急性心肌梗死溶栓前后一氧化氮、一氧化氮合酶及丙二醛的变化
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《急诊医学》
作者：施庆忠 胡文彬 钱伟靖 冯国基 王晓红 聂国英
单位：施庆忠 胡文彬 钱伟靖 冯国基 王晓红 聂国英，解放军第401医院急诊科 6071 青岛
关键词：急性心肌梗死；溶栓治疗；一氧化氮；一氧化氮合酶；氧自由基
急诊医学990408 摘要：目的：探讨急性心肌梗死患者(AMI)溶栓前后体内一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)及丙二醛(MDA)含量变化的临床意义。方法：采用比色法测定16例AMI溶栓前后血清NO(硝酸还原酶法)及NOS含量，采用硫代巴比妥酸比色法测定红细胞MDA含量。结果：AMI溶栓前NO及NOS分别为37.8±6.9μmol/L和19.1±9.2u/ml，低于对照组76.9±20.3μmol/L和28.3±11.1u/ml，差异均非常显著(P<0.01)；溶栓再通后NO及NOS分别为45.5±11.3μmol/L和26.6±10.4u/ml，与溶栓前比较，差异均显著(P<0.05)，但NO仍显著低于对照组(P<0.01)，NOS与对照组比较已无差异(P>0.05)；溶栓前MDA为0.334±0.098nmol/ml，高于对照组0.228±0.031nmol/ml，溶栓后MDA进一步升高。结论：NO、NOS及MDA参与了AMI的发生和发展过程，测定AMI患者的NO、NOS及MDA的变化可能对病情的判断具有重要意义。
, 百拇医药
Changes of nitric oxide、nitric oxide synthase、malondialdehyde of thrombolytic therapy in acute myocardial infarction
Shi Qingzhong，Hu Wenbin，Qian Weijing，et al.
PLA No.401 Hospital，Qingdao 266071
Abstract Objective：To observe the changes of nitric oxide(NO)、nitric oxide synthase(NOS)、malondialdehyde(MDA) of thrombolytic therapy in acute myocardial infarction(AMI).Methods：Serum NO and NOS were measured by calorimetric method and red blood cell MDA by thiobabituric acid colorimetric analysis in 16 AMI thrombolytic therapy with recombinant tissue-type plasminogen activator(rt-PA) and 68 normal subjects.Results：The levels of serum NO and NOS were significantly lower and red blood cell MDA were significantly higher in AMI patients than in normal controls(37.8±6.9μmol/L vs 76.9±20.3μmol/L、19.1±9.1u/ml vs 28.3±11.1u/ml and 0.334±0.098nmol/ml vs 0.228±0.031nmol/ml，P<0.01) respectively.The levels of serum NO、NOS and MDA of patients after myocardial reperfusion were higher than before thrombolytic therapy(45.5±11.3μmol/L vs 37.8±6.9μmol/L、26.6±10.4u/ml vs 19.1±9.1u/ml and 0.334±0.098nmol/ml vs 0.411±0.104nmol/ml，P<0.05) respectively.But the levels of serum NO in AMI patients after myocardial reperfusion was still lower than normal subjects(45.5±11.3μmol/L vs 76.9±20.3μmol/L，P<0.05) and that NOS returned to normal(26.6±10.4u/ml vs 28.3±11.1u/ml).Conclusion：The results suggested that NO、NOS and MDA may be involved in the occurrence and development of AMI.
