消炎Ⅰ号方对兔实验性葡萄膜炎白细胞介素Ⅱ和肿瘤坏死因子的影响
作者：古继红 詹宇坚 关国华
单位：古继红:广州中医药大学(广州510407)；詹宇坚、关国华:广州中医药大学第一临床医学院眼科
关键词：兔；实验性葡萄膜炎；白细胞介素Ⅱ；肿瘤坏死因子
中国中医眼科杂志990401 摘要 目的：探讨消炎Ⅰ号方治疗葡萄膜炎的作用机理。方 法：实验兔随机分为正常组和实验性葡萄膜炎消炎Ⅰ号方治疗组、激素治疗 组、生理盐水对照组。在不同阶段用放射免疫法对各组房水及外周血中白细胞介素Ⅱ(inter leukin-II, IL-II)和肿瘤坏死因子(tumorous necrotic factor-α，TNFα)进行检测 。结果：与正常组比较，葡萄膜炎兔外周血及房水中TNFα升高；与生理 盐水组比较，激素组外周血及房水TNFα、房水中IL-2降低；中药组外周血TNFα及房 水中IL-2降低，差异均有显著性(P<0.05)。房水中TNFα含量虽降低，差异无显著 意义。结论：消炎Ⅰ号方在一定程度上有抑制实验性葡萄膜炎兔TNFα和 降低IL-II水平的作用。
, http://www.100md.com
An effect of xiaoyan yihaofang (消炎Ⅰ号方) on interleukin and tumorous necrotic factor in the rabbits with experimental uvei tis.
Gu Jihong1, Zhan Yugian2, Guan Guohua2.
1 Guangzhou Traditio nal Chinese Medical University, Guangzhou 510407,China
Key words rabbit experimental uveitis interleukin (IL -II) tumorous necrotic factor (TNF)
, 百拇医药
Abstract OBJECTIVE:To investigate mechanism of xiaoyan yihaof ang (消炎Ⅰ号方) in the treatment of experimental uvei t is. METHODS: Experimented rabbits were divided into normal group , treated group with xiaoyan yihao fang, group with corticosteroid, and control group with normal normal saline. To detect level of interleukin-II (IL-II) a nd tumorous necrotic factor (TNFα) collected from the aqueous and peripheral blood of rabbits with experimental uveitis, a radio-immunity method was applied in the each group. RESULTS: Compared with normal group, content of TNFα was increased in aqueous and blood of the rabbits with uveitis. Compa red with normal saline group, content of TNFα in the aqueous and blood, and c ontent of IL-2 in the aqueous were decreased obviously in the group treated wit h corticosteroid. Content of TNFα in the blood and content of IL-2 in the aq ueous were decreased in the group treated with xiaoyan yihaofang group. There wa s a significant difference between the control group and treated groups (P< 0.05). CONCLUSION: Xiaoyan yihaofang could be effective on inhi bition the level of TNFα and IL-II in the rabbits with experimental uveitis.
