盐酸小檗碱片的分光光度法与HPLC测定
作者：饶伟文 钟雪芳 冀赣菁
单位：广西梧州市药检所 广西543000
关键词：盐酸小檗碱；含量测定；分光光度法；HPLC
北京中医药大学学报990411 摘要：为了建立盐酸小檗碱片新的含量测定方法，采用分光光度法与HPLC法，同时与碘量法对比。结果：分光光度法与HPLC法专属性更强，可检测故意造假的产品。结论：分光光度法与HPLC法测定结果更准确、可靠。
Spectrophotometric Method and HPLC Assay on Berberine Hydrochloride Tablet
Rao Weiwen Zhong Xuefang Ji Ganjing
(Wuzhou Institute of the Control of Pharmaceutical and Biological Products,Guangxi 543000)
, 百拇医药
ABSTRACT: To make a new method of content assay of the berberine hydrochloride tablet, take spectrophotometric method and HPLC assay and compare with iodometric method at the same time. Results: The specificity of spectrophotometric mehtod and HPLC assay is stronger and can check out the forged product, so they are more accurate and reliable.
KEY WORDS: Berberine hydrochloride; Assaying; Spectrophotometric method; HPLC
盐酸小檗碱是常用抗菌药，1995年版中国药典采用碘量法[1]测定其含量，本法专属性不强，对于用劣质原料生产的制剂无法检出。因此，我们采用分光光度法和HPLC法测定，结果准确、可靠，并首次发现数批用假劣原料生产的产品。
, http://www.100md.com
1 仪器与试药
岛津UV-265FW自动记录分光光度计；Waters 501 HPLC泵，U6K进样器，SP4290积分仪。实验用盐酸小檗碱片样品均系本所检品，乙腈、乙醇等试剂均为分析纯。盐酸小檗碱、巴马汀、药根碱均为中国药品生物制品检定所出品。
2 实验方法
2.1 分光光度法
取本品10片，如为糖衣片，注意除去糖衣，研细，精密称取适量(约相当于盐酸小檗碱40 mg)，置250mL容量瓶中，用加热至70℃的硫酸溶液(0.05mol/L)150mL，振摇10min使盐酸小檗碱溶解，放冷至室温，加硫酸溶液(0.05mol/L)至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，量取续滤液5mL置100mL容量瓶中，加上述硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在345nm波长处测定吸收度，按C20H18CINO42H2O的吸收系数(E1%1cm)为664(系根据中国药典1990年版一部276页黄连含量测定项下C20H18CINO4吸收系数728换算而得)计算，即得。
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2.2 HPLC法
(1)色谱条件：色谱柱：Kromasil C18,5μm，250mm×4.6mm ID，大连化学物理研究所；以乙腈—水(600∶400每1L中含磷酸二氢钾3.4g，十二烷基硫酸钠1.7g)为流动相，流速1mL/min，检测波长为345nm。
(2)对照品溶液的配制：精密称取盐酸小檗碱对照品40mg，置100mL容量瓶中，加乙醇适量，振摇使溶解，加乙醇至刻度，摇匀，吸取5mL，置100mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。巴马汀、药根碱对照液的配制方法同上。另取上述3种对照品乙醇液各适量，置于同一容量瓶中，加流动相稀释，制成每1mL含盐酸小檗碱20μg，巴与汀2μg，药根碱5μg的混合对照品溶液。
(3)测定法：按分光光度法取样(相当于盐酸小檗碱40mg)，置100mL容量瓶中，加乙醇70mL，置60 ℃水浴中加热，振摇20min使盐酸小檗碱溶解，放冷至室温，加乙醇至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，量取续滤液5mL，置100mL容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，精密量取10μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图，另取100℃干燥4 h的盐酸小檗碱对照品(C20H18CINO4)40mg，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得(含结晶水的盐酸小檗碱C20H18CINO4.2H2O的浓度等于上述对照品的浓度乘以1.0968)。
, 百拇医药
3 结果
3.1 HPLC法的系统适用性
