益肾解毒汤延缓大鼠慢性肾功能衰竭进程的实验研究
作者：周锦明 蔡浙毅 葛缘仁 陈 泳 沈 康
单位：周锦明 蔡浙毅 葛缘仁 陈 泳 沈 康(上海市金山中心医院 上海 201500)
关键词：益肾解毒汤；慢性肾功能衰竭；实验研究
中国中医基础医学杂志990406 益肾解毒汤是周锦明主任医师经30余年临床实践而研制的一个延缓慢性肾功能衰竭(CRF)进程的处方。经长期临床验证，发现其对延缓慢性肾功能衰竭进程，具有很好的效果。我们在此基础上采用大鼠5/6肾切除所致CRF模型，对益肾解毒汤进行实验研究，对其疗效及作用机理作初步的探讨。
材料与方法
1 实验对象
雄性SD大鼠55只，体重190g±16.3g，由上海中医药大学实验动物中心提供。
, 百拇医药
2 造模、分组与用药
55只SD雄性大鼠先饲养1周，再随机抽取7只作为正常对照组，其余48只作为实验组，准备建立CRF实验动物模型。
2.1 造模 48只实验组大鼠在术区去毛及灭菌条件下，用20%的乌拉坦20ml进行腹腔注射麻醉，打开腹腔，游离出左侧肾脏，并切除左肾重量的2/3，压迫止血后，见无活动性出血，复位左侧残余肾脏，然后逐层缝合腹膜及皮肤，待动物清醒后送回动物房中。第一次手术后两周进行第二次手术，20%的乌拉坦腹腔注射麻醉下，打开腹腔，游离右侧肾脏，待右侧肾蒂完全游离后，予以缝线结扎肾蒂，然后行右肾全摘除。手术时特别注意勿损伤肾上腺及输尿管。两次手术切除术由一人操作，助手配合完成。两次手术共切除两肾总重量的5/6，其余7只正常对照组大鼠采用以上同样的手术步骤和方法，但不对左肾和右肾行切除术。
2.2 分组
, 百拇医药 55只SD大鼠于第二次手术后1月，行眼内眦动-静脉丛采血，进行血清肌酐(SCR)、尿素氮(Bun)检查。按血清肌酐结合尿素氮的高低进行分组，共分为四组。B组(n=15)：保肾康治疗组；C组(n=15)：益肾解毒汤治疗组；D组(n=18)：实验对照组；A组(n=7):正常对照组。B、C、D三组分组时Scr的均数为:
±SD=143.1±45.95μmol/L，Bun的均数为:±SD=29.34±8.52mmol/L。以上各组动物分笼饲养，给予普通颗粒饲料及自由饮水。
2.3 用药
分组后，各组动物进行为期2个月的治疗干预，给药方式为灌胃给药。B组动物每日一次予以保肾康片(成都亨达医药集团公司)的溶液3ml灌胃(36mg/3ml，按成人每公斤体重用药量的20倍计算)。C组动物每日一次灌以3ml的益肾解毒汤溶液(由黄芪、生地、生大黄、六月雪、茯苓、丹参等组成的水煎液)。A组与D组动物每日灌以3ml生理盐水。
, http://www.100md.com
3 检查项目
3.1 一般情况 精神状况、活动度、皮毛色泽、摄食及生存率等。
3.2 血常规 红细胞计数(RBC)、血色素(Hb)、红细胞压积(Hct)、血小板计数(plt)。
3.3 血生化指标 血清肌酐(scr)、血清尿素氮(Bun)、血清尿酸(URIC)、血浆总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、血钙(Ca)、血磷(P)、胆固醇(Tc)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、脂蛋白a(LPa)、载脂蛋白B(APOB)。
3.4 残余肾脏观察 质地、颜色、外观、大小。
3.5 肾组织光镜观察 HE常规染色。
3.6 肾组织免疫组织化学检查 胶原IV(COLIV)及纤维连接蛋白测定(FN)。
, 百拇医药
结果
1 一般情况
实验期间，A组动物表现机警，反应快，皮毛致密，整齐而有光泽，生长、进食及活动情况均无明显异常。实验组动物明显营养不良，精神萎糜，活动迟缓，食欲不振，皮毛蓬松，枯槁无光泽。其中以D组最为明显，B、C两组次之。除正常对照A组无死亡外，其余B、C、D三组都有动物死亡。其生存率见表1。
表1 实验各组大鼠生存率及死亡率比较表(单位：只) 观察项目
正 常
对照组
保肾康组
益肾解
毒汤组
, 百拇医药
实 验
对照组
起始动物数
7
15
15
18
死亡动物数
0
6
3
8
生 存 率
, http://www.100md.com 100%
60%
80%*
55.56%
死 亡 率
0
40%
20%*
44.44%
注：* 与实验对照组比较：经x2检验：P<0.1。
