增殖细胞核抗原在子宫颈鳞癌组织中的表达
作者：靳双玲 张志胜 杨元华 贺国强 吴宜林
单位：湖南医科大学附属第二医院(长沙 410011)
关键词：宫颈肿瘤；癌；细胞周期蛋白类；免疫组织化学
湖南医学990506 摘要 目的 了解正常子宫颈鳞状上皮细胞及癌细胞的增殖活性，判断增殖细胞核抗原(PCNA)与宫颈鳞癌生物学行为及预后的关系。方法 应用免疫组化SP法，检测PCNA在52例宫颈鳞癌，5例宫颈非典型性增生及8例正常宫颈组织中PCNA的表达。结果 宫颈鳞癌PCNA强阳性表达率为44.29%，明显高于正常宫颈的0%，差异有显著性(P<0.05)。其免疫反应产物定位于细胞核。宫颈鳞癌中阳性细胞分布不均，癌巢周边及前缘浸润细胞阳性率高，癌巢中央表达极低；分化差的肿瘤，癌旁增生严重，周围淋巴细胞及淋巴滤泡生发中心均有阳性表达。非典型增生的宫颈组织中，阳性细胞分布有规律，大多在基底层，部分达棘细胞层。正常宫颈组织着色仅限于基底细胞。PCNA在宫颈鳞癌组织中的强阳性表达随病理分级的增高而明显提高，差异具有显著性(P<0.05)。宫颈鳞癌临床分期越晚，PCNA强阳性表达率越高，但未显示统计学差异(P>0.05)。结论 PCNA是反映子宫颈鳞癌生物学行为的重要指标之一。
, 百拇医药
Expression of Proliferative Cell Nuclear Antigen in Squamous Cell Carcinoma of Cervix
JIN Shuangling,ZHANG Zhisheng,YANG Yuanhua,et al
Dept.of Obstetrics and Gynecology,The Second Affiliated Hospital of Hunan Medical University,Changsha,410011
Abstract Objective To study the activity of proliferative cell nuclear antigen (PCNA) in normal cervical squamous cells and cervical carcinoma cells and to eveluate the relationship between PCNA expression and the biological behavior of cervical squamous cell cancer.Methods The expression of PCNA in 58 cases of cervical squamous cell carcinoma,5 atypical cervical dysplasia and 8 samples of normal cervix were studied by immunohistochemical techniques.Results Strong positive staining rate in cervical squamous cell carcinoma was 44.2%,significantly higher than that of the normal cervix(0%) (P<0.05).The immunoprecipitiation product of PCNA was located in nucleus, whereas distribution of positive cells in cervical squamous cell cancer was uneven.On the periphery of cancer nest and the frontier of invasive tumor,the positive staining rate was high.Serious hyperplasia in regions adjacent to cancers was shown by positive lymphocytes and lymphofollicles in poorly differentiated cancers.In atypical cervical dysplasia,positive cells were mainly distributed in basal layer and partly in prickle-cell layer;while in normal cervix they were limited in basal layer.Strong positive expression of PCNA increased with the aggravation of pathological stage in cancers(P<0.05).Strong positive expression rate of PCNA was higher in advanced cancer,but the differences were not statistically significant (P>0.05).Conclusion PCNA is one of the important criteria reflecting biological behavior of the cervical squamous carcinoma.
