清开灵和干扰素对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响
作者：金威尔 张俊华 林 颖 张国安
单位：金威尔、张俊华、林颖：福建中医学院附属人民医院眼科(福州350004)；张国安：中国人民解放军第476医院临床免疫研究室
关键词：翼状胬肉；清开灵；成纤维细胞；α-干扰素；γ-干扰素
中国中医眼科杂志990403 摘要 目的：研究清开灵注射液、α-干扰素 ( α- interferon, α - INF )和γ-干扰素(γ-interferon, γ-INF ) 对翼状胬肉成纤维细胞体外增殖的影 响。方法：用组织培养技术建立翼状胬肉成纤维细胞系。用MTT比色法 测定清开灵注射液、α-INF和γ-INF对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响。结果：清开灵注射液、α-INF和γ-INF可以明显抑制翼状胬肉成纤维细胞 的增殖，并呈剂量依赖效应。结论：清开灵注射液、α-INF和γ-INF均能 有效抑制体外翼状胬肉成纤维细胞的生长。
, http://www.100md.com
An experimental research about effect of qingkeiling (清开灵)
and interferon on the proliferation of cultivated
pterygium fibroblast
Jin Weier, Zheng Junhua, Lin Ying, et at.
Department of Ophthalmology, the Affiliated Renmin g Hospital of Fujian Traditional Chinese Medical College, Fuzhou 350004, China
Key words pterygium qingkailing (清开灵) fibroblast interferon-alpha interferon-gamma
, 百拇医药
Abstract OBJECTIVE: To investigate the effect of qingkailing(清开灵) injection, interferon-alpha (α-INF) and interfer on-gamma (γ-INF ) on the proliferation of pterygium fibroblast. METH ODS: Tissue culture technique was applied to establish the pterygium fib ronblast from culture specimen. The effect of qingkailing, α-INF, γ-INF on p roliferation of the pterygium fibroblast were detected with MTT colorimetry. RESULTS: Qingkailing, α-INF andγ-IFN could inhibit obvi ously the proliferation of pyerygium fibroblast. This influencing extent depende d on dosage. CONCLUSIONS: Qingkailing, α-INF and γ-INF and cou ld inhibit severally the proliferation of experimental pterygium fibroblast.
, 百拇医药
翼状胬肉是眼科的常见多发病，但对其病变本质及发病机理仍有争议，临床至今也缺少根治 的理想疗法。故研究其病变本质及寻找有效的防治措施，是目前急需解决的课题之一，病理 学研究表明，翼状胬肉的主要成份是大量增生的成纤维细胞，并由其导致相应的病变〔1〕。近年来，清开灵在眼科临床上越来越受到重视，并用于许多眼病的治疗〔2，3 〕。从1998年5月～12月我们对清开灵注射液、α-干扰素(α-interferon,γ- INF)和γ-干扰素(α-interferon,γ-INF)对翼状胬肉成纤维细胞体外增殖的影响进行了研究，希望能为临床治疗翼状胬肉提供新的有效的方法。
1 材料与方法
1.1 材料
RPMI 1640培养基为美国Gibco公司产品；胎牛血清为北京邦定公司产品，清开灵注射液系北 京 中医学院实验药厂产品，α-INF由深圳兴科公司生产；γ-INF由第二军医大学提供；MTT系Fluka公司产品；DMSO、胰蛋白酶为Sigma公司产品。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 翼状胬肉成纤维细胞的培养：培养组织取自 1998年5～12月本院眼科手术切除的原发性翼状胬肉标本，采用组织培养技术〔4〕，建立翼状胬肉成纤维细胞株，实验所用细胞为第3～5代细胞。
1.2.2 测定不同浓度的清开灵注射液、α-INF和 γ -INF对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响：将贴壁培养的翼状胬肉成纤维细胞用0.25%胰蛋 白酶消化后，接种于96孔培养板(Linbro)中，贴壁后加入含有不同浓度的清开灵注射液、α -INF和γ-INF的无血清RPMI1640培养液。对照组只加培养液，每组设3复孔，培养48h，吸出培养液，加入经浓度为0.05%的MTT，继续培养6h，用PBS冲洗两次后加入DMSO振荡混匀，用酶联免疫测定仪(美国Bio-Rad)测定570nm处吸光度值A。
1.2.3 统计学处理：所有结果均以