2 血常规指标改变
各组RBC、HB、Hct、plt的情况(见表2)。
, http://www.100md.com
3 血清生化指标改变
各组生化指标参见表3、表4、表5、表6、表7。
表2 实验补给各组大鼠血常规指标改变(±s) 观察项目
正常对照组
保肾康组
益肾解毒汤组
实验对照组
RBC(1012/L)
6.87±0.42
5.17±0.76
, http://www.100md.com
5.09±0.95
5.44± 1.04
Hb(g/L)
127±5.51
104.38±11.89
107.33±14.31
104±13.07
Hct(%)
40±2.0
30±3.0
33±18*
31±5.0
, http://www.100md.com
Pl(109/L)
688.67±105.82
816.13±75.59
701.92±184.09*
807±74.85
注：*与保肾康组和实验对照组比较，经t检验：P<0.5,0.1。
表3 实验各组大鼠肾功能指标改变(±s) 观察项目
正常对照组
保肾康组
, 百拇医药
益肾解毒汤组
实验对照组
Scr(μmol/L)
41.29±5.59
139.22±44.38*
111.33±20.50*#
280.4±118.31
Bun(mmol/L)
5.39±0.44
28.8±8.75*
22.14±3.75*#
, 百拇医药
48.04±16.44
URIC(mmol/L)
0.16±0.33
0.12±0.05
0.17±0.06
0.15±0.06
注：*与实验对照组比较，经t检验：P<0.005,0.001;# 与保肾康组比较：P<0.1,0.05。
表4 实验各组大鼠肾功能指标与分组时肾功能指标改变(±s) 观察项目
, http://www.100md.com 正常对照组
保肾康组
益肾解毒汤组
实验对照组
治疗前
Scr(μmol/L)
41.29±5.59
139.22±44.38
111.33±20.50*
280.4±118.31
143.1±45.95
Bun(mmol/L)
, 百拇医药
5.39±0.44
28.8±8.75
22.14±3.75*
48.04±16.44
29.34±8.52
注：*与治疗前比较，经t检验：P<0.05。
表5 实验各组大鼠血浆蛋白指标改变(±s) 观察项目
正常对照组
保肾康组
, 百拇医药 益肾解毒汤组
实验对照组
TP(g/L)
69.71±3.15
63.33±4.69
66.92±2.31*#
63.2±3.52
AIb(g/L)
31.43±1.40
28.11±2.03*
29.25±1.55*
, http://www.100md.com
25.8±2.25
注：*与实验对照组比较，经t检验：P<0.05,0.01; #与保肾康组比较：P<0.05。表6 实验各组大鼠血清电解质钙、磷指标改变(±s) 观察项目
正常对照组
保肾康组
益肾解毒汤组
实验对照组
Ca(mmol/L)
2.36±0.09
2.11±0.19*
, 百拇医药
2.45±0.11*#
2.01±0.32
P (mmol/L)
6.58±2.07
7.73±1.78*
7.47±1.59*
10.88±2.22
注：*与实验对照组比较：P<0.5,0.001；#与保肾康组比较：P<0.001。表7 实验各组大鼠血脂指标改变(±s) 观察项目
, 百拇医药
正常对照组
保肾康组
益肾解毒汤组
实验对照组
Tc(mmol/L)
1.26±0.20
2.27±0.31*
1.71±0.59*#
2.78±1.14
TG(mmol/L)
0.56±0.05
, 百拇医药
0.78±0.21*
0.64±0.33*
0.89±0.39
HDL(mmol/L)
0.54±0.10
1.01±0.15*
0.90±0.10*
1.09±0.26
Lp(a)(mg/L)
336.54±73.78
, http://www.100md.com
337.94±141.89*
330.0±98.53*
408.63±206.91
APOB(g/L)
0.01±0.006
0.021±0.011*
0.020±0.016*
0.099±0.075
注：*与实验组比较：P<0.5,0.05；# 与保肾康组比较：P <0.05。
, 百拇医药
