疫机能及免疫调节状况，本组研究表明，胃癌患者经免疫治疗后，比值为1.64,已接近正常水平,说明TIL治疗可以调节免疫机能，改善患者细胞免疫功能。自体LAK细胞活性水平高低可反映机体外周血单个核细胞(PBMC)对外来抗原的增殖及反应能力，实验结果显示，TIL治疗后自体LAK细胞活性升高，与TIL细胞参与免疫调节、传递抗肿瘤免疫信息相关。体外研究证实，TIL培养上清中有γ-IFN的分泌，并与TIL发挥抗瘤效应相关[3]，说明TIL应用后可诱导出患者机体内源性γ-IFN，产生细胞因子抑瘤作用。资料表明，SIL-2R水平同机体T淋巴细胞转化呈正相关，同时也影响B细胞功能及血清Ig浓度。肿瘤患者因各种因素T细胞表面的IL-2受体脱落，从而使血清中SIL-2R水平增高。本研究发现，胃癌患者其SIL-2R水平均高于正常值(正常值为400±150 IU/ml)。经过TIL治疗后，其水平降至319.23±102.16 IU/ml,接近正常水平，说明TIL治疗可稳定免疫细胞，阻止细胞表面IL-2受体脱落，促进免疫细胞发挥抗瘤效应。
, 百拇医药
笔者认为，应用TIL及对症支持治疗胃癌患者，在提高机体免疫机能、缩小瘤体、改善症状及延长生存期方面有确切效果，但本组病例数较少，有待进一步临床推广探讨。
*：福建省科委科研基金资助课题(95-J-13)
参考文献
1 Rosenberg SA,Spiess P,Lafreniere R,et al. A new approach to the adoptive immunotherapy of cancer with tumor infiltrating lymphocytes. Science, 1986;233:1318
2 Rosenberg SA,Lotze MT,Muul LM,et al. A progress report on the treatment of 157 patients with advanced cancer using lymphokine-activated killer cells and interleukine-2 alone. N Engl J Med, 1987;316:889
, 百拇医药
3 刘振华，蓝 兰，王清水，等. 人胃腺癌TIL 培养上清中SIL-2R及IFN-γ含量变化与抑瘤观察. 中国肿瘤生物治疗杂志， 1997；4：152
4 刘振华，蓝 兰，王清水，等. GM-CSF 对人胃腺癌TIL增殖及杀瘤活性的影响. 肿瘤防治研究， 1997；24(3)；149
5 刘振华，蓝 兰，王清水，等. 胃腺癌TIL体外培养高效扩增体系的建立-应用自体LAK及GM-CSF. 肿瘤， 1998；18:42
6 刘振华，蓝 兰，王清水，等. 自体可溶性肿瘤抗原协同IL-2诱导外周血PBMC 增殖及杀瘤. 肿瘤， 1997；17：358
(收稿:1999—04—13 修回:1999—09—13), 百拇医药
单位：福建省立医院肿瘤科(福州 350001)
关键词：胃癌；肿瘤浸润淋巴细胞；免疫治疗
福建医科大学学报990408
目的 对胃癌患者实施肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)免疫治疗。 方法 培养收获TIL细胞，并回输患者。 结果 TIL治疗能使部分患者瘤体缩小，生存期延长，一般症状显著改善。治疗前后免疫学参数(CD3/CD4，自体LAK活性，血清SIL-2R水平)表明，TIL治疗可以提高患者机体免疫功能，增强抗癌抑癌能力。 结论 对胃癌患者综合治疗，TIL免疫治疗值得临床进一步扩大应用。
Therapeutic Efficacy of Tumor lnfiltrating Lymphocytes
, http://www.100md.com
Against Gastric Carcinoma
Liu Zhenhua， Wang Qingshui， Lin Mengbo， et al
(Department of Oncology， Fujian Provincial Hospital， Fuzhou， 350001)
Objective To study the effect of immunotherapy with tumor infiltrating lymphocytes(TIL) for late gastric carcinoma. Methods TIL were cultured and harvested,then reinfused into the patients. Results TIL therapy could partially reduce the tumor size,prolong the survival time and improve the general clinical symptoms of the patients. The observations on immunological index(CD3/CD4 ratio,serum SIL-2R level and autologous LAK activity) revealed that TIL therapy could enhance the immunological function,and promote the antitumor activity of the patients. Conclusion TIL therapy was thought to be one of the main methods for combined treatment of the patients with late gastric carcinoma,it may regulate the immunological function,relief the sufferings of the patients and prolong the survival time.
