转移抑制基因nm23/NDPK与肺癌生物学行为的相关性研究
作者：郝蕾 陈菊荣 戴文森 李维强 宁永谦 党宏
单位：郝蕾 陈菊荣 戴文森 李维强 宁永谦 党宏(南京铁道医学院附属徐州医院病理科，徐州 221009)
关键词：肺肿瘤；nm23/NDPK
临床与实验病理学杂志990518
摘要 目的：研究转移抑制基因nm23表达产物二磷酸核苷激酶(NDPK)在人肺癌中的表达及意义。方法：应用免疫组化S-P法，检测不同病理分级及淋巴结有无转移肺癌组织中nm23/NDPK的表达。结果：88例肺癌nm23/NDPK阳性表达率为81.82%(72/88)，其中呈高表达率36.36%(32/88)。高分化肺癌高表达率71.43%(10/14)，中分化肺癌高表达率41.3%(19/46)，低分化肺癌高表达率10.72%(3/28)。各组间有显著差异(P<0.05)。而与肺癌有无肺门淋巴结转移无关(P>0.05)。结论：nm23/NDPK的表达与肺癌的分化程度呈负相关，可作为预测肿瘤转移潜能及预后的指标之一。
, http://www.100md.com
分类号 R734.2 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)05-0427-02
The correlative study of metastasis suppressor gene nm23/NDPK in human lung carcinoma
Hao Lei, Chen Jurong, Dai Wensen et al
(Dept of Pathol, Affiliated Xuzhou Hospital of Nangjing Railway Medical College, Xuzhou 221009)
ABSTRACT Purpose To study expression and significance of the metastasis suppressor gene nm23/NDPK in human lung carcinoma. Methods The expression of nm23 in 88 cases of lung cancer was deteted using immunohistochemical S-P method. Results 81.82%(72/88) showed positive staining, and strong positive staining was 36.36% (32/88). The positivity rates in high, middle and low differentiation lung cancer were 71.43%(10/14)， 41.3%(19/46) and 10.72%(3/28). There was a significant difference among different groups in nm23 expression (P<0.05), but nm23 expression wasn't correlated with lymph node metastasis (P>0.05). Conclusion The nm23/NDPK expression levels are inversely correlated with the dexgree of differentiation in lung carcinoma and it may be as a index to forecast potential of the tumor metastasis and prognosis.
, 百拇医药
KEY WORDS lung neoplasms; nm23/NDPK
转移是恶性肿瘤的基本特征，亦是导致患者死亡的主要原因。在多种动物模型及人类肿瘤研究中提示nm23基因及其产物NDPK是一种能抑制肿瘤转移表型的转移抑制基因，并已引起国内外学者的关注〔1〕，目前多用于乳腺癌及大肠癌的研究，结论尚不一致。我们用免疫组化法检测nm23在肺癌中的表达，旨在探讨其表达与肺癌的分化程度、淋巴结转移间的关系。
1 材料和方法
1.1 材料 取自我院肿瘤外科、胸外科1994～1997年经病理证实的肺腺癌、鳞癌共88例。标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片，分别进行HE染色和免疫组化S-P法nm23标记。按肺癌分化程度及有无淋巴结转移分组比较。
1.2 试剂来源及方法 试剂为兔抗人nm23/NDPK多克隆抗体和S-P试剂盒分别为美国Zymed Lab公司及Maxim Biotech公司产品。免疫组化染色按S-P试剂盒说明进行，实验设立阴性对照(以PBS代替第一抗体)和已知阳性标本对照。
, http://www.100md.com
1.3 判断标准 阳性染色信号为棕黄色，NDPK主要位于细胞浆，根据细胞染色有无及强弱分为阴性(无染色)，低表达(+)(30%肿瘤细胞染色)，高表达(
)(80%肿瘤细胞染色)。
1.4 数据结果统计 采用χ2检验。
2 结果