4 残余肾脏大体
实验对照组大鼠残余肾脏形态萎缩，质地较硬，色黯，表面呈颗粒状凹凸不平，沿纵轴剖开后，见皮质部分颜色淡红。 正常对照组大鼠肾脏皮质，髓质的颜色、质地、形态完全正常。
5 肾组织光镜检查
取每只大鼠的肾脏用40%甲醛液固定，石蜡包埋切片后作HE染色，肾小球病变程度的组织学分级，参照purkerson等对肾小球进行组织学分级。即分为五个等级：0级：无任何病变；Ⅰ级：系膜基质增多伴轻度系膜细胞增生；Ⅱ级：系膜区扩大明显伴血管襻节段性硬化和塌陷；Ⅲ级：血管襻节段性硬化伴明显塌陷；Ⅳ级：肾小球硬化伴透明度。每一张肾组织切片共连续被观察25个肾小球，并分别归入上述五个等级，然后计算出每组动物肾小球病变程度的平均值(见表8)
表8 实验各组大鼠肾小球病变程度对比(±s) 观察项目
, 百拇医药
正常对照组
保肾康组
益肾解毒汤组
实验对照组
HE染色
0.28±0.071
1.64±0.205
1.37±0.127*#
1.67±0.431
注：*与实验对照组比较：P<0.05;#与保肾康组比较：P<0.05。
表9 实验各组大鼠FN、COLIV免疫组织化学染色结果对比(±s) 观察项目
, 百拇医药
正常对照组
保肾康组
益肾解毒汤组
实验对照组
FN
0.975±0.024
1.476±0.368
1.287±0.17*#
1.591±0.383
COLIV
0.650±0.141
1.306±0.456
, 百拇医药
1.126±0.233*#
1.361±0.38
注：*与实验对照组比较：P<0.01；#与保肾康组比较：P<0.05。
6 肾组织免疫组织化学染色测定
5μm厚的石蜡包埋包切片，经常规脱蜡后，用PAP免疫酶标法检测肾小球纤维连接蛋白(FN)，IV型胶原蛋白(COLIV)。免抗人FN(美国Telios pharmacy公司)，免抗大鼠COLIV和羊抗免IgG和免PAP均由上海医科大学病理教研室提供。后根据肾小球染色强度进行半定量计数(0-4+)，每张切片共计数25个肾小球，最后求出各组动物肾小球染色强度的平均值(见表9)
讨论
, 百拇医药
慢性肾功能衰竭是发生于各种肾脏疾病基础上，造成肾单位严重受损，而缓慢出现不可逆的肾功能减退，其预后极差。随着透析、肾移植等治疗手段的发展和提高，终末期肾衰的疗效已显著提高，并得到了医学界的一致认同。但至今医学界对如何延缓CRF早、中期的进程无实质性的进展。目前多采取对症治疗为主，但从根本上难以阻止肾功能衰竭的进程。因此，如何延缓CRF的进程是众多医学界人士关注的焦点。本研究正是在临床应用有延缓CRF进程的基础上，采用公认的CRF动物模型，对益肾解毒汤延缓CRF进程的作用机理加以研究并作初步探讨。
益肾解毒汤是一种集益肾健脾、解毒通下等功效的处方，该处方由生黄芪、生地黄、茯苓、丹参、六月雪、生大黄等组成。已有临床和动物实验研究表明，大黄具有降低患者血液中的中、小分子毒素的作用，并能促进蛋白质的合成，抑制肾小球系膜细胞的增生，减少细胞因子的不良作用，纠正脂质代谢紊乱的作用，从而延缓肾小球的硬化。丹参具有改善肾小球毛细血管内外液体压力差以及血液动力学的作用，从而改善肾功能。生黄芪有解除血管痉挛，使毛细血管开放，改善微循环，促进血液流速加快，增加毛细血管张力，降低其脆性，改善血管通透性，扩张微血管，增强组织的耐缺氧能力。茯苓具有健脾利水的功效，可促进肾小球滤过率的增加，减少肾小管对水分的重吸收，从而缓解水钠潴留；并能提高机体的免疫功能，促进蛋白质的合成，从而提高血浆蛋白的水平。生地黄有滋补肾阴的作用，可通过减轻蛋白尿的生成而阻止肾小球系膜细胞的增生，达到延缓肾小球硬化的进程。六月雪有解毒的功效，配合生大黄应用，可以促进中、小分子毒素从肠道排泄，减轻尿毒素引进的消化系统症状，其他药物也都能协同以上药物的作用。综观全方，表明该方是一个集益肾健脾、解毒通下功效的合理处方。因此在临床及动物实验中都取得了较好的阻止旓{CRF进程的作用。
, 百拇医药
1 益肾解毒汤对血液常规的影响
该项动物实验研究表明，益肾解毒汤具有提高CRF实验大鼠红细胞压积的作用，可以部分纠正肾性贫血。可能是通过促进中、小分子毒素的排除，减少了尿毒症毒素对红细胞的破坏，延长红细胞的生存周期，以及部分改善促红细胞生长素的分泌条件而起作用的。实验还表明，该方具有降低CRF大鼠血小板的作用，从而改善CRF的高凝状态。可能是通过该方的活血化瘀功能，即改善微循环，减少血小板的聚集而发挥作用。