, 百拇医药
Key words gastric carcinoma; tumor infiltrating lymphocyte; immunotherapy
用淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)细胞和大剂量白细胞介素2(IL-2)联合治疗肿瘤，已取得了一定成效[1],但疗法繁琐，费用昂贵,大剂量IL-2带来水钠潴留等毒副反应难以避免，且抗瘤又无特异性，限制了该疗法在临床应用中的推广。Rosenberg等研究证实，在荷瘤小鼠中，肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)抗肿瘤作用比LAK强50～100倍，只需小量IL-2就可发挥抗瘤作用，给肿瘤过继免疫治疗带来了新曙光[2]。笔者在研究TIL分离培养途径后[3，4]，在1996年12月～1998年6月进行TIL临床应用，报道如下。
1 材料与方法
1.1 对象 经外科手术不能切除癌肿的本院住院患者,分为两组。TIL治疗组(20例),因2例培养过程中污染,可评估病例18例,男性11例,女性7例,年龄51.69±8.36岁。手术中取小块肿瘤组织及2～3个浸润淋巴结,作TIL分离培养扩增及治疗,辅以对症支持治疗，未行放疗及化疗。对照组11例,男性6例,女性5例,年龄52.7±5.39岁。手术关腹后,只作对症支持治疗,未行放疗及化疗。
, 百拇医药
以上病例均经病理检查确诊。两组在术前及术后3个月至6个月分别作CT或B超检测，记录一般症状、体征及免疫功能情况。疗效评估按WHO标准进行。
1.2 方法
1.2.1 TIL培养分离及回输 取少量肿瘤组织及浸润淋巴结,在体外消化分离，所用DNA酶、胶原酶、透明质酸酶为Sigma公司产品。将TIL置37℃、5%CO2培养箱中扩增培养。按本室建立的高效培养扩增体系方法[5]，TIL达到治疗数量级后，给病人进行自体回输，一般为5～7次，回输同时全身应用rIL-2(TIL细胞量在4.0×109～1.2×1010之间,rIL-2为300万IU左右)。
1.2.2 CD3/CD4检测 细胞样品上流式细胞仪(FCM)检测。OKT单抗为美国Coulter公司产品。
, 百拇医药
1.2.3 自体LAK活性检测[6] MNK45细胞引自上海中科院细胞生物所，本研究室培养传代。
1.2.4 SIL-2R检测 按试剂盒方法。试剂盒由第四军医大学免疫学教研室提供。
1.2.5 疗效判定 按WHO标准。
2 结 果
2.1 TIL免疫治疗前后免疫功能变化(表1) 胃癌患者在接受TIL治疗前后,其CD3/CD4、自体LAK活性差异显著，可溶性IL-2受体水平差异极显著(P<0.001)。
表1 TIL免疫治疗前后对照组与TIL组免疫功能指标
对照组(n=11)
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TIL组(n=18)
治疗前
治疗后
CD3/CD4
1.34±0.27
1.36±0.18
1.64±0.12**
LAK活性(%)
18.88±1.62
23.92±3.80
45.77±6.34**
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SIL-2R(IU/ml)
871.00±275.13
864.30±257.26
319.23±102.16***
与治疗前比,**:P<0.01,***:P<0.001.
2.2 TIL组治疗后3～6个月与对照组免疫功能比较(表2) 免疫功能仍存在显著差异。
表2 TIL治疗后3～6个月对照组与TIL组免疫功能指标
对照组
TIL组
CD3/CD4
, 百拇医药
1.36±0.20
1.64±0.12*
LAK活性(%)
21.08±2.31
45.77±6.34**
SIL-2R(IU/ml)
910.02±258.36
319.23±102.16**
与对照组比,*:P<0.05, **:P<0.01.