2.1 nm23/NDPK与肺癌分化程度间的关系 鳞癌45例，其高中低分化类型nm23/NDPK高表达率分别为100%、39.3%及7.1%。腺癌共43例，其高中低分化类型nm23/NDPK高表达率分别为71.4%、41.3%及10.7%(表1)。
表1 nm23/NDPK表达与肺癌分化程度间的关系 分化
, 百拇医药 程度
鳞癌
腺癌
合计
n
阳性率(%)
高表达率(%)
n
阳性率(%)
高表达率(%)
n
阳性率(%)
高表达率(%)
, 百拇医药
高
3
3(100)
3(100)
11
10(90.9)
7(63.6)
14
13(92.9)
10(71.4)
中
28
23(82.1)
, http://www.100md.com
11(39.3)
18
16(88.9)
8(44.4)
46
39(84.8)
19(41.3)
低
14
9(64.3)
1(7.1)
14
11(78.6)
, http://www.100md.com
2(14.3)
28
20(71.4)
3(10.7)
2.2 nm23/NDPK与肺门淋巴结之间的关系 肺鳞癌45例，有、无肺门淋巴结转移的nm23/NDPK高表达率分别为31.8%和34.8%。肺腺癌43例，有、无肺门淋巴结转移的nm23/NDPK高表达率分别为39.5%和33.3%(表2)。
表2 nm23/NDPK表达与肺门淋巴结转移之间的关系 淋巴结转移
鳞癌
腺癌
合计
, http://www.100md.com
n
阳性率(%)
高表达率(%)
n
阳性率(%)
高表达率(%)
n
阳性率(%)
高表达率(%)
有
22
17(77.3)
7(31.8)
, http://www.100md.com
21
19(90.5)
10(47.6)
43
36(83.7)
17(39.5)
无
23
18(78.3)
8(34.8)
22
18(81.8)
7(31.8)
, http://www.100md.com
45
36(80.0)
15(33.3)
3 讨论
肿瘤的发生和转移是两个既相关联又各自独立的生物学过程，转移可受自身的转移抑制基因的调控。随着对肿瘤发生发展的分子生物学机制研究的不断深入，近年来许多研究表明，癌基因的许多结构变化与异常表达是肿瘤发生的基本原因，对调控细胞生长和分化起着重要的作用〔1〕。现已证实nm23基因在某些高转移特性肿瘤细胞中可发生表达下降、等位基因缺失、基因突变〔2〕。我们知道低分化肺癌恶性程度高，肿瘤细胞易沿粘膜下淋巴管转移至局部淋巴结，易通过血行转移至脑和远处器官。本组研究结果显示在肺癌中高分化组与低分化组间nm23/NDPK高表达差异存在非常显著性(P<0.01)，中分化组与低分化组间差异也存在显著性(P<0.05)。提示nm23可能通过与NDPK一致或相似的途径在调节细胞的信号传递、细胞分化等过程中发挥作用，即可直接通过与G蛋白结合及高能磷酸键的转移调节G蛋白活性，发挥生长抑制等负性调节功能〔1〕。并且nm23/NDPK的表达呈现异质性，正常肺实质上皮呈明显高表达，在不同分化区域的肿瘤细胞中，分化好的细胞阳性表达高，分化差的细胞阳性表达低或无表达。Barnes等〔3〕对39例乳腺癌研究显示其nm23低表达，而正常乳腺导管上皮着色程度比肿瘤细胞深。而对于淋巴结转移的研究报道不一，甚至相反。Tokunage等〔4〕用两种nm23 McAb对130例乳腺癌已发生淋巴结转移的表达研究表明，nm23表达与淋巴结转移成负相关(P<0.01)。但Myeroff等〔5〕研究认为nm23基因表达与大肠癌的淋巴结转移无关，Hahnel等〔6〕也发现该基因未在已发生转移淋巴结乳腺癌中成规率性的表达下降。雷文东等〔7〕对88例肺癌研究结果显示nm23表达与肺鳞癌淋巴结转移有关，与肺腺癌淋巴结转移无关。我们的研究结果亦显示，nm23在肺癌中与肺门淋巴结转移无关，无论是腺癌还是鳞癌(前者高表达率分别为47.62%和31.82%，后者高表达率33.33%和34.78%，P>0.05)，可能与其结构发生的某些改变及一些人为因素(手术清扫的彻底性、病理医生取材的随意性等)有关。
, 百拇医药
综上所述，本组实验表明nm23/NDPK同肺癌的分化程度密切成负相关，对预测肿瘤转移潜能及预后有一定的参考价值。
作者简介：郝 蕾，女，30岁，医师
参考文献
1，倪灿荣. 转移抑制基因——nm23的生物学特性及肿瘤表达水平的意义. 诊断病理学杂志，1995；2(4)：235～236
2，Gilles AM, Presecan E, Vonica A et al. Nucleoside diphosphate kinase from human erythrocytes: Structural characterization of the two polypeptide chains respondible for heterogeneity of hexameric enzyme. J Biol Chem,1991;266:8784
, 百拇医药
3，Barnes R, Masood S, Barker E et al. Low nm23 protein expression in infiltrating ductal breast carcinomas correlates with reduced patient surrvival. Am J Pathol,1991;139(2):245～250