2 益肾解毒汤对肾功能的影响
该研究表明，益肾解毒汤有降低CRF大鼠血清肌酐和尿素氮的作用，相对于实验对照组和治疗对照组，疗效肯定。与治疗前的肾功能对照，同样可以发现该处方具有延缓CRF进程的作用。益肾解毒汤延缓CRF进程的作用，可能与其促进尿毒症毒素的排除，促进蛋白质的合成，减轻蛋白尿的生成，以及减轻肾间质的炎性细胞浸润及减少细胞因子的不良作用，改善肾脏的局部血液循环，从而达到抑制肾小球系膜细胞增生及系膜基质成分增多的作用，从而延缓肾小球的硬化。
, 百拇医药
3 益肾解毒汤对血浆蛋白的影响
CRF患者由于尿毒症毒素对消化系统的刺激，常有食欲不佳，以及饮食中蛋白质的摄入限制，蛋白质分解代谢增强，尿中蛋白质的丢失，常有低蛋白血症。本研究表明，益肾解毒汤具有提高CRF大鼠血浆蛋白的作用，可能与其改善消化系统症状，增加蛋白质摄入的利用，促进机体蛋白质合成的增加，减少蛋白尿的生成，从而改善负氮平衡有关。
4 益肾解毒汤对血清钙、磷的影响
钙磷代谢与肾脏有密切关系，钙磷代谢紊乱是CRF常见的并发症。 低血钙不仅可以引起神经肌肉兴奋性的改变，如抽搐、痉挛，而且可引起皮肤干燥、色素沉着及骨骼的病理改变。高血磷是由于肾功能减退时，肾脏排磷减少所致。血磷升高又可进一步加重低血钙。该实验发现，益肾解毒汤有提高血钙水平、降低血磷的作用，其发挥作用与其促进肾脏和肠道对磷的排泄增加，从而促进血钙水平的提高相关。
, 百拇医药
5 益肾解毒汤对脂质代谢的影响
临床和动物实验均表明，CRF时脂质代谢的异常，这种异常不仅出现在尿毒症期，而且在肾小球滤过率降至正常的50%时已经出现。其表现为胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白的升高。脂质代谢紊乱不仅是肾脏疾病的结果，也是促进肾小球硬化发生和CRF进展的重要因素之一。动物实验也证实，高脂饮食可引起肾小球硬化，细胞，培养也发现肾小球系膜细胞、上皮细胞、内皮细胞有低密度脂蛋白的受体。内皮细胞、系膜细胞吞噬的大量脂质可造成细胞损伤。该研究表明，益肾解毒汤可以降低实验大鼠的胆固醇、甘油三酯、脂蛋白α以及载脂蛋白B，因此可以通过降低脂质代谢紊乱的程度，达到保护肾功能的作用。
6 益肾解毒汤对大鼠肾大部切除病理改变的影响
大鼠经大部肾切除后残余肾单位中有血液动力学的改变，引起残存肾单位的高滤过、高灌注，最终会损害肾小球引起肾小球硬化。在实验中我们发现，益肾解毒汤组大鼠的残余肾脏有代尝性的增大，而实验对照组大鼠的残余肾脏明显缩小。病理切片HE染色提示益肾解毒汤组大鼠肾脏的病变程度低于实验对照组，免疫组化检测也同样证实益肾解毒汤组大鼠残余肾脏中纤维连接蛋白及Ⅳ型胶原的沉积明显低于实验对照组。以上病理结果证实，益肾解毒汤的确具有减轻残余肾组织的病理改变，减轻肾小球的硬化，从而达到了延缓慢性肾功能衰竭进程的作用。
, 百拇医药
作者简介：周锦明，男，1942年12月27日出生，上海市南汇县人。1967年毕业于上海中医药大学，现任上海金山区中心医院副院长，区中医医院常务副院长，中医内科主任医师，上海中医药大学兼职硕士研究生导师。兼任华东地区中医肾病专业委员会委员，上海市中医肾病专业委员会副主任委员，脑病、急症专业委员会委员。1992年享受国务院政府颁发的特殊津贴。在中医肾病、心脑血管疾病、消化系统疾病以及外感热病等方面具有相当造诣。曾发表论文40多篇，其中具有代表性的有：“慢性肾功能衰竭的中西医结合诊治”(《中国农村医学》94年8期)、“益肾解毒汤治疗慢性肾功能衰竭30例疗效观察”(《中医杂志》95年2期)、“温阳活血法在心血管疾病中的应用”(《中国农村医学》90年11期)、“清胆和胃汤治疗慢性胃炎64例”(《中国农村医学》93年2期)、“发热论治18法”(《中国农村医学》97年5期)等。曾参编著作4本：《中医男科百问》、《中医实用大全》、《中医临床肾脏病学》等。
(收稿日期 1998—01—20 修回日期 1998—4—20), http://www.100md.com
单位：周锦明 蔡浙毅 葛缘仁 陈 泳 沈 康(上海市金山中心医院 上海 201500)
关键词：益肾解毒汤；慢性肾功能衰竭；实验研究
