肿瘤标志物DR-70在恶性肿瘤诊断中的应用
作者：林 丁 沈 萍 杨静梅
单位：重庆市肿瘤研究所中心研究室(400030)
关键词：DR-70；肿瘤标志物；ELISA
肿瘤标志物DR 摘 要 目的：评价肿瘤标志物DR-70在恶性肿瘤中的诊断应用。方法：应用美国AMDL公司的DR-70TMELISA试剂盒，测定对20例正常人和59例恶性肿瘤病人血清DR-70含量。结果：各种恶性肿瘤DR-70的阳性率为66.7～100%，均较正常对照组有非常显著性差异(P<0.001)。结论：血清DR-70是诊断恶性肿瘤有价值的标志物。
Application of Tumor Marker of DR-70 in the Diagnosis of Malignant Tumors
Lin Ding,Shen Ping,Yang Jingmei
, http://www.100md.com
Central Research Laboratory,Chongqing Cancer Institute,Chongqing 400030
Abstract objective:To evaluate the tumor marker of DR-70 in the diagnosis of malignant tumors.Method:Using DR-70TMELISA kit for detection of DR-70 in serum samples of 20 healthy controls and 59 patients with various malignant tumors.Results:The positive rates of serum DR-70 of the patients were 66.7～100%,all of which were significantly higher than that of normal controls.Conclusion:The detection of serum DR-70 is a valuable tumor marker in the diagnosis of malignant tumors.
, 百拇医药
Key words: DR-70 Marker of tumor ELISA
恶性肿瘤已成为当今世界威胁人类健康最大的疾病之一。据有关资料表明[1]我国恶性肿瘤的死亡率已达108.39/10万，占总死亡人数的17.97%，成为第2位死亡原因。若能早期发现并合理治疗，治愈率可大大提高。早期诊断为目前医学研究重要课题。我国在肿瘤标志的基础及临床应用方面均取得了一些进展，但与国际先进水平相比尚有差距。本文采用DR-70 ELISA试剂盒测定20例正常人及59例恶性肿瘤病人血清肿瘤标志物DR-70水平，国内尚未见报道。现将结果分析如下。
1 材料与方法
检测对象：正常对照组20例，男11例，女9例，年龄20～45岁，均采自重庆市血液中心各项检测指标均为正常的献血者。恶性肿瘤组59例，男37例，女22例，年龄27～75岁。原发性肝癌20例(其中甲胎蛋白<20ng/ml7例)，肺癌18例，卵巢癌7例，乳腺癌6例，胃癌5例，恶性淋巴瘤2例和脑胶质瘤1例。所有病例均经病理学诊断证实。
, 百拇医药
试剂：美国AMDL公司DR-70TMELISA试剂盒，由美国康民(COMET)医疗技术公司广州办事处提供。
仪器：美国伯乐公司(BIO-RAD Inc.)BR450酶标仪。
方法：ELISA双抗体夹心法，血清标本当天检测或放置-20℃备用。从采集标本开始，一切操作均严格按照说明书进行。酶标仪数据用自编Visual BASIC控制程序自动采集[2]，标准曲线处理使用微软(Microsoft)公司Excel 5.0电子表格进行。典型标准曲线相关方程为：Y=-0.0012x2+0.1173x+0.2973(R2=9963)。式中：y为吸光度值，x为DR-70含量(mg/L)，R为相关系数。
2 结 果
正常对照组20例测定值为(
±s)：4.41±0.81mg/L。其中：男11例，4.50±0.83mg/L；女9例，4.32±0.93mg/L。经统计学t检验无性别差异(P>0.05)。按+1.96s(95%可信限)确定正常血清DR-70上限值为6.0mg/L，与文献值相同[3]。
, 百拇医药
恶性肿瘤组血清DR-70检测值分布见表1。
表1 59例恶性肿瘤患者血清DR-70含量(mg/L)分布
病种
例数
DR-70(mg/L)
<6
～10
～20
>20
原发性肝癌
20
1
, 百拇医药
4
8
7
肺癌
18
3
5
6
4
