尿液中水孔蛋白-2的检测及其与肾组织中表达的相关性*
作者：邓英姿 许顶立 张远慧
单位：第一军医大学南方医院心内科(广州，510515)
关键词：Aquaporin 2水孔蛋白；尿液；肾脏内髓质
肾脏病与透析肾移植杂志990402 摘 要 目的：研究尿液AQP2水孔蛋白检测的方法及其与肾脏AQP2水孔蛋白表达量之间的相关性，为应用尿液AQP2蛋白监测机体的水重吸收状况提供理论依据。 方法：用Western印迹分析法测定自由进水和禁水24h大鼠肾脏AQP2的表达量及尿液AQP2的含量，并分析两者之间的相关性。 结果：AQP2蛋白可在尿液中检测到。尿液AQP2与肾脏AQP2呈正相关(r＝0.799)。 结论：尿液AQP2水平可以反映肾脏集合管AQP2蛋白的表达量，是较好的监测机体水重吸收状况的方法。
CORRELATION BETWEEN URINARY AQUAPORIN 2 PROTEIN AND ITS RENAL EXPRESSION
, 百拇医药
Deng Yingzi，Xu Dingli，Zhang Yuanhui
Department of Cardiology，Nanfang Hospital，the First Military Medical University，Guangzhou 510515
OBJECTIVE To study the method of urinary aquaporin 2 protein detection and its correlation with kidney expression，in order to provide a theoretical basis for detecting urinary AQP2 protein in body water reabsorption monitoring.
METHODOLOGY Rat dehydration models were established by deprivation of water for 24 hours，renal and urinary AQP2 protein were analyzed in control and dehydrated rats by Western blot.
, 百拇医药
RESULTS AQP2 was detectable in the urine.Urine AQP2 was positively correlated with AQP2 protein content in renal inner medulla(r＝0.799).
CONCLUSION Measurement of urinary AQP2 can reflect its protein expression level in renal inner medulla，and thus providing a much better way to monitor body water reabsorption status.
Key words aquaporin 2 water channel dehydration renal inner medulla
Aquaporin 2水孔蛋白(AQP2)是近年来发现存在于肾脏集合管的重要的调节水重吸收的关键蛋白之一[1]。在许多存在水潴留的病理生理状态下，如在充血性心衰时肾脏AQP2表达明显增加[2，3]，提示AQP2在机体水平衡中起着重要作用。由于存在于肾脏集合管主细胞的AQP2蛋白可能脱落或分泌至尿液，因而尿液AQP2的检测，将为临床提供一个新的监测机体水重吸收状态的方法。本实验通过建立大鼠肾脏AQP2蛋白在尿液中的检测方法，以探讨尿液AQP2含量与肾脏AQP2表达量的关系以及尿液AQP2检测的意义。
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1 材料和方法
1.1 实验动物 雄性SD大鼠20只，体重190～250g，在大鼠代谢笼中喂养，予常规食物，10只大鼠自由进水，另10只大鼠禁水24h，收集24h尿液。然后断头处死动物，取双侧肾脏。实验所用化学试剂均购自Sigma公司。应用AQP2蛋白C-末端的多肽片段CELHSPQSLPRGSKA制备兔抗鼠AQP2多克隆抗体，效价为1∶100 000。尿渗量的测定采用冰点法。
1.2 样品的收集与预处理
1.2.1 肾脏内髓质蛋白的提取[4] 肾脏组织总蛋白的提取应用细胞裂解液方法(50 mmol/L β-glycerophosphate，100 mmol/L Na3VO4，2 mmol/L MgCl2，1 mmol/L EGTA，0.5% Triton-x100，1 mmol/L DTT)，裂解液中含有蛋白酶抑制剂(20 mmol/L Pepstatin，20 mmol/L Leupeptin，1000 U/ml Aprotinin，1 mmol/L PMSF)。即大鼠断头处死后，迅速取出双侧肾脏，分离出肾内髓，置液氮中保存待用。将肾内髓碾成粉末，用刮勺将组织粉末移入匀浆器并加入0.5 ml细胞裂解液。将匀浆器中的液体转移入Eppendorf管，3000 r/min 离心20 min。取上清液，应用考马斯亮蓝法(Biorad公司)进行蛋白定量。
