人舌癌顺铂—白蛋白微球栓塞性化疗后增殖细胞核抗原及血管改变的免疫组织化学研究
作者：郑根建 温玉明 王昌美
单位：730070兰州，解放军第473医院(郑根建)610041成都，华西医科大学口腔医学院(温玉明，王昌美)
关键词：人舌癌；顺铂—白蛋白微球；栓塞性化疗；增殖细胞核抗原；血管密度
临床口腔医学杂志990404 提 要 本实验通过定量免疫组化方法，研究了舌癌顺铂白蛋白微球栓塞治疗前后肿瘤中血管和增殖细胞的改变及其相互关系，发现两者在栓塞后随着时间的推移均逐渐减少，前者至灌注后四周时已接近正常舌粘膜水平，灌注后五周与正常舌膜无显著差异,在粘膜下组织中已无法发现PCNA染色阳性的肿瘤细胞，后者至第四周时已接正常舌粘膜水平。两者间变化呈指数曲线正相关关系，从而为基于阻断肿瘤血供及药物缓慢持续作用的舌癌含药微球栓塞性化疗提供了实验研究的依据，说明将增殖细胞阳性比例作为治疗效果的监测指标是切实可行的。
, 百拇医药 Immunohistochemistry study of proliferating cell nuclear antigen(PCNA) and vessel density before/after chemoembolization of cisplatinalbumin microspheres in human tongue cancer.
Zheng Genjian
(department of stomatology, the 473rd hospital of PLA)
Wen YuMing Wang ChangMei
(College of stomatology, West china Univesity of Medical Sciences).
, 百拇医药
Abstract Proliferating cell nuclear antigen(PCNA)and vessel density as well as it’s relationship were studied before/after chemoembolization of cisplatin-albumin microspheres using quantitative immunohistochemistry staining. The result showed that the tumor vessel density and the ratio of proferating cell decreased progressively after embolization of cisplatin-albumin microspheres and attained normal level at 4 weeks postperfusion. The varition of thoso two index presented exponential curve relationship and using the PCNA ratio as monitor index for curative effect was practical.
, 百拇医药
Key words human tongue cancer cisplatin-albumin microspheres chemoembolization proliferating cell nuclear antigen(PCNA) vessel density
本实验采用高灵敏度的LSAB染色法，定量检测人舌癌顺铂白蛋白微球栓塞化疗前后血管密度和增殖细胞核抗原阳性细胞比例，研究两者之间的相关关系，从而对临床疗效进行评价。
材料与方法
研究对象
本组舌癌病例共11例，其中男性6例，女性5例，年龄32～68岁，舌腹部鳞癌1例，舌缘鳞癌10例。计数高倍镜(10×40)下肿瘤团块中的PCNA阳性细胞数，肿瘤组织中任何单一的，明显褐色的并与周围细胞明显分离的细胞均被计数，测量方法同血管密度。共计10个视野，取平均数，即得出每个标本的增殖细胞比例(增殖细胞数/细胞总数×100%)。
, 百拇医药
LSAB免疫组化染色及血管密度、增殖细胞计数，分别请有经验的病理医师取双盲法进行，以确保结果的可靠性。
结 果
1. PCNA阳性定位分布
正常舌粘膜中有少量阳性细胞，局限在基底细胞层(图1)。舌癌灌注前阳性细胞比例明显增高，分布不均匀，主要分布在癌巢周围的基底细胞区和癌周边区(图2)。灌注后各个不同时期，阳性细胞比例逐渐下降，表现为周边区及基底区阳性细胞减少，到第五周时，已无PCNA阳性的肿瘤细胞，仅在粘膜下组织中有散在PCNA染色阳性的炎性细胞和成纤维细胞分布，舌粘膜中PCNA分布和正常舌粘膜相似(图3，4，5)。
2. F8—RA阳性定位分布
F8—RA主要表现为点状阳性，被染成褐色，定位于内皮细胞质中，正常口腔粘膜仅见粘膜下少量血管散在分布(图5)。舌癌灌注前微血管密度明显增加，集中分布在细胞增殖旺盛区域的间质内(图6)。术后F8—RA逐渐减少，到第四周时已基本恢复至正常粘膜水平。F8—RA与PCNA阳性分布相一致(图7，8)。
