涎腺腺样囊性癌嗜神经性的相关临床病理学研究
作者：孙长伏 李瑞武 钟鸣 王兆元 王玉新
单位：钟鸣 王兆元 口腔医学院病理科；孙长伏 李瑞武 王玉新 中国医科大学第一临床学院口腔颌面外科，沈阳 110001
关键词：涎腺腺样囊性癌；嗜神经性；病理学
中国医科990528 摘要 目的：探讨涎腺腺样囊性癌嗜神经性的相关临床病理因素。方法：对50例涎腺腺样囊性癌进行组织分型，嗜神经性观察，同时应用免疫组织化学方法对S-100、神经特异性烯醇酶及神经细胞粘附分子的表达与该肿瘤嗜神经性关系进行研究。结果：涎腺腺样囊性癌嗜神经性与组织分型，S-100蛋白，神经特异性烯醇酶的表达及二者的共同表达无明显关系(P>0.05)，而与神经细胞粘附分子的表达密切相关(P<0.05)。结论：涎腺腺样囊性癌嗜神经性与神经细胞粘附分子的表达密切相关，该肿瘤细胞分泌了神经细胞粘附分子，因而获得了神经亲和性，进而侵袭神经。
, http://www.100md.com
Study of Clinical Pathology on Neurotropism of Salivary Adenoid Cystic Carcinoma
Sun Changfu, Li Ruiwu,Zhong Ming,et al
Department of Oral and Maxillofacial Surgery,The First Clinical College,China Medical University,Shenyang 110001
ABSTRACT Objective:We studied the relative factors of clinical pathology about neurotropism of salivary adenoid cystic carcinoma(SACC).Methods:(1)50 cases of ASCC were classified,and neurotropism of SACC was observed.(2)The relationship between neurotropism of SACC and Expressions of S-100,neuron specific enolase(NSE) and neural cell adhesion molecule(NCAM) were studied with immunohistochemical method.Results:The relation between neurotropism of SACC and tissue typing was not be found (P>0.05).There were not significant relationship between neruotropism of SACC and expressions of S-100 and NSE(P>0.05),while there was close relationship between neruotropism of SACC and expression of NCAM(P<0.05).Conclusion:There is a close relationship between neurotropism of SACC and expression of NCAM.The tumor cells secrete NCAM,which acquires neurotropism and further invade nerves,this may be one of mechanism of molecular biology about neurotropism of SACC.
, 百拇医药
KEY WORDS salivary adenoid cystic carcinoma; neurotropism; pathology
涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)是口腔颌面部最具特征性的恶性肿瘤[1]，其重要的生物学行为之一是极易沿神经生长并侵袭神经，临床上常表现为疼痛、麻木、面瘫等症状。尽管肿瘤生长缓慢，但局部侵袭性很强，加之沿神经生长扩散并侵袭神经，其肿瘤实际范围常较肉眼所见范围大[2]。这也正是临床上常常易出现术后再发的原因之一。有关该肿瘤嗜神经性机理研究的报告较少。本研究的目的旨在探讨该肿瘤嗜神经性的相关病理因素。
1 材料与方法
1.1 临床资料及标本来源
全部病例为1985～1996年中国医科大学口腔医学院及第一临床学院收治的SACC患者50例，其中来源于小涎腺的34例(68%)，大涎腺16例(32%)；男性19例，女性31例，男女之比为1∶1.6；年龄19～68岁，平均43.5岁。所有组织均为手术切除标本并经病理证实。
, http://www.100md.com
