血小板活化因子拮抗剂WEB2170对烫伤大鼠肠粘膜微循环的影响
作者：余佩武 肖光夏 秦孝健 周立新
单位：余佩武 第三军医大学附属西南医院普通外科 重庆，400038；肖光夏 秦孝健 周立新 第三军医大学附属西南医院烧伤研究所 重庆，400038
关键词：血小板活化因子；肠粘膜血流量；肠粘膜pHi；烧伤
提 要 目的
提 要 目的：进一步探讨血小板活化因子(PAF)在烧伤后肠粘膜屏障损害中的作用机制。方法：在大鼠30%Ⅲ度烫伤模型上，观察PAF拮抗剂WEB2170对烧伤后肠粘膜血流量、肠粘膜内pH(pHi)和肠组织含水量的影响。结果：烫伤后肠粘膜血流量和pHi较对照组显著降低，而肠组织含水量显著增多。应用PAF拮抗剂WEB2170治疗能有效改善烫伤后肠粘膜血流量，提高肠粘膜pHi，并有效降低肠组织含水量，从而明显减轻肠粘膜病理损害。结论：PAF是导致烧伤后肠粘膜微循环障碍的重要因素之一。
, http://www.100md.com
中图法分类号 R644
The effects of platelet activating factor antagonist on intestinal mucosal microcirculation after scalding in rats
Yu Peiwu, Xiao Guangxia, Qin Xiaojian, Zhou Lixin (Department of General Surgery, Southwest Hospital, Third Military Medical University,Chongqing,400038)
Abstract Objective: To investigate the effects and their mechanism of platelet activating factor (PAF) antagonist on the intestinal mucosal microcirculation after scalding in rats. Methods: The changes of intestinal mucosal blood flow, intestinal intramucosal pH (pHi) and intestinal water content were determined on rats suffering from 30% TBSA third degree scalding and treated with PAF antagonist WEB2170. Results: PAF antagonist treatment of the scalded rats could significantly increase intestinal mucosal blood flow and pHi, decrease intestinal water content and alleviate evidently the intestinal mucosal damages as compared with those of the control group. Conclusion: PAF is one of the important factors to result in postburn disturbance of intestinal mucosal microcirculation.
, 百拇医药
Key words platelet activating factor; intestinal mucosa; blood flow; intramucosal pH; burns; rat
This project was supported by the National Natural Science Foundation of China,No.39290700
我们已往研究表明，血小板活化因子(Platelet activating factior,PAF)是严重烧伤后肠粘膜屏障功能损害和肠源性感染发生的重要因素之一[1，2]，但其作用机制尚不清楚。本实验重点观察PAF拮抗剂对烧伤后肠粘膜微循环的影响，以进一步探讨PAF在烧伤后肠粘膜损害中的作用机制。
1 材料与方法
1.1 模型制作
, http://www.100md.com
实验用健康Wistar大鼠，雌雄不限，体重(220±30)g。动物麻醉后背部剃毛，于92℃水浴中18s造成30%TBSAⅢ度烫伤。伤后以40ml/kg等渗盐水腹腔注射抗休克，单笼饲养。
1.2 分组