4，Tokunage Y, Urano T, Furukawa K et al. Reduced expression of nm23-H1, but not of nm23-H1, is concordant with the frequency of lymph-node metastasis of human breast cancer. Int J Cancer,1993;55:56
5，Myeroff LL, Markowits SD. Increased nm23-H1 and nm23-H2 messenger RNA expression and absence of mutations in colon carcinomas of low and high metastatic potential. J Natl Cancer Inst,1993;85:147
6，Hahnel E, Dawkins H, Robbins P et al. Expression of stromelysin-3 and nm23 in breast carcinoma and related tissues. Int J Cancer,1994;58:157
7，雷文东，张汝刚，闫水忠等. nm23基因在人肺癌中的表达及其与肺癌淋巴结转移的关系. 中华肿瘤杂志，1994：16(4)：277～279
收稿日期：1998-09-28, http://www.100md.com
单位：郝蕾 陈菊荣 戴文森 李维强 宁永谦 党宏(南京铁道医学院附属徐州医院病理科，徐州 221009)
关键词：肺肿瘤；nm23/NDPK
临床与实验病理学杂志990518
摘要 目的：研究转移抑制基因nm23表达产物二磷酸核苷激酶(NDPK)在人肺癌中的表达及意义。方法：应用免疫组化S-P法，检测不同病理分级及淋巴结有无转移肺癌组织中nm23/NDPK的表达。结果：88例肺癌nm23/NDPK阳性表达率为81.82%(72/88)，其中呈高表达率36.36%(32/88)。高分化肺癌高表达率71.43%(10/14)，中分化肺癌高表达率41.3%(19/46)，低分化肺癌高表达率10.72%(3/28)。各组间有显著差异(P<0.05)。而与肺癌有无肺门淋巴结转移无关(P>0.05)。结论：nm23/NDPK的表达与肺癌的分化程度呈负相关，可作为预测肿瘤转移潜能及预后的指标之一。
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分类号 R734.2 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)05-0427-02
The correlative study of metastasis suppressor gene nm23/NDPK in human lung carcinoma
Hao Lei, Chen Jurong, Dai Wensen et al
(Dept of Pathol, Affiliated Xuzhou Hospital of Nangjing Railway Medical College, Xuzhou 221009)
ABSTRACT Purpose To study expression and significance of the metastasis suppressor gene nm23/NDPK in human lung carcinoma. Methods The expression of nm23 in 88 cases of lung cancer was deteted using immunohistochemical S-P method. Results 81.82%(72/88) showed positive staining, and strong positive staining was 36.36% (32/88). The positivity rates in high, middle and low differentiation lung cancer were 71.43%(10/14)， 41.3%(19/46) and 10.72%(3/28). There was a significant difference among different groups in nm23 expression (P<0.05), but nm23 expression wasn't correlated with lymph node metastasis (P>0.05). Conclusion The nm23/NDPK expression levels are inversely correlated with the dexgree of differentiation in lung carcinoma and it may be as a index to forecast potential of the tumor metastasis and prognosis.