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葡萄膜炎是一种常见的致盲性眼病，据报道我国约4%～10%的盲目由葡萄膜炎 所致〔1〕，随着分子生物学技术在医学领域的应用，有关葡萄膜炎的研究已深入到基因水平，但如何将现代科技的方法引入中医药的研究，是中医眼科面临的重要课题，为了探讨中药的治疗作用，我们以前主要从辨证论治角度进行研究〔2，3〕，在研究过程中发现消炎Ⅰ号方对急性葡萄膜炎有显著的疗效，且副作用小，对葡萄膜炎患者细胞免疫有一定的抑制作用〔4〕，为了进一步探讨细胞因子在葡萄膜炎发病中的作用以及消炎Ⅰ号方对它的影响，我们对24只不同组葡萄膜炎兔房水及外周血细胞因子进行了检测，报告如下。
1 材料和方法
1.1 动物模型
健康成年新西兰兔24只，由第一军医大学动物实验中心提供。无眼疾，体重2.0～2.5kg， 分笼饲养，方法参照文献〔5〕。用BSA作异体抗原，玻璃体、耳缘静脉二次注射法诱导实验 性葡萄膜炎动物模型。
, 百拇医药
1.2 药物组成及制备
消炎Ⅰ号方由黄芩、栀子、土茯苓、三七、青葙子等组成，由广州中医药大学附一院临床药 理研究室制备。将原药用水煮过滤等方法制成100%浓度的液体，加防腐剂、调pH值， 装瓶高压灭菌备用。
1.3 分组及给药方法
24只兔随机分为4组，正常组不造模，其余组分别于造模后第2天开始予中药、激素及生理盐 水治疗。葡萄膜炎中药治疗组经口灌饲消炎Ⅰ号方每日2次，连续2周，给药量根据实验动物 与人体体表面积换算表换算〔6〕，每次每只兔5.5ml/kg。葡萄膜炎激素治疗组按每 日10mg剂量腹腔注射地塞米松注射液，每日1次，连续2周，给药量换算方法同中药组。模型 组经口灌饲生理盐水，剂量同中药组。
1.4 检测指标和实验方法
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观察指标：房水中细胞介素Ⅱ、肿瘤坏死因子以及外周血中肿瘤坏死因子。
实验方法：取房水0.5ml；耳缘静脉血2ml，分离血清后-20℃保存备用。采用放射免疫 法测定，药盒由北京东亚免疫技术研究所提供。
1.5 统计方法用F检验
2 结果
2.1 消炎Ⅰ号方对BSA诱导的葡萄膜炎外周血肿瘤坏死因子的影响
激素组、中药组分别与正常组比较，经BSA诱导的葡萄膜炎外周血中TNFα升高，差异 有显著性意义(P<0.05)，而与生理盐水组比较，激素组与中药组TNFα均降低， 差异 有显 著性意义(P<0.05)，表明经中药和激素治疗后血中TNFαa均降低，但两组之间差 异无显著性。
, 百拇医药
表1 不同组外周血肿瘤坏死因子检测分析(
±s) 组 别
例数
TNFα(ng/ml)
正常组
6
9.75±4.53
生理盐水组
6
34.17±10.541)
激素组
, 百拇医药
6
20.69±6.021)2)
中药组
6
24.31±7.011)2)
注：1)与正常组比较：P<0.05
2)与生理盐水组比较：P<0.05
2.2 消炎Ⅰ号方对BSA诱导的葡萄膜炎房水中细胞因子的影响
激素组、中药组分别与正常组比较，葡萄膜炎房水中TNFα及IL-2均升高，差异有显著性意义(P<0.05或P<0.01)，与生理盐水组比较，激素组房水中TNFα及IL-2均降低，差异有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。而与中药组比较，房水中TNFαa含量稍降低，差异无显著性意义，而IL-2则明显降低，差异有显著性意义(P<0.05) 。
, 百拇医药
表2 不同组房水中细胞因子检测分析(±s) 组 别
例数
TNFα(ng/ml)
IL-2(ng/ml)
正常组
6
7.32±0.18
21.86±4.96
生理盐水组
6
23.02±5.322)
, 百拇医药
81.00±1.352)
激素组
6
14.32±5.821)3)
33.28±5.742)4)
中药组
6
18.46±6.292)
40.62±6.332)4)
注：与正常组比较：1)P<0.05 2)P<0.01
, 百拇医药
与生理盐水组比较：3)P<0.05 4)P<0.01
3 讨论