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1.2.2 大鼠尿液的浓缩 将收集的新鲜尿液以2000 r/min低温离心5～10min，取上清液用Millipore centriplus-10 超滤管2000 r/min低温离心75min，使尿液浓缩至1ml。再加入2X样本缓冲液进行Western印迹分析。
1.3 Western印迹分析法[4] 将50μl尿液或肾内髓样本(5μg总蛋白/泳道)进行变性SDS/12%聚丙烯酰胺凝胶电泳(Bio-Rad Mini Protein Ⅱ)，然后电转移至PVDF膜上(Millipore公司)，再用含5%脱脂奶的TBS-T缓冲液(20 mmol/L Tris-base，137 mmol/L NaCl，0.1%Tween-20)4℃孵育过夜，TBS-T缓冲液漂洗。PVDF膜在室温下与兔抗鼠AQP2多克隆抗体(1∶500稀释)孵育2h，再与驴抗兔IgG二抗(1∶2000，Amersham公司)室温下孵育1h，每次孵育之间均应用TBS-T缓冲液漂洗三次，每次10min。然后用ECL试剂盒(Amersham)显影。预先显色的蛋白质标志物(GIBCO公司)用以显示蛋白质分子量。
, 百拇医药
1.4 统计学方法 实验结果采用直线回归方程分析，P<0.05为差异显著。
2 结 果
2.1 应用Western印迹对大鼠肾脏内髓AQP2蛋白表达量的测定 图1显示的是5只大鼠肾脏AQP2蛋白表达量的情况。可见肾内髓AQP2蛋白有两条带，一条在29kd，另一条在35-45kd(此为糖基化的AQP2蛋白)。禁水组大鼠肾内髓AQP2含量明显高于对照组。
图1 大鼠肾脏AQP2蛋白表达量
1、2为正常进水大鼠，3、4、5为禁水大鼠
2.2 大鼠尿液AQP2蛋白含量的检测 大鼠尿液AQP2蛋白的分子量较肾脏AQP2蛋白的分子量大，约为60 000～70 000。图2可见禁水组大鼠尿液AQP2蛋白含量也明显高于对照组。
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图2 大鼠尿液AQP2蛋白含量
1、2为正常饮水大鼠，3、4、5为禁水大鼠，IM为肾内髓提取的蛋白阳性对照。
2.3 大鼠尿液AQP2蛋白含量与肾脏表达量之间的相关性 将测得的每一只大鼠尿液AQP2蛋白光密度与肾脏AQP2蛋白光密度进行直线回归分析发现：其直线回归方程为y＝0.3347x+6322.4，相关系数r＝0.799(P<0.05)。说明尿液AQP2蛋白的排出量与肾脏AQP2蛋白的表达量有着良好的相关性，提示尿液AQP2的含量可以反映肾脏AQP2蛋白的表达水平(见图3)。
图3 肾内髓与尿液AQP2蛋白光密度值比较
2.4 尿液AQP2光密度与尿渗量的关系 将测得的每一只大鼠尿渗量与尿液AQP2蛋白光密度进行直线回归分析发现，尿液AQP2蛋白的含量与尿渗量有着良好的相关性，相关系数r＝0.81(见图4)。
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图4 尿液AQP2蛋白光密度与尿渗量的关系
3 讨 论
Aquaporin 2蛋白是1993年Fushimi等[5]克隆出的位于肾脏的水孔蛋白之一。AQP2只在肾脏集合管的主细胞上表达，大部分AQP2位于主细胞的管腔面细胞膜上和该侧胞膜下囊泡上，少量表达在侧基底膜上。研究认为，AQP2可能是受血管加压素(Arginine Vassopressin，AVP)调控的最主要的肾脏水孔蛋白。当AVP水平增高后，细胞浆内的囊泡与管腔面细胞膜融合，位于囊泡上的AQP2通过出胞运动(exocytosis)转移至管腔游离面的细胞膜上，使管腔侧细胞膜上AQP2数量增加，细胞对水的通透性增高[1]。在许多病理状态下，AQP2蛋白的表达量发生了改变，如遗传性肾性尿崩症[6]。长期服用锂剂[7]或低蛋白饮食[8]，低钾血症[9]均可引起AQP2蛋白表达量减少；而在某些水潴留的病理状态下，如充血性心衰[2，3，10]、肝硬化[11，12]、妊娠[13]及抗利尿激素分泌不当综合征(SIADH)[12]，AQP2的表达量增加引起肾集合管重吸收增加，提示AQP2在调节机体水平衡中起着至关重要的作用。
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在AQP2蛋白由胞浆内的囊泡转移至胞膜的过程中，AQP2蛋白可能从肾脏集合管的主细胞上脱落或分泌出来，故有可能在尿液中检测到。有文献报道在遗传性肾性尿崩症患者的尿液及尿沉渣中可检测到AQP2蛋白[14，15]，并证实脱水和外源性的AVP可使尿液AQP2含量增加，分泌入尿液的AQP2蛋白约占肾脏总AQP2蛋白量的3%，提示检测尿液AQP2蛋白，可能是监测肾脏水重吸收状况以及AVP对肾脏作用的较好指标。尿液AQP2蛋白含量是否可以反映肾脏AQP2蛋白的水平，是尚待解决的问题。本研究证实，尿液AQP2蛋白水平与肾脏AQP2蛋白水平及尿渗量是明显正相关的，提示尿液AQP2蛋白水平可以代表肾脏AQP2蛋白表达量的水平。为今后尿液AQP2检测的临床应用提供了理论依据。
本研究通过应用Western印迹分析法，检测正常饮水和禁水大鼠尿液AQP2蛋白的含量及其与肾脏AQP2的相关性，证实了禁水时肾脏AQP2蛋白表达量增加的同时尿液AQP2也增多，两者呈正相关，提示尿液AQP2含量可以反映肾脏集合管AQP2蛋白的水平。尿液AQP2的印迹检测方法并不复杂，结果稳定可靠，是较好的监测机体重吸收状况的方法，存在着良好的应用前景。
