各型病毒性肝炎一氧化氮变化及其临床意义
作者：王玉华 马万林 孙宝佳 宋爱华 王晋生 韩淑华 吴淑兰 韩忠厚
单位：河北省秦皇岛市第三医院秦皇岛066001
关键词：肝炎，病毒性，人；肝炎，甲型；肝炎，乙型；肝炎，丙型；肝炎，戊型；一氧化氮；诊断应用
河北医科大学学报990505 摘 要 目的 探讨各种类型病毒性肝炎患者血清一氧化氮(NO)变化及其临床意义。方法 应用紫外分光光度计比色法测定血清NO含量。结果 所有类型病毒性肝炎患者血清NO水平均较正常人高。急性肝炎患者血清NO水平与感染病原型无关,与血清ALT及TBil无明显相关。慢性肝炎,肝炎后肝硬化,重症肝炎中、晚期患者血清NO水平显著增高。且与血清ALT、TBil值呈正相关,与PLD、LH、PCⅢ水平呈正相关。与凝血酶原活动度(PTA)及血清白蛋白(ALB)呈负相关。结论 急性肝炎时,NO轻度升高,是体对炎症的应答应反,此时发挥对肝细胞的保护作用。慢性肝炎、肝硬化及重症肝炎患者血清NO水平明显增高,表现对肝细胞的损伤作用,参与肝纤维化过程。NO是重症肝炎及肝硬化高动力循环的成因。
, 百拇医药
中图号 R512.6
CLINICAL SIGNIFICATION AND CHANGES OF NITRIC OXIDE
IN VARIOUS VIRAL HEPATITIS
Wang Yuhua Ma Wanlin Sun Baojia Song Aihua
Wang Jinsheng Han Shuhua Wu Shulan Han Zhonghou
The Third Hospital of Qinhuangdao,Hebei(Qinhuangdao 066001)
ABSTRACT Objective To study the serum nitric oxide (NO) level and its clinical significance in various viral hepatitis.Methods The serum NO level was detected by ultraviolet spetrophotometry.Results The serum NO level in patients,with various viral hepatitis was higher than that in healthy ones.The serum NO level in patients with acute viral hepatitis has no relation to types of virus,and no relatioin to plasma ALT and TBil level.Serum NO level remarkably increased in patients with chronic hepatitis,liver cirrhosis and severe hepatitis in the late time.The serum NO level was positively related with plasma ALT,TBil,PLD,PCⅢ and LN.It was negatively related with plasma prothrombin activity (PTA) or plasma albumin level.Conclusion The serum NO level was increased in patients with acute viral hepatitis,which may be due to reaction to the inflamation.At that time,serum NO level can reflect protective action to liver cells.The serum NO level was greatly increased in patients with chronic hepatitis liver cirrhosis and severe hepatitis.At this time,NO could damage liver cells and induce liver fibrosis.It was a result of hyperdynamic circulation in severe hepatitis and liver cirrhosis.
, 百拇医药
MeSH hepatitis,viral,human;hepatitis A;hepatitis B;hepatitis C;hepatitis E;nitric oxide/diagnostic use
一氧化氮是最近10年来发现的一种新的信息分子和效应分子,大量动物实验表明NO参与肝炎发病的病理和生理过程,我们对各种病原型不同临床阶段的肝炎患者血清进行了NO检测,现报告如下。
1 对象和方法