中国中医基础医学杂志990406 益肾解毒汤是周锦明主任医师经30余年临床实践而研制的一个延缓慢性肾功能衰竭(CRF)进程的处方。经长期临床验证，发现其对延缓慢性肾功能衰竭进程，具有很好的效果。我们在此基础上采用大鼠5/6肾切除所致CRF模型，对益肾解毒汤进行实验研究，对其疗效及作用机理作初步的探讨。
材料与方法
1 实验对象
雄性SD大鼠55只，体重190g±16.3g，由上海中医药大学实验动物中心提供。
, 百拇医药
2 造模、分组与用药
55只SD雄性大鼠先饲养1周，再随机抽取7只作为正常对照组，其余48只作为实验组，准备建立CRF实验动物模型。
2.1 造模 48只实验组大鼠在术区去毛及灭菌条件下，用20%的乌拉坦20ml进行腹腔注射麻醉，打开腹腔，游离出左侧肾脏，并切除左肾重量的2/3，压迫止血后，见无活动性出血，复位左侧残余肾脏，然后逐层缝合腹膜及皮肤，待动物清醒后送回动物房中。第一次手术后两周进行第二次手术，20%的乌拉坦腹腔注射麻醉下，打开腹腔，游离右侧肾脏，待右侧肾蒂完全游离后，予以缝线结扎肾蒂，然后行右肾全摘除。手术时特别注意勿损伤肾上腺及输尿管。两次手术切除术由一人操作，助手配合完成。两次手术共切除两肾总重量的5/6，其余7只正常对照组大鼠采用以上同样的手术步骤和方法，但不对左肾和右肾行切除术。
2.2 分组
, 百拇医药 55只SD大鼠于第二次手术后1月，行眼内眦动-静脉丛采血，进行血清肌酐(SCR)、尿素氮(Bun)检查。按血清肌酐结合尿素氮的高低进行分组，共分为四组。B组(n=15)：保肾康治疗组；C组(n=15)：益肾解毒汤治疗组；D组(n=18)：实验对照组；A组(n=7):正常对照组。B、C、D三组分组时Scr的均数为:
±SD=143.1±45.95μmol/L，Bun的均数为:±SD=29.34±8.52mmol/L。以上各组动物分笼饲养，给予普通颗粒饲料及自由饮水。2.3 用药
分组后，各组动物进行为期2个月的治疗干预，给药方式为灌胃给药。B组动物每日一次予以保肾康片(成都亨达医药集团公司)的溶液3ml灌胃(36mg/3ml，按成人每公斤体重用药量的20倍计算)。C组动物每日一次灌以3ml的益肾解毒汤溶液(由黄芪、生地、生大黄、六月雪、茯苓、丹参等组成的水煎液)。A组与D组动物每日灌以3ml生理盐水。
, http://www.100md.com
3 检查项目
3.1 一般情况 精神状况、活动度、皮毛色泽、摄食及生存率等。
3.2 血常规 红细胞计数(RBC)、血色素(Hb)、红细胞压积(Hct)、血小板计数(plt)。
3.3 血生化指标 血清肌酐(scr)、血清尿素氮(Bun)、血清尿酸(URIC)、血浆总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、血钙(Ca)、血磷(P)、胆固醇(Tc)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、脂蛋白a(LPa)、载脂蛋白B(APOB)。
3.4 残余肾脏观察 质地、颜色、外观、大小。
3.5 肾组织光镜观察 HE常规染色。
3.6 肾组织免疫组织化学检查 胶原IV(COLIV)及纤维连接蛋白测定(FN)。
, 百拇医药
结果
1 一般情况
实验期间，A组动物表现机警，反应快，皮毛致密，整齐而有光泽，生长、进食及活动情况均无明显异常。实验组动物明显营养不良，精神萎糜，活动迟缓，食欲不振，皮毛蓬松，枯槁无光泽。其中以D组最为明显，B、C两组次之。除正常对照A组无死亡外，其余B、C、D三组都有动物死亡。其生存率见表1。
表1 实验各组大鼠生存率及死亡率比较表(单位：只) 观察项目
正 常
对照组
保肾康组
益肾解
毒汤组
, 百拇医药
实 验
对照组
起始动物数
7
15
15
18
死亡动物数
0
6
3
8
生 存 率
, http://www.100md.com 100%
60%
80%*
55.56%
死 亡 率
0
40%
20%*
44.44%
注：* 与实验对照组比较：经x2检验：P<0.1。
2 血常规指标改变
各组RBC、HB、Hct、plt的情况(见表2)。
, http://www.100md.com
3 血清生化指标改变
各组生化指标参见表3、表4、表5、表6、表7。
表2 实验补给各组大鼠血常规指标改变(
±s) 观察项目正常对照组
保肾康组
益肾解毒汤组
实验对照组
RBC(1012/L)