, 百拇医药
*广东省自然科学基金资助(No 970355)
参考文献
1 Nielsen S，Agre P.The aquaporin family of water channels in kidney.Kidney Int，1995，48：1057
2 Xu DL，Martin PY，Ohara M et al.Upregulation of aquaporin-2 water channel expression in chronic heart failure rat.J Clin Invest，1997，99：1500
3 许顶立，任 昊，Martin PY等.充血性心力衰竭大鼠肾脏Aquaporin 2水通道蛋白基因的表达.中华医学杂志，1998，78：118
, http://www.100md.com
4 许顶立，任 昊，邓英姿等.肾脏Aquaporin 2水通道蛋白的检测及其在充血性心力衰竭的应用.肾脏病与透析肾移植杂志，1998，2：196
5 Fushimi K，Uchida S，Hara Y et al.Cloning and expression of apical membrane water channel of rat kidney collecting tubule.Nature，1993，361：549
6 Merendino JJJ，Speigel AM，Carwford JD et al.Brief report：a mutation in the vasopressin V2-receptor gene in a kindred with X-linked nephrogenic diabetes insipidus.N Engl J Med，1993，328：1538
, 百拇医药
7 Marples D，Christensen S，Christensen EI et al.Lithium-induced downregulation of aquaporin-2 water channel expression in rat kidney medulla.J Clin Invest，1995，95：1838
8 Sands JM，Naruse M，Jacobs JD et al.Changes in aquaporin-2 protein contribute to the urine concentrating defect in rats fed a low-protein diet.J Clin Invest，1996，97：2807
9 Marples D，Frokiaer J，Dorup J et al.Hypokalemia-induced downregulation of aquaporin-2 water channel expression in rat kidney medulla and cortex.J Clin Invest，1996，97：1960
, 百拇医药
10 Nielsen S，Terris J，Andersen D et al.Congestive heart failure in rats is associated with increased expression and trageting of aquaporin-2 water channel in collecting duct.Proc Natl Acad Sci USA，1997，94：5450
11 Asahina Y，Izumi N，Enomoto N et al.Increased gene expression of water channel in cirrhotic rat kidneys.Hepatology，1995，21：169
12 Fujita N，Ishikawa SE，Sasaki S et al.Role of water channel AQP-CD in water retention in SIADH and cirrhotic rats.Am J Physiol，1995 Dec，269(6 Pt 2)：F926
, http://www.100md.com
13 Ohara M，Martin PY，Xu DL et al.Upregulation of Aquaporin-2 water channel expression in pregnant rats.J Clin Invest，1998，101：1076
14 Kanno K，Sasaki S，Hirata Y et al.Urinary excretion of aquaporin-2 in patients with diabetes insipidus.N Engl J Med，1995，332：1540
15 Rai T，Sekine K，Kanno K et al.Urinary excretion of aquaporin-2 water channel protein in human and rat.J Am Soc Nephrol，1997，8：1357
(1999-07-06收稿), 百拇医药
单位：第一军医大学南方医院心内科(广州，510515)
关键词：Aquaporin 2水孔蛋白；尿液；肾脏内髓质
