毛细管电泳测定尿中尿酸浓度
作者：周小棉 邹晓 王毅超
单位：广州南方医院检验科，广州510515；王毅超第三军区大学93级检验系
关键词：尿；尿酸；毛细管电泳
临床检验杂志990405 摘要 为了建立一种直接测定尿中尿酸浓度的毛细管电泳方法，用pH 7.2，120 mmol/L SDS，30 mmol/L磷酸盐缓冲液作为电泳缓冲液，利用非涂渍石英毛细管21 cm×50 μm(id)，用外标法定量，检测波长235 nm，电泳运行6分钟，该法线性范围3000～47 μmol/L，最低检测限为20 μmol/L。本法日内和日间变异系数分别小于3.72%、4.48%。其平均回收率为99.6%。肌酐和尿素及常用药物对此方法无干扰。该法线性范围宽，无需作样品稀释，简单、快速，试剂消耗极微，与尿酸酶法有极好的相关性(r＝0.989)，可应用于临床样品检测。
, 百拇医药 Miyake等[1]于1991年用胶束动电毛细管电泳测定了血清肌酐和尿酸。最近，我们采用外标法建立了直接测定尿中尿酸的毛细管电泳方法，该方法具有稳定、简单、快速，重复性好，试剂消耗甚微，线性范围宽等特点。报告如下。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1 仪器 BioFocus-3000全自动毛细管电泳分析仪(Bio-Rad)，具有二极管阵列的可见紫外多波长扫描系统，自动与手动数据处理系统。最大电压30 kV。非涂渍石英毛细管长度21 cm，内径50 μm，河北永年光导纤维厂产品。
1.1.2 试剂 电泳缓冲液：pH 7.2，120 mmol/L SDS，30 mmol/L磷酸盐缓冲液；SDS(Bio-Rad)电泳纯级，其它试剂均为分析纯。尿酸标准储备液取30 mg磷酸锂(AR)，溶解在40 ml蒸馏水中，加热至60°C，使其完全溶解，精确称取尿酸(MW168.11)50.45 mg，溶解于热碳酸锂溶液中，冷却至室温，移入100 ml容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，贮存在棕色瓶中，此溶液浓度为3000 μmol/L。尿酸标准应用液：取一定量的尿酸标准贮存液，用去离子水稀释成如下系列浓度：3000，1500，750，375，187.5，93.75，46.88，23.44，11.88 μmol/L。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 取尿样品(经3000 r/min离心10分钟，取上清)100 μl左右置于样品杯中。电泳条件：以pH 7.2，120 mmol/L SDS，30 mmol/L磷酸盐缓冲液作电泳液，检测波长235 nm、电压10 kV，直接自动压力进样2秒(2 psi sec，1 psi＝6894.76 Pa)，毛细管温度20°C。
1.2.2 为了获得较好的重复性，每次运行之间用去离子水冲洗1分钟，然后用1 mol/L NaOH冲洗2分钟，再用缓冲液冲洗2分钟。
1.2.3 标准曲线制定 以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，外标法定量。
2 实验与结果
2.1 波长选择 配制一定浓度的尿酸溶液在岛津UV-3000分光光度计作吸收光谱扫描，结果见图1，在290.8 nm处有一主吸收峰，在234.8 nm处有一次吸收峰。因肌酐在235 nm处有最大吸收峰，考虑到在同一条件下检测肌酐和尿酸的可能性，所以本文选择了235 nm作为测定波长，见图1。
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图1 尿酸和肌酐的吸收光谱
2.2 电泳行为 在上述条件下，尿酸的电泳图见图2。尿酸的平均迁移时间为4.52分钟(n＝20，CV＝2.35%)。
2.3 标准曲线制作 用标准应用液进行电泳分析，以尿酸浓度为X，面积为Y。结果尿酸在3000～47 μmol/L范围内呈线性。Y＝2.11×10-3X+19.44，r＝0.9998。