6.87±0.42
5.17±0.76
, http://www.100md.com
5.09±0.95
5.44± 1.04
Hb(g/L)
127±5.51
104.38±11.89
107.33±14.31
104±13.07
Hct(%)
40±2.0
30±3.0
33±18*
31±5.0
, http://www.100md.com
Pl(109/L)
688.67±105.82
816.13±75.59
701.92±184.09*
807±74.85
注：*与保肾康组和实验对照组比较，经t检验：P<0.5,0.1。
表3 实验各组大鼠肾功能指标改变(
±s) 观察项目正常对照组
保肾康组
, 百拇医药
益肾解毒汤组
实验对照组
Scr(μmol/L)
41.29±5.59
139.22±44.38*
111.33±20.50*#
280.4±118.31
Bun(mmol/L)
5.39±0.44
28.8±8.75*
22.14±3.75*#
, 百拇医药
48.04±16.44
URIC(mmol/L)
0.16±0.33
0.12±0.05
0.17±0.06
0.15±0.06
注：*与实验对照组比较，经t检验：P<0.005,0.001;# 与保肾康组比较：P<0.1,0.05。
表4 实验各组大鼠肾功能指标与分组时肾功能指标改变(
±s) 观察项目, http://www.100md.com 正常对照组
保肾康组
益肾解毒汤组
实验对照组
治疗前
Scr(μmol/L)
41.29±5.59
139.22±44.38
111.33±20.50*
280.4±118.31
143.1±45.95
Bun(mmol/L)
, 百拇医药
5.39±0.44
28.8±8.75
22.14±3.75*
48.04±16.44
29.34±8.52
注：*与治疗前比较，经t检验：P<0.05。
表5 实验各组大鼠血浆蛋白指标改变(
±s) 观察项目正常对照组
保肾康组
, 百拇医药 益肾解毒汤组
实验对照组
TP(g/L)
69.71±3.15
63.33±4.69
66.92±2.31*#
63.2±3.52
AIb(g/L)
31.43±1.40
28.11±2.03*
29.25±1.55*
, http://www.100md.com
25.8±2.25
注：*与实验对照组比较，经t检验：P<0.05,0.01; #与保肾康组比较：P<0.05。表6 实验各组大鼠血清电解质钙、磷指标改变(
±s) 观察项目正常对照组
保肾康组
益肾解毒汤组
实验对照组
Ca(mmol/L)
2.36±0.09
2.11±0.19*
, 百拇医药
2.45±0.11*#
2.01±0.32
P (mmol/L)
6.58±2.07
7.73±1.78*
7.47±1.59*
10.88±2.22
注：*与实验对照组比较：P<0.5,0.001；#与保肾康组比较：P<0.001。表7 实验各组大鼠血脂指标改变(
±s) 观察项目, 百拇医药
正常对照组
保肾康组
益肾解毒汤组
实验对照组
Tc(mmol/L)
1.26±0.20
2.27±0.31*
1.71±0.59*#
2.78±1.14
TG(mmol/L)
0.56±0.05
, 百拇医药
0.78±0.21*
0.64±0.33*
0.89±0.39
HDL(mmol/L)
0.54±0.10
1.01±0.15*
0.90±0.10*
1.09±0.26
Lp(a)(mg/L)
336.54±73.78
, http://www.100md.com
337.94±141.89*
330.0±98.53*
408.63±206.91
APOB(g/L)
0.01±0.006
0.021±0.011*
0.020±0.016*
0.099±0.075
注：*与实验组比较：P<0.5,0.05；# 与保肾康组比较：P <0.05。
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4 残余肾脏大体
实验对照组大鼠残余肾脏形态萎缩，质地较硬，色黯，表面呈颗粒状凹凸不平，沿纵轴剖开后，见皮质部分颜色淡红。 正常对照组大鼠肾脏皮质，髓质的颜色、质地、形态完全正常。
5 肾组织光镜检查