卵巢癌
7
1
1
2
, 百拇医药
3
乳腺癌
6
2
2
1
1
胃癌
5
1
1
2
1
恶性淋巴瘤
, http://www.100md.com
2
1
1
脑胶质瘤
1
1
合计
59
8
14
21
16
正常对照组与恶性肿瘤组血清DR-70阳性率比较见表2。各种恶性肿瘤血清DR-70的阳性率均有显著升高(66.7%～100%)。与正常对照组比较均有非常显著性差异(P<0.001)。 表2 正常对照组与各种恶性肿瘤血清DR-70阳性率比较
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分组
例数
阳性数
阳性率(%)
正常对照组
20
1
5.0
恶性肿瘤组
59
51
86.4
原发性肝癌
, 百拇医药
20
19
95.0
肺癌
18
15
83.3
卵巢癌
7
6
85.7
乳腺癌
6
4
, http://www.100md.com
66.7
胃癌
5
4
80.0
恶性淋巴瘤
2
2
100.0
脑胶质瘤
1
1
100.0
, 百拇医药 3 讨 论
血清肿瘤标志物虽在1978年提出已有二十余年，但真正只存在于或只能由肿瘤细胞产生的特异性标志物至今尚未被发现。肿瘤诊断中常用的肿瘤标志物已有几十种。但仅有50～70%的恶性肿瘤血清中可测出目前常见的肿瘤标志物，如原发性肝癌血清AFP30～40%为阴性，乳腺癌中血清CA15-3 20～30%阴性，结肠癌中血清CEA 50%阴性等，假阴性率都较高。
1970年Donald Rounds于正常细胞培养物恶变过程中发现DR-70，此为后来在肿瘤病人血液中找到的一种环形粒子(Ring Shaped Particle,RSP)。为纪念他的发现，该物质用他的姓名首字母及发现年号命名。1991年美国医疗诊断实验室(AMDL)研究证实DR-70是一组与恶性肿瘤密切相关的蛋白质，是肿瘤细胞分泌的一类蛋白水解酶。Justice等首先将其用于筛检乳腺癌，其后陆续出现应用于诊断各种恶性肿瘤具有一定临床意义的报道。1996年AMDL生产出ELISA诊断试剂盒用于临床辅助肺癌诊断。Wu D等[4]用其测定136例共13种恶性肿瘤患者血清中的DR-70，对于肺癌、胃癌、乳腺癌和结肠癌的灵敏度分别为87.8%、92.6%、65.2%和66.7%。
, 百拇医药
本文结果说明血清DR-70是一有较高诊断价值的广谱肿瘤标志物，对肝癌及肺癌的诊断阳性率高达95%及83.3%。在所研究的20例肝癌病例中，有7例血清甲胎蛋白为假阴性，其中2例DR-70显示强阳性，其值分别为13.4和21.2mg/L，提示DR-70作为广谱肿瘤标志物与特异性肿瘤标志物联合检测分析可以显著提高诊断准确性。同其他特异性肿瘤标志物一样，DR-70也存在不同程度假阳性，原因之一可能系DR-70仍然不是癌基因直接表达的蛋白质，其因果关系仍需进一步研究确认。目前研究发现，部分病毒性肝炎、肺部组织胞浆菌感染及支气管扩张病例DR-70含量偏高，出现假阳性。
DR-70在血液中表现为一种复合物，因此对于患者血清标本的正确处理是必要的。必须使用空腹血以避免脂血引起假阳性。溶血标本测定结果偏高，所以应在血液凝结后30分钟左右分离血清避免溶血。为充分保持DR-70这种蛋白水解酶的活性，如果标本在24小时内不能测定，则应将血清冻存于-20℃，以避免出现假阴性结果。DR-70ELISA检测方法简单、快速，仅需1.5小时就可得到结果，比通常ELISA方法需要的6小时以上时间显著缩短，临床上可以及时获得报告作出诊断。
, 百拇医药
参考文献
1 武建国.血清肿瘤标志物检测中值得注意的问题，中华医学检验杂志，1997，20：7
2 林丁，沈萍.用微型计算机控制伯乐BR450酶标仪的联机策略.中国医药荟萃-实验医学与临床(中).第1版，成都：成都科技大学出版社，1997：462
3 吴东方，周新，杨桂，等.血清肿瘤标志物DR-70TM参考值，数理医药学杂志，1998，11：335
4 Wu D,Zhou X,Yang G，et al.Clinical performance of the AMDL DR-70 immunoassay kit for cancer detection.J Immunoassay,1998,19:63, 百拇医药
单位：重庆市肿瘤研究所中心研究室(400030)
关键词：DR-70；肿瘤标志物；ELISA
肿瘤标志物DR 摘 要 目的：评价肿瘤标志物DR-70在恶性肿瘤中的诊断应用。方法：应用美国AMDL公司的DR-70TMELISA试剂盒，测定对20例正常人和59例恶性肿瘤病人血清DR-70含量。结果：各种恶性肿瘤DR-70的阳性率为66.7～100%，均较正常对照组有非常显著性差异(P<0.001)。结论：血清DR-70是诊断恶性肿瘤有价值的标志物。
