抗嗜中性粒细胞胞浆抗体的酶免疫染色法
作者：马建国
单位：江苏省沭阳县人民医院检验科，江苏沭阳 223600
关键词：
临床检验杂志990414 抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophil cytoplasm antibody,ANCA)与血管炎性疾病相关，在Wegener肉芽肿病、肾脏病、结缔组织病等中有较高的诊断价值。
ANCA检测方法常用的有间接免疫荧光法(IIF法)、免疫印迹法等，均需特殊设备，一般基层医院难以开展。本文介绍一种不需特殊仪器的酶免疫染色法。
1 材料和方法
1.1 中性粒细胞涂片 取健康人肝素抗凝血加入等量用生理盐水配制的1.5 g/dl的葡聚糖，混匀、静置45 min后取血浆层轻轻加于淋巴细胞分离液上，2500 r/min离心10 min，弃上清，加3 ml冷蒸馏水溶解残留红细胞，30 s后加3 ml 18 g/L NaCl溶液恢复等渗，1000 r/min离心5 min，弃上清，用0.01 mol/L pH 7.4 PBS洗3次，最后用RPMI-1640培养液调整细胞数至2.5×105/ml，制成薄片、干燥，无水乙醇固定1 min，置-20°C备用。
1.2 酶免疫染色法 待检血清用0.01 mol/L pH 7.4 PBS作1∶10稀释，滴加于抗原片上，置湿盒内，37°C 30 min，0.01 mol/L pH 7.4 PBS洗3次，每次5 min，吹干，滴加最适工作浓度(用方阵滴定法选出)的辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗人IgG，置湿盒37°C 30 min，同上洗涤、吹干，加底物溶液(DAB-H2O2)，37°C 10 min呈色，洗涤、干燥后，在普通光学显微镜下观察结果。阴性结果细胞不着色或呈很浅的背景颜色，阳性时，嗜中性粒细胞胞浆染成黄色至深棕色。
2 结果与讨论
2.1 结果 5份用间接免疫荧光(IIF)法检测ANCA阳性的血清(其抗核抗体、类风湿因子、抗双链DNA抗体、抗ENA抗体都为阴性)，用酶免疫染色法检测都为阳性；15份IIF法检测为ANCA阴性但抗核抗体阳性的血清，用酶免疫染色法检测也都为阴性；30份正常健康人血清IIF法和酶免疫染色法检测ANCA都为阴性。
2.2 讨论 本法所测的ANCA结果与IIF法所得结果基本一致，但本法仅需普通光学显微镜，为基层医院开展这一项目提供了条件。
(1998-09-29收稿), 百拇医药
单位：江苏省沭阳县人民医院检验科，江苏沭阳 223600
关键词：
临床检验杂志990414 抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophil cytoplasm antibody,ANCA)与血管炎性疾病相关，在Wegener肉芽肿病、肾脏病、结缔组织病等中有较高的诊断价值。
ANCA检测方法常用的有间接免疫荧光法(IIF法)、免疫印迹法等，均需特殊设备，一般基层医院难以开展。本文介绍一种不需特殊仪器的酶免疫染色法。
1 材料和方法
1.1 中性粒细胞涂片 取健康人肝素抗凝血加入等量用生理盐水配制的1.5 g/dl的葡聚糖，混匀、静置45 min后取血浆层轻轻加于淋巴细胞分离液上，2500 r/min离心10 min，弃上清，加3 ml冷蒸馏水溶解残留红细胞，30 s后加3 ml 18 g/L NaCl溶液恢复等渗，1000 r/min离心5 min，弃上清，用0.01 mol/L pH 7.4 PBS洗3次，最后用RPMI-1640培养液调整细胞数至2.5×105/ml，制成薄片、干燥，无水乙醇固定1 min，置-20°C备用。
1.2 酶免疫染色法 待检血清用0.01 mol/L pH 7.4 PBS作1∶10稀释，滴加于抗原片上，置湿盒内，37°C 30 min，0.01 mol/L pH 7.4 PBS洗3次，每次5 min，吹干，滴加最适工作浓度(用方阵滴定法选出)的辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗人IgG，置湿盒37°C 30 min，同上洗涤、吹干，加底物溶液(DAB-H2O2)，37°C 10 min呈色，洗涤、干燥后，在普通光学显微镜下观察结果。阴性结果细胞不着色或呈很浅的背景颜色，阳性时，嗜中性粒细胞胞浆染成黄色至深棕色。
2 结果与讨论
2.1 结果 5份用间接免疫荧光(IIF)法检测ANCA阳性的血清(其抗核抗体、类风湿因子、抗双链DNA抗体、抗ENA抗体都为阴性)，用酶免疫染色法检测都为阳性；15份IIF法检测为ANCA阴性但抗核抗体阳性的血清，用酶免疫染色法检测也都为阴性；30份正常健康人血清IIF法和酶免疫染色法检测ANCA都为阴性。
2.2 讨论 本法所测的ANCA结果与IIF法所得结果基本一致，但本法仅需普通光学显微镜，为基层医院开展这一项目提供了条件。
(1998-09-29收稿), 百拇医药