血浆内皮素和非酯化脂肪酸改变与糖尿病视网膜病变的关系
作者：欧造国 杨刚毅 刘 纯 李 伶
单位：欧造国 杨刚毅 刘 纯 重庆医科大学附属第一医院内科(400016)；李 伶 重庆医科大学检验系
关键词：内皮素；非酯化脂肪酸；视网膜病变
血浆内皮素和非酯化脂肪酸改变与糖尿病视网膜病变的关系 摘 要 目的：为探讨血浆内皮素(ET)和非酯化脂肪酸(NEFA)水平与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法：分组分析了56例伴和不伴DR的2型糖尿病(DM)人血浆ET和NEFA水平，并与正常人进行了比较。结果：2型DM病人血浆ET水平明显高于正常人，伴有DR组病人又明显高于无DR的病人。病人血浆NEFA总水平和亚油酸(C18∶2n-6)、油酸(C18∶1n-9)、软脂酸(C16∶0)和硬脂酸(C18∶0)含量明显高于对照组，伴有DR的病人油酸和总酸水平又明显高于不伴DR组病人。血浆NEFA水平与ET浓度呈明显正相关。结论：血管内皮损伤，ET释放增加和NEFA代谢紊乱是糖尿病DR发生的重要因素。
, 百拇医药
Changes of Plasma Endothelin and Nonesterified
Fatty Acids and Diabetic Retinopathy
Ou Zaoguo,Yang Gangyi,Liu Chun,et al.Department of Intern
al Medicine,The First Affiliated Hospital,Chongqing University
of Medical Sciences,Chongqing 400016
Abstract objective:To study the relationship between plasma endothelin (ET) and nonesterified fatty acids(NEFA) and diabetic retinopathy(DR).Methods plasma ET and NEFA were examined in 56 noninsulin-dependent diabetes mulitus(NIDDM) patients with or without retinopathy and 30 controls.Results:The results showed that plasma ET levels in NIDDM were significantly higher than those in the healthy controls,and patients with DR had a higher plasma ET level compared to those without DR.The contents of stearic(C18∶0)，oleic(C18∶1n-9),linoleic(C18∶2n-6)and plamitic(C16∶0) acids were significantly increased in diabetic patients,and the plasma contents of total NEFA and oleic acids were higher in patients with DR than those without DR.Plasma NEFA levels were positively correlated with ET concentrations in NIDDM patients.Conclusion: These results suggest that increase of plasma ET levels result from vascular endothelial cell injury and abnormalities of plasma NEFA metabolism may be one important cause of diabetic retinopathy.
, 百拇医药
Key Words Endothelin Nonesterfied fatty acids Diabetic retinopathy.
内皮素(ET)作为一种新的生物活性肽，有着广泛的生理效应，除具有很强的血管收缩及促进平滑肌细胞增殖作用外，还参与神经内分泌的调节过程。它在多种疾病的发病机制中有重要的病理生理意义[1]。有关胰岛素抵抗(IR)和高胰岛素血症导致血管内皮损伤，ET释放增加以及血浆ET升高在糖尿病(DM)血管病变中的作用已有报道[2～3]。但血浆非酯化脂肪酸(NEFA)代谢紊乱对血管内皮损伤，ET释放以及与DM血管并发症的关系目前仍不清楚。为此，我们分组测定了56例DM病人血浆NEFA和ET水平，并与正常人进行了比较。
