介绍一种快速冷冻切片方法
作者：洪玉萍
单位：洪玉萍(东风汽车公司中心医院病理科，湖北十堰 442008 郧阳医学院东风临床学院)
关键词：冷冻切片
临床与实验病理学杂志990532
分类号 R446.8 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)05-0462-01
快速冷冻切片有利于临床医师在术中获取病理诊断，以便决定进一步的治疗方案。我们在实践中摸索出一种快速、简便、高质量的-25℃直接骤冷冻切片法，现介绍如下。
1 材料与方法
1.1 材料 日本产樱花牌恒冷切片机，我院术中冷冻切片标本152例。
, http://www.100md.com
1.2 方法 将取材后的新鲜组织直接放在组织托上，底部、周围及表面都不加OCT等包埋剂(穿刺活检、胃镜等微小组织，可预先在组织托上加少许OCT等包埋剂，冷冻，再加上微小组织)，迅速置于冷冻台上，于-25℃恒温下骤冻1～2 min后切片，厚度3～5 μm，将切片直接贴附于干净的载玻片上，立即入10%福尔马林液固定，常规HE染色，封片。
2 结果
2.1 制片时间缩短 整个制片过程约需8～15 min，与常规冰冻切片法相比，节省了近一半时间。二者的制片时间比较见表1。
表1 直接骤冷法与常规法所需制片时间比较 步骤
时间(min)
时间(min)
滴加OCT等
, 百拇医药
0
1～2
冷冻
1～2
3～5
切片
2～3
2～3
染色前处理
0
1～2
染色
5～10
, http://www.100md.com 8～10
合计
8～15
5～22
2.2 切片质量有所提高 在152例冷冻切片中，切片完整、组织结构清晰，染色对比好者137例，占90%；组织结构稍模糊、对比稍差，有少许皱折、冰晶、但不影响诊断者12例，占8%；组织结构模糊不清，有明显皱折、冰晶、裂隙而影响诊断者3例，占2%。另随机抽取100例常规法冷冻切片，其切片质量按照上述标准，分别为72%，20%，8%。
3 讨论
常规-20℃冷冻切片法，由于冷冻较慢，易产生大量冰晶，引起细胞间针状裂隙，导致正常结构异常改变，影响病理诊断〔1，2〕。并且使用OCT等包埋剂可增加冷冻体积，加大散热量，导致冷冻时间过长，切片易皱折、重叠，易产生冰晶现象，影响切片质量〔3〕。-25℃直接骤冷冷冻切片法，不需加OCT等包埋剂，既节省资金、减少步骤，又能保证切片质量。切片后可将玻片直接放入固定液，从而避免常规法需电吹风或室温下停留而造成的细胞核退变、着色力下降、结构模糊不清等现象。该方法由于组织冷却迅速，因此应掌握好最佳切片时间，即在标本表面尚有小部分组织未冷冷冻发硬时开始修出切片平面，不断试切，直到制出最佳切片。另外，急骤冷冷冻对乳腺、胃肠道肿瘤、软组织肿瘤等结缔组织较多的切片效果较佳，易制片，切片平整，厚薄均匀；而对细胞成分较丰富的组织，如肝、脾、淋巴结等标本，在低温下易变脆，切片不易成形〔1〕，我们采用改良的方法，即在切片前，先用手触摸一下或对着标本吹一口气，即可避免。-25℃直接骤冷冷冻切片法不仅缩短了染色时间，同时减少了冰晶现象的产生，组织结构清晰，对比好，细胞大小、形态接近于常规石蜡切片，提高了病理诊断率。
, 百拇医药
作者简介：洪玉萍，女，36岁，主管技师
参考文献
1，丁 伟.影响冷冻切片质量的探讨.诊断病理学杂志，1995；2(4)：238
2，陈蔚麟，任占平.术中810例快速冷冻切片质量的探讨.诊断病理学杂志，1996；3(2)：114
3，孙智才，巍国红，张桂芬等.OCT包埋剂对冷冻切片质量的影响.诊断病理学杂志，1998；5(1)：48
收稿日期：1999-01-20
修回日期：1999-07-09, http://www.100md.com