, 百拇医药
Key words cervix neoplasms;cancer;cyclins;immunohistochemistry
增殖细胞核抗原(PCNA)是一种仅在增殖细胞中合成和表达的36 kD多肽，其阳性表达说明该细胞处于增殖状态，与细胞增殖周期有密切关系。本实验应用免疫组化方法，检测PCNA在子宫颈鳞状细胞癌(简称宫颈鳞癌)，子宫颈非典型增生及正常宫颈组织中的表达，旨在了解正常宫颈的鳞状上皮细胞及癌细胞的增殖活性，判断PCNA与宫颈鳞癌生物学行为及预后的关系。
1 材料与方法
1.1 标本来源 收集湖南医科大学附属第二医院妇产科1988年1月至1997年9月手术切除标本及湖南省肿瘤医院1996年1月至8月放射治疗前标本57例，且经病理证实为宫颈鳞癌52例，宫颈非典型增生5例，取同期正常宫颈组织标本8例。标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚4 μm。肿瘤分级按WHO的分级方法，Ⅰ级6例，Ⅱ级32例，Ⅲ级14例；临床分期按1985年FIGO标准，Ⅰ期14例，Ⅱ期25例，Ⅲ期13例。
, 百拇医药
1.2 主要试剂 鼠抗人PCNA单克隆抗体(Pc10,1:30)为丹麦Dako公司产品，SP及AEC显色试剂盒为Zymed公司产品，购自福州迈新公司。
1.3 免疫组化方法 按试剂盒说明书进行，但A液阻断时间延长至15 min，血清孵育时间延长至20 min，胃蛋白酶消化30 min，可获得满意结果。实验中以肝癌阳性切片作为阳性对照，用PBS液代替一抗作为每次染色的阴性对照。
1.4 结果判断 由两位有经验的病理科教授采用双盲法对结果进行判定。细胞核内见红色颗粒判断为PCNA阳性细胞。据阳性细胞占癌细胞数的比率(每个视野200个细胞，高倍镜下数4～5个视野，取均值)，再结合着色程度综合判断：“+”即<25%，着色浅红色；++即26%～50%，呈桔红色；++++即51%～75%，鲜红色；++++即75%以上，鲜红至深红色。+++～++++判断为强阳性表达。
1.5 统计学处理 采用χ2检验。
, 百拇医药
2 结果
2.1 PCNA在不同类型宫颈组织中的表达 宫颈鳞癌、非典型增生及正常宫颈组织中PCNA的阳性表达及强阳性表达率分别为100%，44.29%；100%，40%；87.5%，0%。鳞癌与正常宫颈的强阳性表达差异有显著性(P<0.05)。PCNA阳性产物定位于细胞核，胞浆不着色。在宫颈鳞癌组织中，PCNA阳性细胞分布不均，癌巢周边及浸润前缘细胞密集，着色呈鲜红色，部分呈深红色，癌巢中央特别是有明显角化的细胞，表达极低。分化差的肿瘤，癌旁增生明显，周围淋巴细胞及淋巴滤泡生发中心均呈阳性表达。宫颈非典型增生组织中，阳性细胞的分布呈规律性，主要位于基底层细胞，部分达棘细胞层。正常宫颈组织中的阳性细胞仅限于基底层，呈零星分布，着色浅。
2.2 PCNA的表达与肿瘤病理分级 52例宫颈鳞癌标本全部阳性表达，但强阳性表达率随肿瘤病理级别的提高而显著增高，统计学处理，差异具有显著性(χ2＝20.36，P<0.05)。见附表。
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附表 PCNA阳性表达与肿瘤病理分级的关系(例数，%) 分级
n
+
++
+++
++++
Ⅰ
6
5(83.3)
1(16.7)
0(0)
0(0)
Ⅱ
, 百拇医药
32
12(37.5)
10(31.3)
8(25.0)
2(0.6)
Ⅲ
14
1(0.7)
0(0)
3(21.4)
10(71.4)
合计
52
, 百拇医药
18(34.5)
11(21.2)
11(21.2)
12(23.1)
2.3 PCNA的表达与肿瘤临床分期 Ⅰ期宫颈鳞癌的PCNA强阳性表达率21.4%(3/14)，Ⅱ期为40%(10/25)，Ⅲ期为76.9%(10/13)。临床分期越晚，PCNA的强阳性细胞率越高，但临床分期间则差异无显著性(P>0.05)。
3 讨论
PCNA是一种周期调节蛋白，其表达因细胞周期而异，在G1早期开始上升，S期达最高，是G1期的2～3倍，G2及M期呈持续下降，其合成与表达与细胞增殖周期有密切关系[1]。但也有研究表明，PCNA的阳性表达与增生活性无相关性[2]。宫颈鳞癌组织中PCNA的表达，文献少有报道。
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本组资料显示，PCNA在正常宫颈组织中阳性细胞数少，均在25%以下，着色浅，位于基底层，棘细胞层及角化层均无阳性细胞，说明宫颈鳞状上皮的基底层细胞具有增殖活性。宫颈非典型增生的组织中，阳性细胞主要分布在增生活跃带，部分达棘细胞层，说明PCNA表达出现在细胞分裂增殖期。宫颈鳞癌组织中，PCNA的阳性细胞分布有明显的异质性和特点，癌巢周边细胞和前缘浸润细胞，阳性细胞密集，着色鲜红，颗粒清楚，正常间质细胞不着色。分化差的肿瘤，癌周围间质中淋巴细胞及淋巴滤泡的生发中心PCNA均呈阳性反应，这充分说明PCNA的阳性表达出现在宫颈鳞癌细胞的分裂、繁殖期，与增殖程度密切相关。肿瘤内或周边自分泌和旁分泌作用产生的生长因子可能参与调节PCNA的表达[3]。
从正常子宫颈组织到宫颈非典型增生，子宫颈鳞状上皮癌，PCNA的强阳性表达率明显增高，与杨万才等[4]在食管癌中的报道结果一致，薛月珍等[5]的报道与本结果也很相似。提示PCNA强阳性表达可能为估计子宫颈癌前病变或癌变提供临床诊断依据。本组子宫颈非典型增生与子宫颈鳞癌中PCNA的强阳性表达率分别为40%，44.29%，差异不具有显著性，可能与标本中宫颈上皮内瘤形成(CIN)Ⅱ～Ⅲ级者较多有关，但CIN标本总数太少也可能有影响。随着肿瘤分化程度的降低，强阳性细胞表达率明显增高(P<0.05)，说明PCNA的强阳性表达与宫颈鳞癌的恶性程度密切相关，PCNA强阳性表达者，可能预后差。Thomas等[6]报道PCNA染色是卵巢癌的一种较好的预后因子，PCNA表达越强，预后越差；Aaltoma等也认为，PCNA免疫染色对乳腺癌预后的判断有独特的价值。本组结果，因随访时间不长，未能确证其与预后的密切关系。
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另外，PCNA的强阳性表达，随临床分期的提高而增强，但二者之间差异无显著性(P>0.05)，其有待进一步研究。
参考文献
1 Bdton WE,Mikulka WK,Healy CG,et al.Expression of proliferation associated antigen in the cell cycle of synchronized mammalian cells.Cytometry,1992,13:117