图2 尿酸电泳图谱
2.4 精密度 日内(n＝20)和日间(n＝5)不精密度(CV)分别为3.72%和4.48%，
＝750 μmol/L。
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2.5 回收试验 于混合尿中加入高、中、低三个不同浓度尿酸(750、325、81.25 μmol/L)，按前述方法操作，分别测定三次，其平均回率分别为100.8%，99.4%，98.7%。
2.6 对比实验 取30份含高、中、低尿酸样品，在Corning-560 plus生化分析仪上用尿酸酶偶联过氧化物酶(λ＝520 nm)法(元生公司)测定尿酸含量(X)，结果与毛细管电泳法(Y)测定的结果对比，线性回归分析，其方程为Y＝0.963X+25.46(r＝0.989)，配对t检验，t＝1.302，P>0.05。
2.7 最低检测限 以信噪比为5作为最低检测限，尿酸的最低检测量为20 μmol/L。
2.8 干扰试验 上述电泳条件下，尿中内源性物质与肌酐、尿素等和临床常用Vit C、Vit B2等药物不干扰尿酸测定。
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3 讨论
随着电压增大，其出峰时间变短，但峰间影响增加；反之，出峰时间延长，半峰宽增加，见表1。
表1 电压对迁移时间的影响
电 压(kV)
1
5
10
15
20
25
迁移时间(分钟)
19.34
, 百拇医药
10.75
4.52
3.45
2.70
1.43
故我们选择了10 kV作为运行电压。电泳缓冲液性质对检测亦有影响，当利用硼酸缓冲液时，其分离度差，检测灵敏度亦下降。
尿尿酸毛细管电泳测定的线性范围宽，与化学方法比较，其结果可靠，操作简单，快速，可应用于临床样品检测。
参考文献
1 Miyake M,Shibukawa A,Nakagawa T.J High Resolut Chromatogr，1991，14：181
(1998-03-09收稿，1999-01-18修回), 百拇医药
单位：广州南方医院检验科，广州510515；王毅超第三军区大学93级检验系
关键词：尿；尿酸；毛细管电泳
临床检验杂志990405 摘要 为了建立一种直接测定尿中尿酸浓度的毛细管电泳方法，用pH 7.2，120 mmol/L SDS，30 mmol/L磷酸盐缓冲液作为电泳缓冲液，利用非涂渍石英毛细管21 cm×50 μm(id)，用外标法定量，检测波长235 nm，电泳运行6分钟，该法线性范围3000～47 μmol/L，最低检测限为20 μmol/L。本法日内和日间变异系数分别小于3.72%、4.48%。其平均回收率为99.6%。肌酐和尿素及常用药物对此方法无干扰。该法线性范围宽，无需作样品稀释，简单、快速，试剂消耗极微，与尿酸酶法有极好的相关性(r＝0.989)，可应用于临床样品检测。
, 百拇医药 Miyake等[1]于1991年用胶束动电毛细管电泳测定了血清肌酐和尿酸。最近，我们采用外标法建立了直接测定尿中尿酸的毛细管电泳方法，该方法具有稳定、简单、快速，重复性好，试剂消耗甚微，线性范围宽等特点。报告如下。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1 仪器 BioFocus-3000全自动毛细管电泳分析仪(Bio-Rad)，具有二极管阵列的可见紫外多波长扫描系统，自动与手动数据处理系统。最大电压30 kV。非涂渍石英毛细管长度21 cm，内径50 μm，河北永年光导纤维厂产品。
1.1.2 试剂 电泳缓冲液：pH 7.2，120 mmol/L SDS，30 mmol/L磷酸盐缓冲液；SDS(Bio-Rad)电泳纯级，其它试剂均为分析纯。尿酸标准储备液取30 mg磷酸锂(AR)，溶解在40 ml蒸馏水中，加热至60°C，使其完全溶解，精确称取尿酸(MW168.11)50.45 mg，溶解于热碳酸锂溶液中，冷却至室温，移入100 ml容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，贮存在棕色瓶中，此溶液浓度为3000 μmol/L。尿酸标准应用液：取一定量的尿酸标准贮存液，用去离子水稀释成如下系列浓度：3000，1500，750，375，187.5，93.75，46.88，23.44，11.88 μmol/L。
