塑料不脱钙、石蜡包埋、明胶浸泡法对骨组织切片的比较
作者：吕荣 杨光
单位：吕荣 杨光(第四军医大学西京医院全军骨科研究所，西安 710032)
关键词：塑料包埋；石蜡包埋；明胶；骨组织；显微切片术对比研究；兔
临床与实验病理学杂志990534
分类号 R446.8； R329-34 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)05-0464-01
骨组织内含有大量的钙盐和无机盐，如不脱钙切片，常给骨组织切片和染色造成非常大的困难，直接影响实验结果。作者根据研究的需要，对塑料包埋不脱钙、石蜡包埋、明胶浸泡3种方法切片及染色进行比较，以便找出一种最佳切片方法。
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1 材料与方法
1.1 塑料包埋组 所用材料是我所研究生课题实验材料。新西兰大耳白兔10只，体重2.2～2.5 kg，♀、♂不限。取双侧尺桡骨1.5 cm保留周围少量肌肉。10%中性福尔马林固定。梯度乙醇脱水。甲液：甲基丙稀酸甲酯(MMA)75 ml，邻苯二甲酸二丁酯(DBP)25 ml。乙液：MMA 75 ml, DBP 25 ml过氧化苯甲酰1 g。丙液：MMA 75 ml，DBP 25 ml，过氧化苯甲酰2.5 g。将上述三液搅拌数小时，组织浸入甲、乙、丙各48 h。再用新配的丙液包埋于小瓶内40℃过夜。第二天加满包埋剂，盖瓶塞，置于38℃～40℃水浴中聚合2～3天。用专切不脱钙的D刀切片厚5 μm。1%火棉胶封片，80%乙醇硬化，水洗后染色。
1.2 石蜡组 取新西兰大耳白兔双尺桡骨10只。体重2.2～2.5 kg，♀、♂不限。保留周围少量肌肉，10%中性福尔马林固定。用下液脱钙：生理盐水900 ml，甲醛100 ml，甲酸70 ml，盐酸80 ml，结晶氧化铝60 g，冰醋酸25 ml。脱钙至终点，流水冲洗24 h。梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片厚4 μm，常规脱蜡，梯度乙醇脱水，1%火棉胶封片，80%乙醇硬化，水洗后染色。
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1.3 明胶浸泡组 取狗的腰椎修成4 cm的完整脊柱骨10个，10%中性福尔马林固定，甲酸-盐酸混合脱钙液脱钙至终点。流水冲洗24 h，入10%明胶液浸泡3～5天，换入20%明胶液内浸泡5～7天。OCT冷冻包埋剂包埋，西德Leitz 1720型冷冻切片机切片，温度-25℃～-30℃，冷冻切片5 μm，贴于玻片上，干燥后，1%火棉胶封片，80%乙醇硬化，水洗后染色。
2 结果
2.1 塑料包埋组 切片较为困难，但只要有耐心，还是能切出完整的切片。成功率达80%，对细胞核着色较困难，苏木精染色时间要延长到10～15 min。切片困难，主要原因考虑为不脱钙直接切片所致。但是我们认为，尽管切片困难，细胞核着色不理想，但是对骨组织内的成分及骨质疏松和一些植骨材料的研究有很高的应用价值。
2.2 石蜡包埋组 这种方法是常规方法，已经被广大病理工作者所认可，但是我们认为，这种方法有一定的局限性，只能制作小标本骨切片，或只能制作骨皮质切片，而对植骨材料，或髓腔组织易脱落。对大块骨组织切片不能做出完整的切片。优点，对细胞核染色好。
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2.3 明胶浸泡组 这种方法，可切出狗的完整脊椎切片，切片的完整性优于塑料和石蜡切片，但细胞核着色差，需延长苏木精染色时间，方法比较简单，对研究脊椎及全关节具有更实用价值。
3 体会
3.1 塑料包埋适用于不脱钙骨组织切片，对研究骨组织内成分、骨质疏松有较大价值。
3.2 石蜡包埋对较小的骨组织切片较为理想，对活检组织或钙化组织比较适用。
3.3 明胶浸泡冷冻切片法对较大的骨组织较为适用，对研究脊柱及全关节及骨组织与软组织之间的关系，用此种方法较为理想。
作者简介：吕 荣，男，45岁，副主任技师
参考文献
1，刘绍泉.塑料包埋不脱钙骨组织玻璃刀切片技术.中华病理学杂志，1996；25：49
2，吕 荣，南 耘，胡蕴玉等.骨切片固定液和脱钙剂的筛选及效果观察.临床与实验病理学杂志，1992；8(3)：229
3，吕 荣，陶惠仁，石凯军等.明胶浸泡冷冻切片法与石蜡包埋法制作骨组织大切片的对比.临床与实验病理学杂志，1995；11(4)：283