, 百拇医药
图1 正常人舌粘膜基底细胞层中有少量PCNA阳性细胞，PCNA呈颗粒状分布，被染成褐色，局限在细胞核中。LSAB法免疫组化染色×20
图2 人舌癌CDDP—AMS灌注前PCNA阳性细胞比例明显高，分布均匀，主要分布在癌巢周围的基底细胞区和癌周边区。LSAB法免疫组化染色×20。
图3 CDDP—AMS灌注后一周，PCNA阳性细胞比例有所下降，分布基本和灌注前相同。LSAB法免疫组化染色×20
图4 CDDP—AMP灌注后五周，PCNA阳性细胞比例和正常舌粘膜相似，主要分布在粘膜基底细胞的细胞核中，粘膜下结缔组织中有散在的PCNA阳性细胞(炎性细胞或成纤维细胞)分布。LSAB法免疫组化染色×20
图5 正常人舌粘膜下有少量Ⅷ因子相关抗原(F8—RA)分布，为点状分布，被染成褐色，定位于内皮细胞质中，LSAB法免疫组化染色×20
, http://www.100md.com
图6 CDDP—AMS灌注前舌癌微血管密度明显增加，集中分布在细胞增殖旺盛区域(癌巢周围)的间质中。LSAB法免疫组化染色×20
图7 CDDP—AMS灌注后一周，人舌癌微血管密度有所下降，分布基本和灌注前相同。LSAB免疫组化染色×20
图8 CDDP—AMS灌注后四周，微血管密度基本和正常舌粘膜接近。LSAB法免疫组化染色×20
3.LSAB法染色计量检测
增殖细胞比例(%)和血管密度(条/mm2)测量结果如(表2)。
表2 增殖细胞比例(%)和血管密度(条/mm2)(%)测量结果 分 组
增殖细胞x±s
, 百拇医药
血管密度(x±s)
正常舌粘膜
14.40±1.04
16.7197±2.1397
灌注前
69.84±2.71
53.7420±2.0981
灌注后一周
55.43±2.11
40.0080±1.9794
灌注后二周
45.46±1.66
, 百拇医药
29.2596±1.8883
灌注后三周
32.77±1.63
22.2930±2.2597
灌注后四周
17.22±1.67
16.9188±1.9344
灌注后五周
0
16.5207±2.6622
灌注后六周
0
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16.7261±2.9967
各测量指标经Bartlett-Box方差齐性检验，变量代换后方差为齐性，两两比较q检验。增殖细胞比例，灌注前舌癌组和正常舌粘膜组差异显著(P<0.05)，各实验组除灌注后五、六周组无显著性差异(P<0.05)外，其余各组均有显著性差异(P<0.05),血管密度除正常舌粘膜组、灌注后四周、五周、六周组间无显著性差异(P〈0.05)外，其余各组间均有显著性差异(P<0.05)。
从表中可知增殖细胞比例灌注后逐渐下降，到第四周时已接近正常舌粘膜水平，灌注后五周与正常舌粘膜无显著差异,在粘膜下组织中已无法发现肿瘤细胞，仅有一些PCNA染色阳性的炎性细胞或成纤维细胞(未计数入内)，粘膜上皮中PCNA阳性细胞分布和正常舌粘膜相似。血管密度也逐渐下降，到第四周时已接近正常舌粘膜水平，灌注后四周血管密度是灌注前的31.58%，减少68.52%。
4. 增殖细胞比例与微血管密度关系
, 百拇医药
将灌注前及灌注后相同区域的增殖细胞比例和微血管密度绘制散点图，散点呈指数曲线趋势。
经统计学曲线拟合得曲线方程：
=-128.068879+115.2672171gx(r2=0.92896)，经方差分析，方程有意义，lgx、Y之间有线性依存关系(P<0.01)。
讨 论
增殖细胞核抗原(PCNA)是一种非组蛋白，分子量为36KD，功能是作为DNA聚合酶δ的辅因子，可加速DNA聚合酶的作用，直接参加DNA合成〔3〕。人类PCNA的全部基因序列已确定，PCNA是一种稳定的细胞周期相关核蛋白，在细胞周期中表达不明，其合成直接与细胞的增殖相关。PCNA水平在G1中期迅速增加，在G/S期交界达到高峰，S期维持高水平，G2期开始下降，M期及G1早期为低水平〔4〕。PCNA mRNA一般仅积聚在增殖细胞中，而在静止的细胞中则缺乏〔5，6〕，因此，它在DNA合成和细胞增殖调控中起重要作用。Hall〔7〕等报告了PCNA在正常组织内的分布。本实验结果发现，PCNA在正常舌粘膜表达弱而规律，在舌癌细胞表达明显增多，分布不均匀，当微球栓塞治疗后，随着时间的推移，增殖细胞阳性比例逐步下降，最后完全和正常舌粘膜相似。
, http://www.100md.com
F8—RA由血管内皮、巨核细胞以及血小板生成。组织培养的内皮细胞也可分泌第Ⅷ因子前体，应用针对血管内皮细胞的单克隆抗体F8—RA免疫组化染色，可特异性地使微血管内皮染色。肿瘤内毛细血管尽管不存在肿瘤的去分化，但对F8RA却呈强染色。本实验中，F8RA在正常舌粘膜下有少量散在分布，而在舌癌中有大量分布，且不均匀，其分布区域与PCNA阳性细胞分布一致,随着CDDP—AMS超选择性栓塞后时间推移，血管数目逐渐减少，其周围的增殖细胞亦相应减少，至灌注后第四周时，血管计量接近正常舌粘膜水平，PCNA阳性细胞比例也接近正常，说明了癌细胞增殖活动性和血管间有依存关系，其结果与李宏卫〔8〕观察的临床疗效相吻合。