所有标本经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片5 μm，备HE和免疫组织化学染色用。根据WHO(1991)新分类标准进行组织分型，同时在HE下判定嗜神经性的有无，即发现神经受侵袭及癌细胞包绕神经判定为阳性(如图1)。
1.2 试剂及免疫组织化学染色
采用福州迈新生物技术公司及北京中山生物技术公司提供的美国Maxim Biotech公司及Santa Cruz公司生产的SP试剂盒。S-100的工作浓度为1∶100；神经特异性烯醇酶(neuron-specific enolase,NSE)的工作浓度为1∶50；神经细胞粘附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)的工作浓度为1∶50；SP试剂盒的工作浓度为1∶150；DAB试剂工作浓度为0.05%。采用链菌素亲生物素—过氧化物酶免疫组织化学染色法(SP法)。
1.3 结果判定
, 百拇医药
染色阳性均呈棕黄色。将表达情况分为四级，(-)：细胞染色数为0%；(+)：0%<细胞染色数<33%；(
)：33%<细胞染色数<66%；(
)：细胞染色数>66%。
阳性对照：用已知阳性片(小细胞肺癌及直肠癌)；阴性对照：用0.01 mol/L PBS代替Ⅰ抗，其余步骤不变。
2 结果
2.1 SACC的嗜神经性与组织分型无明显关系(P>0.05，见表1)。
表1 SACC的嗜神经性与组织分型 组织分型
, http://www.100md.com
嗜神经性
合计
p=n+/n
p.n+
(+)
(-)
腺样型
6
17
23
0.2609
1.5654
管状型
, http://www.100md.com
8
15
23
0.3478
2.7824
实体型
1
3
4
0.2500
0.2500
合 计
15
, 百拇医药
35
50
0.3000
4.5978
χ2=0.4657；P>0.05
2.2 SACC的嗜神经性与S-100的表达无明显关系(P>0.05，见表2)。S-100蛋白阳性表达位于细胞核及胞浆内，同时神经纤维染色阳性(见图2)。50例中(+)，()，()分别为5，7，30例，阳性率为84%。
, 百拇医药
表2 SACC的嗜神经性与S-100的表达 S-100
嗜神经性
合计
(+)
(-)
(+)
12
30
42
(-)
3
5
8
, 百拇医药
合计
15
35
50
χ2=0.007；P>0.05
2.3 SACC的嗜神经性与NSE的表达无明显关系(P>0.05，见表3)。NSE阳性表达位于胞浆(见图3)。50例中(+)，()，()分别为4，7，21例，阳性率为64%。
表3 SACC的嗜神经性与NSE的表达 NSE
, 百拇医药
嗜神经性
合计
(+)
(-)
(+)
11
21
32
(-)
4
14
18
合计
15
, 百拇医药
35
50
χ2=0.335；P>0.05
2.4 SACC嗜神经性与S-100、NSE共同表达无明显关系(P>0.05，见表4)。
2.5 SACC的嗜神经性与NCAM的表达有密切关系(P<0.05，见表5)。NCAM的阳性表达位于胞
图1 HE染色下观察到SACC细胞包绕神经，即嗜神经现象 ×100
图2 SACC细胞S-100蛋白表达阳性，同时神经纤维染色阳性 ×100
图3 SACC细胞NSE表达阳性 ×100
, 百拇医药
图4 神经周围SACC细胞NCAM表达阳性 ×100
表4 SACC嗜神经性与S-100、NSE的共同表达 S-100+NSE
嗜神经性
合计
(+)
(-)
(+)
9
15
24
(-)
6
, 百拇医药
20
26
合计
15
35
50
χ2=0.645；P>0.05
浆及胞膜上(见图4)。50例中(+)、()分别为10例及11例，在有嗜神经现象的15例中，(+)、()分别为4，7例。
表5 SACC的嗜神经性与NCAM的表达 NCAM
, 百拇医药
嗜神经性
合计
(+)
(-)
(+)
11
10
21
(-)
4
25
29
合计
15
, 百拇医药
35
50
χ2=6.892；P<0.05
3 讨论
SACC的嗜神经性是该肿瘤的重要生物学行为特征，因此颇受人们的关注。有关该肿瘤侵袭神经的出现率报告不尽相同[3，4]。本组病例中嗜神经性的阳性率为30%(15/50)，可见该肿瘤的这种生物学行为的明显性。已有学者对组织分型与神经侵袭性的关系进行了探讨，但由于分型标准不同，报告的结果也不尽一致。我们采用了UICC(1991)新分类标准进行病理组织学分型后发现尽管管状型嗜神经现象出现的百分比较大，但无统计学意义(P>0.05)。
S-100蛋白是一种钙结合酸性蛋白质(acidic calcium binding protein)，有学者认为S-100可做为判断预后的指标[5]。本实验中发现：S-100蛋白在该肿瘤有高水平的表达，但与该肿瘤的嗜神经性无明显的关系，与Adam[6]等人的结果一致。值得一提的是，神经纤维对S-100蛋白抗体极为敏感，非常细小的神经均能良好显示，在研究肿瘤侵袭神经方面，具有良好效果。