取每只大鼠的肾脏用40%甲醛液固定，石蜡包埋切片后作HE染色，肾小球病变程度的组织学分级，参照purkerson等对肾小球进行组织学分级。即分为五个等级：0级：无任何病变；Ⅰ级：系膜基质增多伴轻度系膜细胞增生；Ⅱ级：系膜区扩大明显伴血管襻节段性硬化和塌陷；Ⅲ级：血管襻节段性硬化伴明显塌陷；Ⅳ级：肾小球硬化伴透明度。每一张肾组织切片共连续被观察25个肾小球，并分别归入上述五个等级，然后计算出每组动物肾小球病变程度的平均值(见表8)
表8 实验各组大鼠肾小球病变程度对比(
±s) 观察项目, 百拇医药
正常对照组
保肾康组
益肾解毒汤组
实验对照组
HE染色
0.28±0.071
1.64±0.205
1.37±0.127*#
1.67±0.431
注：*与实验对照组比较：P<0.05;#与保肾康组比较：P<0.05。
表9 实验各组大鼠FN、COLIV免疫组织化学染色结果对比(
±s) 观察项目, 百拇医药
正常对照组
保肾康组
益肾解毒汤组
实验对照组
FN
0.975±0.024
1.476±0.368
1.287±0.17*#
1.591±0.383
COLIV
0.650±0.141
1.306±0.456
, 百拇医药
1.126±0.233*#
1.361±0.38
注：*与实验对照组比较：P<0.01；#与保肾康组比较：P<0.05。
6 肾组织免疫组织化学染色测定
5μm厚的石蜡包埋包切片，经常规脱蜡后，用PAP免疫酶标法检测肾小球纤维连接蛋白(FN)，IV型胶原蛋白(COLIV)。免抗人FN(美国Telios pharmacy公司)，免抗大鼠COLIV和羊抗免IgG和免PAP均由上海医科大学病理教研室提供。后根据肾小球染色强度进行半定量计数(0-4+)，每张切片共计数25个肾小球，最后求出各组动物肾小球染色强度的平均值(见表9)
讨论
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慢性肾功能衰竭是发生于各种肾脏疾病基础上，造成肾单位严重受损，而缓慢出现不可逆的肾功能减退，其预后极差。随着透析、肾移植等治疗手段的发展和提高，终末期肾衰的疗效已显著提高，并得到了医学界的一致认同。但至今医学界对如何延缓CRF早、中期的进程无实质性的进展。目前多采取对症治疗为主，但从根本上难以阻止肾功能衰竭的进程。因此，如何延缓CRF的进程是众多医学界人士关注的焦点。本研究正是在临床应用有延缓CRF进程的基础上，采用公认的CRF动物模型，对益肾解毒汤延缓CRF进程的作用机理加以研究并作初步探讨。
益肾解毒汤是一种集益肾健脾、解毒通下等功效的处方，该处方由生黄芪、生地黄、茯苓、丹参、六月雪、生大黄等组成。已有临床和动物实验研究表明，大黄具有降低患者血液中的中、小分子毒素的作用，并能促进蛋白质的合成，抑制肾小球系膜细胞的增生，减少细胞因子的不良作用，纠正脂质代谢紊乱的作用，从而延缓肾小球的硬化。丹参具有改善肾小球毛细血管内外液体压力差以及血液动力学的作用，从而改善肾功能。生黄芪有解除血管痉挛，使毛细血管开放，改善微循环，促进血液流速加快，增加毛细血管张力，降低其脆性，改善血管通透性，扩张微血管，增强组织的耐缺氧能力。茯苓具有健脾利水的功效，可促进肾小球滤过率的增加，减少肾小管对水分的重吸收，从而缓解水钠潴留；并能提高机体的免疫功能，促进蛋白质的合成，从而提高血浆蛋白的水平。生地黄有滋补肾阴的作用，可通过减轻蛋白尿的生成而阻止肾小球系膜细胞的增生，达到延缓肾小球硬化的进程。六月雪有解毒的功效，配合生大黄应用，可以促进中、小分子毒素从肠道排泄，减轻尿毒素引进的消化系统症状，其他药物也都能协同以上药物的作用。综观全方，表明该方是一个集益肾健脾、解毒通下功效的合理处方。因此在临床及动物实验中都取得了较好的阻止旓{CRF进程的作用。
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1 益肾解毒汤对血液常规的影响
该项动物实验研究表明，益肾解毒汤具有提高CRF实验大鼠红细胞压积的作用，可以部分纠正肾性贫血。可能是通过促进中、小分子毒素的排除，减少了尿毒症毒素对红细胞的破坏，延长红细胞的生存周期，以及部分改善促红细胞生长素的分泌条件而起作用的。实验还表明，该方具有降低CRF大鼠血小板的作用，从而改善CRF的高凝状态。可能是通过该方的活血化瘀功能，即改善微循环，减少血小板的聚集而发挥作用。