, 百拇医药
Key words Acute myocardial infarction Thrombolytic therapy Nitric oxide Nitric oxide synthase Oxygen free radicals
近来的研究表明血管内皮舒张因子，即一氧化氮(NO)在调节血管张力、维持血压稳定及冠心病的发生发展中起重要作用[1，2]。我们测定16例急性心肌梗死(AMI)患者应用重组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)溶栓治疗前后NO、NOS和MDA的变化，并与68例非冠心病患者(对照组)作比较，探讨AMI患者溶栓治疗前后NO、NOS及MDA变化的临床意义，报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料：16例AMI中，男14例、女2例，年龄34～78岁，平均57.3±5.9岁。梗死部位：前壁6例，前间壁2例，广泛前壁侧壁3例，下壁2例，下壁+正后壁3例。
, 百拇医药
1.2 给药方法：患者确诊后即刻口服肠溶阿斯匹林150mg，且静脉滴注肝素5000U后，立即给予rt-PA10mg，在2min内静脉注入，继之以50mg 1h内静脉滴入，之后2h内再滴入40mg，总量为100mg。rt-PA滴毕后应用肝素1000U/h，连续48h，监测APTT在60～80s，以后皮下注射肝素6250u每12h一次，持续3～5d。于溶栓前和溶栓再通后抽血测定血清NO、NOS和红细胞MDA含量。溶栓治疗均在发病后6h内，平均3.8h。
1.3 溶栓后血管再通观察指标：①溶栓后2h内心电图ST段抬高最显著导联回降≥50%；②溶栓后2～3h内胸痛基本缓解；③溶栓后2～3h内出现加速性室性自主心律；房室或束支传导阻滞突然改善或消失；室性早搏等心律失常或心率改变；④血清CPK酶峰提前在发病16h以内。同时具备以上两项或以上者，判断为血管再通，但除外第②和③项组合[3]。
, 百拇医药
1.4 测定方法：按南京建成生物工程研究所提供的试剂盒，采用硝酸还原酶法测定血清NO。此方法利用硝酸还原酶特异性将NO3-还原为NO2-，通过显色深浅测定其浓度的高低，单位为μmol/L。应用比色法测定NOS。血清NOS活力的定义：每毫升血清每分钟生成1nmolNO为1个酶活力单位。NOS的单位为u/ml。MDA测定按冯国基等介绍的方法测定[4]。
1.5 统计处理：结果以
±s表示，资料采用t检验，P<0.05为差异显著，P<0.01为差异非常显著。
2 结果
AMI患者较正常对照组血清NO、NOS含量低，红细胞MDA增高，差异非常显著(P<0.01)。溶栓后NO、NOS、MDA升高，与溶栓前比较差异显著(P<0.05)，但与对照组比较，NO仍低于正常(P<0.05)，而NOS接近正常(P>0.05)。AMI溶栓前后NO、NOS及MDA的变化见附表。
, 百拇医药
附表 急性心肌梗死患者溶栓
前后NO、NOS、MDA含量的变化(±s) 组别
例数
NO(μmol/L)
NOS
(u/ml)
MDA
(nmol/ml)
对照组
68
76.9±20.3
, 百拇医药
28.3±11.1
0.228±0.031
AMI溶栓前
16
37.8±6.9*
19.1±9.2*
0.334±0.098*
AMI溶栓后
16
45.5±11.3*＃
26.6±10.4＃
, 百拇医药
0.411±0.104*＃
注：与对照组比较，*P<0.01；治疗前后比较，＃P<0.05
3 讨论
自Furchgott等发现血管内皮细胞产生并分泌内源性舒张因子后，进一步的研究发现内皮源性舒张因子就是NO。催化NO生物合成的酶称为一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)。NOS的一个重要特征是不仅合成NO，也能产生超氧离子[5]。NO具有极强的亲脂性可迅速扩散入邻近的血管平滑肌细胞，通过激活鸟苷酸环化酶，增加细胞内cGMP，降低细胞游离钙水平，引起血管平滑肌超极化反应，直接产生血管平滑肌舒张作用。血管内皮细胞释放NO还能抑制血管损伤后血小板的聚集，防止血小板粘附于管壁形成血栓。冠状动脉粥样硬化时，血管内皮细胞发生改变，内皮松弛作用受损，NO的合成和释放减少。动脉硬化又使NO进入血管平滑肌受阻，因而易造成冠状动脉痉挛，心绞痛发作；另因NO减少，使NO抑制血管损伤后血小板的聚集、防止血小板粘附于血管壁的作用减弱。这些因素均是最终发生心肌梗死的可能原因。我们测定AMI患者血清NO，结果也证实AMI患者NO含量降低，这在AMI发生、发展过程中可能具有重要意义。经溶栓后NO含量升高，可能是血管再通后血流增多，刺激了血管内皮细胞增加NO的分泌释放。但由于动脉硬化，内皮细胞受损，使这种分泌增加仍低于正常。NO是仅在局部发挥作用的内源性物质，可通过调节血管平滑肌的舒缩而改变局部的血流状态[6]。这种由NO介导的缺血再灌注引起的血管扩张，对局部缺血的心肌细胞可能有益。但是缺血心肌恢复血流再灌注时，代表氧自由基活性及脂质过氧化反应程度的红细胞丙二醛浓度升高。特别是当再灌注过程产生的超氧阴离子O2*和NO·反应生成强氧化剂ONOO-(超氧亚硝酸根离子)可能导致再灌注损伤，这对局部缺血的心肌细胞可能有害。我们观察到出现再灌注心律失常的病例MDA升高尤明显。有文献报道NO可以减少心肌梗死的范围[7，8]，我们推测这种效应取决于NO介导的再灌注损伤的净效益。