, 百拇医药
NSE是一种与糖代谢有关的烯醇化酶，目前认为它可做为区别内分泌及非内分泌肿瘤的重要标记物[7]，但NSE与肿瘤生物学行为的报告较少，本实验中发现NSE与SACC的嗜神经性无明显关系。然而有文献报告S-100蛋白与NSE的共同表达仅出现在雪旺氏细胞、胶质细胞及骨骼肌细胞(骨髂肌细胞弱染色)[6]，同时Adam[6]的实验证实S-100蛋白与NSE在SACC可出现共同表达。这表明由于涎腺腺样囊性癌细胞组成的多样性，其中肌上皮细胞具有上皮细胞和平滑肌细胞双重特性，这种肌上皮细胞可能出现类似神经鞘中雪旺氏细胞样分化，进而表现雪旺氏细胞的特性来包绕神经直至侵袭神经，这可做为解释该肿瘤嗜神经性的原因。本实验中虽然发现在SACC中S-100蛋白与NSE的共同表达，但与嗜神经性并未见直接关系(P>0.05)，我们推测这种分化可能与该肿瘤嗜神经性存在间接的关系，这有待于进一步证实。
NCAM是Edelman[8]首次提取的多肽，它参与神经细胞间及神经与肌肉间突触形成，使细胞之间产生分子结合，促使细胞凝集。已有报道NCAM可在神经细胞、神经组织来源的肿瘤中表达，也可在横纹肌肉瘤中表达[9]。目前尚未见有在涎腺肿瘤中表达的报道。剑持雅一[10]首次报道了直肠癌的神经侵袭性与NCAM有密切的关系。本实验中发现在出现嗜神经现象的15例中有11例NCAM阳性表达，有显著意义(P<0.05)。我们认为，SACC细胞存在NCAM，癌细胞之间通过NCAM结合，同时识别神经并侵袭神经，这可能是该肿瘤嗜神经性的分子生物学基础之一。
, 百拇医药
卫生部科研基金资助项目，96-1-219
参考文献
1 俞光岩.涎腺疾病.北京：人民卫生出版社，1992.153
2 马大权，俞光岩.涎腺腺样囊性癌诊断和治疗的探讨.中华口腔医学杂志，1987，22：319—322
3 Ellis GL,Auclair PL,Gnepp DR.Surgery pathology of the salivary gland.Philadelphia:WB Saunders,1991:348
4 周志瑜，何志秀，杨名仲.涎腺腺样囊性癌的临床病理分型及其与临床的关系.华西口腔医学杂志，1985，3(1)：19—22
5 邢晓皖.头颈部腺样囊性癌101例临床病理及免疫组织化学分析.口腔医学，1993，13(3)：155—156
, 百拇医药
6 Adam AT,Thomas DD,Howard BL,et al. Schwann cell differentiation of modified myoepithelial cell within adenoid cystic carcinoma and polymorphous low grade adenocarcinomas:clinicopathologic assessment of immunohistochemical staining. J Otolaryngology,1996,25(2):94-102
7 Gnepp DR,Wick MR.Small cell carcinoma of the minor salivary gland. Cancer,1990,66(1):185-192
8 Edelman GM.Cell adhesion molecule. Science,1983,219:450-457
9 Phimister E,Kiely F,Kemshead JT,et al. Expression of neural cell adhesion molecule(NCAM) isoforms in neuroblastoma. J Clin Pathol,1991,44:580-585
10 剑持雅一，合地明，丸尾幸喜，他.直肠癌における NCAMの发现と神经浸润および转移形成について抗NACM抗体による检索.日外会，1994，95：66—70
1999-05-11收稿, 百拇医药
单位：钟鸣 王兆元 口腔医学院病理科；孙长伏 李瑞武 王玉新 中国医科大学第一临床学院口腔颌面外科，沈阳 110001
关键词：涎腺腺样囊性癌；嗜神经性；病理学
中国医科990528 摘要 目的：探讨涎腺腺样囊性癌嗜神经性的相关临床病理因素。方法：对50例涎腺腺样囊性癌进行组织分型，嗜神经性观察，同时应用免疫组织化学方法对S-100、神经特异性烯醇酶及神经细胞粘附分子的表达与该肿瘤嗜神经性关系进行研究。结果：涎腺腺样囊性癌嗜神经性与组织分型，S-100蛋白，神经特异性烯醇酶的表达及二者的共同表达无明显关系(P>0.05)，而与神经细胞粘附分子的表达密切相关(P<0.05)。结论：涎腺腺样囊性癌嗜神经性与神经细胞粘附分子的表达密切相关，该肿瘤细胞分泌了神经细胞粘附分子，因而获得了神经亲和性，进而侵袭神经。