±s表示，组间比较采用配对t检验。
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2 结果
2.1 不同浓度清开灵注射液对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响
10%～40%终浓度的清开灵注射液均可显著抑制成纤维细胞的增殖，且呈剂量依赖效应，见表 1。
表1 清开灵对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响 组 别
药物浓度(%)
A值(±s)
t值
P值
对照组
0
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0.316±0.01
—
—
清开灵
1
0.312±0.02
2.167
>0.05
10
0.297±0.02
2.724
<0.05
20
, 百拇医药
0.251±0.03
3.221
<0.05
30
0.228±0.01
4.106
<0.01
40
0.185±0.02
4.385
<0.01
2.2 不同浓度的α-INF和γ-INF 对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响
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α-INF 102～104u/ml，γ-INF 102～104u/ml，均可显著抑制 成纤维细胞增殖，且均呈剂量依赖效应，见表2。
表2 干扰素对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响 组 别
细胞因子
浓度(u/ml)
A值(±s)
t值
P值
对照组
0
, 百拇医药
0.316±0.01
—
—
α-INF组
10
0.318±0.02
2.324
>0.05
102
0.282±0.02
2.665
<0.05
, http://www.100md.com
103
0.261±0.02
3.177
<0.05
104
0.164±0.01
4.782
<0.01
γ-INF组
10
0.274±0.03
2.801
, 百拇医药
<0.05
102
0.236±0.02
4.099
<0.01
103
0.185±0.02
4.385
<0.01
104
0.127±0.01
5.124
, 百拇医药
<0.01
3 讨论
翼状胬肉的病因仍不明确，目前治疗仍以手术切除为主，但术后复发率较高，寻找高效低毒的防止翼状胬肉术后复发的药物是一项重要课题。清开灵是以安宫牛黄丸为基 础配方提取而成的复方中药制品，主要成份有牛黄、水牛角、黄芩、金银花、杞子等，有清热解毒、化痰、祛痰通络、醒脑开窍之功效〔3〕。据资料记载本药有显著的抗炎免疫作用，这种抗炎免疫作用类似于环胞霉素，且与之协同〔5〕。
干扰素是一组由淋巴细胞、成纤维细胞经诱导产生的糖蛋白，它可以作用于纤维化过程的多个环节，可调节成纤维细胞的功能，可有效地治疗纤维性疾病〔6〕；还能抑制成 纤维细胞的趋化和增殖，从而抑制胶原的合成和分泌〔7〕。在本研究中，清开灵注 射液、α-INF和γ-INF均能明显抑制翼状胬肉成纤维细胞的体外增殖活性，且均呈剂量依 赖效应，提示清开灵、α-INF和γ-INF三者可能是一组有效的防治翼状胬肉复发的药物 ，且没有丝裂霉素、5-Fu等抗代谢药物的毒性，因此，具有极好的临床应用前景。
, 百拇医药
参考文献
1 Hill J C,Maske R.Pathogenesis of ptergium.Eye，1989，3：218
2 池珍儿，胡谷冰.口服清开灵防止翼状胬肉术后复发的疗效观察.中国中医眼科 杂志，1996，6：97
3 宋 立.清开灵在眼科的应用示例.中国中医眼科杂志，1993，3：231
4 鄂 征.组织培养技术.第2版.北京：北京人民出版社，1993，125
5 胡土星，李绍珍.葡萄膜炎的治疗(综述与译文).国外医学*眼科学分册，1990 ，14：260
6 顾金文.细胞因子与内眼术后纤维形成的关系.国外医学*眼科学分册，1995， 19：51
7 顾宝文.细胞因子与内眼术后纤维形成的关系.国外医学*眼科学分册，1995， 19：51
收稿：1999-03-04；修回：1999-08-28, 百拇医药
单位：金威尔、张俊华、林颖：福建中医学院附属人民医院眼科(福州350004)；张国安：中国人民解放军第476医院临床免疫研究室
关键词：翼状胬肉；清开灵；成纤维细胞；α-干扰素；γ-干扰素
中国中医眼科杂志990403 摘要 目的：研究清开灵注射液、α-干扰素 ( α- interferon, α - INF )和γ-干扰素(γ-interferon, γ-INF ) 对翼状胬肉成纤维细胞体外增殖的影 响。方法：用组织培养技术建立翼状胬肉成纤维细胞系。用MTT比色法 测定清开灵注射液、α-INF和γ-INF对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响。结果：清开灵注射液、α-INF和γ-INF可以明显抑制翼状胬肉成纤维细胞 的增殖，并呈剂量依赖效应。结论：清开灵注射液、α-INF和γ-INF均能 有效抑制体外翼状胬肉成纤维细胞的生长。
, http://www.100md.com
An experimental research about effect of qingkeiling (清开灵)
and interferon on the proliferation of cultivated
pterygium fibroblast
Jin Weier, Zheng Junhua, Lin Ying, et at.
