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编号:10249125
血虚证红细胞免疫功能和变形性、淋巴细胞转化功能及自由基代谢的研究
http://www.100md.com 《中国中西医结合急救杂志》 1999年第4期
     作者:陈如泉 梁 毅 欧 敏 方碧琴

    单位:430061 武汉 湖北中医学院附属医院内科

    关键词:血虚;证候;红细胞免疫;自由基;红细胞变形性;淋巴细胞转化功能

    中西医结合实用临床急救990403 摘要 目的:探讨血虚证免疫功能变化和自由基代谢的特点及其意义。方法:选择34例临床血虚证患者及30例正常人,并采用缓慢放血及饥饱失宜联合方法制作24只血虚证家兔模型。对血虚证红细胞C3b受体(RBCC3bR)花环率,红细胞免疫复合物(RBCIC)花环率、红细胞变形指数(DI)、T淋巴细胞亚群、T和B淋巴细胞转化率、红细胞超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化脂质(LPO)的变化进行了研究;同时观察中药四物汤对上述指标的影响。结果:血虚证时,RBCC3bR花环率明显降低,RBCIC花环率明显升高;红细胞DI值降低;T淋巴细胞亚群OKT3和OKT4明显降低,OKT8略高但变化不明显,OKT4/OKT8明显下降;T、B淋巴细胞转化率均明显降低;SOD活性明显降低,LPO含量明显升高。P<0.05或P<0.01。给血虚证家兔服用四物汤后,其RBCC3bR明显提高,RBCIC明显降低;红细胞DI值明显升高;T、B淋巴细胞转化率明显增加;SOD活性明显上升,LPO含量显著下降。P<0.05或P<0.01。结论:血虚证时细胞免疫功能明显降低,红细胞变形性下降,机体产生自由基。四物汤具有提高RBC功能、改善血虚症状、促进免疫功能恢复和消除自由基的作用。
, 百拇医药
    Studies on erythrocytic immune functions and deformabilities,lymphocytic transformable functions,and metabolisms of free radicals in blood deficiency syndrome

    Chen Ruquan,Liang Yi,Ou Min,et al.

    The Affiliated Hospital of Hubei College TCM,Wuhan 430061

    Abstract Objective:To investigate the changes in immune functions,the metabolic characteristics and significances of free radicals in blood deficiency syndrome(BDS).Methods:Clinically 34 cases with BDS and 30 normal subjects were selected.Simultaneously 24 models of rabbits with BDS were constructed by slowly drawing blood and irregular feeding.The changes in red blood cell(RBC)C3b receptor rosette rate,RBCimmune complex(IC) rosette rate,deformable index of RBC(DI),T lymphocytic subgroups,transformable rates of T and B lymphocytes,erythrocytic superoxide dismutase(SOD),and lipid peroxidation(LPO) were studied while the influences of Siwu Decoction(四物汤) of traditional Chinese medicine on abovementioned parameters were observed.Results:In BDS the RBCC3b receptor rosette rate was markedly depressed,RBCIC rosette rate markedly elevated,RBC DI value declined,OKT3 and OKT4 of T lymphocytic subgroups were obviously decreased,OKT8 was slightly increased (not obviously),OKT4/OKT8 significantly decreased,transformable rates of all T and B lymphocytes were obviously depressed,activities of SOD markedly decreased,concentrations of LPO significantly heightened (P<0.05 or P<0.01).After feeding Siwu Decoction orally to rabbit model with BDS the RBCC3b receptor was elevated,RBCIC depressed,and DI value of RBC heightened significantly.The transformable rates of T and B lymphocytes were increased,the activities of SOD elevated,and the concentrations of LPO declined significantly (P<0.05 or P<0.01).Conclusions:In BDS the cellular immune functions are significantly depressed,erythrocytic deformabilities are significantly declined,and body produces free radicals.The Siwu Decoction is able to heighten RBC functions,improve symptoms of blood deficiency,promote recovery of immune functions,and eliminate actions of free radicals.
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    Key words blood deficiency syndrome erythrocytic immunity free radicals erythrocytic deformability transformable functions of lymphocytes