本实验发现舌癌栓塞治疗后，微血管的改变和增殖细胞改变呈指数曲线正相关关系，可以推知：①肿瘤周围血管越丰富，癌细胞增殖越旺盛，只要阻断肿瘤内血流供应，降低血管密度，可以阻碍肿瘤细胞的增殖活动，限制肿瘤生长。顺铂白蛋白微球栓塞后，微球可以阻断血供，而顺铂除杀伤肿瘤细胞外，还可使血管内皮细胞损伤。因此，基于阻断肿瘤血供及抗癌药物持续作用的舌动脉微球栓塞治疗是一种有效而极有前景的治疗手段。②顺铂作为细胞非周期特异性药物，对细胞各增殖周期及后期细胞均有杀伤作用，能抑制DNA前期蛋白质及RNA的合成，并能阻止癌细胞DNA的复制〔9〕，其单纯化疗虽然对癌细胞大量杀伤，但残余的肿瘤细胞增殖活动存在，又有可能诱发新血管生成，促进了肿瘤细胞的大量增殖，因而单纯化疗只能作为术前、后的辅助治疗,不能达到根治瘤的目的。③空白微球单纯性栓塞，虽然暂时阻断血供，但由于微球降解后，血流再通，不如顺铂微球携带的化疗药物本身对血管壁有破坏作用，因此其抑制血管作用不如含药微球彻底，因此也只能起到缩小肿瘤的作用，不能使舌癌彻底根治，这和临床疗效的观察一致〔8〕。
, 百拇医药
参考文献
1 Jani S,Filipe NT, Hall PA, et al. Application of proliferating cellnuclear antigen(PCNA) immunostaining ingastric carcinoma. J Pathol. 1990;161(4) :351
2 Hall PA, Lerison DA. Assessment of cell proliferation in histological material. J Clin Pathol. 1990;43(3):184_192
3 Bravo R, Frank R, Blundell PA, et al. Cyclin/PCNA is the auxiliary protein DNA polymerase alpha. Nature. 1987;326:515
, http://www.100md.com
4 Celis JE, Celis A. Cell cycl dependent variations in the distribution of the nuclear protein cyclin proliferating cell nuclear antigen in cultured cell: Subdivision of S phase. Proc Natl Acad Sci USA. 1985;82:3262
5 Chang CD. Ottavio L, Travalli S, et al. Transcriptional and posttranscriptional regulation of the proliferating cell nuclear antigen gene. Mol Cell Biol. 1990;10:3299
6 Ottavi L, Chang CD, Rizzo MG, et al. Importance of introns in the growth regulation of mRNA levels of the proliferating cell nuclear antigen gene. Mol cell Biol. 1990;10:303
, 百拇医药
7 Hall PA, Levison DA, Wood AL, et al. Proliferating cell nuelear antigen (PCNA) immunolocation in paraffin sections: A index of cell proliferation with evidence of deregulated expression in some neoplasms, J Pathol. 1990;162:285
8 李宏卫.舌癌动脉栓塞治疗的临床及相关基础研究。硕士论文.1996年
9 Sorenson CM, Barry MA, Eastman A. Analysis of events associated with cell cycle arrest at G2 phase and cell death induce by cisplatin. J Natl Cancer Inst. 1990;82:749
(收稿：1998—12—13)
(修回：1999—04—05), http://www.100md.com
单位：730070兰州，解放军第473医院(郑根建)610041成都，华西医科大学口腔医学院(温玉明，王昌美)