肾脏病与透析肾移植杂志990402 摘 要 目的：研究尿液AQP2水孔蛋白检测的方法及其与肾脏AQP2水孔蛋白表达量之间的相关性，为应用尿液AQP2蛋白监测机体的水重吸收状况提供理论依据。 方法：用Western印迹分析法测定自由进水和禁水24h大鼠肾脏AQP2的表达量及尿液AQP2的含量，并分析两者之间的相关性。 结果：AQP2蛋白可在尿液中检测到。尿液AQP2与肾脏AQP2呈正相关(r＝0.799)。 结论：尿液AQP2水平可以反映肾脏集合管AQP2蛋白的表达量，是较好的监测机体水重吸收状况的方法。
CORRELATION BETWEEN URINARY AQUAPORIN 2 PROTEIN AND ITS RENAL EXPRESSION
, 百拇医药
Deng Yingzi，Xu Dingli，Zhang Yuanhui
Department of Cardiology，Nanfang Hospital，the First Military Medical University，Guangzhou 510515
OBJECTIVE To study the method of urinary aquaporin 2 protein detection and its correlation with kidney expression，in order to provide a theoretical basis for detecting urinary AQP2 protein in body water reabsorption monitoring.
METHODOLOGY Rat dehydration models were established by deprivation of water for 24 hours，renal and urinary AQP2 protein were analyzed in control and dehydrated rats by Western blot.
, 百拇医药
RESULTS AQP2 was detectable in the urine.Urine AQP2 was positively correlated with AQP2 protein content in renal inner medulla(r＝0.799).
CONCLUSION Measurement of urinary AQP2 can reflect its protein expression level in renal inner medulla，and thus providing a much better way to monitor body water reabsorption status.
Key words aquaporin 2 water channel dehydration renal inner medulla
Aquaporin 2水孔蛋白(AQP2)是近年来发现存在于肾脏集合管的重要的调节水重吸收的关键蛋白之一[1]。在许多存在水潴留的病理生理状态下，如在充血性心衰时肾脏AQP2表达明显增加[2，3]，提示AQP2在机体水平衡中起着重要作用。由于存在于肾脏集合管主细胞的AQP2蛋白可能脱落或分泌至尿液，因而尿液AQP2的检测，将为临床提供一个新的监测机体水重吸收状态的方法。本实验通过建立大鼠肾脏AQP2蛋白在尿液中的检测方法，以探讨尿液AQP2含量与肾脏AQP2表达量的关系以及尿液AQP2检测的意义。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 实验动物 雄性SD大鼠20只，体重190～250g，在大鼠代谢笼中喂养，予常规食物，10只大鼠自由进水，另10只大鼠禁水24h，收集24h尿液。然后断头处死动物，取双侧肾脏。实验所用化学试剂均购自Sigma公司。应用AQP2蛋白C-末端的多肽片段CELHSPQSLPRGSKA制备兔抗鼠AQP2多克隆抗体，效价为1∶100 000。尿渗量的测定采用冰点法。
1.2 样品的收集与预处理
1.2.1 肾脏内髓质蛋白的提取[4] 肾脏组织总蛋白的提取应用细胞裂解液方法(50 mmol/L β-glycerophosphate，100 mmol/L Na3VO4，2 mmol/L MgCl2，1 mmol/L EGTA，0.5% Triton-x100，1 mmol/L DTT)，裂解液中含有蛋白酶抑制剂(20 mmol/L Pepstatin，20 mmol/L Leupeptin，1000 U/ml Aprotinin，1 mmol/L PMSF)。即大鼠断头处死后，迅速取出双侧肾脏，分离出肾内髓，置液氮中保存待用。将肾内髓碾成粉末，用刮勺将组织粉末移入匀浆器并加入0.5 ml细胞裂解液。将匀浆器中的液体转移入Eppendorf管，3000 r/min 离心20 min。取上清液，应用考马斯亮蓝法(Biorad公司)进行蛋白定量。
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1.2.2 大鼠尿液的浓缩 将收集的新鲜尿液以2000 r/min低温离心5～10min，取上清液用Millipore centriplus-10 超滤管2000 r/min低温离心75min，使尿液浓缩至1ml。再加入2X样本缓冲液进行Western印迹分析。