, 百拇医药
KEY WORDS lung neoplasms; nm23/NDPK
转移是恶性肿瘤的基本特征，亦是导致患者死亡的主要原因。在多种动物模型及人类肿瘤研究中提示nm23基因及其产物NDPK是一种能抑制肿瘤转移表型的转移抑制基因，并已引起国内外学者的关注〔1〕，目前多用于乳腺癌及大肠癌的研究，结论尚不一致。我们用免疫组化法检测nm23在肺癌中的表达，旨在探讨其表达与肺癌的分化程度、淋巴结转移间的关系。
1 材料和方法
1.1 材料 取自我院肿瘤外科、胸外科1994～1997年经病理证实的肺腺癌、鳞癌共88例。标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片，分别进行HE染色和免疫组化S-P法nm23标记。按肺癌分化程度及有无淋巴结转移分组比较。
1.2 试剂来源及方法 试剂为兔抗人nm23/NDPK多克隆抗体和S-P试剂盒分别为美国Zymed Lab公司及Maxim Biotech公司产品。免疫组化染色按S-P试剂盒说明进行，实验设立阴性对照(以PBS代替第一抗体)和已知阳性标本对照。
, http://www.100md.com
1.3 判断标准 阳性染色信号为棕黄色，NDPK主要位于细胞浆，根据细胞染色有无及强弱分为阴性(无染色)，低表达(+)(30%肿瘤细胞染色)，高表达(
)(80%肿瘤细胞染色)。1.4 数据结果统计 采用χ2检验。
2 结果
2.1 nm23/NDPK与肺癌分化程度间的关系 鳞癌45例，其高中低分化类型nm23/NDPK高表达率分别为100%、39.3%及7.1%。腺癌共43例，其高中低分化类型nm23/NDPK高表达率分别为71.4%、41.3%及10.7%(表1)。
表1 nm23/NDPK表达与肺癌分化程度间的关系 分化
, 百拇医药 程度
鳞癌
腺癌
合计
n
阳性率(%)
高表达率(%)
n
阳性率(%)
高表达率(%)
n
阳性率(%)
高表达率(%)
, 百拇医药
高
3
3(100)
3(100)
11
10(90.9)
7(63.6)
14
13(92.9)
10(71.4)
中
28
23(82.1)
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11(39.3)
18
16(88.9)
8(44.4)
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39(84.8)
19(41.3)
低
14
9(64.3)
1(7.1)
14
11(78.6)
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2(14.3)
28
20(71.4)
3(10.7)
2.2 nm23/NDPK与肺门淋巴结之间的关系 肺鳞癌45例，有、无肺门淋巴结转移的nm23/NDPK高表达率分别为31.8%和34.8%。肺腺癌43例，有、无肺门淋巴结转移的nm23/NDPK高表达率分别为39.5%和33.3%(表2)。
表2 nm23/NDPK表达与肺门淋巴结转移之间的关系 淋巴结转移
鳞癌
腺癌
合计
, http://www.100md.com
n
阳性率(%)
高表达率(%)
n
阳性率(%)
高表达率(%)
n
阳性率(%)
高表达率(%)
有
22
17(77.3)
7(31.8)
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21
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无
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18(78.3)
8(34.8)
22
18(81.8)
7(31.8)
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45
36(80.0)
15(33.3)
3 讨论