2 Jain S,Hall PA,Lane DP,et al.Application of PCNA immunostaining in gastric cancer(abstract).J Pathol,1990,161:351A
3 Browo R,Mac-Douald-Bravo H.Changes in the nuclear distribution of cyclin(PCNA) but not its synthesis depend on DNA replication.EMBOJ,1985,4:655
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4 杨万才，王立东，周 琦，等.食管癌前病变和癌组织中增殖细胞核抗原与细胞凋亡变化的关系.湖南医科大学学报，1997，32(1)：15～18
5 薛月珍，朱关珍.子宫颈上皮肉瘤变及子宫颈鳞癌中增殖细胞核抗原和Cmyc基因过度表达及其临床意义.现代妇产科进展，1997，6(3)：204～207
6 Thomas H,Nasim MM,Sarraf CE,et al.Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) immunostaining:a prognostic factor in ovarian cancer?Br J Cancer,1995,71,357～362
(19981109 收稿), 百拇医药
单位：湖南医科大学附属第二医院(长沙 410011)
关键词：宫颈肿瘤；癌；细胞周期蛋白类；免疫组织化学
湖南医学990506 摘要 目的 了解正常子宫颈鳞状上皮细胞及癌细胞的增殖活性，判断增殖细胞核抗原(PCNA)与宫颈鳞癌生物学行为及预后的关系。方法 应用免疫组化SP法，检测PCNA在52例宫颈鳞癌，5例宫颈非典型性增生及8例正常宫颈组织中PCNA的表达。结果 宫颈鳞癌PCNA强阳性表达率为44.29%，明显高于正常宫颈的0%，差异有显著性(P<0.05)。其免疫反应产物定位于细胞核。宫颈鳞癌中阳性细胞分布不均，癌巢周边及前缘浸润细胞阳性率高，癌巢中央表达极低；分化差的肿瘤，癌旁增生严重，周围淋巴细胞及淋巴滤泡生发中心均有阳性表达。非典型增生的宫颈组织中，阳性细胞分布有规律，大多在基底层，部分达棘细胞层。正常宫颈组织着色仅限于基底细胞。PCNA在宫颈鳞癌组织中的强阳性表达随病理分级的增高而明显提高，差异具有显著性(P<0.05)。宫颈鳞癌临床分期越晚，PCNA强阳性表达率越高，但未显示统计学差异(P>0.05)。结论 PCNA是反映子宫颈鳞癌生物学行为的重要指标之一。
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Expression of Proliferative Cell Nuclear Antigen in Squamous Cell Carcinoma of Cervix
JIN Shuangling,ZHANG Zhisheng,YANG Yuanhua,et al
Dept.of Obstetrics and Gynecology,The Second Affiliated Hospital of Hunan Medical University,Changsha,410011
Abstract Objective To study the activity of proliferative cell nuclear antigen (PCNA) in normal cervical squamous cells and cervical carcinoma cells and to eveluate the relationship between PCNA expression and the biological behavior of cervical squamous cell cancer.Methods The expression of PCNA in 58 cases of cervical squamous cell carcinoma,5 atypical cervical dysplasia and 8 samples of normal cervix were studied by immunohistochemical techniques.Results Strong positive staining rate in cervical squamous cell carcinoma was 44.2%,significantly higher than that of the normal cervix(0%) (P<0.05).The immunoprecipitiation product of PCNA was located in nucleus, whereas distribution of positive cells in cervical squamous cell cancer was uneven.On the periphery of cancer nest and the frontier of invasive tumor,the positive staining rate was high.Serious hyperplasia in regions adjacent to cancers was shown by positive lymphocytes and lymphofollicles in poorly differentiated cancers.In atypical cervical dysplasia,positive cells were mainly distributed in basal layer and partly in prickle-cell layer;while in normal cervix they were limited in basal layer.Strong positive expression of PCNA increased with the aggravation of pathological stage in cancers(P<0.05).Strong positive expression rate of PCNA was higher in advanced cancer,but the differences were not statistically significant (P>0.05).Conclusion PCNA is one of the important criteria reflecting biological behavior of the cervical squamous carcinoma.