动物随机分为3组：①正常对照组：不作特殊处理；②单纯烫伤组：烫伤后仅给抗休克治疗；③PAF拮抗剂治疗组：烫伤后立即腹腔注射PAF拮抗剂WEB2170(5mg/kg)，以后每8h重复一次，其余处理同单纯烫伤组。PAF拮抗剂WEB2170由联邦德国Boehringer Ingelheim公司Elich博士馈赠。分别于伤后6、12、24h和48h进行有关指标观察与测定。正常组、烫伤组以及治疗组各时相均为10只大鼠。
1.3 观察指标
1.3.1肠粘膜血流量测定 应用LDF-Ⅱ型微循环多普勒血流计(南开大学研制)直接测定回肠末段粘膜血流，单位用mV表示。
, 百拇医药
1.3.2 肠粘膜pHi测定[3] 动物麻醉后开腹，取回肠末段长约15cm，予以输入、输出部结扎。其内注入生理盐水3ml，留置30min后抽吸1ml，同时抽动脉血1ml，立即送血气分析，测出肠腔液内PCO2和动脉血HCO-3浓度。按Henderson-Hasselbalch公式计算pHi；pHi=6.1+log(HCO-3/PCO2×0.0307)。
1.3.3 肠组织含水量测定 取新鲜回肠长约3～5cm，去除肠内容物，称湿重后置140℃烤箱烤干4h，再称干重，肠组织含水量以(湿重-干重/湿重)×100%表示。
1.3.4 肠粘膜病理学检查 取末段回肠，常法固定、包埋、切片、HE染色、光镜下观察。
1.4 统计学分析
, 百拇医药
采用华西医科大学医用统计程序包在计算机上对实验数据进行统计学处理。
2 结果
2.1 肠粘膜血流量变化
烫伤后6h肠粘膜血流量即显著降低，为对照组的65%，12h达最低值，约为对照组的46%。此后稍升高，但仍较对照组显著降低。PAF拮抗剂治疗组各时相点肠粘膜血流量均较烫伤组显著升高，见表1。
表1 肠粘膜血流量变化(mV,x±s)
Tab 1 Changes of the intestinal mucosal blood flow (mV,x±s)
Postburn(h)
Group
, 百拇医药
6
12
24
48
Burn
30.60±3.08△△
21.85±2.94△△
31.85±2.72△△
58.56±3.11△
Treatment
40.22±2.86**△
, 百拇医药
37.1±2.90**△△
42.06±2.14**△
45.89±4.51*
Control:46.55±3.01；*:P<0.05，**：P<0.01 vs burn;△：P<0.05,△△：P<0.01 vs control
2.2 肠粘膜pHi变化 烫伤后6h肠粘膜pHi即较对照组非常显著降低(P<0.01)，12h和24h仍较对照组显著降低(P<0.05)，48h与对照组差别不显著(P>0.05)。PAF拮抗剂治疗组6、12和24h肠粘膜pHi均较烫伤组有不同程度显著升高，见表2。
表2 肠粘膜pHi变化(x±s)
, 百拇医药
Tab 2 Changes of the intestinal mucosal pHi (x±s)
Postburn(h)
Groups
6
12
24
48
Burn
7.217±0.085△△
7.316±0.067△△
7.347±0.016△
, 百拇医药
7.432±0.046
Treatment
7.326±0.087**△
7.406±0.113*
7.374±0.148*
7.435±0.055
Control:7.419±0.058；*:P<0.05，**：P<0.01 vs burn；△：P<0.05，△△：P<0.01 vs control
2.3 肠组织含水量变化 烫伤后6h肠组织含水量与对照组比较差别不显著，但伤后12h和24h较对照组显著增加(P<0.05)。48h与对照组比较差别不显著(P>0.05)。PAF拮抗剂治疗12h和24h肠组织含水量较烫伤组均显著降低(P<0.05)，见表3。
, 百拇医药
表3 肠组织含水量变化(%，x±s)
Tab 3 Changes of intestinal tissue water content (%,x±s)
Postburn(h)
Group
6
12
24
48
Burn
76.21±4.16
80.43±2.78△
, 百拇医药
79.89±2.60△
76.97±1.91
Treatment
75.83±2.67
76.65±2.14*
76.47±1.43*
76.14±1.56
Control:76.02±2.97；*:P<0.05 vs burn；△：P<0.05 vs control
2.4 肠粘膜组织学变化 光镜下见烫伤6h肠粘膜固有层水肿，中性粒细胞浸润，绒毛顶端上皮下出现囊状间隙，中央乳糜管扩张。伤后12h和24h，上述损伤更明显，出现上皮细胞变性、坏死、脱落、固有层裸露。48 h粘膜病损有所减轻。PAF拮抗剂治疗组肠粘膜仅见中央乳糜管轻度扩张，上皮细胞结构尚完整。
, 百拇医药
3 讨论