    已知诸多虚证表现出细胞免疫功能紊乱或低下〔1,2〕,自由基可不同程度地直接或间接损害机体〔3,4〕。本研究以细胞免疫功能、T和B淋巴细胞亚群、T淋巴细胞转化、超氧化物歧化酶(SOD)活力、过氧化脂质(LPO)水平为主要参数,观察其与血虚证的关系,现将结果报告分析如下。

    1 血虚证临床研究

    1.1 资料与方法:

    1.1.1 研究对象:

, http://www.100md.com     1.1.1.1 血虚证组:根据文献〔5,6〕标准,选择血虚证患者34例,其中男16例,女18例;年龄16~64岁,平均(38.18±16.51)岁。原发病:血液系统疾病20例,心血管系统疾病3例,呼吸系统疾病1例,消化系统疾病2例,妇科疾病5例,皮肤疾病3例。

    1.1.1.2 健康对照组:30例中男16例,女14例;年龄21~60岁,平均(38.43±10.20)岁。其性别、年龄与血虚证组具有可比性。

    1.1.2 检测方法:

    1.1.2.1 红细胞C3b受体和红细胞免疫复合物(IC)花环试验依据文献〔7〕方法。

    1.1.2.2 T淋巴细胞亚群测定:由武汉生物制品研究所提供OKT3、OKT4、OKT8单克隆抗体致敏的红细胞花环试剂(McAbAE),按试剂说明书方法测定。
, 百拇医药
    1.1.2.3 SOD检测用邻苯三酚自氧化法〔4〕

    1.1.2.4 LPO含量检测用硫代巴比妥酸比色法〔4〕

    1.1.2.5 红细胞变形性测定用粘度测量法。

    1.1.3 统计学方法:所得数据用均数±标准差(15a.gif (107 字节)±s)表示,t检验。

    1.2 结果:

    1.2.1 血虚证患者红细胞免疫功能〔C3b受体(RBCC3bR)、花环率和红细胞免疫复合物(RBCIC)花环率〕变化见表1。
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    表1 血虚证患者与健康成人RBCC3bR与RBCIC花环试验比较(15a.gif (107 字节)±s) 组别

    例数

    (例)

    RBCC3bR花环率

    RBCIC花环率

    健康对照组

    30

    28±0.02

    0.05±0.01
, 百拇医药
    血虚证组

    34

    21±0.03**

    0.09±0.03**

    注:与健康对照组比较:**P<0.01

    1.2.2 血虚证患者T淋巴细胞亚群的变化规律见表2。

    表2 血虚证患者与健康成人T淋巴细胞亚群值比较(15a.gif (107 字节)±s) 组别

    例数(例)
, 百拇医药
    OKT3

    OKT4

    OKT8

    OKT4/OKT8

    健康对照组

    30

    0.67±0.07

    0.45±0.04

    0.27±0.03

    1.66±0.17

    血虚证组
, 百拇医药
    34

    0.54±0.05**

    0.39±0.04**

    0.30±0.05

    1.33±0.27**

    注:与健康对照组比较:**P<0.01

    1.2.3 血虚证患者红细胞SOD活性及LPO含量比较见表3。

    表3 血虚证患者与健康成人SOD活性及LPO含量比较(15a.gif (107 字节)±s) 组别
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    例数(例)

    SOD活性(U/g)

    LPO(μmol/L)

    健康对照组

    30

    1 814.46±114.19

    4.61±0.34

    血虚证组

    34

    1 497.76±105.39**

    7.06±1.11**
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    注:与健康对照组比较:**P<0.01

    1.2.4 血虚证患者红细胞变形能力测定见表4。

    表4 血虚证患者与健康成人红细胞变形能力比较(15a.gif (107 字节)±s) 组别

    例数

    (例)