1 对象与方法
1.1 对象：DM组：根据WHO标准确诊的2型DM患者56例，病程1～35年，根据有无视网膜病变(DR)进一步分为伴DR和不伴(NDR)两组。DR组：21例，男9例，女12例。平均年龄60±5岁，平均体重指数(BMI)24.12±4.35kg/m2，经眼底荧光造影或眼底镜检查证实存在DR。NDR组：35例，男17例，女18例，平均年龄58±6岁，平均BMI22.56±2.66kg/m2，经检查无DR。对照组：无DM及心血管病史的健康成人30例，男14例，女16例，年龄55±9岁，BMI23.17±2.29kg/m2，检前一周未服用任何药物。
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以上各组年龄、性别构成、BMI等均具可比性。各组在检前三天进食素食。
1.2 方法
1.2.1 血浆ET测定：取空腹静脉肝素抗凝血液1ml，置于含10%EDTA10μl和胰肽酶200Iu的试管中，混匀于40℃离心(3500g/10min)，分离血浆存于-30℃待测。标本收集后统一行ET放免测定[4]。
1.2.2 血浆NEFA测定：取血浆300μl，用氯仿-甲醇混合液(2∶1V/V，含抗氧化剂BHT400mg/l)提取脂类。经2-溴苯乙酮衍生得脂肪酸苯乙酮酯行色谱分析。色谱条件：测定波长为254nm，柱温35℃，流速梯度洗脱，流动相为甲醇-乙晴-水(70∶20∶10V/V)，内标法定量[5]。
1.2.3 空腹血糖(FBG)测定用酶法；糖化血红蛋白(HbAlc)用微柱法；甘油三酯(TG)用乙酰丙酮显色法；胆固醇(TC)测定用酶法。
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1.2.4 统计学处理：各项数据以均数±标准差(
±SD)表示。多组间比较用F和Q检验，指标间的关系判定采用直线相关分析。
2 结 果
2.1 各组血浆ET浓度及其他生化指标比较：NDR和DR组FBG、HbAlc、TG明显高于对照组，但两组间无明显差异。两组病人血浆ET水平明显高于对照组，DR组又明显高于NDR组(见表1)。
2.2 血浆NEFA含量及组成分析：两组病人血浆月桂酸(C12∶0)、十四酸(C14∶0)的百分含量明显低于对照组，而亚油酸(C18∶2n-6)，软脂酸(C16∶0)，油酸(C18∶1n-9)，硬脂酸(C18∶0)和总酸含量明显高于对照组。DR组病人油酸(C18∶1n-9)和总脂肪酸含量又明显高于NDR组。其余各酸含量无明显差异(见表2)，DM病人血浆NEFA水平与ET浓度呈明显正相关(r=0.351，P<0.01)。
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表1 血浆ET及其他生化指标比较(x±s)
组别
ET(ng/l)
FBG(mmol/l)
HbAlc(%)
TG(mmol/l)
TC(mmol/l)
对照组
123.45±28.37
4.75±0.88
4.40±1.20
1.22±0.45
, 百拇医药
4.34±1.11
NDR组
161.34±67.24*
8.82±2.12**
9.65±2.75**
1.77±0.68*
4.76±1.05
DR组
221.87±82.40**
, 百拇医药
9.57±2.88**
10.35±2.98**
1.95±0.85*
4.94±1.18
与对照组比较；*P<0.05，**P<0.01；与NDR组比较：
P<0.05 表2 血浆NEFA成分比较(x±s)
组别
C12∶0
C20∶5n-3
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C14∶0
C20∶4n-6
C18∶2n-6
C16∶0
C18∶1n-9
C18∶0
TFA
UFA/TFA
对照组
含量(μmol/l)
9.27±2.42
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6.36±2.21
22.04±6.10
13.55±3.64
94.67±31.90
114.31±24.32
206.08±51.08
46.31±9.08
515.70±101.22
组成(%)
2.15±0.80
1.24±0.36
, 百拇医药
4.25±1.23
2.57±0.61
18.57±2.76
22.43±2.77
39.64±5.00
9.12±1.84
62.24±4.87
DR组
含量(μmol/l)