肠粘膜血流是维护肠上皮细胞结构和功能完整的重要因素。已有研究表明，严重烧伤早期即有胃肠粘膜血流量显著减少。如Binnaka等[4]实验发现大鼠30%体表烫伤后1h胃粘膜血流量降低至正常水平的45%，在此后5h的实验过程中仍处于相同较低水平。Tokyay等[5]在40%体表烫伤的猪模型中发现，伤后2h肠血流量显著降低至伤前25%，4h为伤前的30%，48h仍未恢复正常。本结果表明：伤后6h肠粘膜血流即显著降低至对照组的65%，12h仅为46%，24h和48h虽然有所改善，但仍显著低于对照组，分别为对照组的68%和82%。与文献报道相一致，再一次证明烧伤早期有肠粘膜供血不足。肠粘膜血流量减少势必引起肠上皮细胞内氧供量(DO2)减少，而氧耗量(VO2)明显增加，当超过上皮细胞的代偿能力时，细胞内即出现厌氧代谢、酸中毒、肠粘膜内pHi减低，从而导致肠上皮细胞损害[6]。本结果也表明，烫伤后6 h肠粘膜pHi即显著降低达最低值，伤后12 h和24 h仍显著低于对照组。提示烧伤早期肠上皮细胞内严重缺氧。
, 百拇医药
PAF是由磷脂酶A2作用于膜磷脂后生成的一种脂质介质。具有很强的血管活性作用。静脉注射PAF后可引起全身低血压，以及心、肺、脑和胃肠道等组织的血管强烈收缩，应用PAF拮抗剂能有效地阻滞这一作用。PAF还具有很强的致血管通透性升高的作用，比组织胺强1000倍[7]。有研究报道，应用PAF拮抗剂治疗能明显改善内毒素休克和失血性休克所致的胃肠粘膜缺血，减轻其病理损害[8，9]。本实验应用人工合成的PAF拮抗剂WEB2170治疗烫伤大鼠，结果显示能有效改善肠粘膜血流量，提高粘膜pHi，同时还能有效降低肠组织含水量，减轻肠粘膜病理损害，提示PAF是导致烧伤后肠粘膜微循环障碍的重要因素之一，而PAF拮抗剂具有一定的保护作用。
国家自然科学基金资助项目，No.39290700
作者简介：余佩武，男，37岁，副教授，副主任医师，博士
, http://www.100md.com 参考文献
1 余佩武，肖光夏，府伟灵，等.血小板活化因子在烧伤后肠粘膜屏障损害中的作用.中华外科杂志，1995，33(7)：393
2 余佩武，肖光夏，府伟灵，等.血小板活化因子在烧伤后肠源性感染发病机制中的作用.中华医院感染杂志，1996，6(2)：65
3 Wang X D, Wang Q, Anderson R,et al.Intramucosal pH and oxygen extraction in the gastrointestinal tract after major liver resection in rats. Eur J Surg,1993,159(5):81
4 Binnaka T, Yamaguchi T, Kubota Y,et al.Burn-induced gastric mucosal hemodynamic disturbance in the rat. Scand J Gastroenterol,1992,27(2):89
, http://www.100md.com
5 Tokyay R, Loick H M, Traber D L,et al.Effects of thromboxane synthetase inhibition on postburn mesenteric vascular resistance and the rate of bacterial translocation in a chronic porcine model.S G O,1992,174(2):125
6 Haglund U, Rasmussen I. Oxygenation of the gut mucosa. Br J Surg,1993,80(8):955
7 Anderson B O, Bensard D O, Harken A H,et al.The role of platelet activating factor and its antagonists in shock,sepsis and multiple organ failure. S G O,1991,172(5):415
, 百拇医药
8 Torley LW, Pickett W C, Carroll M L,et al.Studies of the effect of a PAF antagonist,CL-184005, in animal models of gram-negative bacterial sepsis. Antimicrob Agents Chemother,1992,36(9):1971
9 Wallace J L, Hogaboam C M, Mcknight G W.PAF mediates gastric damage induce by hemorrhage shock. Am J Physiol,1990,259(1pt1):140