Application of Tumor Marker of DR-70 in the Diagnosis of Malignant Tumors
Lin Ding,Shen Ping,Yang Jingmei
, http://www.100md.com
Central Research Laboratory,Chongqing Cancer Institute,Chongqing 400030
Abstract objective:To evaluate the tumor marker of DR-70 in the diagnosis of malignant tumors.Method:Using DR-70TMELISA kit for detection of DR-70 in serum samples of 20 healthy controls and 59 patients with various malignant tumors.Results:The positive rates of serum DR-70 of the patients were 66.7～100%,all of which were significantly higher than that of normal controls.Conclusion:The detection of serum DR-70 is a valuable tumor marker in the diagnosis of malignant tumors.
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Key words: DR-70 Marker of tumor ELISA
恶性肿瘤已成为当今世界威胁人类健康最大的疾病之一。据有关资料表明[1]我国恶性肿瘤的死亡率已达108.39/10万，占总死亡人数的17.97%，成为第2位死亡原因。若能早期发现并合理治疗，治愈率可大大提高。早期诊断为目前医学研究重要课题。我国在肿瘤标志的基础及临床应用方面均取得了一些进展，但与国际先进水平相比尚有差距。本文采用DR-70 ELISA试剂盒测定20例正常人及59例恶性肿瘤病人血清肿瘤标志物DR-70水平，国内尚未见报道。现将结果分析如下。
1 材料与方法
检测对象：正常对照组20例，男11例，女9例，年龄20～45岁，均采自重庆市血液中心各项检测指标均为正常的献血者。恶性肿瘤组59例，男37例，女22例，年龄27～75岁。原发性肝癌20例(其中甲胎蛋白<20ng/ml7例)，肺癌18例，卵巢癌7例，乳腺癌6例，胃癌5例，恶性淋巴瘤2例和脑胶质瘤1例。所有病例均经病理学诊断证实。
, 百拇医药
试剂：美国AMDL公司DR-70TMELISA试剂盒，由美国康民(COMET)医疗技术公司广州办事处提供。
仪器：美国伯乐公司(BIO-RAD Inc.)BR450酶标仪。
方法：ELISA双抗体夹心法，血清标本当天检测或放置-20℃备用。从采集标本开始，一切操作均严格按照说明书进行。酶标仪数据用自编Visual BASIC控制程序自动采集[2]，标准曲线处理使用微软(Microsoft)公司Excel 5.0电子表格进行。典型标准曲线相关方程为：Y=-0.0012x2+0.1173x+0.2973(R2=9963)。式中：y为吸光度值，x为DR-70含量(mg/L)，R为相关系数。
2 结 果
正常对照组20例测定值为(
±s)：4.41±0.81mg/L。其中：男11例，4.50±0.83mg/L；女9例，4.32±0.93mg/L。经统计学t检验无性别差异(P>0.05)。按+1.96s(95%可信限)确定正常血清DR-70上限值为6.0mg/L，与文献值相同[3]。, 百拇医药
恶性肿瘤组血清DR-70检测值分布见表1。
表1 59例恶性肿瘤患者血清DR-70含量(mg/L)分布
病种
例数
DR-70(mg/L)
<6
～10
～20
>20
原发性肝癌
20
1
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4
8
7
肺癌
18
3
5
6
4
卵巢癌
7
1
1
2
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3
乳腺癌
6
2
2
1
1
胃癌
5
1
1
2
1