1.1 研究对象:1996～1998年间我院收治的不同临床类型肝炎病毒感染及不同临床时期的病毒性肝炎患者共218例,对其进行了血清NO检测,其中男性172例,女性46例,年龄20～50岁,平均(32±11.8)岁。另设50例正常人做对照,诊断按1995年北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订标准。急性肝炎87例(其中甲型肝炎22例,乙型肝炎18例,丙型肝炎22例,戊型肝炎25例),慢性肝炎40例,肝炎后肝硬化27例,重症肝炎34例(其中早期18例,中、晚期16例)。乙肝病毒携带者30例。各组患者在年龄、性别方面经统计学处理无显著性差异,具有可比性。
, 百拇医药
1.2 检测方法:抽取患者清晨空腹血为标本,高速离心,留取血清,使用南京建成生物制品研究所研制的NO试剂盒,操作步骤严格按照试剂盒使用说明书进行,用752型紫外分光光度计比色,以吸光度结果自标准曲线得出NO含量,结果采取平均数加标准差表示,假设检验采用t检验。
2 结果
2.1 87例病原型分别为甲、乙、丙、戊型的急性病毒性肝炎患者,对其血清进行NO检测,并与正常人对照,结果见表1。急性肝损伤患者血清NO水平与正常人比较具有显著性差异。但感染不同病原型(甲、乙、丙、戊)之间无明显差异,P>0.05。本组中血清NO水平与谷丙转氨酶(ALT)及总胆红质(TBil)的变化无明显相关性,r分别为0.198和0.236,P>0.05。
表1 不同病原型急性病毒性肝炎患者血清NO变化
Table 1 The changs of serum NO level in various patients
, 百拇医药
with acute viral hepatitis
Virus type
n
NO(μmol/L)
Control
50
31.15±16.84
HAV
22
39.08±18.35△
HBV
18
, 百拇医药
47.94±38.26▲*
HCV
22
46.29±38.99△*
HEV
25
42.29±28.24△*
△ Compared with control P<0.05,▲ Compared with control P<0.02,* Compared with HAV group P<0.05
2.2 对218例不同临床类型的肝炎患者及乙肝病毒携带者进行NO检测,并与正常人对照,结果见表2。无症状乙肝病毒携带者血清NO水平与正常人比较无显著性差异,但急性肝炎,慢性肝炎,肝炎后肝硬化,重症肝炎患者血清NO水平与正常比较具有非常显著性差异,且急性肝炎与慢性肝炎之间,慢性肝炎与肝硬化之间比较也具有显著性差异。重型肝炎早期患者血清NO水平与急性肝炎之间无显著性差异,但中晚期患者与急性肝炎之间具有非常显著差异。
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表2 各种临床类型病毒性肝炎血清NO水平变化
Table 2 The changs of serum NO level in patients with
viral hepatits of various clinical types
Clinical type
n
NO(μmol/L)
Control
50
31.50±16.84
Asymtomatic carriers of HBV(ASC of HBV)
, 百拇医药
30
38.65±17.89*
Acute viral hepatitis
87
43.89±21.32**
Chronic viral hepatitis
40
58.16±25.05***
Liver cirrhosis
27
90.52±41.46***
, 百拇医药
Severe hepatitis early stage
18
45.66±19.87▲
medium and later stage
16
78.56±31.28***
* Compared with control, P>0.05,** Compared with control, P>0.01,*** Compared with AVH, P>0.01,▲ Compared with control, P>0.05
2.3 慢性肝炎40例中,血清NO水平与ALT值呈正相关(r=0.428,P<0.05)。与TBiL呈正相关(r=0.527,P<0.01)。血清ALB与NO水平呈负相关(r=0.368,P<0.05)。
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2.4 肝硬化、重型肝炎共61例中,NO水平与PTA呈明显负相关(r=0.683,P<0.01)。与ALB变化呈明显负相关(r=0.721,P<0.01)。(以上P值采用分组资料相关系数计算法,P值采用查表法)。
2.5 血清NO水平与Ⅲ型前胶原肽(PCⅢ),层粘连蛋白(LN),脯氨酸肽酶(PLD)之间呈明显正向线性相关,结果见图1～3。
图1 NO水平与PCⅢ的关系
Figure 1 Relation of NO level and PCⅢ
图2 NO水平与LN的关系
, 百拇医药
Figure 2 Relation of NO level and LN
图3 NO水平与PLD的关系
Figure 3 Relation of NO PLD
2.6 对30例重症肝炎伴肝性脑病患者使用精氨酸后NO值治疗前(68.66±18.07)μmol/L,治疗后为(46.78±15.26)μmol/L(P<0.05),使用后肝性脑病有所缓解。对30例肝硬化伴门脉高压者使用硝酸酯制剂(硝酸甘油)后,NO治疗前(66.78±32.86)μmol/L,治疗后(83.52±23.55)μmol/L,P<0.05。且随着NO的变化升高,门静脉宽度有所减少,并发症有所改善。