2.3 TIL治疗后症状体征改变
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TIL组患者大多数食欲改善(12例,66.6%),体力增加(11例,61.1%),体重增加(9例,50%),疼痛减轻(10例,55.5%);对照组上述症状体征无明显变化。
2.4 TIL治疗与生存期关系
对照组11例,存活时间最长为10个月,最短3.5个月;TIL组18例,2例死亡,其余存活,生存>1年8例,最长者达22个月,1年以上生存率为44.4%。按WHO实体瘤标准评价，二组中均无治愈病例，但TIL组好转6例(33.3%),而对照组仅1例(9.1%),差异有显著性(P<0.05)。
3 讨 论
TIL细胞因其杀瘤活性强，又具相对特异性，不需要大量IL-2诱导维持，为免疫治疗工作者关注。笔者在实验研究基础上[3～5]，建立了体外高效扩增体系，对进展期胃癌进行TIL治疗的临床观察结果比较满意。
, http://www.100md.com
临床观察显示，采用TIL免疫治疗辅以对症支持措施，可使部分胃癌患者出现食欲增强、体重增加、体力增强、疼痛减轻，并使部分患者瘤体部分缩小，生存期延长。本研究中，TIL治疗胃癌好转率为33.3%,因而,TIL免疫治疗胃癌不失为一种有意义的综合手段，尤其在延长生存方面有一定的临床意义。
CD3/CD4水平反映机体细胞免疫机能及免疫调节状况，本组研究表明，胃癌患者经免疫治疗后，比值为1.64,已接近正常水平,说明TIL治疗可以调节免疫机能，改善患者细胞免疫功能。自体LAK细胞活性水平高低可反映机体外周血单个核细胞(PBMC)对外来抗原的增殖及反应能力，实验结果显示，TIL治疗后自体LAK细胞活性升高，与TIL细胞参与免疫调节、传递抗肿瘤免疫信息相关。体外研究证实，TIL培养上清中有γ-IFN的分泌，并与TIL发挥抗瘤效应相关[3]，说明TIL应用后可诱导出患者机体内源性γ-IFN，产生细胞因子抑瘤作用。资料表明，SIL-2R水平同机体T淋巴细胞转化呈正相关，同时也影响B细胞功能及血清Ig浓度。肿瘤患者因各种因素T细胞表面的IL-2受体脱落，从而使血清中SIL-2R水平增高。本研究发现，胃癌患者其SIL-2R水平均高于正常值(正常值为400±150 IU/ml)。经过TIL治疗后，其水平降至319.23±102.16 IU/ml,接近正常水平，说明TIL治疗可稳定免疫细胞，阻止细胞表面IL-2受体脱落，促进免疫细胞发挥抗瘤效应。
, 百拇医药
笔者认为，应用TIL及对症支持治疗胃癌患者，在提高机体免疫机能、缩小瘤体、改善症状及延长生存期方面有确切效果，但本组病例数较少，有待进一步临床推广探讨。
*：福建省科委科研基金资助课题(95-J-13)
参考文献
1 Rosenberg SA,Spiess P,Lafreniere R,et al. A new approach to the adoptive immunotherapy of cancer with tumor infiltrating lymphocytes. Science, 1986;233:1318
2 Rosenberg SA,Lotze MT,Muul LM,et al. A progress report on the treatment of 157 patients with advanced cancer using lymphokine-activated killer cells and interleukine-2 alone. N Engl J Med, 1987;316:889
, 百拇医药
3 刘振华，蓝 兰，王清水，等. 人胃腺癌TIL 培养上清中SIL-2R及IFN-γ含量变化与抑瘤观察. 中国肿瘤生物治疗杂志， 1997；4：152
4 刘振华，蓝 兰，王清水，等. GM-CSF 对人胃腺癌TIL增殖及杀瘤活性的影响. 肿瘤防治研究， 1997；24(3)；149
5 刘振华，蓝 兰，王清水，等. 胃腺癌TIL体外培养高效扩增体系的建立-应用自体LAK及GM-CSF. 肿瘤， 1998；18:42
6 刘振华，蓝 兰，王清水，等. 自体可溶性肿瘤抗原协同IL-2诱导外周血PBMC 增殖及杀瘤. 肿瘤， 1997；17：358
(收稿:1999—04—13 修回:1999—09—13), 百拇医药