单位：洪玉萍(东风汽车公司中心医院病理科，湖北十堰 442008 郧阳医学院东风临床学院)
关键词：冷冻切片
临床与实验病理学杂志990532
分类号 R446.8 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)05-0462-01
快速冷冻切片有利于临床医师在术中获取病理诊断，以便决定进一步的治疗方案。我们在实践中摸索出一种快速、简便、高质量的-25℃直接骤冷冻切片法，现介绍如下。
1 材料与方法
1.1 材料 日本产樱花牌恒冷切片机，我院术中冷冻切片标本152例。
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1.2 方法 将取材后的新鲜组织直接放在组织托上，底部、周围及表面都不加OCT等包埋剂(穿刺活检、胃镜等微小组织，可预先在组织托上加少许OCT等包埋剂，冷冻，再加上微小组织)，迅速置于冷冻台上，于-25℃恒温下骤冻1～2 min后切片，厚度3～5 μm，将切片直接贴附于干净的载玻片上，立即入10%福尔马林液固定，常规HE染色，封片。
2 结果
2.1 制片时间缩短 整个制片过程约需8～15 min，与常规冰冻切片法相比，节省了近一半时间。二者的制片时间比较见表1。
表1 直接骤冷法与常规法所需制片时间比较 步骤
时间(min)
时间(min)
滴加OCT等
, 百拇医药
0
1～2
冷冻
1～2
3～5
切片
2～3
2～3
染色前处理
0
1～2
染色
5～10
, http://www.100md.com 8～10
合计
8～15
5～22
2.2 切片质量有所提高 在152例冷冻切片中，切片完整、组织结构清晰，染色对比好者137例，占90%；组织结构稍模糊、对比稍差，有少许皱折、冰晶、但不影响诊断者12例，占8%；组织结构模糊不清，有明显皱折、冰晶、裂隙而影响诊断者3例，占2%。另随机抽取100例常规法冷冻切片，其切片质量按照上述标准，分别为72%，20%，8%。
3 讨论
常规-20℃冷冻切片法，由于冷冻较慢，易产生大量冰晶，引起细胞间针状裂隙，导致正常结构异常改变，影响病理诊断〔1，2〕。并且使用OCT等包埋剂可增加冷冻体积，加大散热量，导致冷冻时间过长，切片易皱折、重叠，易产生冰晶现象，影响切片质量〔3〕。-25℃直接骤冷冷冻切片法，不需加OCT等包埋剂，既节省资金、减少步骤，又能保证切片质量。切片后可将玻片直接放入固定液，从而避免常规法需电吹风或室温下停留而造成的细胞核退变、着色力下降、结构模糊不清等现象。该方法由于组织冷却迅速，因此应掌握好最佳切片时间，即在标本表面尚有小部分组织未冷冷冻发硬时开始修出切片平面，不断试切，直到制出最佳切片。另外，急骤冷冷冻对乳腺、胃肠道肿瘤、软组织肿瘤等结缔组织较多的切片效果较佳，易制片，切片平整，厚薄均匀；而对细胞成分较丰富的组织，如肝、脾、淋巴结等标本，在低温下易变脆，切片不易成形〔1〕，我们采用改良的方法，即在切片前，先用手触摸一下或对着标本吹一口气，即可避免。-25℃直接骤冷冷冻切片法不仅缩短了染色时间，同时减少了冰晶现象的产生，组织结构清晰，对比好，细胞大小、形态接近于常规石蜡切片，提高了病理诊断率。
, 百拇医药
作者简介：洪玉萍，女，36岁，主管技师
参考文献
1，丁 伟.影响冷冻切片质量的探讨.诊断病理学杂志，1995；2(4)：238
2，陈蔚麟，任占平.术中810例快速冷冻切片质量的探讨.诊断病理学杂志，1996；3(2)：114
3，孙智才，巍国红，张桂芬等.OCT包埋剂对冷冻切片质量的影响.诊断病理学杂志，1998；5(1)：48
收稿日期：1999-01-20
修回日期：1999-07-09, http://www.100md.com