体外内皮素1对人牙髓细胞内Ca2+的影响
作者：严焱 刘正
单位：200011 上海第二医科大学口腔医学院
关键词：
体外内皮素1对人牙髓细胞内Ca2 内皮素1(endothelin-1，ET-1)具有促人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPC)增殖作用[1]。我们通过探讨ET-1对人牙髓细胞胞内Ca2+浓度的作用，及钙通道阻滞剂异博定对ET-1促Ca2+内流影响,以期揭示ET-1促HDPC增殖作用的细胞机制。
1. 材料与方法:
(1) 主要试剂 ： Fluo-3 (Sigma，U.S.A.)；乙酰甲酯(AM ，Sigma U.S.A.)；二甲基亚砜(DMSO)；F-127(Pluronic Sigma)；盐酸维拉帕米 (异博定，上海禾丰制药有限公司)。试剂配制：Fluo-3 AM 储备液及工作液；含Ca2+台氏液；无Ca2+台氏液。
, http://www.100md.com
(2) 参照Halim等[2]及Okishio等[3]介绍的方法,略作改良。分别行ET-1组与对照组、ET-1组与异博定组胞内Ca2+Fluo-3荧光染色。
(3)各组Ca2+荧光程度测试：经Fluo-3 AM标记的细胞，行显微分光光度仪扫描，并输入VIDAS图像处理系统对选取的细胞行细胞面积、平均荧光强度和Ca2+总荧光强度测定。
2.结果: ①荧光显微镜下可见ET-1组荧光强度明显强于对照组，HDPC呈典型梭形，多角型。胞浆内充满Fulo-3荧光染色，并可见Ca2+荧光结节。②钙通道阻滞剂异博定略降低ET-1激发的HDPC胞内Ca2+升高作用， 但统计学上无显著差异。
3. 讨论:以往研究发现，ET-1可激发成纤维细胞、平滑肌细胞胞内Ca2+的增加。本研究结果发现，ET-1可使HDPC内游离Ca2+浓度升高，且为快速短暂的瞬时升高，与对照组相比差异有显著性。异博定为钙通道阻滞剂，实验中发现其对ET-1激发的HDPC内Ca2+浓度升高无明显抑制作用。细胞内Ca2+浓度增加可能通过 ：①经钙通道细胞外钙流入增加；②细胞内储存钙的释放增加。本研究证明钙通道阻滞剂异博定对HDPC细胞膜上的钙通道阻断，只是部分抑制了ET-1促Ca2+通道开放的作用，致使Ca2+内流略有降低，HDPC内Ca2+呈不明显下降。曾有报道，ET-1可通过三磷酸肌醇诱使细胞内储存钙池的释放。我们认为，ET-1致使人牙髓细胞胞内Ca2+升高，可能与其调控细胞活动，提高细胞反应性，促使人牙髓细胞的分裂和增殖活动有关。然而，ET-1是否通过细胞内Ca2+动员而导致HDPC内Ca2+升高，以及 ET-1激发人牙髓细胞内游离钙浓度升高的生理、病理学意义仍需继续探讨。
, 百拇医药
参考文献
[1] 严焱.内皮素促人牙髓细胞生长作用的体外研究.上海口腔医学, 1999,8:1-2.
[2] Halim A, Kanayama N, Maradny E, et al . Endothelin-1 evoked an increase and oscillations in cytosolic calcium concentration in adherent single human platelets and increased GMP-140 (p-slectin ) in platelet suspension. Thromb Res，1995,80: 105-112.
[3] Okishio M, Ohkawa S, Ichimori Y, et al. Interaction between endothelium-derivde relaxing facter's S-nitrosothiols, and endo-thelin-1 on Ca2+ mobilization in rat vascular smooth muscle cells. Biochem Biophys Res Commun,1992,183:849-855.
收稿：1998-07-07
修回：1999-01-26
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单位：200011 上海第二医科大学口腔医学院
关键词：
体外内皮素1对人牙髓细胞内Ca2 内皮素1(endothelin-1，ET-1)具有促人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPC)增殖作用[1]。我们通过探讨ET-1对人牙髓细胞胞内Ca2+浓度的作用，及钙通道阻滞剂异博定对ET-1促Ca2+内流影响,以期揭示ET-1促HDPC增殖作用的细胞机制。
1. 材料与方法:
(1) 主要试剂 ： Fluo-3 (Sigma，U.S.A.)；乙酰甲酯(AM ，Sigma U.S.A.)；二甲基亚砜(DMSO)；F-127(Pluronic Sigma)；盐酸维拉帕米 (异博定，上海禾丰制药有限公司)。试剂配制：Fluo-3 AM 储备液及工作液；含Ca2+台氏液；无Ca2+台氏液。
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(2) 参照Halim等[2]及Okishio等[3]介绍的方法,略作改良。分别行ET-1组与对照组、ET-1组与异博定组胞内Ca2+Fluo-3荧光染色。
(3)各组Ca2+荧光程度测试：经Fluo-3 AM标记的细胞，行显微分光光度仪扫描，并输入VIDAS图像处理系统对选取的细胞行细胞面积、平均荧光强度和Ca2+总荧光强度测定。
2.结果: ①荧光显微镜下可见ET-1组荧光强度明显强于对照组，HDPC呈典型梭形，多角型。胞浆内充满Fulo-3荧光染色，并可见Ca2+荧光结节。②钙通道阻滞剂异博定略降低ET-1激发的HDPC胞内Ca2+升高作用， 但统计学上无显著差异。
3. 讨论:以往研究发现，ET-1可激发成纤维细胞、平滑肌细胞胞内Ca2+的增加。本研究结果发现，ET-1可使HDPC内游离Ca2+浓度升高，且为快速短暂的瞬时升高，与对照组相比差异有显著性。异博定为钙通道阻滞剂，实验中发现其对ET-1激发的HDPC内Ca2+浓度升高无明显抑制作用。细胞内Ca2+浓度增加可能通过 ：①经钙通道细胞外钙流入增加；②细胞内储存钙的释放增加。本研究证明钙通道阻滞剂异博定对HDPC细胞膜上的钙通道阻断，只是部分抑制了ET-1促Ca2+通道开放的作用，致使Ca2+内流略有降低，HDPC内Ca2+呈不明显下降。曾有报道，ET-1可通过三磷酸肌醇诱使细胞内储存钙池的释放。我们认为，ET-1致使人牙髓细胞胞内Ca2+升高，可能与其调控细胞活动，提高细胞反应性，促使人牙髓细胞的分裂和增殖活动有关。然而，ET-1是否通过细胞内Ca2+动员而导致HDPC内Ca2+升高，以及 ET-1激发人牙髓细胞内游离钙浓度升高的生理、病理学意义仍需继续探讨。
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参考文献
[1] 严焱.内皮素促人牙髓细胞生长作用的体外研究.上海口腔医学, 1999,8:1-2.
[2] Halim A, Kanayama N, Maradny E, et al . Endothelin-1 evoked an increase and oscillations in cytosolic calcium concentration in adherent single human platelets and increased GMP-140 (p-slectin ) in platelet suspension. Thromb Res，1995,80: 105-112.
[3] Okishio M, Ohkawa S, Ichimori Y, et al. Interaction between endothelium-derivde relaxing facter's S-nitrosothiols, and endo-thelin-1 on Ca2+ mobilization in rat vascular smooth muscle cells. Biochem Biophys Res Commun,1992,183:849-855.
收稿：1998-07-07
修回：1999-01-26
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