2 益肾解毒汤对肾功能的影响
该研究表明，益肾解毒汤有降低CRF大鼠血清肌酐和尿素氮的作用，相对于实验对照组和治疗对照组，疗效肯定。与治疗前的肾功能对照，同样可以发现该处方具有延缓CRF进程的作用。益肾解毒汤延缓CRF进程的作用，可能与其促进尿毒症毒素的排除，促进蛋白质的合成，减轻蛋白尿的生成，以及减轻肾间质的炎性细胞浸润及减少细胞因子的不良作用，改善肾脏的局部血液循环，从而达到抑制肾小球系膜细胞增生及系膜基质成分增多的作用，从而延缓肾小球的硬化。
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3 益肾解毒汤对血浆蛋白的影响
CRF患者由于尿毒症毒素对消化系统的刺激，常有食欲不佳，以及饮食中蛋白质的摄入限制，蛋白质分解代谢增强，尿中蛋白质的丢失，常有低蛋白血症。本研究表明，益肾解毒汤具有提高CRF大鼠血浆蛋白的作用，可能与其改善消化系统症状，增加蛋白质摄入的利用，促进机体蛋白质合成的增加，减少蛋白尿的生成，从而改善负氮平衡有关。
4 益肾解毒汤对血清钙、磷的影响
钙磷代谢与肾脏有密切关系，钙磷代谢紊乱是CRF常见的并发症。 低血钙不仅可以引起神经肌肉兴奋性的改变，如抽搐、痉挛，而且可引起皮肤干燥、色素沉着及骨骼的病理改变。高血磷是由于肾功能减退时，肾脏排磷减少所致。血磷升高又可进一步加重低血钙。该实验发现，益肾解毒汤有提高血钙水平、降低血磷的作用，其发挥作用与其促进肾脏和肠道对磷的排泄增加，从而促进血钙水平的提高相关。
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5 益肾解毒汤对脂质代谢的影响
临床和动物实验均表明，CRF时脂质代谢的异常，这种异常不仅出现在尿毒症期，而且在肾小球滤过率降至正常的50%时已经出现。其表现为胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白的升高。脂质代谢紊乱不仅是肾脏疾病的结果，也是促进肾小球硬化发生和CRF进展的重要因素之一。动物实验也证实，高脂饮食可引起肾小球硬化，细胞，培养也发现肾小球系膜细胞、上皮细胞、内皮细胞有低密度脂蛋白的受体。内皮细胞、系膜细胞吞噬的大量脂质可造成细胞损伤。该研究表明，益肾解毒汤可以降低实验大鼠的胆固醇、甘油三酯、脂蛋白α以及载脂蛋白B，因此可以通过降低脂质代谢紊乱的程度，达到保护肾功能的作用。
6 益肾解毒汤对大鼠肾大部切除病理改变的影响
大鼠经大部肾切除后残余肾单位中有血液动力学的改变，引起残存肾单位的高滤过、高灌注，最终会损害肾小球引起肾小球硬化。在实验中我们发现，益肾解毒汤组大鼠的残余肾脏有代尝性的增大，而实验对照组大鼠的残余肾脏明显缩小。病理切片HE染色提示益肾解毒汤组大鼠肾脏的病变程度低于实验对照组，免疫组化检测也同样证实益肾解毒汤组大鼠残余肾脏中纤维连接蛋白及Ⅳ型胶原的沉积明显低于实验对照组。以上病理结果证实，益肾解毒汤的确具有减轻残余肾组织的病理改变，减轻肾小球的硬化，从而达到了延缓慢性肾功能衰竭进程的作用。
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作者简介：周锦明，男，1942年12月27日出生，上海市南汇县人。1967年毕业于上海中医药大学，现任上海金山区中心医院副院长，区中医医院常务副院长，中医内科主任医师，上海中医药大学兼职硕士研究生导师。兼任华东地区中医肾病专业委员会委员，上海市中医肾病专业委员会副主任委员，脑病、急症专业委员会委员。1992年享受国务院政府颁发的特殊津贴。在中医肾病、心脑血管疾病、消化系统疾病以及外感热病等方面具有相当造诣。曾发表论文40多篇，其中具有代表性的有：“慢性肾功能衰竭的中西医结合诊治”(《中国农村医学》94年8期)、“益肾解毒汤治疗慢性肾功能衰竭30例疗效观察”(《中医杂志》95年2期)、“温阳活血法在心血管疾病中的应用”(《中国农村医学》90年11期)、“清胆和胃汤治疗慢性胃炎64例”(《中国农村医学》93年2期)、“发热论治18法”(《中国农村医学》97年5期)等。曾参编著作4本：《中医男科百问》、《中医实用大全》、《中医临床肾脏病学》等。
(收稿日期 1998—01—20 修回日期 1998—4—20), http://www.100md.com