Department of Ophthalmology, the Affiliated Renmin g Hospital of Fujian Traditional Chinese Medical College, Fuzhou 350004, China
Key words pterygium qingkailing (清开灵) fibroblast interferon-alpha interferon-gamma
, 百拇医药
Abstract OBJECTIVE: To investigate the effect of qingkailing(清开灵) injection, interferon-alpha (α-INF) and interfer on-gamma (γ-INF ) on the proliferation of pterygium fibroblast. METH ODS: Tissue culture technique was applied to establish the pterygium fib ronblast from culture specimen. The effect of qingkailing, α-INF, γ-INF on p roliferation of the pterygium fibroblast were detected with MTT colorimetry. RESULTS: Qingkailing, α-INF andγ-IFN could inhibit obvi ously the proliferation of pyerygium fibroblast. This influencing extent depende d on dosage. CONCLUSIONS: Qingkailing, α-INF and γ-INF and cou ld inhibit severally the proliferation of experimental pterygium fibroblast.
, 百拇医药
翼状胬肉是眼科的常见多发病，但对其病变本质及发病机理仍有争议，临床至今也缺少根治 的理想疗法。故研究其病变本质及寻找有效的防治措施，是目前急需解决的课题之一，病理 学研究表明，翼状胬肉的主要成份是大量增生的成纤维细胞，并由其导致相应的病变〔1〕。近年来，清开灵在眼科临床上越来越受到重视，并用于许多眼病的治疗〔2，3 〕。从1998年5月～12月我们对清开灵注射液、α-干扰素(α-interferon,γ- INF)和γ-干扰素(α-interferon,γ-INF)对翼状胬肉成纤维细胞体外增殖的影响进行了研究，希望能为临床治疗翼状胬肉提供新的有效的方法。
1 材料与方法
1.1 材料
RPMI 1640培养基为美国Gibco公司产品；胎牛血清为北京邦定公司产品，清开灵注射液系北 京 中医学院实验药厂产品，α-INF由深圳兴科公司生产；γ-INF由第二军医大学提供；MTT系Fluka公司产品；DMSO、胰蛋白酶为Sigma公司产品。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 翼状胬肉成纤维细胞的培养：培养组织取自 1998年5～12月本院眼科手术切除的原发性翼状胬肉标本，采用组织培养技术〔4〕，建立翼状胬肉成纤维细胞株，实验所用细胞为第3～5代细胞。
1.2.2 测定不同浓度的清开灵注射液、α-INF和 γ -INF对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响：将贴壁培养的翼状胬肉成纤维细胞用0.25%胰蛋 白酶消化后，接种于96孔培养板(Linbro)中，贴壁后加入含有不同浓度的清开灵注射液、α -INF和γ-INF的无血清RPMI1640培养液。对照组只加培养液，每组设3复孔，培养48h，吸出培养液，加入经浓度为0.05%的MTT，继续培养6h，用PBS冲洗两次后加入DMSO振荡混匀，用酶联免疫测定仪(美国Bio-Rad)测定570nm处吸光度值A。
1.2.3 统计学处理：所有结果均以
±s表示，组间比较采用配对t检验。, http://www.100md.com
