维生素C对氧化酶法测定糖尿病患者血糖的负干扰
作者：李伟民 周燕红 周云
单位：咸宁医学院附属第二医院内科，咸宁 437100
关键词：
咸宁医学院学报990408 糖尿病(DM)患者以空腹或餐后血糖升高为重要特征。葡萄糖氧化酶法(简称氧化酶法)对葡萄糖的特异性和敏感性较高，可在其它单糖存在的情况下进行血糖测定，目前国内外已广泛采用。国外有报道维生素C(VitC)和谷胱甘肽等还原性物质能竞争H2O2，引起负误差，影响血糖测定结果的准确性[1]。国内尚未见有关报道，为此我们进行了VitC对氧化酶法测定糖尿病人血糖值影响的探讨。
1 资料与方法
1.1 一般资料
, 百拇医药 随机选择1997年3月～19997年4月就诊于中山医科大学孙逸仙纪念医院糖尿病专家门诊的患者8例，均为初次就诊,并具有较典型的糖尿病临床表现，均未经系统的口服降糖药或胰岛素治疗。其中男6例，女2例，年龄在40～55岁之间。
1.2 主要试剂和仪器
1.2.1 试剂
葡萄糖氧化酶(10 000u/L)，辣根过氧化物酶(5 000u/L)，对羟基苯甲酸钠(10mmol/L),4-氨基安替比林(390mmol/L)，叠氮钠(5mmol/L)，磷酸盐缓冲液(pH值7.5，100mmol/L),标准试剂由深圳晶美公司提供。葡萄糖标准应用液(5.5mmol/L)，VitC精制品，原料经乙醇二次重结晶，105℃干燥至恒重，符合中国药典(1985年版)规定。EDTA，无水乙酸钠，乙酸(分析纯)。
1.2.2 仪器
, 百拇医药
紫外分光光度计(国产751—G型，GFZ—201型，WFZ—800D2，日本日立U—2000型)。
1.3 方法
患者空腹抽静脉血3ml，盛入含有氟化钠(抗凝、抗酵解)的抗凝试管，离心取上清液，编号置4℃冰箱待测。标明测定管(U)，标准管(S)，空白管(B)。
按下列程序进行操作：U管准确吸入患者血清0.02ml，S管准确吸入葡萄糖标准液0.02ml，B管准确吸入双蒸水0.02ml，三管中分别加入标准试剂各3.0ml。混匀，置37℃水浴15min,于505mm波长，测各管吸光度(B管校正吸光度“O"点)。
按上述程序得出8例患者的空腹血糖值。尔后将各编号试管未测血清分次准确吸出0.04ml×6次分置6支空白的试管内，待校正不同含量VitC后再测。
, 百拇医药 紫外吸收光谱：取VitC精制品适量，用溶剂配制成8μg/ml溶液，于230～290nm波长范围内绘制吸收光谱，结果表明本品在264nm波长处有最大吸收峰，定为测定波长。
精密称定VitC精制品4mg。用上述4台不同型号的紫外分光光度计于264nm处测吸收度，并以直线回归方程A=0.0823C+0.008，得出含VitC 0.04, 0.08, 0.16, 0.32, 0.64和1.28μg/ml的血溶液，再分别重测血糖值。
2 结果
8例糖尿病患者空腹血糖值和不同含量VitC对其影响见表1。
表1 不同含量VitC对8例DM患者空腹血糖值的影响 VitC(μg/ml)
空腹血糖值(mmol/L)
, 百拇医药
12.90
10.52
22.31
11.72
10.81
8.23
9.05
8.93
0.04
12.74
10.13
21.90
11.41
, 百拇医药
10.25
8.12
8.81
8.70
0.08
12.46
9.79
21.61
11.02
9.91
7.96
8.54
8.62
, 百拇医药
0.16
12.30
9.41
20.52
10.90
9.63
7.24
8.21
8.23
0.32
12.03
9.18
19.91
, 百拇医药
10.51
9.10
6.83
7.40
7.90
0.64
10.60
8.71
17.74
9.20
8.60
5.30
6.14
, 百拇医药
6.24
1.28
8.30
7.84
15.12
8.13
7.15
4.23
4.38
4.16
相关系数
-0.98
-0.92
, 百拇医药
-0.98
-0.98
-0.86
-0.84
-0.79
-0.76
3 讨论