, 百拇医药
参考文献
1 Umans JG，Levi R.Nitric oxide in the regulation of blood flow and arterial pressure.Ann Rev Physiol，1995,57：771～790
2 Moncada S，Higgs A.The L-arginine nitric oxide pathway.N Eng J Med，1993，329：2002～2012
3 中华心血管病杂志编委会.急性心肌梗塞溶栓疗法参考方案.中华心血管病杂志，1996，5：328～329
4 冯国基，崔巧生，孙春该，等.红细胞丙二醛含量的测定及其临床意义探讨.陕西医学检验杂志，1992，7：136～139
5 Pou S，Pou WS，Bredt DS，et al.Generation of superoxide by purified brain nitric oxide synthase.J Biol Chen，1992，267：24173～24176
, 百拇医药
6 Iami T，Hirata Y，Kanno K，et al.Induction of nitric oxide synthase by cyclic AMP in rat vascular smooth muscle cell.J Clin Invest，1994，93：543～548
7 Daniel TE，Masazumi W，Nilanjana M，et al.Critical timing of nitric oxide supplementation in cardioplegic arrest and reperfusion.Circulation(supplement Ⅱ)，1996，94：407～411
8 Christophe A，Kenneth DB，Pedro RM.Inhaled nitric oxide increases coronary artery patency after thrombolysis.Circulation，1994，94：1919～1926
收稿：1998-11-22, 百拇医药
单位：施庆忠 胡文彬 钱伟靖 冯国基 王晓红 聂国英，解放军第401医院急诊科 6071 青岛
关键词：急性心肌梗死；溶栓治疗；一氧化氮；一氧化氮合酶；氧自由基
急诊医学990408 摘要：目的：探讨急性心肌梗死患者(AMI)溶栓前后体内一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)及丙二醛(MDA)含量变化的临床意义。方法：采用比色法测定16例AMI溶栓前后血清NO(硝酸还原酶法)及NOS含量，采用硫代巴比妥酸比色法测定红细胞MDA含量。结果：AMI溶栓前NO及NOS分别为37.8±6.9μmol/L和19.1±9.2u/ml，低于对照组76.9±20.3μmol/L和28.3±11.1u/ml，差异均非常显著(P<0.01)；溶栓再通后NO及NOS分别为45.5±11.3μmol/L和26.6±10.4u/ml，与溶栓前比较，差异均显著(P<0.05)，但NO仍显著低于对照组(P<0.01)，NOS与对照组比较已无差异(P>0.05)；溶栓前MDA为0.334±0.098nmol/ml，高于对照组0.228±0.031nmol/ml，溶栓后MDA进一步升高。结论：NO、NOS及MDA参与了AMI的发生和发展过程，测定AMI患者的NO、NOS及MDA的变化可能对病情的判断具有重要意义。
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Changes of nitric oxide、nitric oxide synthase、malondialdehyde of thrombolytic therapy in acute myocardial infarction
Shi Qingzhong，Hu Wenbin，Qian Weijing，et al.