2 结果
2.1 不同浓度清开灵注射液对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响
10%～40%终浓度的清开灵注射液均可显著抑制成纤维细胞的增殖，且呈剂量依赖效应，见表 1。
表1 清开灵对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响 组 别
药物浓度(%)
A值(
±s)t值
P值
对照组
0
, http://www.100md.com
0.316±0.01
—
—
清开灵
1
0.312±0.02
2.167
>0.05
10
0.297±0.02
2.724
<0.05
20
, 百拇医药
0.251±0.03
3.221
<0.05
30
0.228±0.01
4.106
<0.01
40
0.185±0.02
4.385
<0.01
2.2 不同浓度的α-INF和γ-INF 对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响
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α-INF 102～104u/ml，γ-INF 102～104u/ml，均可显著抑制 成纤维细胞增殖，且均呈剂量依赖效应，见表2。
表2 干扰素对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响 组 别
细胞因子
浓度(u/ml)
A值(
±s)t值
P值
对照组
0
, 百拇医药
0.316±0.01
—
—
α-INF组
10
0.318±0.02
2.324
>0.05
102
0.282±0.02
2.665
<0.05
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103
0.261±0.02
3.177
<0.05
104
0.164±0.01
4.782
<0.01
γ-INF组
10
0.274±0.03
2.801
, 百拇医药
<0.05
102
0.236±0.02
4.099
<0.01
103
0.185±0.02
4.385
<0.01
104
0.127±0.01
5.124
, 百拇医药
<0.01
3 讨论
翼状胬肉的病因仍不明确，目前治疗仍以手术切除为主，但术后复发率较高，寻找高效低毒的防止翼状胬肉术后复发的药物是一项重要课题。清开灵是以安宫牛黄丸为基 础配方提取而成的复方中药制品，主要成份有牛黄、水牛角、黄芩、金银花、杞子等，有清热解毒、化痰、祛痰通络、醒脑开窍之功效〔3〕。据资料记载本药有显著的抗炎免疫作用，这种抗炎免疫作用类似于环胞霉素，且与之协同〔5〕。
干扰素是一组由淋巴细胞、成纤维细胞经诱导产生的糖蛋白，它可以作用于纤维化过程的多个环节，可调节成纤维细胞的功能，可有效地治疗纤维性疾病〔6〕；还能抑制成 纤维细胞的趋化和增殖，从而抑制胶原的合成和分泌〔7〕。在本研究中，清开灵注 射液、α-INF和γ-INF均能明显抑制翼状胬肉成纤维细胞的体外增殖活性，且均呈剂量依 赖效应，提示清开灵、α-INF和γ-INF三者可能是一组有效的防治翼状胬肉复发的药物 ，且没有丝裂霉素、5-Fu等抗代谢药物的毒性，因此，具有极好的临床应用前景。
, 百拇医药
参考文献
1 Hill J C,Maske R.Pathogenesis of ptergium.Eye，1989，3：218
2 池珍儿，胡谷冰.口服清开灵防止翼状胬肉术后复发的疗效观察.中国中医眼科 杂志，1996，6：97
3 宋 立.清开灵在眼科的应用示例.中国中医眼科杂志，1993，3：231
4 鄂 征.组织培养技术.第2版.北京：北京人民出版社，1993，125
5 胡土星，李绍珍.葡萄膜炎的治疗(综述与译文).国外医学*眼科学分册，1990 ，14：260
6 顾金文.细胞因子与内眼术后纤维形成的关系.国外医学*眼科学分册，1995， 19：51
7 顾宝文.细胞因子与内眼术后纤维形成的关系.国外医学*眼科学分册，1995， 19：51
收稿：1999-03-04；修回：1999-08-28, 百拇医药