(收稿：1998-10-19；修回：1999-01-22), 百拇医药
单位：余佩武 第三军医大学附属西南医院普通外科 重庆，400038；肖光夏 秦孝健 周立新 第三军医大学附属西南医院烧伤研究所 重庆，400038
关键词：血小板活化因子；肠粘膜血流量；肠粘膜pHi；烧伤
提 要 目的
提 要 目的：进一步探讨血小板活化因子(PAF)在烧伤后肠粘膜屏障损害中的作用机制。方法：在大鼠30%Ⅲ度烫伤模型上，观察PAF拮抗剂WEB2170对烧伤后肠粘膜血流量、肠粘膜内pH(pHi)和肠组织含水量的影响。结果：烫伤后肠粘膜血流量和pHi较对照组显著降低，而肠组织含水量显著增多。应用PAF拮抗剂WEB2170治疗能有效改善烫伤后肠粘膜血流量，提高肠粘膜pHi，并有效降低肠组织含水量，从而明显减轻肠粘膜病理损害。结论：PAF是导致烧伤后肠粘膜微循环障碍的重要因素之一。
, http://www.100md.com
中图法分类号 R644
The effects of platelet activating factor antagonist on intestinal mucosal microcirculation after scalding in rats
Yu Peiwu, Xiao Guangxia, Qin Xiaojian, Zhou Lixin (Department of General Surgery, Southwest Hospital, Third Military Medical University,Chongqing,400038)
Abstract Objective: To investigate the effects and their mechanism of platelet activating factor (PAF) antagonist on the intestinal mucosal microcirculation after scalding in rats. Methods: The changes of intestinal mucosal blood flow, intestinal intramucosal pH (pHi) and intestinal water content were determined on rats suffering from 30% TBSA third degree scalding and treated with PAF antagonist WEB2170. Results: PAF antagonist treatment of the scalded rats could significantly increase intestinal mucosal blood flow and pHi, decrease intestinal water content and alleviate evidently the intestinal mucosal damages as compared with those of the control group. Conclusion: PAF is one of the important factors to result in postburn disturbance of intestinal mucosal microcirculation.
, 百拇医药
Key words platelet activating factor; intestinal mucosa; blood flow; intramucosal pH; burns; rat
This project was supported by the National Natural Science Foundation of China,No.39290700
我们已往研究表明，血小板活化因子(Platelet activating factior,PAF)是严重烧伤后肠粘膜屏障功能损害和肠源性感染发生的重要因素之一[1，2]，但其作用机制尚不清楚。本实验重点观察PAF拮抗剂对烧伤后肠粘膜微循环的影响，以进一步探讨PAF在烧伤后肠粘膜损害中的作用机制。
1 材料与方法
1.1 模型制作
, http://www.100md.com
实验用健康Wistar大鼠，雌雄不限，体重(220±30)g。动物麻醉后背部剃毛，于92℃水浴中18s造成30%TBSAⅢ度烫伤。伤后以40ml/kg等渗盐水腹腔注射抗休克，单笼饲养。
1.2 分组
动物随机分为3组：①正常对照组：不作特殊处理；②单纯烫伤组：烫伤后仅给抗休克治疗；③PAF拮抗剂治疗组：烫伤后立即腹腔注射PAF拮抗剂WEB2170(5mg/kg)，以后每8h重复一次，其余处理同单纯烫伤组。PAF拮抗剂WEB2170由联邦德国Boehringer Ingelheim公司Elich博士馈赠。分别于伤后6、12、24h和48h进行有关指标观察与测定。正常组、烫伤组以及治疗组各时相均为10只大鼠。