9.44±2.26
6.66±1.89
20.30±7.46
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17.21±6.38
129.06±46.31**
139.66±40.32**
287.91±90.20**
55.38±15.20**
658.30±172.75**
, 百拇医药
组成(%)
1.59±0.64*
1.14±0.37
3.42±0.98*
2.70±0.77
19.43±2.43
22.18±2.25
40.98±3.55
9.13±1.80
63.82±4.15
NDR组
, 百拇医药
含量(μmol/l)
8.41±2.52
5.48±1.66
9.45±6.61
14.89±4.21
122.96±43.42*
136.77±33.82**
240.30±74.80**
57.45±14.60**
605.92±164.7*
组成(%)
, 百拇医药
1.43±0.52
1.00±0.43
3.35±1.01
2.45±0.74
19.68±3.30
22.42±2.50
40.49±3.87
9.66±2.07
63.21±4.37
与正常对照组比；*P<0.05，**P<0.01；与NDR组比较；P<0.05；TFA为总脂肪酸含量；UFA/TFA为不饱和酸与总酸含量之比 3 讨 论
, 百拇医药
本文结果表明2型DM病人血浆ET明显高于正常人。DR和NDR两组间FBG、HbAlc和TG等代谢指标无明显差异，而伴有视网膜病变的DR组血浆ET水平又明显高于不伴视网膜病变的NDR组，这与近年多数报道一致[2～3]。这可能由于DM患者长期代谢紊乱，血红蛋白糖基化，红细胞携氧和释氧能力下降，高血糖导致血粘滞性增加，血流缓慢，组织缺氧等血管内皮受损，ET释放增加。在有DR的病人血浆ET升高更明显，提示内皮损伤是DM微血管病变的重要原因之一。
对各组血浆NEFA的分析结果可见：2型糖尿病患者血浆NEFA浓度明显高于对照组，其中主要是硬脂酸(C18∶0)，软脂酸(C16∶0)，油酸(C18∶1n-9)和亚油酸(C18∶2n-6)四种脂肪酸含量明显增高，其中伴有DR的病人油酸和总NEFA水平又明显高于不伴DR组病人。说明伴有DR的病人胰岛素抵抗(IR)和脂肪酸代谢紊乱更为严重。由于血浆NEFA的升高抑制了胰岛素(Ins)介导的组织细胞对糖的摄取和利用，从而加重了IR，并导致了高胰岛素血症[6]。另一方面，高胰岛素血症可通过增加交感神经兴奋，增加细胞Na+/H+和Na+/Li+转运活性，以及降低纤溶活性和血管平滑肌增殖等而导致血管内皮损伤使ET释放增加，ET增加又影响了Ins促进组织血供和增强对糖摄取利用的能力，因而降低了组织对胰岛素的敏感性，进一步加重了IR[2]。相关性分析亦表明病人血浆NEFA与ET水平呈明显正相关可能提示存在上述机制。
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综上所述，本组资料显示：血浆NEFA代谢紊乱和水平增高可能是造成血管内皮损伤和DM微血管病变的重要原因之一。血浆NEFA和ET增高本身又加重了IR和高胰岛素血症，从而进一步加重血管内皮损伤使ET分泌增加形成恶性循环。因此，我们认为控制DM病人糖代谢及脂肪酸代紊乱是减轻其血管内皮损伤，防止和延缓其微血管并发症的重要措施。
参考文献
1 李青，宋建华，乔淑华，等.内皮素在内分泌调节功能中的作用.国外医学《内分泌学分册》，1994；188
2 Ferri C,Laurenti O,Carlomagno A,et al.Circulating Endopthelin-l levels increase during euglycemic hyperinsulinmic clamp in lean NIDDM men.Diabetes Care,1995,2:227
, 百拇医药
3 曾成陪，唐丹，孙梅励，等.血浆内皮素与糖尿病血管病变的关系，中华内科杂志，1994，7：467
4 Naruse M,Naruse K,Obaba F,et al.Radioimmunoassay for erdothelin and immunoreative endothelin in culture medium of bovine endothelial cells.Biochem Biophys Res Commun,1989,160:662
5 李伶，杨刚毅，魏锡文，等.高效液相色谱法测定人血浆游离脂肪酸.仪器分析，1996，3：37
6 Boden G.Fatty acids and insulin resistance.Diabetes Care,1996,4:3394, 百拇医药
