雷公藤氯内酯醇对人外周血淋巴细胞内钙离子浓度的影响
作者：卜玉芬 苏颖 李学旺
单位：中国医学科学院 中国协和医科大学 协和医院肾内科，北京100730
关键词：雷公藤氯内酯醇；淋巴细胞；钙
雷公藤氯内酯醇对人外周血淋巴细胞 内钙离子浓度的影响 中图号 R284.1 R331.1+44
近年来，有关雷公藤抑制免疫机制的研究取得不少进展，但其胞内作用机制仍不清楚。研究表明有丝分裂原激活T淋巴细胞的过程有赖于胞内钙信号系统。本研究采用Fura-2/Am荧光法观察不同浓度雷公藤氯内酯醇(T4)对人外周血T淋巴细胞内钙离子浓度影响，以期进一步探讨T4作用的细胞内机制。
方法 (1) 分离人外周血淋巴细胞，在淋巴细胞悬液中，加入5 μmol/L Fura-2/Am,于37℃ 5%CO2孵育40 min;(2) 采用F-2000荧光分光光度计分别检测非负载淋巴细胞内自发荧光强度、负载后淋巴细胞静息时以及加入1 mmol/L氯化钙、60 μg/ml PHA后胞内钙离子浓度，并与0.1 mmol/L异搏定的作用比较；(3) 分别测定加入1.25 ng/ml、2.5 ng/ml、5.0 ng/ml T4后的胞内钙离子浓度，(4) 加入0.1% triton破膜，求出最大值，加入3 mmol/L EGTA求出最小值。(5) 计算胞内钙离子浓度(以荧光强度值表示)，并以加入1 mmol/L CaCl2时的荧光强度值作为1，将加入其它药物时的荧光强度值与之相比，求出相对值。
, http://www.100md.com
结果 60 ng/ml PHA可使淋巴细胞内钙荧光强度相对值由1.0上升至1.45±0.46，而异搏定则使胞内钙荧光强度值由1.45±0.46降至1.12±0.21(P<0.05)。5.0 ng/ml T4也使胞内钙离子浓度显著下降(P<0.001)(附表)其作用与0.1 mmol/L钙离子拮抗剂异搏定相当。
附表 不同浓度T4对人外周血淋巴细胞内钙离子荧光强度比值的影响
Table Effects of T4 on the intercellular calcium fluorenscent ratio in human lymphocytes
of periferal blood (
±s,n=3)
, 百拇医药
T4(ng/ml)
1.25
2.50
5.00
CaCl2
1.0
1.0
1.0
Ca+PHA
1.26±0.05
1.33±0.17
1.35±0.05
, http://www.100md.com
Ca+PHA+T4
1.38±0.10*
1.23±0.07
1.18±0.04***
* P<0.05，***P<0.001 compared to (PHA+Ca)group;the concentration of CaCl2 and PHA are 1 mmol/L and 60 μg/ml respectively
讨论 钙是细胞内重要的信使系统，T淋巴细胞的功能与胞内钙离子密切相关。在有丝分裂原刺激T淋巴细胞DNA合成的中期和后期，或ConA刺激T淋巴细胞表达IL-2R及产生IL-2的过程中均伴有细胞钙摄入增加及胞内钙离子浓度升高。本研究结果显示，PHA可使淋巴细胞内钙较静息状态时显著升高，而钙通道拮抗剂异博定却对抗这一过程，提示PHA的作用至少部分是通过促进胞外钙内流引起的。 5.0 ng/ml T4也显著降低胞内钙离子水平，提示T4很可能通过降低细胞内钙离子浓度发挥其免疫抑制活性。但T4的作用是抑制胞外钙内流还是抑制胞内钙库释放或是作用于钙泵，目前尚不清楚。
#通讯作者
(1999-02-25收稿), 百拇医药
单位：中国医学科学院 中国协和医科大学 协和医院肾内科，北京100730
关键词：雷公藤氯内酯醇；淋巴细胞；钙
雷公藤氯内酯醇对人外周血淋巴细胞 内钙离子浓度的影响 中图号 R284.1 R331.1+44
近年来，有关雷公藤抑制免疫机制的研究取得不少进展，但其胞内作用机制仍不清楚。研究表明有丝分裂原激活T淋巴细胞的过程有赖于胞内钙信号系统。本研究采用Fura-2/Am荧光法观察不同浓度雷公藤氯内酯醇(T4)对人外周血T淋巴细胞内钙离子浓度影响，以期进一步探讨T4作用的细胞内机制。
方法 (1) 分离人外周血淋巴细胞，在淋巴细胞悬液中，加入5 μmol/L Fura-2/Am,于37℃ 5%CO2孵育40 min;(2) 采用F-2000荧光分光光度计分别检测非负载淋巴细胞内自发荧光强度、负载后淋巴细胞静息时以及加入1 mmol/L氯化钙、60 μg/ml PHA后胞内钙离子浓度，并与0.1 mmol/L异搏定的作用比较；(3) 分别测定加入1.25 ng/ml、2.5 ng/ml、5.0 ng/ml T4后的胞内钙离子浓度，(4) 加入0.1% triton破膜，求出最大值，加入3 mmol/L EGTA求出最小值。(5) 计算胞内钙离子浓度(以荧光强度值表示)，并以加入1 mmol/L CaCl2时的荧光强度值作为1，将加入其它药物时的荧光强度值与之相比，求出相对值。
, http://www.100md.com
结果 60 ng/ml PHA可使淋巴细胞内钙荧光强度相对值由1.0上升至1.45±0.46，而异搏定则使胞内钙荧光强度值由1.45±0.46降至1.12±0.21(P<0.05)。5.0 ng/ml T4也使胞内钙离子浓度显著下降(P<0.001)(附表)其作用与0.1 mmol/L钙离子拮抗剂异搏定相当。
附表 不同浓度T4对人外周血淋巴细胞内钙离子荧光强度比值的影响
Table Effects of T4 on the intercellular calcium fluorenscent ratio in human lymphocytes
of periferal blood (
±s,n=3), 百拇医药
T4(ng/ml)
1.25
2.50
5.00
CaCl2
1.0
1.0
1.0
Ca+PHA
1.26±0.05
1.33±0.17
1.35±0.05
, http://www.100md.com
Ca+PHA+T4
1.38±0.10*
1.23±0.07
1.18±0.04***
* P<0.05，***P<0.001 compared to (PHA+Ca)group;the concentration of CaCl2 and PHA are 1 mmol/L and 60 μg/ml respectively
讨论 钙是细胞内重要的信使系统，T淋巴细胞的功能与胞内钙离子密切相关。在有丝分裂原刺激T淋巴细胞DNA合成的中期和后期，或ConA刺激T淋巴细胞表达IL-2R及产生IL-2的过程中均伴有细胞钙摄入增加及胞内钙离子浓度升高。本研究结果显示，PHA可使淋巴细胞内钙较静息状态时显著升高，而钙通道拮抗剂异博定却对抗这一过程，提示PHA的作用至少部分是通过促进胞外钙内流引起的。 5.0 ng/ml T4也显著降低胞内钙离子水平，提示T4很可能通过降低细胞内钙离子浓度发挥其免疫抑制活性。但T4的作用是抑制胞外钙内流还是抑制胞内钙库释放或是作用于钙泵，目前尚不清楚。
#通讯作者
(1999-02-25收稿), 百拇医药