1.3 观察指标
1.3.1肠粘膜血流量测定 应用LDF-Ⅱ型微循环多普勒血流计(南开大学研制)直接测定回肠末段粘膜血流，单位用mV表示。
, 百拇医药
1.3.2 肠粘膜pHi测定[3] 动物麻醉后开腹，取回肠末段长约15cm，予以输入、输出部结扎。其内注入生理盐水3ml，留置30min后抽吸1ml，同时抽动脉血1ml，立即送血气分析，测出肠腔液内PCO2和动脉血HCO-3浓度。按Henderson-Hasselbalch公式计算pHi；pHi=6.1+log(HCO-3/PCO2×0.0307)。
1.3.3 肠组织含水量测定 取新鲜回肠长约3～5cm，去除肠内容物，称湿重后置140℃烤箱烤干4h，再称干重，肠组织含水量以(湿重-干重/湿重)×100%表示。
1.3.4 肠粘膜病理学检查 取末段回肠，常法固定、包埋、切片、HE染色、光镜下观察。
1.4 统计学分析
, 百拇医药
采用华西医科大学医用统计程序包在计算机上对实验数据进行统计学处理。
2 结果
2.1 肠粘膜血流量变化
烫伤后6h肠粘膜血流量即显著降低，为对照组的65%，12h达最低值，约为对照组的46%。此后稍升高，但仍较对照组显著降低。PAF拮抗剂治疗组各时相点肠粘膜血流量均较烫伤组显著升高，见表1。
表1 肠粘膜血流量变化(mV,x±s)
Tab 1 Changes of the intestinal mucosal blood flow (mV,x±s)
Postburn(h)
Group
, 百拇医药
6
12
24
48
Burn
30.60±3.08△△
21.85±2.94△△
31.85±2.72△△
58.56±3.11△
Treatment
40.22±2.86**△
, 百拇医药
37.1±2.90**△△
42.06±2.14**△
45.89±4.51*
Control:46.55±3.01；*:P<0.05，**：P<0.01 vs burn;△：P<0.05,△△：P<0.01 vs control
2.2 肠粘膜pHi变化 烫伤后6h肠粘膜pHi即较对照组非常显著降低(P<0.01)，12h和24h仍较对照组显著降低(P<0.05)，48h与对照组差别不显著(P>0.05)。PAF拮抗剂治疗组6、12和24h肠粘膜pHi均较烫伤组有不同程度显著升高，见表2。
表2 肠粘膜pHi变化(x±s)
, 百拇医药
Tab 2 Changes of the intestinal mucosal pHi (x±s)
Postburn(h)
Groups
6
12
24
48
Burn
7.217±0.085△△
7.316±0.067△△
7.347±0.016△
, 百拇医药
7.432±0.046
Treatment
7.326±0.087**△
7.406±0.113*
7.374±0.148*
7.435±0.055
Control:7.419±0.058；*:P<0.05，**：P<0.01 vs burn；△：P<0.05，△△：P<0.01 vs control
2.3 肠组织含水量变化 烫伤后6h肠组织含水量与对照组比较差别不显著，但伤后12h和24h较对照组显著增加(P<0.05)。48h与对照组比较差别不显著(P>0.05)。PAF拮抗剂治疗12h和24h肠组织含水量较烫伤组均显著降低(P<0.05)，见表3。
, 百拇医药
表3 肠组织含水量变化(%，x±s)
Tab 3 Changes of intestinal tissue water content (%,x±s)
Postburn(h)
Group
6
12
24
48
Burn
76.21±4.16
80.43±2.78△
, 百拇医药
79.89±2.60△
76.97±1.91
Treatment
75.83±2.67
76.65±2.14*
76.47±1.43*
76.14±1.56
Control:76.02±2.97；*:P<0.05 vs burn；△：P<0.05 vs control
2.4 肠粘膜组织学变化 光镜下见烫伤6h肠粘膜固有层水肿，中性粒细胞浸润，绒毛顶端上皮下出现囊状间隙，中央乳糜管扩张。伤后12h和24h，上述损伤更明显，出现上皮细胞变性、坏死、脱落、固有层裸露。48 h粘膜病损有所减轻。PAF拮抗剂治疗组肠粘膜仅见中央乳糜管轻度扩张，上皮细胞结构尚完整。
, 百拇医药
3 讨论