单位：欧造国 杨刚毅 刘 纯 重庆医科大学附属第一医院内科(400016)；李 伶 重庆医科大学检验系
关键词：内皮素；非酯化脂肪酸；视网膜病变
血浆内皮素和非酯化脂肪酸改变与糖尿病视网膜病变的关系 摘 要 目的：为探讨血浆内皮素(ET)和非酯化脂肪酸(NEFA)水平与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法：分组分析了56例伴和不伴DR的2型糖尿病(DM)人血浆ET和NEFA水平，并与正常人进行了比较。结果：2型DM病人血浆ET水平明显高于正常人，伴有DR组病人又明显高于无DR的病人。病人血浆NEFA总水平和亚油酸(C18∶2n-6)、油酸(C18∶1n-9)、软脂酸(C16∶0)和硬脂酸(C18∶0)含量明显高于对照组，伴有DR的病人油酸和总酸水平又明显高于不伴DR组病人。血浆NEFA水平与ET浓度呈明显正相关。结论：血管内皮损伤，ET释放增加和NEFA代谢紊乱是糖尿病DR发生的重要因素。
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Changes of Plasma Endothelin and Nonesterified
Fatty Acids and Diabetic Retinopathy
Ou Zaoguo,Yang Gangyi,Liu Chun,et al.Department of Intern
al Medicine,The First Affiliated Hospital,Chongqing University
of Medical Sciences,Chongqing 400016
Abstract objective:To study the relationship between plasma endothelin (ET) and nonesterified fatty acids(NEFA) and diabetic retinopathy(DR).Methods plasma ET and NEFA were examined in 56 noninsulin-dependent diabetes mulitus(NIDDM) patients with or without retinopathy and 30 controls.Results:The results showed that plasma ET levels in NIDDM were significantly higher than those in the healthy controls,and patients with DR had a higher plasma ET level compared to those without DR.The contents of stearic(C18∶0)，oleic(C18∶1n-9),linoleic(C18∶2n-6)and plamitic(C16∶0) acids were significantly increased in diabetic patients,and the plasma contents of total NEFA and oleic acids were higher in patients with DR than those without DR.Plasma NEFA levels were positively correlated with ET concentrations in NIDDM patients.Conclusion: These results suggest that increase of plasma ET levels result from vascular endothelial cell injury and abnormalities of plasma NEFA metabolism may be one important cause of diabetic retinopathy.
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Key Words Endothelin Nonesterfied fatty acids Diabetic retinopathy.
内皮素(ET)作为一种新的生物活性肽，有着广泛的生理效应，除具有很强的血管收缩及促进平滑肌细胞增殖作用外，还参与神经内分泌的调节过程。它在多种疾病的发病机制中有重要的病理生理意义[1]。有关胰岛素抵抗(IR)和高胰岛素血症导致血管内皮损伤，ET释放增加以及血浆ET升高在糖尿病(DM)血管病变中的作用已有报道[2～3]。但血浆非酯化脂肪酸(NEFA)代谢紊乱对血管内皮损伤，ET释放以及与DM血管并发症的关系目前仍不清楚。为此，我们分组测定了56例DM病人血浆NEFA和ET水平，并与正常人进行了比较。