按上述条件，以盐酸小檗碱计，理论塔板数为4860，TR为7.9min，连续进样5次，其峰面积RSD为0.3%。盐酸小檗碱、巴马汀、药根碱分离良好(见图1)。
1 盐酸小檗碱 2 巴马汀 3 药根碱
A 对照品 B 样品(6号)
图1 HPLC色谱图
(1)进样量与峰面积的关系：取盐酸小檗碱对照液，分别进样2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15μL(相当于46～276×10-3μg)，结果进样量与峰面积的回归方程为：y=7.47+7.11x，r=0.9998。
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(2)方法精密度试验：取同一批样品(3号样)，重复取样测定5次，结果分别为：96.0、97.7、97.0、95.0、96.9%；平均含量为96.5%，RSD为1.1%。
3.2 三种方法测定结果比较
取各批样品，分别按碘量法[1]、分光光度法、HPLC法测定，结果见表1。
表1 三种方法测定不同厂家产品结果对比 (%) 编号
标示厂家
批号
规格
碘量法
分光法
, 百拇医药
HPLC
备 注
1
四川华安药物原料厂
981112
原料
99.6
98.3
100.7
三种方法RSD：1.2%
2
焦作平光制药公司
981006
, 百拇医药
糖衣片0.1g
100.6
100.5
99.0
三种方法RSD：0.9%
3
成都锦华制药厂
980601
糖衣片0.1g
97.5
95.7
96.5
三种方法RSD：0.92%
, 百拇医药
4
湖南zJJ厂
980504
0.1g
89.2
88.6
90.2
不合格品
5
昆明TK厂
980818-1
0.1g
96.9
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91.1
81.0
另含药根碱约7%
6
云南AN厂
981029
0.1g
95.4
93.8
79.5
另含药根碱、巴马汀约13%
7
云南JK厂
, http://www.100md.com
980202
糖衣片0.1g
96.1
91.3
79.0
另含药根碱、巴马汀约11%
8
广东KT厂
980606
0.1g
103.7
37.6
38.7
, 百拇医药
检出其他还原性物质
9
广东KT厂
980301
0.1g
110.2
37.9
38.0
检出其他还原性物质
10
广东KT厂
980304
0.1g
, 百拇医药
109.1
37.9
38.7
检出其他还原性物质
11
广东KT厂
980620
0.1g
106.1
36.8
37.4
检出其他还原性物质
12
, 百拇医药
广东KT厂
980621
0.1g
107.7
38.1
39.0
检出其他还原性物质
13
广东KT厂
980908
糖衣片0.1g
101.0
34.2
, 百拇医药
35.2
检出其他还原性物质
4 讨论
(1)从表1可见，真正合格的产品(1、2、3号样品)，三种方法的测定结果相近，相对标准差均在1.5%以内。
(2)碘量法测定盐酸小檗碱专属性不强，对于故意造假的样品(8～13号样品)测定结果均在100%～110%之间，因此，建议现版药典尽快修订。
(3)分光光度法操作简单，对于药根碱，巴马汀限量超标者(如6、7号样品)无法检出。
(4)HPLC法可同时测定盐酸小檗碱、药根碱、巴马汀的含量(见图1)，既可用于盐酸小檗碱原料及制剂的含量测定，也可用于药根碱和巴马汀的限量测定。
(5)在故意造假的6批产品中；可检测到一种还原性物质，其成分结构有待进一步鉴定。
作者简介：饶伟文，41岁，副主任药师。
参考文献
1 中华人民共和国药典二部.广东：广东科技出版社、化学工业出版社，1995.567～569
(收稿日期：1999-03-24), http://www.100md.com
单位：广西梧州市药检所 广西543000
关键词：盐酸小檗碱；含量测定；分光光度法；HPLC
北京中医药大学学报990411 摘要：为了建立盐酸小檗碱片新的含量测定方法，采用分光光度法与HPLC法，同时与碘量法对比。结果：分光光度法与HPLC法专属性更强，可检测故意造假的产品。结论：分光光度法与HPLC法测定结果更准确、可靠。
Spectrophotometric Method and HPLC Assay on Berberine Hydrochloride Tablet
Rao Weiwen Zhong Xuefang Ji Ganjing
(Wuzhou Institute of the Control of Pharmaceutical and Biological Products,Guangxi 543000)
, 百拇医药
ABSTRACT: To make a new method of content assay of the berberine hydrochloride tablet, take spectrophotometric method and HPLC assay and compare with iodometric method at the same time. Results: The specificity of spectrophotometric mehtod and HPLC assay is stronger and can check out the forged product, so they are more accurate and reliable.