关键词：人舌癌；顺铂—白蛋白微球；栓塞性化疗；增殖细胞核抗原；血管密度
临床口腔医学杂志990404 提 要 本实验通过定量免疫组化方法，研究了舌癌顺铂白蛋白微球栓塞治疗前后肿瘤中血管和增殖细胞的改变及其相互关系，发现两者在栓塞后随着时间的推移均逐渐减少，前者至灌注后四周时已接近正常舌粘膜水平，灌注后五周与正常舌膜无显著差异,在粘膜下组织中已无法发现PCNA染色阳性的肿瘤细胞，后者至第四周时已接正常舌粘膜水平。两者间变化呈指数曲线正相关关系，从而为基于阻断肿瘤血供及药物缓慢持续作用的舌癌含药微球栓塞性化疗提供了实验研究的依据，说明将增殖细胞阳性比例作为治疗效果的监测指标是切实可行的。
, 百拇医药 Immunohistochemistry study of proliferating cell nuclear antigen(PCNA) and vessel density before/after chemoembolization of cisplatinalbumin microspheres in human tongue cancer.
Zheng Genjian
(department of stomatology, the 473rd hospital of PLA)
Wen YuMing Wang ChangMei
(College of stomatology, West china Univesity of Medical Sciences).
, 百拇医药
Abstract Proliferating cell nuclear antigen(PCNA)and vessel density as well as it’s relationship were studied before/after chemoembolization of cisplatin-albumin microspheres using quantitative immunohistochemistry staining. The result showed that the tumor vessel density and the ratio of proferating cell decreased progressively after embolization of cisplatin-albumin microspheres and attained normal level at 4 weeks postperfusion. The varition of thoso two index presented exponential curve relationship and using the PCNA ratio as monitor index for curative effect was practical.
, 百拇医药
Key words human tongue cancer cisplatin-albumin microspheres chemoembolization proliferating cell nuclear antigen(PCNA) vessel density
本实验采用高灵敏度的LSAB染色法，定量检测人舌癌顺铂白蛋白微球栓塞化疗前后血管密度和增殖细胞核抗原阳性细胞比例，研究两者之间的相关关系，从而对临床疗效进行评价。
材料与方法
研究对象
本组舌癌病例共11例，其中男性6例，女性5例，年龄32～68岁，舌腹部鳞癌1例，舌缘鳞癌10例。计数高倍镜(10×40)下肿瘤团块中的PCNA阳性细胞数，肿瘤组织中任何单一的，明显褐色的并与周围细胞明显分离的细胞均被计数，测量方法同血管密度。共计10个视野，取平均数，即得出每个标本的增殖细胞比例(增殖细胞数/细胞总数×100%)。
, 百拇医药
LSAB免疫组化染色及血管密度、增殖细胞计数，分别请有经验的病理医师取双盲法进行，以确保结果的可靠性。
结 果
1. PCNA阳性定位分布
正常舌粘膜中有少量阳性细胞，局限在基底细胞层(图1)。舌癌灌注前阳性细胞比例明显增高，分布不均匀，主要分布在癌巢周围的基底细胞区和癌周边区(图2)。灌注后各个不同时期，阳性细胞比例逐渐下降，表现为周边区及基底区阳性细胞减少，到第五周时，已无PCNA阳性的肿瘤细胞，仅在粘膜下组织中有散在PCNA染色阳性的炎性细胞和成纤维细胞分布，舌粘膜中PCNA分布和正常舌粘膜相似(图3，4，5)。
2. F8—RA阳性定位分布
F8—RA主要表现为点状阳性，被染成褐色，定位于内皮细胞质中，正常口腔粘膜仅见粘膜下少量血管散在分布(图5)。舌癌灌注前微血管密度明显增加，集中分布在细胞增殖旺盛区域的间质内(图6)。术后F8—RA逐渐减少，到第四周时已基本恢复至正常粘膜水平。F8—RA与PCNA阳性分布相一致(图7，8)。
, 百拇医药