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Key words cervix neoplasms;cancer;cyclins;immunohistochemistry
增殖细胞核抗原(PCNA)是一种仅在增殖细胞中合成和表达的36 kD多肽，其阳性表达说明该细胞处于增殖状态，与细胞增殖周期有密切关系。本实验应用免疫组化方法，检测PCNA在子宫颈鳞状细胞癌(简称宫颈鳞癌)，子宫颈非典型增生及正常宫颈组织中的表达，旨在了解正常宫颈的鳞状上皮细胞及癌细胞的增殖活性，判断PCNA与宫颈鳞癌生物学行为及预后的关系。
1 材料与方法
1.1 标本来源 收集湖南医科大学附属第二医院妇产科1988年1月至1997年9月手术切除标本及湖南省肿瘤医院1996年1月至8月放射治疗前标本57例，且经病理证实为宫颈鳞癌52例，宫颈非典型增生5例，取同期正常宫颈组织标本8例。标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚4 μm。肿瘤分级按WHO的分级方法，Ⅰ级6例，Ⅱ级32例，Ⅲ级14例；临床分期按1985年FIGO标准，Ⅰ期14例，Ⅱ期25例，Ⅲ期13例。
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1.2 主要试剂 鼠抗人PCNA单克隆抗体(Pc10,1:30)为丹麦Dako公司产品，SP及AEC显色试剂盒为Zymed公司产品，购自福州迈新公司。
1.3 免疫组化方法 按试剂盒说明书进行，但A液阻断时间延长至15 min，血清孵育时间延长至20 min，胃蛋白酶消化30 min，可获得满意结果。实验中以肝癌阳性切片作为阳性对照，用PBS液代替一抗作为每次染色的阴性对照。
1.4 结果判断 由两位有经验的病理科教授采用双盲法对结果进行判定。细胞核内见红色颗粒判断为PCNA阳性细胞。据阳性细胞占癌细胞数的比率(每个视野200个细胞，高倍镜下数4～5个视野，取均值)，再结合着色程度综合判断：“+”即<25%，着色浅红色；++即26%～50%，呈桔红色；++++即51%～75%，鲜红色；++++即75%以上，鲜红至深红色。+++～++++判断为强阳性表达。
1.5 统计学处理 采用χ2检验。
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2 结果
2.1 PCNA在不同类型宫颈组织中的表达 宫颈鳞癌、非典型增生及正常宫颈组织中PCNA的阳性表达及强阳性表达率分别为100%，44.29%；100%，40%；87.5%，0%。鳞癌与正常宫颈的强阳性表达差异有显著性(P<0.05)。PCNA阳性产物定位于细胞核，胞浆不着色。在宫颈鳞癌组织中，PCNA阳性细胞分布不均，癌巢周边及浸润前缘细胞密集，着色呈鲜红色，部分呈深红色，癌巢中央特别是有明显角化的细胞，表达极低。分化差的肿瘤，癌旁增生明显，周围淋巴细胞及淋巴滤泡生发中心均呈阳性表达。宫颈非典型增生组织中，阳性细胞的分布呈规律性，主要位于基底层细胞，部分达棘细胞层。正常宫颈组织中的阳性细胞仅限于基底层，呈零星分布，着色浅。
2.2 PCNA的表达与肿瘤病理分级 52例宫颈鳞癌标本全部阳性表达，但强阳性表达率随肿瘤病理级别的提高而显著增高，统计学处理，差异具有显著性(χ2＝20.36，P<0.05)。见附表。
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附表 PCNA阳性表达与肿瘤病理分级的关系(例数，%) 分级
n
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Ⅰ
6
5(83.3)
1(16.7)
0(0)
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Ⅱ
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32
12(37.5)
10(31.3)
8(25.0)
2(0.6)
Ⅲ
14
1(0.7)
0(0)
3(21.4)
10(71.4)
合计
52
, 百拇医药
18(34.5)
11(21.2)
11(21.2)
12(23.1)