    红细胞DI值

    50

    100

    200
, 百拇医药
    健康对照组

    30

    0.374 9±0.010 8

    0.466 9±0.117 0

    0.524 5±0.011 0

    血虚证组

    34

    0.367 2±0.017 5*

    0.442 9±0.017 6**

    0.478 1±0.023 6**

, 百拇医药     注:与健康对照组比较:P<0.05,P<0.01

    2 血虚证动物实验研究

    2.1 资料与方法:

    2.1.1 实验动物及分组:选用本院动物房提供的经过检疫的日本大耳白家兔24只,雌雄各半,月龄3个月,体重2 000 g左右。实验采用自身前后对照,即制模前(正常期)和制模后(血虚证期),制模前测定体重、体温,并记录其一般情况。

    2.1.2 血虚证家兔模型的制作:在家兔耳背常规消毒,用乙醇反复擦拭使血管扩张,然后用注射器从兔耳中央动、静脉及耳缘静脉抽血,每日1次,每次5~10 ml,持续20日(家兔全血容量:雄兔为体重的5.11%,雌兔为体重的4.67%)。自制模之日起改变其正常喂养规律,限食与足量食交替给与,主食为红薯、白萝卜、各种青菜的根茎(这些饲料所含蛋白质、脂肪、糖类、矿物质及维生素等较正常精饲料低75%以上)。
, 百拇医药
    2.1.3 复健:将制模后的血虚证家兔24只随机分成2组,每组12只。四物汤复健组,应用传统补血方——四物汤,经加工制成200%浓度口服液,按10 g.kg-1.d-1量灌胃,每日1次,连用3周。自然复健组则以等量蒸馏水灌胃,时间同上。2组同时恢复标准精饲料喂养。

    2.1.4 指标检测及统计学方法同临床观察。

    2.2 结果:

    2.2.1 血虚证家兔红细胞免疫及变形功能、淋巴细胞转化功能和自由基代谢的变化见表5。结果示家兔血虚证期与正常期比较:RBCC3bR花环率明显降低,而RBCIC花环率收明显升高(P均<0.01);红细胞DI值则明显降低(P均<0.05);T、B淋巴细胞转化率均明显降低(P均<0.01);SOD活性明显降低(P<0.01),LPO含量明显升高(P<0.01)。
, 百拇医药
    表5 家兔制模前后红细胞免疫功能及变形性、淋巴细胞转化功能和自由基代谢变化(15a.gif (107 字节)±s) 组别

    动物数

    (只)

    红细胞免疫功能

    红细胞DI值

    RBCC3bR花环率(%)

    RBCIC花环率(%)

    50

    100
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    200

    正常期

    24

    8.94±1.85

    3.00±0.74

    0.395±0.013

    0.478±0.012

    0.533±0.009

    血虚证期

    24

    5.53±1.58**

    11.71±2.26**
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    0.387±0.014*

    0.437±0.09**

    0.484±0.012**

    组别

    动物数

    (只)

    淋巴细胞转化率(%)

    自由基代谢

    T细胞

    B细胞

    SOD活性(U/g)
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    LPO含量(μmol/L)

    正常期

    24

    70.60±5.33

    78.50±7.00

    1 676.21±166.01

    5.89±0.87

    血虚证组

    24

    51.42±4.14**

    53.54±6.70**
, 百拇医药
    1 229.32±167.79**

    9.05±1.57**

    注:与正常期比较:P<0.05,P<0.01

    2.2.2 四物汤对血虚证家兔复健后红细胞免疫功能及变形性、淋巴细胞转化功能和自由基代谢的影响见表6。结果示,血虚证家兔用四物汤复健较自然复健能明显提高RBCC3bR花环率和降低RBCIC花环率(P均<0.05);能明显提高红细胞DI值(P均<0.05);能明显提高T、B淋巴细胞转化率(P均<0.01);能明显增加SOD活性,降低LPO含量(P均<0.05)。

    表6 四物汤复健对血虚证家兔红细胞免疫功能及变形性、淋巴细胞转化功能和自由基代谢变化的影响(15a.gif (107 字节)±s) 组别
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    动物数