VitC具有较强的还原性，可使某些酶分子中的巯基(-SH)保存还原状态，从而维 持它们的活性。但VitC分子中两个相邻的烯醇式羟基(第2，3位)极易释出H+，形成脱氢VitC,该反应是可逆的。故两者在体内可以互变，形成一种氧化还原系统，发挥递氢作用，参与很多氧化还原反应。
本研究建立的VitC对氧化酶法测定血糖的负影响表明，VitC在血中含量愈大，其对血糖值负干扰也愈大，回归直线也愈好，相关系数的绝对值都在0.76以上。分析其原因，我们认为本法第一步反应相当特异，第二步(辣根过氧化物酶)特异性稍差。因此，还原性物质干扰往往发生在第二步，虽然在一般情况下由于血中VitC浓度低且易于从尿中排出，对血糖测定影响不大，但在临床上大剂量使用该药物治疗时，或肾功能衰竭时，则应引起临床工作者高度重视。其机理可能为：①还原型的VitC氧化酶法测定葡萄糖反应过程中的H2O2发生反应，使得H2O2的量减少。②还原型的VitC与试剂中的辣根过氧化物酶发生反应，使后者的量减少。因此，可使血糖测定的色泽改变、减弱，所读取的光密度值下降，结果出现负偏差。
, http://www.100md.com
VitC是临床最常用的药物之一，我们认为，在临床实际工作中，不能单纯以实验室质控标本结果为依据，而忽略临床用药对血糖造成的误差。特别是当血糖值与患者的临床表现不符时，更应注意到是否有较大剂量VitC静脉滴注或口服。而糖尿病患者一般都存在不同程度的肾病变，也会加剧这种负干扰的测定值的下降。为此，在测定空腹血糖或餐后血糖前的2～3天，应停用VitC或采用邻甲苯胺法复测血糖值，以保证实验结果的可靠性，更好地指导临床治疗。 参考文献
1 Skrha J,Hass T,Sperl M,et al.A six year follow up of the relationshop between N-acetyl-β-glucosaminidase and albuminuria in relation to retionpathy.Diabetic Med,1991；8：817
1998-12-21收稿, 百拇医药
单位：咸宁医学院附属第二医院内科，咸宁 437100
关键词：
咸宁医学院学报990408 糖尿病(DM)患者以空腹或餐后血糖升高为重要特征。葡萄糖氧化酶法(简称氧化酶法)对葡萄糖的特异性和敏感性较高，可在其它单糖存在的情况下进行血糖测定，目前国内外已广泛采用。国外有报道维生素C(VitC)和谷胱甘肽等还原性物质能竞争H2O2，引起负误差，影响血糖测定结果的准确性[1]。国内尚未见有关报道，为此我们进行了VitC对氧化酶法测定糖尿病人血糖值影响的探讨。
1 资料与方法
1.1 一般资料
, 百拇医药 随机选择1997年3月～19997年4月就诊于中山医科大学孙逸仙纪念医院糖尿病专家门诊的患者8例，均为初次就诊,并具有较典型的糖尿病临床表现，均未经系统的口服降糖药或胰岛素治疗。其中男6例，女2例，年龄在40～55岁之间。
1.2 主要试剂和仪器
1.2.1 试剂
葡萄糖氧化酶(10 000u/L)，辣根过氧化物酶(5 000u/L)，对羟基苯甲酸钠(10mmol/L),4-氨基安替比林(390mmol/L)，叠氮钠(5mmol/L)，磷酸盐缓冲液(pH值7.5，100mmol/L),标准试剂由深圳晶美公司提供。葡萄糖标准应用液(5.5mmol/L)，VitC精制品，原料经乙醇二次重结晶，105℃干燥至恒重，符合中国药典(1985年版)规定。EDTA，无水乙酸钠，乙酸(分析纯)。
1.2.2 仪器
, 百拇医药
紫外分光光度计(国产751—G型，GFZ—201型，WFZ—800D2，日本日立U—2000型)。
1.3 方法
患者空腹抽静脉血3ml，盛入含有氟化钠(抗凝、抗酵解)的抗凝试管，离心取上清液，编号置4℃冰箱待测。标明测定管(U)，标准管(S)，空白管(B)。
按下列程序进行操作：U管准确吸入患者血清0.02ml，S管准确吸入葡萄糖标准液0.02ml，B管准确吸入双蒸水0.02ml，三管中分别加入标准试剂各3.0ml。混匀，置37℃水浴15min,于505mm波长，测各管吸光度(B管校正吸光度“O"点)。