KEY WORDS: Berberine hydrochloride; Assaying; Spectrophotometric method; HPLC
盐酸小檗碱是常用抗菌药，1995年版中国药典采用碘量法[1]测定其含量，本法专属性不强，对于用劣质原料生产的制剂无法检出。因此，我们采用分光光度法和HPLC法测定，结果准确、可靠，并首次发现数批用假劣原料生产的产品。
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1 仪器与试药
岛津UV-265FW自动记录分光光度计；Waters 501 HPLC泵，U6K进样器，SP4290积分仪。实验用盐酸小檗碱片样品均系本所检品，乙腈、乙醇等试剂均为分析纯。盐酸小檗碱、巴马汀、药根碱均为中国药品生物制品检定所出品。
2 实验方法
2.1 分光光度法
取本品10片，如为糖衣片，注意除去糖衣，研细，精密称取适量(约相当于盐酸小檗碱40 mg)，置250mL容量瓶中，用加热至70℃的硫酸溶液(0.05mol/L)150mL，振摇10min使盐酸小檗碱溶解，放冷至室温，加硫酸溶液(0.05mol/L)至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，量取续滤液5mL置100mL容量瓶中，加上述硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在345nm波长处测定吸收度，按C20H18CINO42H2O的吸收系数(E1%1cm)为664(系根据中国药典1990年版一部276页黄连含量测定项下C20H18CINO4吸收系数728换算而得)计算，即得。
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2.2 HPLC法
(1)色谱条件：色谱柱：Kromasil C18,5μm，250mm×4.6mm ID，大连化学物理研究所；以乙腈—水(600∶400每1L中含磷酸二氢钾3.4g，十二烷基硫酸钠1.7g)为流动相，流速1mL/min，检测波长为345nm。
(2)对照品溶液的配制：精密称取盐酸小檗碱对照品40mg，置100mL容量瓶中，加乙醇适量，振摇使溶解，加乙醇至刻度，摇匀，吸取5mL，置100mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。巴马汀、药根碱对照液的配制方法同上。另取上述3种对照品乙醇液各适量，置于同一容量瓶中，加流动相稀释，制成每1mL含盐酸小檗碱20μg，巴与汀2μg，药根碱5μg的混合对照品溶液。
(3)测定法：按分光光度法取样(相当于盐酸小檗碱40mg)，置100mL容量瓶中，加乙醇70mL，置60 ℃水浴中加热，振摇20min使盐酸小檗碱溶解，放冷至室温，加乙醇至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，量取续滤液5mL，置100mL容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，精密量取10μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图，另取100℃干燥4 h的盐酸小檗碱对照品(C20H18CINO4)40mg，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得(含结晶水的盐酸小檗碱C20H18CINO4.2H2O的浓度等于上述对照品的浓度乘以1.0968)。
, 百拇医药
3 结果
3.1 HPLC法的系统适用性
按上述条件，以盐酸小檗碱计，理论塔板数为4860，TR为7.9min，连续进样5次，其峰面积RSD为0.3%。盐酸小檗碱、巴马汀、药根碱分离良好(见图1)。
1 盐酸小檗碱 2 巴马汀 3 药根碱
A 对照品 B 样品(6号)
图1 HPLC色谱图
(1)进样量与峰面积的关系：取盐酸小檗碱对照液，分别进样2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15μL(相当于46～276×10-3μg)，结果进样量与峰面积的回归方程为：y=7.47+7.11x，r=0.9998。
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(2)方法精密度试验：取同一批样品(3号样)，重复取样测定5次，结果分别为：96.0、97.7、97.0、95.0、96.9%；平均含量为96.5%，RSD为1.1%。
3.2 三种方法测定结果比较
取各批样品，分别按碘量法[1]、分光光度法、HPLC法测定，结果见表1。
表1 三种方法测定不同厂家产品结果对比 (%) 编号
标示厂家
批号
规格
碘量法
分光法
, 百拇医药
HPLC
备 注
1
四川华安药物原料厂
981112
原料
99.6
98.3
100.7
三种方法RSD：1.2%
2
焦作平光制药公司
981006
, 百拇医药
糖衣片0.1g
100.6
100.5
99.0
三种方法RSD：0.9%
3
成都锦华制药厂
980601
糖衣片0.1g
97.5
95.7
96.5
三种方法RSD：0.92%
, 百拇医药
4
湖南zJJ厂
980504
0.1g
89.2
88.6
90.2
不合格品
5
昆明TK厂
980818-1
0.1g
96.9
, http://www.100md.com
91.1
81.0
另含药根碱约7%
6
云南AN厂
981029
0.1g
95.4
93.8
79.5
另含药根碱、巴马汀约13%
7
云南JK厂
, http://www.100md.com
980202
糖衣片0.1g
96.1
91.3
79.0
另含药根碱、巴马汀约11%
8
广东KT厂
980606
0.1g
103.7
37.6
38.7
, 百拇医药
检出其他还原性物质
9
广东KT厂
980301
0.1g
110.2
37.9
38.0
检出其他还原性物质
10
广东KT厂
980304
0.1g
, 百拇医药
109.1
37.9
38.7
检出其他还原性物质
11
广东KT厂
980620
0.1g
106.1
36.8
37.4
检出其他还原性物质
12
, 百拇医药
广东KT厂
980621
0.1g
107.7
38.1
39.0
检出其他还原性物质
13
广东KT厂
980908
糖衣片0.1g
101.0
34.2
, 百拇医药
35.2
检出其他还原性物质
4 讨论
(1)从表1可见，真正合格的产品(1、2、3号样品)，三种方法的测定结果相近，相对标准差均在1.5%以内。
(2)碘量法测定盐酸小檗碱专属性不强，对于故意造假的样品(8～13号样品)测定结果均在100%～110%之间，因此，建议现版药典尽快修订。
(3)分光光度法操作简单，对于药根碱，巴马汀限量超标者(如6、7号样品)无法检出。
(4)HPLC法可同时测定盐酸小檗碱、药根碱、巴马汀的含量(见图1)，既可用于盐酸小檗碱原料及制剂的含量测定，也可用于药根碱和巴马汀的限量测定。
(5)在故意造假的6批产品中；可检测到一种还原性物质，其成分结构有待进一步鉴定。
作者简介：饶伟文，41岁，副主任药师。
参考文献
1 中华人民共和国药典二部.广东：广东科技出版社、化学工业出版社，1995.567～569
(收稿日期：1999-03-24), http://www.100md.com