PLA No.401 Hospital，Qingdao 266071
Abstract Objective：To observe the changes of nitric oxide(NO)、nitric oxide synthase(NOS)、malondialdehyde(MDA) of thrombolytic therapy in acute myocardial infarction(AMI).Methods：Serum NO and NOS were measured by calorimetric method and red blood cell MDA by thiobabituric acid colorimetric analysis in 16 AMI thrombolytic therapy with recombinant tissue-type plasminogen activator(rt-PA) and 68 normal subjects.Results：The levels of serum NO and NOS were significantly lower and red blood cell MDA were significantly higher in AMI patients than in normal controls(37.8±6.9μmol/L vs 76.9±20.3μmol/L、19.1±9.1u/ml vs 28.3±11.1u/ml and 0.334±0.098nmol/ml vs 0.228±0.031nmol/ml，P<0.01) respectively.The levels of serum NO、NOS and MDA of patients after myocardial reperfusion were higher than before thrombolytic therapy(45.5±11.3μmol/L vs 37.8±6.9μmol/L、26.6±10.4u/ml vs 19.1±9.1u/ml and 0.334±0.098nmol/ml vs 0.411±0.104nmol/ml，P<0.05) respectively.But the levels of serum NO in AMI patients after myocardial reperfusion was still lower than normal subjects(45.5±11.3μmol/L vs 76.9±20.3μmol/L，P<0.05) and that NOS returned to normal(26.6±10.4u/ml vs 28.3±11.1u/ml).Conclusion：The results suggested that NO、NOS and MDA may be involved in the occurrence and development of AMI.
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Key words Acute myocardial infarction Thrombolytic therapy Nitric oxide Nitric oxide synthase Oxygen free radicals
近来的研究表明血管内皮舒张因子，即一氧化氮(NO)在调节血管张力、维持血压稳定及冠心病的发生发展中起重要作用[1，2]。我们测定16例急性心肌梗死(AMI)患者应用重组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)溶栓治疗前后NO、NOS和MDA的变化，并与68例非冠心病患者(对照组)作比较，探讨AMI患者溶栓治疗前后NO、NOS及MDA变化的临床意义，报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料：16例AMI中，男14例、女2例，年龄34～78岁，平均57.3±5.9岁。梗死部位：前壁6例，前间壁2例，广泛前壁侧壁3例，下壁2例，下壁+正后壁3例。
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1.2 给药方法：患者确诊后即刻口服肠溶阿斯匹林150mg，且静脉滴注肝素5000U后，立即给予rt-PA10mg，在2min内静脉注入，继之以50mg 1h内静脉滴入，之后2h内再滴入40mg，总量为100mg。rt-PA滴毕后应用肝素1000U/h，连续48h，监测APTT在60～80s，以后皮下注射肝素6250u每12h一次，持续3～5d。于溶栓前和溶栓再通后抽血测定血清NO、NOS和红细胞MDA含量。溶栓治疗均在发病后6h内，平均3.8h。
1.3 溶栓后血管再通观察指标：①溶栓后2h内心电图ST段抬高最显著导联回降≥50%；②溶栓后2～3h内胸痛基本缓解；③溶栓后2～3h内出现加速性室性自主心律；房室或束支传导阻滞突然改善或消失；室性早搏等心律失常或心率改变；④血清CPK酶峰提前在发病16h以内。同时具备以上两项或以上者，判断为血管再通，但除外第②和③项组合[3]。
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1.4 测定方法：按南京建成生物工程研究所提供的试剂盒，采用硝酸还原酶法测定血清NO。此方法利用硝酸还原酶特异性将NO3-还原为NO2-，通过显色深浅测定其浓度的高低，单位为μmol/L。应用比色法测定NOS。血清NOS活力的定义：每毫升血清每分钟生成1nmolNO为1个酶活力单位。NOS的单位为u/ml。MDA测定按冯国基等介绍的方法测定[4]。