肠粘膜血流是维护肠上皮细胞结构和功能完整的重要因素。已有研究表明，严重烧伤早期即有胃肠粘膜血流量显著减少。如Binnaka等[4]实验发现大鼠30%体表烫伤后1h胃粘膜血流量降低至正常水平的45%，在此后5h的实验过程中仍处于相同较低水平。Tokyay等[5]在40%体表烫伤的猪模型中发现，伤后2h肠血流量显著降低至伤前25%，4h为伤前的30%，48h仍未恢复正常。本结果表明：伤后6h肠粘膜血流即显著降低至对照组的65%，12h仅为46%，24h和48h虽然有所改善，但仍显著低于对照组，分别为对照组的68%和82%。与文献报道相一致，再一次证明烧伤早期有肠粘膜供血不足。肠粘膜血流量减少势必引起肠上皮细胞内氧供量(DO2)减少，而氧耗量(VO2)明显增加，当超过上皮细胞的代偿能力时，细胞内即出现厌氧代谢、酸中毒、肠粘膜内pHi减低，从而导致肠上皮细胞损害[6]。本结果也表明，烫伤后6 h肠粘膜pHi即显著降低达最低值，伤后12 h和24 h仍显著低于对照组。提示烧伤早期肠上皮细胞内严重缺氧。
, 百拇医药
PAF是由磷脂酶A2作用于膜磷脂后生成的一种脂质介质。具有很强的血管活性作用。静脉注射PAF后可引起全身低血压，以及心、肺、脑和胃肠道等组织的血管强烈收缩，应用PAF拮抗剂能有效地阻滞这一作用。PAF还具有很强的致血管通透性升高的作用，比组织胺强1000倍[7]。有研究报道，应用PAF拮抗剂治疗能明显改善内毒素休克和失血性休克所致的胃肠粘膜缺血，减轻其病理损害[8，9]。本实验应用人工合成的PAF拮抗剂WEB2170治疗烫伤大鼠，结果显示能有效改善肠粘膜血流量，提高粘膜pHi，同时还能有效降低肠组织含水量，减轻肠粘膜病理损害，提示PAF是导致烧伤后肠粘膜微循环障碍的重要因素之一，而PAF拮抗剂具有一定的保护作用。
国家自然科学基金资助项目，No.39290700
作者简介：余佩武，男，37岁，副教授，副主任医师，博士
, http://www.100md.com 参考文献
1 余佩武，肖光夏，府伟灵，等.血小板活化因子在烧伤后肠粘膜屏障损害中的作用.中华外科杂志，1995，33(7)：393
2 余佩武，肖光夏，府伟灵，等.血小板活化因子在烧伤后肠源性感染发病机制中的作用.中华医院感染杂志，1996，6(2)：65
3 Wang X D, Wang Q, Anderson R,et al.Intramucosal pH and oxygen extraction in the gastrointestinal tract after major liver resection in rats. Eur J Surg,1993,159(5):81
4 Binnaka T, Yamaguchi T, Kubota Y,et al.Burn-induced gastric mucosal hemodynamic disturbance in the rat. Scand J Gastroenterol,1992,27(2):89
, http://www.100md.com
5 Tokyay R, Loick H M, Traber D L,et al.Effects of thromboxane synthetase inhibition on postburn mesenteric vascular resistance and the rate of bacterial translocation in a chronic porcine model.S G O,1992,174(2):125
6 Haglund U, Rasmussen I. Oxygenation of the gut mucosa. Br J Surg,1993,80(8):955
7 Anderson B O, Bensard D O, Harken A H,et al.The role of platelet activating factor and its antagonists in shock,sepsis and multiple organ failure. S G O,1991,172(5):415
, 百拇医药
8 Torley LW, Pickett W C, Carroll M L,et al.Studies of the effect of a PAF antagonist,CL-184005, in animal models of gram-negative bacterial sepsis. Antimicrob Agents Chemother,1992,36(9):1971
9 Wallace J L, Hogaboam C M, Mcknight G W.PAF mediates gastric damage induce by hemorrhage shock. Am J Physiol,1990,259(1pt1):140
(收稿：1998-10-19；修回：1999-01-22), 百拇医药