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Study of Clinical Pathology on Neurotropism of Salivary Adenoid Cystic Carcinoma
Sun Changfu, Li Ruiwu,Zhong Ming,et al
Department of Oral and Maxillofacial Surgery,The First Clinical College,China Medical University,Shenyang 110001
ABSTRACT Objective:We studied the relative factors of clinical pathology about neurotropism of salivary adenoid cystic carcinoma(SACC).Methods:(1)50 cases of ASCC were classified,and neurotropism of SACC was observed.(2)The relationship between neurotropism of SACC and Expressions of S-100,neuron specific enolase(NSE) and neural cell adhesion molecule(NCAM) were studied with immunohistochemical method.Results:The relation between neurotropism of SACC and tissue typing was not be found (P>0.05).There were not significant relationship between neruotropism of SACC and expressions of S-100 and NSE(P>0.05),while there was close relationship between neruotropism of SACC and expression of NCAM(P<0.05).Conclusion:There is a close relationship between neurotropism of SACC and expression of NCAM.The tumor cells secrete NCAM,which acquires neurotropism and further invade nerves,this may be one of mechanism of molecular biology about neurotropism of SACC.
, 百拇医药
KEY WORDS salivary adenoid cystic carcinoma; neurotropism; pathology
涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)是口腔颌面部最具特征性的恶性肿瘤[1]，其重要的生物学行为之一是极易沿神经生长并侵袭神经，临床上常表现为疼痛、麻木、面瘫等症状。尽管肿瘤生长缓慢，但局部侵袭性很强，加之沿神经生长扩散并侵袭神经，其肿瘤实际范围常较肉眼所见范围大[2]。这也正是临床上常常易出现术后再发的原因之一。有关该肿瘤嗜神经性机理研究的报告较少。本研究的目的旨在探讨该肿瘤嗜神经性的相关病理因素。
1 材料与方法
1.1 临床资料及标本来源
全部病例为1985～1996年中国医科大学口腔医学院及第一临床学院收治的SACC患者50例，其中来源于小涎腺的34例(68%)，大涎腺16例(32%)；男性19例，女性31例，男女之比为1∶1.6；年龄19～68岁，平均43.5岁。所有组织均为手术切除标本并经病理证实。
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所有标本经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片5 μm，备HE和免疫组织化学染色用。根据WHO(1991)新分类标准进行组织分型，同时在HE下判定嗜神经性的有无，即发现神经受侵袭及癌细胞包绕神经判定为阳性(如图1)。
1.2 试剂及免疫组织化学染色
采用福州迈新生物技术公司及北京中山生物技术公司提供的美国Maxim Biotech公司及Santa Cruz公司生产的SP试剂盒。S-100的工作浓度为1∶100；神经特异性烯醇酶(neuron-specific enolase,NSE)的工作浓度为1∶50；神经细胞粘附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)的工作浓度为1∶50；SP试剂盒的工作浓度为1∶150；DAB试剂工作浓度为0.05%。采用链菌素亲生物素—过氧化物酶免疫组织化学染色法(SP法)。