    (只)

    红细胞免疫功能

    红细胞DI值

    RBCC3bR

    花环率(%)

    RBCIC

    花环率(%)

    50

    100

    200

    四物汤复健组

, 百拇医药     12

    8.00±1.87*

    7.92±1.43*

    0.389±0.014*

    0.455±0.007**

    0.506±0.011**

    自然复健组

    12

    5.50±0.89

    9.50±1.26

    0.384±0.017
, http://www.100md.com
    0.445±0.005

    0.495±0.001

    组别

    动物数

    (只)

    淋巴细胞转化率(%)

    自由基代谢

    T细胞

    B细胞

    SOD活性(U/g)

    LPO含量(μmol/L)

    四物汤复健组
, 百拇医药
    12

    66.85±3.22**

    74.08±4.28**

    1 411.06±187.40*

    7.66±1.71*

    自然复健组

    12

    57.92±3.76

    62.92±4.83

    1 325.14±123.20

    8.42±1.3
, 百拇医药
    注:与自然复健组比较:*P<0.05,**P<0.01

    3 讨论

    中医药与免疫功能的关系是中医现代研究的一大内容,免疫功能一直被看作是人体正气的内涵。本实验研究结果提示,在血虚状态下,其RBCC3bR花环率降低,而RBCIC花环率增高,是继发性红细胞免疫功能低下的表现,其原因在于循环免疫复合物(CIC)增加,红细胞粘附IC过多所致。而T淋巴细胞亚群检测的结果则反映出机体的细胞免疫功能呈抑制状态。

    正常情况下,自由基代谢呈动态平衡以维持机体的正常状态。本实验发现,于血虚状态下,ATP的来源受到阻碍,新陈代谢功能降低,机体清除自由基的能力降低(SOD活力下降),自由基过剩积累,对红细胞等细胞膜的不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应,致LPO增多。

    在动物实验中,通过四物汤对血虚模型家兔的治疗,表现出其具有增强红细胞免疫功能的作用;能改善自由基代谢紊乱,使SOD活力提高,LPO水平下降,并能改善红细胞变形性。
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    本研究获1996年度湖北省科委科技成果奖及1998年度湖北省科技进步三等奖;本文曾在世界中西医结合大会上交流

    作者简介:陈如泉,男,60岁,教授,主任医师,内科博士生导师。湖北省中医内科学重点学科带头人。现兼任国家医药监督局药品评审专家,中国中西医结合学会血液病专业委员会委员,湖北省中西医结合血液病专业委员会主任委员,中国中医药学会武汉分会常务理事。主要研究方向为中医、中西医结合治疗血液病、甲状腺病及方剂学的研究;先后主持或承担部级研究课题2项,省级课题9项;通过省级科技成果鉴定7项;3次获湖北省科技进步奖,获省卫生厅科技进步奖2项,转让科技成果4项;先后主持或参加临床研究中药新药8项。主编、参编论著《血证证治与现代研究》、《中西医结合方法学》等专著5部,发表学术论文60余篇。先后赴西班牙等地参加国际性学术会议3次。

    4 参考文献

    1 李文雄,廖品东,张友荣,等.肾虚与红细胞免疫功能关系的实验研究.成都中医学院学报,1989;12(4):3335
, 百拇医药
    2 刘健,孙弼纲.脾虚泄泻患者红细胞免疫功能的临床研究.中西医结合杂志,1994;14(9):513

    3 陶国枢,董伟,李茨芬,等.四项衰老指标的探讨.中华老年医学杂志,1988;7(3):167170

    4 许士凯主编.抗衰老药物学.第1版.北京:中国医药科技出版社,1994:40213

    5 中医虚证辨证参考标准.中西医结合杂志,1987;7(2):598

    6 张伯臾主编.中医内科学.第5版.上海:上海科学技术出版社,1985:283284

    7 郭峰.红细胞免疫及其调节功能测定方法.免疫学杂志,1990;(6):6062

    (收稿:19990104 修回:19990228), http://www.100md.com