细胞因子是一些分泌性蛋白质，可调节和决定免疫应答的性质，它们涉及免疫和炎症的每一 个环节，是细胞间进行交流信息的一种物质，可对其效应细胞的功能，如分化、增殖、分泌等产生调节作用，细胞因子之间存在着复杂的协同和制约关系，在维持体内环境稳定上起作 用。TNFα是由单核巨噬细胞产生的一种多肽，主要介导抗肿瘤，调节机体的免疫功能 ，参与炎症病变等多方面的病理生理变化，许多急慢性感染常导致体内TNFα含量增加 〔7 〕。TNFα可诱导巨噬细胞产生IL-1，刺激血管内皮细胞产生MG-CSF，而MG-CSF则抑 制巨 噬细胞产生TNFα-mRNA，有助于机体防御机能，TNFα还可激活T细胞增加IL-2以 及IL-2R 表达，激活细胞毒T细胞〔8〕。IL-2作为一种免疫增强因子，参与机体的免疫调节， 它不仅是T细胞的生长因子，而且能在体外增强NK细胞活性，促进B细胞的增殖和分化，还具 有调节T细胞产生γ-干扰素的作用〔8〕。葡萄膜炎发病与细胞因子之间有一定的关 系 ，有关这方面的研究有很多报道，很多研究已经表明葡萄膜炎患者OKT4/OKT8异常，IL -2亦相应出现改变〔10〕。因为葡萄膜炎作为一种自身免疫性疾病，在免疫方面表现 为T细胞合成 过量的自身抗体及免疫球蛋白，抑制性T细胞和辅助性T细胞紊乱，甚至功能缺陷，而IL-2是 一种重要的免疫调节因子，所以葡萄膜炎的免疫异常可能与IL-2紊乱有关。葡萄膜炎患者IL -2降低的原因可能是由于抑制性T细胞活性增强，即在患者外周血中存在着抑制IL-2的细胞 ，OKT8细胞亚群，或是由于产生IL-2细胞的功能即OKT4细胞亚群异常，张 海男〔11〕等用内毒素诱导葡萄膜炎的动物模型发现葡萄膜炎兔较正常兔外周血TNF α增加。本研究结果显示BSA诱导的葡萄膜炎房水及外周血中TNFα及IL-2均有改变， 而消炎Ⅰ号方治疗后外周血以及房水中TNFα均下降，房水中IL-2亦明显降低，表明本方 在一定程度上可通过对细胞因子的抑制而调节机体的免疫功能，但因样本量不大，进一步的 作用机制有待于继续研究。
, 百拇医药
参考文献
1 杨培增，龚向明.葡萄膜炎在世界各地的发生及研究概况—亚洲.国外医学.眼科分册，1992，16(5)：285～288
2 古继红，詹宇坚，关国华.葡萄膜炎患者辨证分型与T细胞亚群检测分析.中国 中医眼科杂志,1997，7(4)：212～214
3 王 燕，詹宇坚，王舜杏.葡萄膜炎患者中医证型与免疫功能关系的临床分析. 中国中医眼科
杂志，1996，6(3)：140～142
4 詹宇坚，古继红，关国华.消炎一号方治疗兔实验性葡萄膜炎免疫组织化学的研 究.中国中医
眼科杂志，1998，8(4)：204～206
, 百拇医药
5 吴树杨，肖继皋，王育良.牛血清白蛋白诱发兔葡萄膜炎的免疫病理形态学观察 .中华眼科杂
志，1994，10(3)：153～155
6 施新猷.医学动物实验学.北京：人民卫生出版社，1980.448
7 董碧蓉.肿瘤坏死因子与临床.国外医学.内科学分册，1991，18(4)：146～14 8
8 陈 燕.白细胞介素2与自身免疫病.首都医学院学报，1989，10(3)：225～227
9 郝京生，贾东华，董玉环，等.肿瘤坏死因子与感染性疾病.国外医学.微生物 学分册，1995,18(2)：3～6
10 魏 双，刘春楠，马树俊，等.前色素膜炎患者T细胞亚群、淋巴细胞增殖 能 力及白细胞介
素2水平变化的研究.中华眼科杂志，1990，26(4)：232～234
11 张海男，黎杏群，李学文.清肝泻火汤对内毒素诱发家兔肝火证的疗效机理. 中国中西医结合
杂志，1996，16(2)：95～97
收稿：1999-03-22, 百拇医药
单位：古继红:广州中医药大学(广州510407)；詹宇坚、关国华:广州中医药大学第一临床医学院眼科
关键词：兔；实验性葡萄膜炎；白细胞介素Ⅱ；肿瘤坏死因子
中国中医眼科杂志990401 摘要 目的：探讨消炎Ⅰ号方治疗葡萄膜炎的作用机理。方 法：实验兔随机分为正常组和实验性葡萄膜炎消炎Ⅰ号方治疗组、激素治疗 组、生理盐水对照组。在不同阶段用放射免疫法对各组房水及外周血中白细胞介素Ⅱ(inter leukin-II, IL-II)和肿瘤坏死因子(tumorous necrotic factor-α，TNFα)进行检测 。结果：与正常组比较，葡萄膜炎兔外周血及房水中TNFα升高；与生理 盐水组比较，激素组外周血及房水TNFα、房水中IL-2降低；中药组外周血TNFα及房 水中IL-2降低，差异均有显著性(P<0.05)。房水中TNFα含量虽降低，差异无显著 意义。结论：消炎Ⅰ号方在一定程度上有抑制实验性葡萄膜炎兔TNFα和 降低IL-II水平的作用。
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An effect of xiaoyan yihaofang (消炎Ⅰ号方) on interleukin and tumorous necrotic factor in the rabbits with experimental uvei tis.
Gu Jihong1, Zhan Yugian2, Guan Guohua2.