1 对象与方法
1.1 对象：DM组：根据WHO标准确诊的2型DM患者56例，病程1～35年，根据有无视网膜病变(DR)进一步分为伴DR和不伴(NDR)两组。DR组：21例，男9例，女12例。平均年龄60±5岁，平均体重指数(BMI)24.12±4.35kg/m2，经眼底荧光造影或眼底镜检查证实存在DR。NDR组：35例，男17例，女18例，平均年龄58±6岁，平均BMI22.56±2.66kg/m2，经检查无DR。对照组：无DM及心血管病史的健康成人30例，男14例，女16例，年龄55±9岁，BMI23.17±2.29kg/m2，检前一周未服用任何药物。
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以上各组年龄、性别构成、BMI等均具可比性。各组在检前三天进食素食。
1.2 方法
1.2.1 血浆ET测定：取空腹静脉肝素抗凝血液1ml，置于含10%EDTA10μl和胰肽酶200Iu的试管中，混匀于40℃离心(3500g/10min)，分离血浆存于-30℃待测。标本收集后统一行ET放免测定[4]。
1.2.2 血浆NEFA测定：取血浆300μl，用氯仿-甲醇混合液(2∶1V/V，含抗氧化剂BHT400mg/l)提取脂类。经2-溴苯乙酮衍生得脂肪酸苯乙酮酯行色谱分析。色谱条件：测定波长为254nm，柱温35℃，流速梯度洗脱，流动相为甲醇-乙晴-水(70∶20∶10V/V)，内标法定量[5]。
1.2.3 空腹血糖(FBG)测定用酶法；糖化血红蛋白(HbAlc)用微柱法；甘油三酯(TG)用乙酰丙酮显色法；胆固醇(TC)测定用酶法。
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1.2.4 统计学处理：各项数据以均数±标准差(
±SD)表示。多组间比较用F和Q检验，指标间的关系判定采用直线相关分析。2 结 果
2.1 各组血浆ET浓度及其他生化指标比较：NDR和DR组FBG、HbAlc、TG明显高于对照组，但两组间无明显差异。两组病人血浆ET水平明显高于对照组，DR组又明显高于NDR组(见表1)。
2.2 血浆NEFA含量及组成分析：两组病人血浆月桂酸(C12∶0)、十四酸(C14∶0)的百分含量明显低于对照组，而亚油酸(C18∶2n-6)，软脂酸(C16∶0)，油酸(C18∶1n-9)，硬脂酸(C18∶0)和总酸含量明显高于对照组。DR组病人油酸(C18∶1n-9)和总脂肪酸含量又明显高于NDR组。其余各酸含量无明显差异(见表2)，DM病人血浆NEFA水平与ET浓度呈明显正相关(r=0.351，P<0.01)。
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表1 血浆ET及其他生化指标比较(x±s)
组别
ET(ng/l)
FBG(mmol/l)
HbAlc(%)
TG(mmol/l)
TC(mmol/l)
对照组
123.45±28.37
4.75±0.88
4.40±1.20
1.22±0.45
, 百拇医药
4.34±1.11
NDR组
161.34±67.24*
8.82±2.12**
9.65±2.75**
1.77±0.68*
4.76±1.05
DR组
221.87±82.40**
, 百拇医药
9.57±2.88**
10.35±2.98**
1.95±0.85*
4.94±1.18
与对照组比较；*P<0.05，**P<0.01；与NDR组比较：
P<0.05 表2 血浆NEFA成分比较(x±s)组别
C12∶0
C20∶5n-3
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C14∶0
C20∶4n-6
C18∶2n-6
C16∶0
C18∶1n-9
C18∶0
TFA
UFA/TFA
对照组
含量(μmol/l)
9.27±2.42
, http://www.100md.com
6.36±2.21
22.04±6.10
13.55±3.64
94.67±31.90
114.31±24.32
206.08±51.08
46.31±9.08
515.70±101.22
组成(%)
2.15±0.80
1.24±0.36
, 百拇医药
4.25±1.23
2.57±0.61
18.57±2.76
22.43±2.77
39.64±5.00
9.12±1.84
62.24±4.87