1.5 统计处理：结果以
±s表示，资料采用t检验，P<0.05为差异显著，P<0.01为差异非常显著。2 结果
AMI患者较正常对照组血清NO、NOS含量低，红细胞MDA增高，差异非常显著(P<0.01)。溶栓后NO、NOS、MDA升高，与溶栓前比较差异显著(P<0.05)，但与对照组比较，NO仍低于正常(P<0.05)，而NOS接近正常(P>0.05)。AMI溶栓前后NO、NOS及MDA的变化见附表。
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附表 急性心肌梗死患者溶栓
前后NO、NOS、MDA含量的变化(
±s) 组别例数
NO(μmol/L)
NOS
(u/ml)
MDA
(nmol/ml)
对照组
68
76.9±20.3
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28.3±11.1
0.228±0.031
AMI溶栓前
16
37.8±6.9*
19.1±9.2*
0.334±0.098*
AMI溶栓后
16
45.5±11.3*＃
26.6±10.4＃
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0.411±0.104*＃
注：与对照组比较，*P<0.01；治疗前后比较，＃P<0.05
3 讨论
自Furchgott等发现血管内皮细胞产生并分泌内源性舒张因子后，进一步的研究发现内皮源性舒张因子就是NO。催化NO生物合成的酶称为一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)。NOS的一个重要特征是不仅合成NO，也能产生超氧离子[5]。NO具有极强的亲脂性可迅速扩散入邻近的血管平滑肌细胞，通过激活鸟苷酸环化酶，增加细胞内cGMP，降低细胞游离钙水平，引起血管平滑肌超极化反应，直接产生血管平滑肌舒张作用。血管内皮细胞释放NO还能抑制血管损伤后血小板的聚集，防止血小板粘附于管壁形成血栓。冠状动脉粥样硬化时，血管内皮细胞发生改变，内皮松弛作用受损，NO的合成和释放减少。动脉硬化又使NO进入血管平滑肌受阻，因而易造成冠状动脉痉挛，心绞痛发作；另因NO减少，使NO抑制血管损伤后血小板的聚集、防止血小板粘附于血管壁的作用减弱。这些因素均是最终发生心肌梗死的可能原因。我们测定AMI患者血清NO，结果也证实AMI患者NO含量降低，这在AMI发生、发展过程中可能具有重要意义。经溶栓后NO含量升高，可能是血管再通后血流增多，刺激了血管内皮细胞增加NO的分泌释放。但由于动脉硬化，内皮细胞受损，使这种分泌增加仍低于正常。NO是仅在局部发挥作用的内源性物质，可通过调节血管平滑肌的舒缩而改变局部的血流状态[6]。这种由NO介导的缺血再灌注引起的血管扩张，对局部缺血的心肌细胞可能有益。但是缺血心肌恢复血流再灌注时，代表氧自由基活性及脂质过氧化反应程度的红细胞丙二醛浓度升高。特别是当再灌注过程产生的超氧阴离子O2*和NO·反应生成强氧化剂ONOO-(超氧亚硝酸根离子)可能导致再灌注损伤，这对局部缺血的心肌细胞可能有害。我们观察到出现再灌注心律失常的病例MDA升高尤明显。有文献报道NO可以减少心肌梗死的范围[7，8]，我们推测这种效应取决于NO介导的再灌注损伤的净效益。
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参考文献
1 Umans JG，Levi R.Nitric oxide in the regulation of blood flow and arterial pressure.Ann Rev Physiol，1995,57：771～790
2 Moncada S，Higgs A.The L-arginine nitric oxide pathway.N Eng J Med，1993，329：2002～2012
3 中华心血管病杂志编委会.急性心肌梗塞溶栓疗法参考方案.中华心血管病杂志，1996，5：328～329
4 冯国基，崔巧生，孙春该，等.红细胞丙二醛含量的测定及其临床意义探讨.陕西医学检验杂志，1992，7：136～139
5 Pou S，Pou WS，Bredt DS，et al.Generation of superoxide by purified brain nitric oxide synthase.J Biol Chen，1992，267：24173～24176
, 百拇医药
6 Iami T，Hirata Y，Kanno K，et al.Induction of nitric oxide synthase by cyclic AMP in rat vascular smooth muscle cell.J Clin Invest，1994，93：543～548
7 Daniel TE，Masazumi W，Nilanjana M，et al.Critical timing of nitric oxide supplementation in cardioplegic arrest and reperfusion.Circulation(supplement Ⅱ)，1996，94：407～411
8 Christophe A，Kenneth DB，Pedro RM.Inhaled nitric oxide increases coronary artery patency after thrombolysis.Circulation，1994，94：1919～1926
收稿：1998-11-22, 百拇医药