收稿日期：1998-10-26, 百拇医药
单位：吕荣 杨光(第四军医大学西京医院全军骨科研究所，西安 710032)
关键词：塑料包埋；石蜡包埋；明胶；骨组织；显微切片术对比研究；兔
临床与实验病理学杂志990534
分类号 R446.8； R329-34 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)05-0464-01
骨组织内含有大量的钙盐和无机盐，如不脱钙切片，常给骨组织切片和染色造成非常大的困难，直接影响实验结果。作者根据研究的需要，对塑料包埋不脱钙、石蜡包埋、明胶浸泡3种方法切片及染色进行比较，以便找出一种最佳切片方法。
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1 材料与方法
1.1 塑料包埋组 所用材料是我所研究生课题实验材料。新西兰大耳白兔10只，体重2.2～2.5 kg，♀、♂不限。取双侧尺桡骨1.5 cm保留周围少量肌肉。10%中性福尔马林固定。梯度乙醇脱水。甲液：甲基丙稀酸甲酯(MMA)75 ml，邻苯二甲酸二丁酯(DBP)25 ml。乙液：MMA 75 ml, DBP 25 ml过氧化苯甲酰1 g。丙液：MMA 75 ml，DBP 25 ml，过氧化苯甲酰2.5 g。将上述三液搅拌数小时，组织浸入甲、乙、丙各48 h。再用新配的丙液包埋于小瓶内40℃过夜。第二天加满包埋剂，盖瓶塞，置于38℃～40℃水浴中聚合2～3天。用专切不脱钙的D刀切片厚5 μm。1%火棉胶封片，80%乙醇硬化，水洗后染色。
1.2 石蜡组 取新西兰大耳白兔双尺桡骨10只。体重2.2～2.5 kg，♀、♂不限。保留周围少量肌肉，10%中性福尔马林固定。用下液脱钙：生理盐水900 ml，甲醛100 ml，甲酸70 ml，盐酸80 ml，结晶氧化铝60 g，冰醋酸25 ml。脱钙至终点，流水冲洗24 h。梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片厚4 μm，常规脱蜡，梯度乙醇脱水，1%火棉胶封片，80%乙醇硬化，水洗后染色。
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1.3 明胶浸泡组 取狗的腰椎修成4 cm的完整脊柱骨10个，10%中性福尔马林固定，甲酸-盐酸混合脱钙液脱钙至终点。流水冲洗24 h，入10%明胶液浸泡3～5天，换入20%明胶液内浸泡5～7天。OCT冷冻包埋剂包埋，西德Leitz 1720型冷冻切片机切片，温度-25℃～-30℃，冷冻切片5 μm，贴于玻片上，干燥后，1%火棉胶封片，80%乙醇硬化，水洗后染色。
2 结果
2.1 塑料包埋组 切片较为困难，但只要有耐心，还是能切出完整的切片。成功率达80%，对细胞核着色较困难，苏木精染色时间要延长到10～15 min。切片困难，主要原因考虑为不脱钙直接切片所致。但是我们认为，尽管切片困难，细胞核着色不理想，但是对骨组织内的成分及骨质疏松和一些植骨材料的研究有很高的应用价值。
2.2 石蜡包埋组 这种方法是常规方法，已经被广大病理工作者所认可，但是我们认为，这种方法有一定的局限性，只能制作小标本骨切片，或只能制作骨皮质切片，而对植骨材料，或髓腔组织易脱落。对大块骨组织切片不能做出完整的切片。优点，对细胞核染色好。
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2.3 明胶浸泡组 这种方法，可切出狗的完整脊椎切片，切片的完整性优于塑料和石蜡切片，但细胞核着色差，需延长苏木精染色时间，方法比较简单，对研究脊椎及全关节具有更实用价值。
3 体会
3.1 塑料包埋适用于不脱钙骨组织切片，对研究骨组织内成分、骨质疏松有较大价值。
3.2 石蜡包埋对较小的骨组织切片较为理想，对活检组织或钙化组织比较适用。
3.3 明胶浸泡冷冻切片法对较大的骨组织较为适用，对研究脊柱及全关节及骨组织与软组织之间的关系，用此种方法较为理想。
作者简介：吕 荣，男，45岁，副主任技师
参考文献
1，刘绍泉.塑料包埋不脱钙骨组织玻璃刀切片技术.中华病理学杂志，1996；25：49
2，吕 荣，南 耘，胡蕴玉等.骨切片固定液和脱钙剂的筛选及效果观察.临床与实验病理学杂志，1992；8(3)：229
3，吕 荣，陶惠仁，石凯军等.明胶浸泡冷冻切片法与石蜡包埋法制作骨组织大切片的对比.临床与实验病理学杂志，1995；11(4)：283
收稿日期：1998-10-26, 百拇医药