DR组
含量(μmol/l)
9.44±2.26
6.66±1.89
20.30±7.46
, http://www.100md.com
17.21±6.38
129.06±46.31**
139.66±40.32**
287.91±90.20**
55.38±15.20**
658.30±172.75**
, 百拇医药
组成(%)
1.59±0.64*
1.14±0.37
3.42±0.98*
2.70±0.77
19.43±2.43
22.18±2.25
40.98±3.55
9.13±1.80
63.82±4.15
NDR组
, 百拇医药
含量(μmol/l)
8.41±2.52
5.48±1.66
9.45±6.61
14.89±4.21
122.96±43.42*
136.77±33.82**
240.30±74.80**
57.45±14.60**
605.92±164.7*
组成(%)
, 百拇医药
1.43±0.52
1.00±0.43
3.35±1.01
2.45±0.74
19.68±3.30
22.42±2.50
40.49±3.87
9.66±2.07
63.21±4.37
与正常对照组比；*P<0.05，**P<0.01；与NDR组比较；
P<0.05；TFA为总脂肪酸含量；UFA/TFA为不饱和酸与总酸含量之比 3 讨 论, 百拇医药
本文结果表明2型DM病人血浆ET明显高于正常人。DR和NDR两组间FBG、HbAlc和TG等代谢指标无明显差异，而伴有视网膜病变的DR组血浆ET水平又明显高于不伴视网膜病变的NDR组，这与近年多数报道一致[2～3]。这可能由于DM患者长期代谢紊乱，血红蛋白糖基化，红细胞携氧和释氧能力下降，高血糖导致血粘滞性增加，血流缓慢，组织缺氧等血管内皮受损，ET释放增加。在有DR的病人血浆ET升高更明显，提示内皮损伤是DM微血管病变的重要原因之一。
对各组血浆NEFA的分析结果可见：2型糖尿病患者血浆NEFA浓度明显高于对照组，其中主要是硬脂酸(C18∶0)，软脂酸(C16∶0)，油酸(C18∶1n-9)和亚油酸(C18∶2n-6)四种脂肪酸含量明显增高，其中伴有DR的病人油酸和总NEFA水平又明显高于不伴DR组病人。说明伴有DR的病人胰岛素抵抗(IR)和脂肪酸代谢紊乱更为严重。由于血浆NEFA的升高抑制了胰岛素(Ins)介导的组织细胞对糖的摄取和利用，从而加重了IR，并导致了高胰岛素血症[6]。另一方面，高胰岛素血症可通过增加交感神经兴奋，增加细胞Na+/H+和Na+/Li+转运活性，以及降低纤溶活性和血管平滑肌增殖等而导致血管内皮损伤使ET释放增加，ET增加又影响了Ins促进组织血供和增强对糖摄取利用的能力，因而降低了组织对胰岛素的敏感性，进一步加重了IR[2]。相关性分析亦表明病人血浆NEFA与ET水平呈明显正相关可能提示存在上述机制。
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综上所述，本组资料显示：血浆NEFA代谢紊乱和水平增高可能是造成血管内皮损伤和DM微血管病变的重要原因之一。血浆NEFA和ET增高本身又加重了IR和高胰岛素血症，从而进一步加重血管内皮损伤使ET分泌增加形成恶性循环。因此，我们认为控制DM病人糖代谢及脂肪酸代紊乱是减轻其血管内皮损伤，防止和延缓其微血管并发症的重要措施。
参考文献
1 李青，宋建华，乔淑华，等.内皮素在内分泌调节功能中的作用.国外医学《内分泌学分册》，1994；188
2 Ferri C,Laurenti O,Carlomagno A,et al.Circulating Endopthelin-l levels increase during euglycemic hyperinsulinmic clamp in lean NIDDM men.Diabetes Care,1995,2:227
, 百拇医药
3 曾成陪，唐丹，孙梅励，等.血浆内皮素与糖尿病血管病变的关系，中华内科杂志，1994，7：467
4 Naruse M,Naruse K,Obaba F,et al.Radioimmunoassay for erdothelin and immunoreative endothelin in culture medium of bovine endothelial cells.Biochem Biophys Res Commun,1989,160:662
5 李伶，杨刚毅，魏锡文，等.高效液相色谱法测定人血浆游离脂肪酸.仪器分析，1996，3：37
6 Boden G.Fatty acids and insulin resistance.Diabetes Care,1996,4:3394, 百拇医药