肿瘤的发生和转移是两个既相关联又各自独立的生物学过程，转移可受自身的转移抑制基因的调控。随着对肿瘤发生发展的分子生物学机制研究的不断深入，近年来许多研究表明，癌基因的许多结构变化与异常表达是肿瘤发生的基本原因，对调控细胞生长和分化起着重要的作用〔1〕。现已证实nm23基因在某些高转移特性肿瘤细胞中可发生表达下降、等位基因缺失、基因突变〔2〕。我们知道低分化肺癌恶性程度高，肿瘤细胞易沿粘膜下淋巴管转移至局部淋巴结，易通过血行转移至脑和远处器官。本组研究结果显示在肺癌中高分化组与低分化组间nm23/NDPK高表达差异存在非常显著性(P<0.01)，中分化组与低分化组间差异也存在显著性(P<0.05)。提示nm23可能通过与NDPK一致或相似的途径在调节细胞的信号传递、细胞分化等过程中发挥作用，即可直接通过与G蛋白结合及高能磷酸键的转移调节G蛋白活性，发挥生长抑制等负性调节功能〔1〕。并且nm23/NDPK的表达呈现异质性，正常肺实质上皮呈明显高表达，在不同分化区域的肿瘤细胞中，分化好的细胞阳性表达高，分化差的细胞阳性表达低或无表达。Barnes等〔3〕对39例乳腺癌研究显示其nm23低表达，而正常乳腺导管上皮着色程度比肿瘤细胞深。而对于淋巴结转移的研究报道不一，甚至相反。Tokunage等〔4〕用两种nm23 McAb对130例乳腺癌已发生淋巴结转移的表达研究表明，nm23表达与淋巴结转移成负相关(P<0.01)。但Myeroff等〔5〕研究认为nm23基因表达与大肠癌的淋巴结转移无关，Hahnel等〔6〕也发现该基因未在已发生转移淋巴结乳腺癌中成规率性的表达下降。雷文东等〔7〕对88例肺癌研究结果显示nm23表达与肺鳞癌淋巴结转移有关，与肺腺癌淋巴结转移无关。我们的研究结果亦显示，nm23在肺癌中与肺门淋巴结转移无关，无论是腺癌还是鳞癌(前者高表达率分别为47.62%和31.82%，后者高表达率33.33%和34.78%，P>0.05)，可能与其结构发生的某些改变及一些人为因素(手术清扫的彻底性、病理医生取材的随意性等)有关。
, 百拇医药
综上所述，本组实验表明nm23/NDPK同肺癌的分化程度密切成负相关，对预测肿瘤转移潜能及预后有一定的参考价值。
作者简介：郝 蕾，女，30岁，医师
参考文献
1，倪灿荣. 转移抑制基因——nm23的生物学特性及肿瘤表达水平的意义. 诊断病理学杂志，1995；2(4)：235～236
2，Gilles AM, Presecan E, Vonica A et al. Nucleoside diphosphate kinase from human erythrocytes: Structural characterization of the two polypeptide chains respondible for heterogeneity of hexameric enzyme. J Biol Chem,1991;266:8784
, 百拇医药
3，Barnes R, Masood S, Barker E et al. Low nm23 protein expression in infiltrating ductal breast carcinomas correlates with reduced patient surrvival. Am J Pathol,1991;139(2):245～250
4，Tokunage Y, Urano T, Furukawa K et al. Reduced expression of nm23-H1, but not of nm23-H1, is concordant with the frequency of lymph-node metastasis of human breast cancer. Int J Cancer,1993;55:56
5，Myeroff LL, Markowits SD. Increased nm23-H1 and nm23-H2 messenger RNA expression and absence of mutations in colon carcinomas of low and high metastatic potential. J Natl Cancer Inst,1993;85:147
6，Hahnel E, Dawkins H, Robbins P et al. Expression of stromelysin-3 and nm23 in breast carcinoma and related tissues. Int J Cancer,1994;58:157
7，雷文东，张汝刚，闫水忠等. nm23基因在人肺癌中的表达及其与肺癌淋巴结转移的关系. 中华肿瘤杂志，1994：16(4)：277～279
收稿日期：1998-09-28, http://www.100md.com