1.3 结果判定
, 百拇医药
染色阳性均呈棕黄色。将表达情况分为四级，(-)：细胞染色数为0%；(+)：0%<细胞染色数<33%；(
)：33%<细胞染色数<66%；()：细胞染色数>66%。阳性对照：用已知阳性片(小细胞肺癌及直肠癌)；阴性对照：用0.01 mol/L PBS代替Ⅰ抗，其余步骤不变。
2 结果
2.1 SACC的嗜神经性与组织分型无明显关系(P>0.05，见表1)。
表1 SACC的嗜神经性与组织分型 组织分型
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嗜神经性
合计
p=n+/n
p.n+
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腺样型
6
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0.2609
1.5654
管状型
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8
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23
0.3478
2.7824
实体型
1
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0.2500
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合 计
15
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35
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0.3000
4.5978
χ2=0.4657；P>0.05
2.2 SACC的嗜神经性与S-100的表达无明显关系(P>0.05，见表2)。S-100蛋白阳性表达位于细胞核及胞浆内，同时神经纤维染色阳性(见图2)。50例中(+)，(
)，()分别为5，7，30例，阳性率为84%。, 百拇医药
表2 SACC的嗜神经性与S-100的表达 S-100
嗜神经性
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χ2=0.007；P>0.05
2.3 SACC的嗜神经性与NSE的表达无明显关系(P>0.05，见表3)。NSE阳性表达位于胞浆(见图3)。50例中(+)，(
)，()分别为4，7，21例，阳性率为64%。表3 SACC的嗜神经性与NSE的表达 NSE
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嗜神经性
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χ2=0.335；P>0.05
2.4 SACC嗜神经性与S-100、NSE共同表达无明显关系(P>0.05，见表4)。
2.5 SACC的嗜神经性与NCAM的表达有密切关系(P<0.05，见表5)。NCAM的阳性表达位于胞
图1 HE染色下观察到SACC细胞包绕神经，即嗜神经现象 ×100
图2 SACC细胞S-100蛋白表达阳性，同时神经纤维染色阳性 ×100
图3 SACC细胞NSE表达阳性 ×100
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图4 神经周围SACC细胞NCAM表达阳性 ×100
表4 SACC嗜神经性与S-100、NSE的共同表达 S-100+NSE
嗜神经性
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χ2=0.645；P>0.05
浆及胞膜上(见图4)。50例中(+)、(
)分别为10例及11例，在有嗜神经现象的15例中，(+)、()分别为4，7例。表5 SACC的嗜神经性与NCAM的表达 NCAM
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嗜神经性
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3 讨论
SACC的嗜神经性是该肿瘤的重要生物学行为特征，因此颇受人们的关注。有关该肿瘤侵袭神经的出现率报告不尽相同[3，4]。本组病例中嗜神经性的阳性率为30%(15/50)，可见该肿瘤的这种生物学行为的明显性。已有学者对组织分型与神经侵袭性的关系进行了探讨，但由于分型标准不同，报告的结果也不尽一致。我们采用了UICC(1991)新分类标准进行病理组织学分型后发现尽管管状型嗜神经现象出现的百分比较大，但无统计学意义(P>0.05)。