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Key words rabbit experimental uveitis interleukin (IL -II) tumorous necrotic factor (TNF)
, 百拇医药
Abstract OBJECTIVE:To investigate mechanism of xiaoyan yihaof ang (消炎Ⅰ号方) in the treatment of experimental uvei t is. METHODS: Experimented rabbits were divided into normal group , treated group with xiaoyan yihao fang, group with corticosteroid, and control group with normal normal saline. To detect level of interleukin-II (IL-II) a nd tumorous necrotic factor (TNFα) collected from the aqueous and peripheral blood of rabbits with experimental uveitis, a radio-immunity method was applied in the each group. RESULTS: Compared with normal group, content of TNFα was increased in aqueous and blood of the rabbits with uveitis. Compa red with normal saline group, content of TNFα in the aqueous and blood, and c ontent of IL-2 in the aqueous were decreased obviously in the group treated wit h corticosteroid. Content of TNFα in the blood and content of IL-2 in the aq ueous were decreased in the group treated with xiaoyan yihaofang group. There wa s a significant difference between the control group and treated groups (P< 0.05). CONCLUSION: Xiaoyan yihaofang could be effective on inhi bition the level of TNFα and IL-II in the rabbits with experimental uveitis.
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葡萄膜炎是一种常见的致盲性眼病，据报道我国约4%～10%的盲目由葡萄膜炎 所致〔1〕，随着分子生物学技术在医学领域的应用，有关葡萄膜炎的研究已深入到基因水平，但如何将现代科技的方法引入中医药的研究，是中医眼科面临的重要课题，为了探讨中药的治疗作用，我们以前主要从辨证论治角度进行研究〔2，3〕，在研究过程中发现消炎Ⅰ号方对急性葡萄膜炎有显著的疗效，且副作用小，对葡萄膜炎患者细胞免疫有一定的抑制作用〔4〕，为了进一步探讨细胞因子在葡萄膜炎发病中的作用以及消炎Ⅰ号方对它的影响，我们对24只不同组葡萄膜炎兔房水及外周血细胞因子进行了检测，报告如下。
1 材料和方法
1.1 动物模型
健康成年新西兰兔24只，由第一军医大学动物实验中心提供。无眼疾，体重2.0～2.5kg， 分笼饲养，方法参照文献〔5〕。用BSA作异体抗原，玻璃体、耳缘静脉二次注射法诱导实验 性葡萄膜炎动物模型。
, 百拇医药
1.2 药物组成及制备
消炎Ⅰ号方由黄芩、栀子、土茯苓、三七、青葙子等组成，由广州中医药大学附一院临床药 理研究室制备。将原药用水煮过滤等方法制成100%浓度的液体，加防腐剂、调pH值， 装瓶高压灭菌备用。
1.3 分组及给药方法
24只兔随机分为4组，正常组不造模，其余组分别于造模后第2天开始予中药、激素及生理盐 水治疗。葡萄膜炎中药治疗组经口灌饲消炎Ⅰ号方每日2次，连续2周，给药量根据实验动物 与人体体表面积换算表换算〔6〕，每次每只兔5.5ml/kg。葡萄膜炎激素治疗组按每 日10mg剂量腹腔注射地塞米松注射液，每日1次，连续2周，给药量换算方法同中药组。模型 组经口灌饲生理盐水，剂量同中药组。
1.4 检测指标和实验方法
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观察指标：房水中细胞介素Ⅱ、肿瘤坏死因子以及外周血中肿瘤坏死因子。
实验方法：取房水0.5ml；耳缘静脉血2ml，分离血清后-20℃保存备用。采用放射免疫 法测定，药盒由北京东亚免疫技术研究所提供。
1.5 统计方法用F检验
2 结果
2.1 消炎Ⅰ号方对BSA诱导的葡萄膜炎外周血肿瘤坏死因子的影响
激素组、中药组分别与正常组比较，经BSA诱导的葡萄膜炎外周血中TNFα升高，差异 有显著性意义(P<0.05)，而与生理盐水组比较，激素组与中药组TNFα均降低， 差异 有显 著性意义(P<0.05)，表明经中药和激素治疗后血中TNFαa均降低，但两组之间差 异无显著性。