图1 正常人舌粘膜基底细胞层中有少量PCNA阳性细胞，PCNA呈颗粒状分布，被染成褐色，局限在细胞核中。LSAB法免疫组化染色×20
图2 人舌癌CDDP—AMS灌注前PCNA阳性细胞比例明显高，分布均匀，主要分布在癌巢周围的基底细胞区和癌周边区。LSAB法免疫组化染色×20。
图3 CDDP—AMS灌注后一周，PCNA阳性细胞比例有所下降，分布基本和灌注前相同。LSAB法免疫组化染色×20
图4 CDDP—AMP灌注后五周，PCNA阳性细胞比例和正常舌粘膜相似，主要分布在粘膜基底细胞的细胞核中，粘膜下结缔组织中有散在的PCNA阳性细胞(炎性细胞或成纤维细胞)分布。LSAB法免疫组化染色×20
图5 正常人舌粘膜下有少量Ⅷ因子相关抗原(F8—RA)分布，为点状分布，被染成褐色，定位于内皮细胞质中，LSAB法免疫组化染色×20
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图6 CDDP—AMS灌注前舌癌微血管密度明显增加，集中分布在细胞增殖旺盛区域(癌巢周围)的间质中。LSAB法免疫组化染色×20
图7 CDDP—AMS灌注后一周，人舌癌微血管密度有所下降，分布基本和灌注前相同。LSAB免疫组化染色×20
图8 CDDP—AMS灌注后四周，微血管密度基本和正常舌粘膜接近。LSAB法免疫组化染色×20
3.LSAB法染色计量检测
增殖细胞比例(%)和血管密度(条/mm2)测量结果如(表2)。
表2 增殖细胞比例(%)和血管密度(条/mm2)(%)测量结果 分 组
增殖细胞x±s
, 百拇医药
血管密度(x±s)
正常舌粘膜
14.40±1.04
16.7197±2.1397
灌注前
69.84±2.71
53.7420±2.0981
灌注后一周
55.43±2.11
40.0080±1.9794
灌注后二周
45.46±1.66
, 百拇医药
29.2596±1.8883
灌注后三周
32.77±1.63
22.2930±2.2597
灌注后四周
17.22±1.67
16.9188±1.9344
灌注后五周
0
16.5207±2.6622
灌注后六周
0
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16.7261±2.9967
各测量指标经Bartlett-Box方差齐性检验，变量代换后方差为齐性，两两比较q检验。增殖细胞比例，灌注前舌癌组和正常舌粘膜组差异显著(P<0.05)，各实验组除灌注后五、六周组无显著性差异(P<0.05)外，其余各组均有显著性差异(P<0.05),血管密度除正常舌粘膜组、灌注后四周、五周、六周组间无显著性差异(P〈0.05)外，其余各组间均有显著性差异(P<0.05)。
从表中可知增殖细胞比例灌注后逐渐下降，到第四周时已接近正常舌粘膜水平，灌注后五周与正常舌粘膜无显著差异,在粘膜下组织中已无法发现肿瘤细胞，仅有一些PCNA染色阳性的炎性细胞或成纤维细胞(未计数入内)，粘膜上皮中PCNA阳性细胞分布和正常舌粘膜相似。血管密度也逐渐下降，到第四周时已接近正常舌粘膜水平，灌注后四周血管密度是灌注前的31.58%，减少68.52%。
4. 增殖细胞比例与微血管密度关系
, 百拇医药
将灌注前及灌注后相同区域的增殖细胞比例和微血管密度绘制散点图，散点呈指数曲线趋势。
经统计学曲线拟合得曲线方程：
=-128.068879+115.2672171gx(r2=0.92896)，经方差分析，方程有意义，lgx、Y之间有线性依存关系(P<0.01)。讨 论
增殖细胞核抗原(PCNA)是一种非组蛋白，分子量为36KD，功能是作为DNA聚合酶δ的辅因子，可加速DNA聚合酶的作用，直接参加DNA合成〔3〕。人类PCNA的全部基因序列已确定，PCNA是一种稳定的细胞周期相关核蛋白，在细胞周期中表达不明，其合成直接与细胞的增殖相关。PCNA水平在G1中期迅速增加，在G/S期交界达到高峰，S期维持高水平，G2期开始下降，M期及G1早期为低水平〔4〕。PCNA mRNA一般仅积聚在增殖细胞中，而在静止的细胞中则缺乏〔5，6〕，因此，它在DNA合成和细胞增殖调控中起重要作用。Hall〔7〕等报告了PCNA在正常组织内的分布。本实验结果发现，PCNA在正常舌粘膜表达弱而规律，在舌癌细胞表达明显增多，分布不均匀，当微球栓塞治疗后，随着时间的推移，增殖细胞阳性比例逐步下降，最后完全和正常舌粘膜相似。
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F8—RA由血管内皮、巨核细胞以及血小板生成。组织培养的内皮细胞也可分泌第Ⅷ因子前体，应用针对血管内皮细胞的单克隆抗体F8—RA免疫组化染色，可特异性地使微血管内皮染色。肿瘤内毛细血管尽管不存在肿瘤的去分化，但对F8RA却呈强染色。本实验中，F8RA在正常舌粘膜下有少量散在分布，而在舌癌中有大量分布，且不均匀，其分布区域与PCNA阳性细胞分布一致,随着CDDP—AMS超选择性栓塞后时间推移，血管数目逐渐减少，其周围的增殖细胞亦相应减少，至灌注后第四周时，血管计量接近正常舌粘膜水平，PCNA阳性细胞比例也接近正常，说明了癌细胞增殖活动性和血管间有依存关系，其结果与李宏卫〔8〕观察的临床疗效相吻合。