恶性淋巴瘤
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2
1
1
脑胶质瘤
1
1
合计
59
8
14
21
16
正常对照组与恶性肿瘤组血清DR-70阳性率比较见表2。各种恶性肿瘤血清DR-70的阳性率均有显著升高(66.7%～100%)。与正常对照组比较均有非常显著性差异(P<0.001)。 表2 正常对照组与各种恶性肿瘤血清DR-70阳性率比较
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分组
例数
阳性数
阳性率(%)
正常对照组
20
1
5.0
恶性肿瘤组
59
51
86.4
原发性肝癌
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20
19
95.0
肺癌
18
15
83.3
卵巢癌
7
6
85.7
乳腺癌
6
4
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66.7
胃癌
5
4
80.0
恶性淋巴瘤
2
2
100.0
脑胶质瘤
1
1
100.0
, 百拇医药 3 讨 论
血清肿瘤标志物虽在1978年提出已有二十余年，但真正只存在于或只能由肿瘤细胞产生的特异性标志物至今尚未被发现。肿瘤诊断中常用的肿瘤标志物已有几十种。但仅有50～70%的恶性肿瘤血清中可测出目前常见的肿瘤标志物，如原发性肝癌血清AFP30～40%为阴性，乳腺癌中血清CA15-3 20～30%阴性，结肠癌中血清CEA 50%阴性等，假阴性率都较高。
1970年Donald Rounds于正常细胞培养物恶变过程中发现DR-70，此为后来在肿瘤病人血液中找到的一种环形粒子(Ring Shaped Particle,RSP)。为纪念他的发现，该物质用他的姓名首字母及发现年号命名。1991年美国医疗诊断实验室(AMDL)研究证实DR-70是一组与恶性肿瘤密切相关的蛋白质，是肿瘤细胞分泌的一类蛋白水解酶。Justice等首先将其用于筛检乳腺癌，其后陆续出现应用于诊断各种恶性肿瘤具有一定临床意义的报道。1996年AMDL生产出ELISA诊断试剂盒用于临床辅助肺癌诊断。Wu D等[4]用其测定136例共13种恶性肿瘤患者血清中的DR-70，对于肺癌、胃癌、乳腺癌和结肠癌的灵敏度分别为87.8%、92.6%、65.2%和66.7%。
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本文结果说明血清DR-70是一有较高诊断价值的广谱肿瘤标志物，对肝癌及肺癌的诊断阳性率高达95%及83.3%。在所研究的20例肝癌病例中，有7例血清甲胎蛋白为假阴性，其中2例DR-70显示强阳性，其值分别为13.4和21.2mg/L，提示DR-70作为广谱肿瘤标志物与特异性肿瘤标志物联合检测分析可以显著提高诊断准确性。同其他特异性肿瘤标志物一样，DR-70也存在不同程度假阳性，原因之一可能系DR-70仍然不是癌基因直接表达的蛋白质，其因果关系仍需进一步研究确认。目前研究发现，部分病毒性肝炎、肺部组织胞浆菌感染及支气管扩张病例DR-70含量偏高，出现假阳性。
DR-70在血液中表现为一种复合物，因此对于患者血清标本的正确处理是必要的。必须使用空腹血以避免脂血引起假阳性。溶血标本测定结果偏高，所以应在血液凝结后30分钟左右分离血清避免溶血。为充分保持DR-70这种蛋白水解酶的活性，如果标本在24小时内不能测定，则应将血清冻存于-20℃，以避免出现假阴性结果。DR-70ELISA检测方法简单、快速，仅需1.5小时就可得到结果，比通常ELISA方法需要的6小时以上时间显著缩短，临床上可以及时获得报告作出诊断。
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参考文献
1 武建国.血清肿瘤标志物检测中值得注意的问题，中华医学检验杂志，1997，20：7
2 林丁，沈萍.用微型计算机控制伯乐BR450酶标仪的联机策略.中国医药荟萃-实验医学与临床(中).第1版，成都：成都科技大学出版社，1997：462
3 吴东方，周新，杨桂，等.血清肿瘤标志物DR-70TM参考值，数理医药学杂志，1998，11：335
4 Wu D,Zhou X,Yang G，et al.Clinical performance of the AMDL DR-70 immunoassay kit for cancer detection.J Immunoassay,1998,19:63, 百拇医药