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表1 不同组外周血肿瘤坏死因子检测分析(
±s) 组 别例数
TNFα(ng/ml)
正常组
6
9.75±4.53
生理盐水组
6
34.17±10.541)
激素组
, 百拇医药
6
20.69±6.021)2)
中药组
6
24.31±7.011)2)
注：1)与正常组比较：P<0.05
2)与生理盐水组比较：P<0.05
2.2 消炎Ⅰ号方对BSA诱导的葡萄膜炎房水中细胞因子的影响
激素组、中药组分别与正常组比较，葡萄膜炎房水中TNFα及IL-2均升高，差异有显著性意义(P<0.05或P<0.01)，与生理盐水组比较，激素组房水中TNFα及IL-2均降低，差异有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。而与中药组比较，房水中TNFαa含量稍降低，差异无显著性意义，而IL-2则明显降低，差异有显著性意义(P<0.05) 。
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表2 不同组房水中细胞因子检测分析(
±s) 组 别例数
TNFα(ng/ml)
IL-2(ng/ml)
正常组
6
7.32±0.18
21.86±4.96
生理盐水组
6
23.02±5.322)
, 百拇医药
81.00±1.352)
激素组
6
14.32±5.821)3)
33.28±5.742)4)
中药组
6
18.46±6.292)
40.62±6.332)4)
注：与正常组比较：1)P<0.05 2)P<0.01
, 百拇医药
与生理盐水组比较：3)P<0.05 4)P<0.01
3 讨论
细胞因子是一些分泌性蛋白质，可调节和决定免疫应答的性质，它们涉及免疫和炎症的每一 个环节，是细胞间进行交流信息的一种物质，可对其效应细胞的功能，如分化、增殖、分泌等产生调节作用，细胞因子之间存在着复杂的协同和制约关系，在维持体内环境稳定上起作 用。TNFα是由单核巨噬细胞产生的一种多肽，主要介导抗肿瘤，调节机体的免疫功能 ，参与炎症病变等多方面的病理生理变化，许多急慢性感染常导致体内TNFα含量增加 〔7 〕。TNFα可诱导巨噬细胞产生IL-1，刺激血管内皮细胞产生MG-CSF，而MG-CSF则抑 制巨 噬细胞产生TNFα-mRNA，有助于机体防御机能，TNFα还可激活T细胞增加IL-2以 及IL-2R 表达，激活细胞毒T细胞〔8〕。IL-2作为一种免疫增强因子，参与机体的免疫调节， 它不仅是T细胞的生长因子，而且能在体外增强NK细胞活性，促进B细胞的增殖和分化，还具 有调节T细胞产生γ-干扰素的作用〔8〕。葡萄膜炎发病与细胞因子之间有一定的关 系 ，有关这方面的研究有很多报道，很多研究已经表明葡萄膜炎患者OKT4/OKT8异常，IL -2亦相应出现改变〔10〕。因为葡萄膜炎作为一种自身免疫性疾病，在免疫方面表现 为T细胞合成 过量的自身抗体及免疫球蛋白，抑制性T细胞和辅助性T细胞紊乱，甚至功能缺陷，而IL-2是 一种重要的免疫调节因子，所以葡萄膜炎的免疫异常可能与IL-2紊乱有关。葡萄膜炎患者IL -2降低的原因可能是由于抑制性T细胞活性增强，即在患者外周血中存在着抑制IL-2的细胞 ，OKT8细胞亚群，或是由于产生IL-2细胞的功能即OKT4细胞亚群异常，张 海男〔11〕等用内毒素诱导葡萄膜炎的动物模型发现葡萄膜炎兔较正常兔外周血TNF α增加。本研究结果显示BSA诱导的葡萄膜炎房水及外周血中TNFα及IL-2均有改变， 而消炎Ⅰ号方治疗后外周血以及房水中TNFα均下降，房水中IL-2亦明显降低，表明本方 在一定程度上可通过对细胞因子的抑制而调节机体的免疫功能，但因样本量不大，进一步的 作用机制有待于继续研究。
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参考文献
1 杨培增，龚向明.葡萄膜炎在世界各地的发生及研究概况—亚洲.国外医学.眼科分册，1992，16(5)：285～288
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4 詹宇坚，古继红，关国华.消炎一号方治疗兔实验性葡萄膜炎免疫组织化学的研 究.中国中医
眼科杂志，1998，8(4)：204～206
, 百拇医药
5 吴树杨，肖继皋，王育良.牛血清白蛋白诱发兔葡萄膜炎的免疫病理形态学观察 .中华眼科杂
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6 施新猷.医学动物实验学.北京：人民卫生出版社，1980.448
7 董碧蓉.肿瘤坏死因子与临床.国外医学.内科学分册，1991，18(4)：146～14 8
8 陈 燕.白细胞介素2与自身免疫病.首都医学院学报，1989，10(3)：225～227
9 郝京生，贾东华，董玉环，等.肿瘤坏死因子与感染性疾病.国外医学.微生物 学分册，1995,18(2)：3～6
10 魏 双，刘春楠，马树俊，等.前色素膜炎患者T细胞亚群、淋巴细胞增殖 能 力及白细胞介
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11 张海男，黎杏群，李学文.清肝泻火汤对内毒素诱发家兔肝火证的疗效机理. 中国中西医结合
杂志，1996，16(2)：95～97
收稿：1999-03-22, 百拇医药