1.3 Western印迹分析法[4] 将50μl尿液或肾内髓样本(5μg总蛋白/泳道)进行变性SDS/12%聚丙烯酰胺凝胶电泳(Bio-Rad Mini Protein Ⅱ)，然后电转移至PVDF膜上(Millipore公司)，再用含5%脱脂奶的TBS-T缓冲液(20 mmol/L Tris-base，137 mmol/L NaCl，0.1%Tween-20)4℃孵育过夜，TBS-T缓冲液漂洗。PVDF膜在室温下与兔抗鼠AQP2多克隆抗体(1∶500稀释)孵育2h，再与驴抗兔IgG二抗(1∶2000，Amersham公司)室温下孵育1h，每次孵育之间均应用TBS-T缓冲液漂洗三次，每次10min。然后用ECL试剂盒(Amersham)显影。预先显色的蛋白质标志物(GIBCO公司)用以显示蛋白质分子量。
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1.4 统计学方法 实验结果采用直线回归方程分析，P<0.05为差异显著。
2 结 果
2.1 应用Western印迹对大鼠肾脏内髓AQP2蛋白表达量的测定 图1显示的是5只大鼠肾脏AQP2蛋白表达量的情况。可见肾内髓AQP2蛋白有两条带，一条在29kd，另一条在35-45kd(此为糖基化的AQP2蛋白)。禁水组大鼠肾内髓AQP2含量明显高于对照组。
图1 大鼠肾脏AQP2蛋白表达量
1、2为正常进水大鼠，3、4、5为禁水大鼠
2.2 大鼠尿液AQP2蛋白含量的检测 大鼠尿液AQP2蛋白的分子量较肾脏AQP2蛋白的分子量大，约为60 000～70 000。图2可见禁水组大鼠尿液AQP2蛋白含量也明显高于对照组。
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图2 大鼠尿液AQP2蛋白含量
1、2为正常饮水大鼠，3、4、5为禁水大鼠，IM为肾内髓提取的蛋白阳性对照。
2.3 大鼠尿液AQP2蛋白含量与肾脏表达量之间的相关性 将测得的每一只大鼠尿液AQP2蛋白光密度与肾脏AQP2蛋白光密度进行直线回归分析发现：其直线回归方程为y＝0.3347x+6322.4，相关系数r＝0.799(P<0.05)。说明尿液AQP2蛋白的排出量与肾脏AQP2蛋白的表达量有着良好的相关性，提示尿液AQP2的含量可以反映肾脏AQP2蛋白的表达水平(见图3)。
图3 肾内髓与尿液AQP2蛋白光密度值比较
2.4 尿液AQP2光密度与尿渗量的关系 将测得的每一只大鼠尿渗量与尿液AQP2蛋白光密度进行直线回归分析发现，尿液AQP2蛋白的含量与尿渗量有着良好的相关性，相关系数r＝0.81(见图4)。
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图4 尿液AQP2蛋白光密度与尿渗量的关系
3 讨 论
Aquaporin 2蛋白是1993年Fushimi等[5]克隆出的位于肾脏的水孔蛋白之一。AQP2只在肾脏集合管的主细胞上表达，大部分AQP2位于主细胞的管腔面细胞膜上和该侧胞膜下囊泡上，少量表达在侧基底膜上。研究认为，AQP2可能是受血管加压素(Arginine Vassopressin，AVP)调控的最主要的肾脏水孔蛋白。当AVP水平增高后，细胞浆内的囊泡与管腔面细胞膜融合，位于囊泡上的AQP2通过出胞运动(exocytosis)转移至管腔游离面的细胞膜上，使管腔侧细胞膜上AQP2数量增加，细胞对水的通透性增高[1]。在许多病理状态下，AQP2蛋白的表达量发生了改变，如遗传性肾性尿崩症[6]。长期服用锂剂[7]或低蛋白饮食[8]，低钾血症[9]均可引起AQP2蛋白表达量减少；而在某些水潴留的病理状态下，如充血性心衰[2，3，10]、肝硬化[11，12]、妊娠[13]及抗利尿激素分泌不当综合征(SIADH)[12]，AQP2的表达量增加引起肾集合管重吸收增加，提示AQP2在调节机体水平衡中起着至关重要的作用。
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在AQP2蛋白由胞浆内的囊泡转移至胞膜的过程中，AQP2蛋白可能从肾脏集合管的主细胞上脱落或分泌出来，故有可能在尿液中检测到。有文献报道在遗传性肾性尿崩症患者的尿液及尿沉渣中可检测到AQP2蛋白[14，15]，并证实脱水和外源性的AVP可使尿液AQP2含量增加，分泌入尿液的AQP2蛋白约占肾脏总AQP2蛋白量的3%，提示检测尿液AQP2蛋白，可能是监测肾脏水重吸收状况以及AVP对肾脏作用的较好指标。尿液AQP2蛋白含量是否可以反映肾脏AQP2蛋白的水平，是尚待解决的问题。本研究证实，尿液AQP2蛋白水平与肾脏AQP2蛋白水平及尿渗量是明显正相关的，提示尿液AQP2蛋白水平可以代表肾脏AQP2蛋白表达量的水平。为今后尿液AQP2检测的临床应用提供了理论依据。
本研究通过应用Western印迹分析法，检测正常饮水和禁水大鼠尿液AQP2蛋白的含量及其与肾脏AQP2的相关性，证实了禁水时肾脏AQP2蛋白表达量增加的同时尿液AQP2也增多，两者呈正相关，提示尿液AQP2含量可以反映肾脏集合管AQP2蛋白的水平。尿液AQP2的印迹检测方法并不复杂，结果稳定可靠，是较好的监测机体重吸收状况的方法，存在着良好的应用前景。
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*广东省自然科学基金资助(No 970355)
参考文献