2.3 PCNA的表达与肿瘤临床分期 Ⅰ期宫颈鳞癌的PCNA强阳性表达率21.4%(3/14)，Ⅱ期为40%(10/25)，Ⅲ期为76.9%(10/13)。临床分期越晚，PCNA的强阳性细胞率越高，但临床分期间则差异无显著性(P>0.05)。
3 讨论
PCNA是一种周期调节蛋白，其表达因细胞周期而异，在G1早期开始上升，S期达最高，是G1期的2～3倍，G2及M期呈持续下降，其合成与表达与细胞增殖周期有密切关系[1]。但也有研究表明，PCNA的阳性表达与增生活性无相关性[2]。宫颈鳞癌组织中PCNA的表达，文献少有报道。
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本组资料显示，PCNA在正常宫颈组织中阳性细胞数少，均在25%以下，着色浅，位于基底层，棘细胞层及角化层均无阳性细胞，说明宫颈鳞状上皮的基底层细胞具有增殖活性。宫颈非典型增生的组织中，阳性细胞主要分布在增生活跃带，部分达棘细胞层，说明PCNA表达出现在细胞分裂增殖期。宫颈鳞癌组织中，PCNA的阳性细胞分布有明显的异质性和特点，癌巢周边细胞和前缘浸润细胞，阳性细胞密集，着色鲜红，颗粒清楚，正常间质细胞不着色。分化差的肿瘤，癌周围间质中淋巴细胞及淋巴滤泡的生发中心PCNA均呈阳性反应，这充分说明PCNA的阳性表达出现在宫颈鳞癌细胞的分裂、繁殖期，与增殖程度密切相关。肿瘤内或周边自分泌和旁分泌作用产生的生长因子可能参与调节PCNA的表达[3]。
从正常子宫颈组织到宫颈非典型增生，子宫颈鳞状上皮癌，PCNA的强阳性表达率明显增高，与杨万才等[4]在食管癌中的报道结果一致，薛月珍等[5]的报道与本结果也很相似。提示PCNA强阳性表达可能为估计子宫颈癌前病变或癌变提供临床诊断依据。本组子宫颈非典型增生与子宫颈鳞癌中PCNA的强阳性表达率分别为40%，44.29%，差异不具有显著性，可能与标本中宫颈上皮内瘤形成(CIN)Ⅱ～Ⅲ级者较多有关，但CIN标本总数太少也可能有影响。随着肿瘤分化程度的降低，强阳性细胞表达率明显增高(P<0.05)，说明PCNA的强阳性表达与宫颈鳞癌的恶性程度密切相关，PCNA强阳性表达者，可能预后差。Thomas等[6]报道PCNA染色是卵巢癌的一种较好的预后因子，PCNA表达越强，预后越差；Aaltoma等也认为，PCNA免疫染色对乳腺癌预后的判断有独特的价值。本组结果，因随访时间不长，未能确证其与预后的密切关系。
, http://www.100md.com
另外，PCNA的强阳性表达，随临床分期的提高而增强，但二者之间差异无显著性(P>0.05)，其有待进一步研究。
参考文献
1 Bdton WE,Mikulka WK,Healy CG,et al.Expression of proliferation associated antigen in the cell cycle of synchronized mammalian cells.Cytometry,1992,13:117
2 Jain S,Hall PA,Lane DP,et al.Application of PCNA immunostaining in gastric cancer(abstract).J Pathol,1990,161:351A
3 Browo R,Mac-Douald-Bravo H.Changes in the nuclear distribution of cyclin(PCNA) but not its synthesis depend on DNA replication.EMBOJ,1985,4:655
, http://www.100md.com
4 杨万才，王立东，周 琦，等.食管癌前病变和癌组织中增殖细胞核抗原与细胞凋亡变化的关系.湖南医科大学学报，1997，32(1)：15～18
5 薛月珍，朱关珍.子宫颈上皮肉瘤变及子宫颈鳞癌中增殖细胞核抗原和Cmyc基因过度表达及其临床意义.现代妇产科进展，1997，6(3)：204～207
6 Thomas H,Nasim MM,Sarraf CE,et al.Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) immunostaining:a prognostic factor in ovarian cancer?Br J Cancer,1995,71,357～362
(19981109 收稿), 百拇医药