按上述程序得出8例患者的空腹血糖值。尔后将各编号试管未测血清分次准确吸出0.04ml×6次分置6支空白的试管内，待校正不同含量VitC后再测。
, 百拇医药 紫外吸收光谱：取VitC精制品适量，用溶剂配制成8μg/ml溶液，于230～290nm波长范围内绘制吸收光谱，结果表明本品在264nm波长处有最大吸收峰，定为测定波长。
精密称定VitC精制品4mg。用上述4台不同型号的紫外分光光度计于264nm处测吸收度，并以直线回归方程A=0.0823C+0.008，得出含VitC 0.04, 0.08, 0.16, 0.32, 0.64和1.28μg/ml的血溶液，再分别重测血糖值。
2 结果
8例糖尿病患者空腹血糖值和不同含量VitC对其影响见表1。
表1 不同含量VitC对8例DM患者空腹血糖值的影响 VitC(μg/ml)
空腹血糖值(mmol/L)
, 百拇医药
12.90
10.52
22.31
11.72
10.81
8.23
9.05
8.93
0.04
12.74
10.13
21.90
11.41
, 百拇医药
10.25
8.12
8.81
8.70
0.08
12.46
9.79
21.61
11.02
9.91
7.96
8.54
8.62
, 百拇医药
0.16
12.30
9.41
20.52
10.90
9.63
7.24
8.21
8.23
0.32
12.03
9.18
19.91
, 百拇医药
10.51
9.10
6.83
7.40
7.90
0.64
10.60
8.71
17.74
9.20
8.60
5.30
6.14
, 百拇医药
6.24
1.28
8.30
7.84
15.12
8.13
7.15
4.23
4.38
4.16
相关系数
-0.98
-0.92
, 百拇医药
-0.98
-0.98
-0.86
-0.84
-0.79
-0.76
3 讨论
VitC具有较强的还原性，可使某些酶分子中的巯基(-SH)保存还原状态，从而维 持它们的活性。但VitC分子中两个相邻的烯醇式羟基(第2，3位)极易释出H+，形成脱氢VitC,该反应是可逆的。故两者在体内可以互变，形成一种氧化还原系统，发挥递氢作用，参与很多氧化还原反应。
本研究建立的VitC对氧化酶法测定血糖的负影响表明，VitC在血中含量愈大，其对血糖值负干扰也愈大，回归直线也愈好，相关系数的绝对值都在0.76以上。分析其原因，我们认为本法第一步反应相当特异，第二步(辣根过氧化物酶)特异性稍差。因此，还原性物质干扰往往发生在第二步，虽然在一般情况下由于血中VitC浓度低且易于从尿中排出，对血糖测定影响不大，但在临床上大剂量使用该药物治疗时，或肾功能衰竭时，则应引起临床工作者高度重视。其机理可能为：①还原型的VitC氧化酶法测定葡萄糖反应过程中的H2O2发生反应，使得H2O2的量减少。②还原型的VitC与试剂中的辣根过氧化物酶发生反应，使后者的量减少。因此，可使血糖测定的色泽改变、减弱，所读取的光密度值下降，结果出现负偏差。
, http://www.100md.com
VitC是临床最常用的药物之一，我们认为，在临床实际工作中，不能单纯以实验室质控标本结果为依据，而忽略临床用药对血糖造成的误差。特别是当血糖值与患者的临床表现不符时，更应注意到是否有较大剂量VitC静脉滴注或口服。而糖尿病患者一般都存在不同程度的肾病变，也会加剧这种负干扰的测定值的下降。为此，在测定空腹血糖或餐后血糖前的2～3天，应停用VitC或采用邻甲苯胺法复测血糖值，以保证实验结果的可靠性，更好地指导临床治疗。 参考文献
1 Skrha J,Hass T,Sperl M,et al.A six year follow up of the relationshop between N-acetyl-β-glucosaminidase and albuminuria in relation to retionpathy.Diabetic Med,1991；8：817
1998-12-21收稿, 百拇医药