S-100蛋白是一种钙结合酸性蛋白质(acidic calcium binding protein)，有学者认为S-100可做为判断预后的指标[5]。本实验中发现：S-100蛋白在该肿瘤有高水平的表达，但与该肿瘤的嗜神经性无明显的关系，与Adam[6]等人的结果一致。值得一提的是，神经纤维对S-100蛋白抗体极为敏感，非常细小的神经均能良好显示，在研究肿瘤侵袭神经方面，具有良好效果。
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NSE是一种与糖代谢有关的烯醇化酶，目前认为它可做为区别内分泌及非内分泌肿瘤的重要标记物[7]，但NSE与肿瘤生物学行为的报告较少，本实验中发现NSE与SACC的嗜神经性无明显关系。然而有文献报告S-100蛋白与NSE的共同表达仅出现在雪旺氏细胞、胶质细胞及骨骼肌细胞(骨髂肌细胞弱染色)[6]，同时Adam[6]的实验证实S-100蛋白与NSE在SACC可出现共同表达。这表明由于涎腺腺样囊性癌细胞组成的多样性，其中肌上皮细胞具有上皮细胞和平滑肌细胞双重特性，这种肌上皮细胞可能出现类似神经鞘中雪旺氏细胞样分化，进而表现雪旺氏细胞的特性来包绕神经直至侵袭神经，这可做为解释该肿瘤嗜神经性的原因。本实验中虽然发现在SACC中S-100蛋白与NSE的共同表达，但与嗜神经性并未见直接关系(P>0.05)，我们推测这种分化可能与该肿瘤嗜神经性存在间接的关系，这有待于进一步证实。
NCAM是Edelman[8]首次提取的多肽，它参与神经细胞间及神经与肌肉间突触形成，使细胞之间产生分子结合，促使细胞凝集。已有报道NCAM可在神经细胞、神经组织来源的肿瘤中表达，也可在横纹肌肉瘤中表达[9]。目前尚未见有在涎腺肿瘤中表达的报道。剑持雅一[10]首次报道了直肠癌的神经侵袭性与NCAM有密切的关系。本实验中发现在出现嗜神经现象的15例中有11例NCAM阳性表达，有显著意义(P<0.05)。我们认为，SACC细胞存在NCAM，癌细胞之间通过NCAM结合，同时识别神经并侵袭神经，这可能是该肿瘤嗜神经性的分子生物学基础之一。
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卫生部科研基金资助项目，96-1-219
参考文献
1 俞光岩.涎腺疾病.北京：人民卫生出版社，1992.153
2 马大权，俞光岩.涎腺腺样囊性癌诊断和治疗的探讨.中华口腔医学杂志，1987，22：319—322
3 Ellis GL,Auclair PL,Gnepp DR.Surgery pathology of the salivary gland.Philadelphia:WB Saunders,1991:348
4 周志瑜，何志秀，杨名仲.涎腺腺样囊性癌的临床病理分型及其与临床的关系.华西口腔医学杂志，1985，3(1)：19—22
5 邢晓皖.头颈部腺样囊性癌101例临床病理及免疫组织化学分析.口腔医学，1993，13(3)：155—156
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6 Adam AT,Thomas DD,Howard BL,et al. Schwann cell differentiation of modified myoepithelial cell within adenoid cystic carcinoma and polymorphous low grade adenocarcinomas:clinicopathologic assessment of immunohistochemical staining. J Otolaryngology,1996,25(2):94-102
7 Gnepp DR,Wick MR.Small cell carcinoma of the minor salivary gland. Cancer,1990,66(1):185-192
8 Edelman GM.Cell adhesion molecule. Science,1983,219:450-457
9 Phimister E,Kiely F,Kemshead JT,et al. Expression of neural cell adhesion molecule(NCAM) isoforms in neuroblastoma. J Clin Pathol,1991,44:580-585
10 剑持雅一，合地明，丸尾幸喜，他.直肠癌における NCAMの发现と神经浸润および转移形成について抗NACM抗体による检索.日外会，1994，95：66—70
1999-05-11收稿, 百拇医药