本实验发现舌癌栓塞治疗后，微血管的改变和增殖细胞改变呈指数曲线正相关关系，可以推知：①肿瘤周围血管越丰富，癌细胞增殖越旺盛，只要阻断肿瘤内血流供应，降低血管密度，可以阻碍肿瘤细胞的增殖活动，限制肿瘤生长。顺铂白蛋白微球栓塞后，微球可以阻断血供，而顺铂除杀伤肿瘤细胞外，还可使血管内皮细胞损伤。因此，基于阻断肿瘤血供及抗癌药物持续作用的舌动脉微球栓塞治疗是一种有效而极有前景的治疗手段。②顺铂作为细胞非周期特异性药物，对细胞各增殖周期及后期细胞均有杀伤作用，能抑制DNA前期蛋白质及RNA的合成，并能阻止癌细胞DNA的复制〔9〕，其单纯化疗虽然对癌细胞大量杀伤，但残余的肿瘤细胞增殖活动存在，又有可能诱发新血管生成，促进了肿瘤细胞的大量增殖，因而单纯化疗只能作为术前、后的辅助治疗,不能达到根治瘤的目的。③空白微球单纯性栓塞，虽然暂时阻断血供，但由于微球降解后，血流再通，不如顺铂微球携带的化疗药物本身对血管壁有破坏作用，因此其抑制血管作用不如含药微球彻底，因此也只能起到缩小肿瘤的作用，不能使舌癌彻底根治，这和临床疗效的观察一致〔8〕。
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参考文献
1 Jani S,Filipe NT, Hall PA, et al. Application of proliferating cellnuclear antigen(PCNA) immunostaining ingastric carcinoma. J Pathol. 1990;161(4) :351
2 Hall PA, Lerison DA. Assessment of cell proliferation in histological material. J Clin Pathol. 1990;43(3):184_192
3 Bravo R, Frank R, Blundell PA, et al. Cyclin/PCNA is the auxiliary protein DNA polymerase alpha. Nature. 1987;326:515
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4 Celis JE, Celis A. Cell cycl dependent variations in the distribution of the nuclear protein cyclin proliferating cell nuclear antigen in cultured cell: Subdivision of S phase. Proc Natl Acad Sci USA. 1985;82:3262
5 Chang CD. Ottavio L, Travalli S, et al. Transcriptional and posttranscriptional regulation of the proliferating cell nuclear antigen gene. Mol Cell Biol. 1990;10:3299
6 Ottavi L, Chang CD, Rizzo MG, et al. Importance of introns in the growth regulation of mRNA levels of the proliferating cell nuclear antigen gene. Mol cell Biol. 1990;10:303
, 百拇医药
7 Hall PA, Levison DA, Wood AL, et al. Proliferating cell nuelear antigen (PCNA) immunolocation in paraffin sections: A index of cell proliferation with evidence of deregulated expression in some neoplasms, J Pathol. 1990;162:285
8 李宏卫.舌癌动脉栓塞治疗的临床及相关基础研究。硕士论文.1996年
9 Sorenson CM, Barry MA, Eastman A. Analysis of events associated with cell cycle arrest at G2 phase and cell death induce by cisplatin. J Natl Cancer Inst. 1990;82:749
(收稿：1998—12—13)
(修回：1999—04—05), http://www.100md.com