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1.2 方法
1.2.1 取尿样品(经3000 r/min离心10分钟，取上清)100 μl左右置于样品杯中。电泳条件：以pH 7.2，120 mmol/L SDS，30 mmol/L磷酸盐缓冲液作电泳液，检测波长235 nm、电压10 kV，直接自动压力进样2秒(2 psi sec，1 psi＝6894.76 Pa)，毛细管温度20°C。
1.2.2 为了获得较好的重复性，每次运行之间用去离子水冲洗1分钟，然后用1 mol/L NaOH冲洗2分钟，再用缓冲液冲洗2分钟。
1.2.3 标准曲线制定 以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，外标法定量。
2 实验与结果
2.1 波长选择 配制一定浓度的尿酸溶液在岛津UV-3000分光光度计作吸收光谱扫描，结果见图1，在290.8 nm处有一主吸收峰，在234.8 nm处有一次吸收峰。因肌酐在235 nm处有最大吸收峰，考虑到在同一条件下检测肌酐和尿酸的可能性，所以本文选择了235 nm作为测定波长，见图1。
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图1 尿酸和肌酐的吸收光谱
2.2 电泳行为 在上述条件下，尿酸的电泳图见图2。尿酸的平均迁移时间为4.52分钟(n＝20，CV＝2.35%)。
2.3 标准曲线制作 用标准应用液进行电泳分析，以尿酸浓度为X，面积为Y。结果尿酸在3000～47 μmol/L范围内呈线性。Y＝2.11×10-3X+19.44，r＝0.9998。
图2 尿酸电泳图谱
2.4 精密度 日内(n＝20)和日间(n＝5)不精密度(CV)分别为3.72%和4.48%，
＝750 μmol/L。, http://www.100md.com
2.5 回收试验 于混合尿中加入高、中、低三个不同浓度尿酸(750、325、81.25 μmol/L)，按前述方法操作，分别测定三次，其平均回率分别为100.8%，99.4%，98.7%。
2.6 对比实验 取30份含高、中、低尿酸样品，在Corning-560 plus生化分析仪上用尿酸酶偶联过氧化物酶(λ＝520 nm)法(元生公司)测定尿酸含量(X)，结果与毛细管电泳法(Y)测定的结果对比，线性回归分析，其方程为Y＝0.963X+25.46(r＝0.989)，配对t检验，t＝1.302，P>0.05。
2.7 最低检测限 以信噪比为5作为最低检测限，尿酸的最低检测量为20 μmol/L。
2.8 干扰试验 上述电泳条件下，尿中内源性物质与肌酐、尿素等和临床常用Vit C、Vit B2等药物不干扰尿酸测定。
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3 讨论
随着电压增大，其出峰时间变短，但峰间影响增加；反之，出峰时间延长，半峰宽增加，见表1。
表1 电压对迁移时间的影响
电 压(kV)
1
5
10
15
20
25
迁移时间(分钟)
19.34
, 百拇医药
10.75
4.52
3.45
2.70
1.43
故我们选择了10 kV作为运行电压。电泳缓冲液性质对检测亦有影响，当利用硼酸缓冲液时，其分离度差，检测灵敏度亦下降。
尿尿酸毛细管电泳测定的线性范围宽，与化学方法比较，其结果可靠，操作简单，快速，可应用于临床样品检测。
参考文献
1 Miyake M,Shibukawa A,Nakagawa T.J High Resolut Chromatogr，1991，14：181
(1998-03-09收稿，1999-01-18修回), 百拇医药