1 Nielsen S，Agre P.The aquaporin family of water channels in kidney.Kidney Int，1995，48：1057
2 Xu DL，Martin PY，Ohara M et al.Upregulation of aquaporin-2 water channel expression in chronic heart failure rat.J Clin Invest，1997，99：1500
3 许顶立，任 昊，Martin PY等.充血性心力衰竭大鼠肾脏Aquaporin 2水通道蛋白基因的表达.中华医学杂志，1998，78：118
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4 许顶立，任 昊，邓英姿等.肾脏Aquaporin 2水通道蛋白的检测及其在充血性心力衰竭的应用.肾脏病与透析肾移植杂志，1998，2：196
5 Fushimi K，Uchida S，Hara Y et al.Cloning and expression of apical membrane water channel of rat kidney collecting tubule.Nature，1993，361：549
6 Merendino JJJ，Speigel AM，Carwford JD et al.Brief report：a mutation in the vasopressin V2-receptor gene in a kindred with X-linked nephrogenic diabetes insipidus.N Engl J Med，1993，328：1538
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7 Marples D，Christensen S，Christensen EI et al.Lithium-induced downregulation of aquaporin-2 water channel expression in rat kidney medulla.J Clin Invest，1995，95：1838
8 Sands JM，Naruse M，Jacobs JD et al.Changes in aquaporin-2 protein contribute to the urine concentrating defect in rats fed a low-protein diet.J Clin Invest，1996，97：2807
9 Marples D，Frokiaer J，Dorup J et al.Hypokalemia-induced downregulation of aquaporin-2 water channel expression in rat kidney medulla and cortex.J Clin Invest，1996，97：1960
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10 Nielsen S，Terris J，Andersen D et al.Congestive heart failure in rats is associated with increased expression and trageting of aquaporin-2 water channel in collecting duct.Proc Natl Acad Sci USA，1997，94：5450
11 Asahina Y，Izumi N，Enomoto N et al.Increased gene expression of water channel in cirrhotic rat kidneys.Hepatology，1995，21：169
12 Fujita N，Ishikawa SE，Sasaki S et al.Role of water channel AQP-CD in water retention in SIADH and cirrhotic rats.Am J Physiol，1995 Dec，269(6 Pt 2)：F926
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13 Ohara M，Martin PY，Xu DL et al.Upregulation of Aquaporin-2 water channel expression in pregnant rats.J Clin Invest，1998，101：1076
14 Kanno K，Sasaki S，Hirata Y et al.Urinary excretion of aquaporin-2 in patients with diabetes insipidus.N Engl J Med，1995，332：1540
15 Rai T，Sekine K，Kanno K et al.Urinary excretion of aquaporin-2 water channel protein in human and rat.J Am Soc Nephrol，1997，8：1357
(1999-07-06收稿), 百拇医药