3 讨论
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NO是L-精氨酸在一氧化氮合成酶作用下生成的一种嗜脂性物质,其化学性质不稳定,迅速与体内超氧阴离子反应而生成NO-2和NO-3。生物体内有原生型NO合酶(cNOS)和诱生型NO合酶(iNOS)。cNOS主要分布在内皮细胞和中枢神经细胞,在正常生理条件下含量甚微,用来完成神经传递功能。iNOS主要存在于肝细胞、巨噬细胞等许多细胞中,当这些细胞被某些细胞因子及病原微生物刺激后数小时就会产生大量的iNOS,从而合成NO而发挥其生物学特性[1]。NO在人体物质代谢,信息传递,预防疾病中起着十分重要的作用,正常分泌时参与血压调节,神经递质,免疫功能及抗感染作用,在肝炎患者中则起到保护肝细胞及参与炎症破坏作用的双重性。
本文结果表明,肝脏急性炎症期,NO水平与正常对照轻度升高,但与ALT及TBil无明显相关性,重型肝炎早期与急性肝炎比较,NO水平无明显变化。考虑NO在肝炎初期并非介导肝细胞损伤,而是起保护作用,是宿主对炎症的应答反应。机制为:①肝炎时,肠源性内毒素增加,形成肠源性内毒素血症,使NO合成增多,NO作为免疫效应分子,抑制病毒复制[2]。②同时NO可通过清除体内的自由基而起保护作用[3],也可与超氧阴离子反应产生低毒性物质。③增加肝窦内血容量,缓解窦内皮肿胀,纠正肝脏微循环紊乱,防止肝脏因缺血或白细胞粘附所致的氧化损伤。
, 百拇医药
慢性肝炎,重症肝炎中晚期、肝硬化患者血清NO水平与急性肝炎比较明显大幅度提高。认为,随着肝脏炎症时间的推移及大量的肝细胞破坏,随之伴有肝细胞基质纤维化过程,此过程中的一些细胞因子如TNF-α、IL-1、SIL-2R和细胞外基质LN、PLD等,是启动胶原纤维增生的因素[4],也是NOS的诱生剂,可促使巨噬细胞和肝细胞产生大量NO,本文中PLD、PCⅢ和LN与NO的正向关系,正说明这一点。如果NO诱生过量,超过机体应激反应的量时,可通过抑制线粒体呼吸链,和免疫机制介导肝损伤。本文中慢性肝炎患者ALT、TBiL的变化与NO的关系正与此相吻合。同时NO可抑制肝细胞蛋白质的合成,并可通过与O-2反应引起质子过氧化同功酶结构蛋白的破坏,是慢性和重症肝炎患者血浆白蛋白及PTA与NO呈负相关的理论依据。
重症肝炎中、晚期和肝硬化患者伴肝性脑病,使用精氨酸治疗后,NO水平明显下降,缓解了NO对肝脏的毒性,使肝病症状得以好转。肝硬化门脉高压者使用硝酸酯类制剂使NO水平增高,由于NO参与血液动力学作用[5],使血管扩张,门静脉压力下降,但是否同时加重肝细胞破坏,有待今后探讨。
, http://www.100md.com
本实验发现:随着TBil上升到171 μmol/L以上,NO值有下降趋势,考虑可能是重症肝炎晚期,肝细胞大量破坏,产生NO量减少的缘故。本实验还发现血浆溶血的患者NO值明显降低,是否机体溶血因素参与NO合成及代谢有关,因例数较少,有待今后探讨。
参考文献
1.王彝康,李定国,边城,等.肝硬化患者血清NO水平变化.上海医学,1997,20(7):396
2.刘银良,高伟良.NO一种新的信息分子与效应分子.免疫学杂志,1996,12(1):1
3.腾书玲,雪玲,武雪润.大鼠急性肝损伤中一氧化氮与自由基的变化.中华肝脏病杂志,1998,6(6):2
4.方建玲,高洁生,吴轰.实验性大鼠肝纤维化NO动态变化及意义.免疫学杂志,1997,13(1):26
5.Vallance P,Moncada S.Hyperdynamic circulation in cirrhosis:a role for nitric oxide.Lancet,1991,337:776
收稿日期：1999-04-01, 百拇医药
单位：河北省秦皇岛市第三医院秦皇岛066001
关键词：肝炎，病毒性，人；肝炎，甲型；肝炎，乙型；肝炎，丙型；肝炎，戊型；一氧化氮；诊断应用
河北医科大学学报990505 摘 要 目的 探讨各种类型病毒性肝炎患者血清一氧化氮(NO)变化及其临床意义。方法 应用紫外分光光度计比色法测定血清NO含量。结果 所有类型病毒性肝炎患者血清NO水平均较正常人高。急性肝炎患者血清NO水平与感染病原型无关,与血清ALT及TBil无明显相关。慢性肝炎,肝炎后肝硬化,重症肝炎中、晚期患者血清NO水平显著增高。且与血清ALT、TBil值呈正相关,与PLD、LH、PCⅢ水平呈正相关。与凝血酶原活动度(PTA)及血清白蛋白(ALB)呈负相关。结论 急性肝炎时,NO轻度升高,是体对炎症的应答应反,此时发挥对肝细胞的保护作用。慢性肝炎、肝硬化及重症肝炎患者血清NO水平明显增高,表现对肝细胞的损伤作用,参与肝纤维化过程。NO是重症肝炎及肝硬化高动力循环的成因。
, 百拇医药
中图号 R512.6
CLINICAL SIGNIFICATION AND CHANGES OF NITRIC OXIDE
IN VARIOUS VIRAL HEPATITIS
Wang Yuhua Ma Wanlin Sun Baojia Song Aihua
Wang Jinsheng Han Shuhua Wu Shulan Han Zhonghou
The Third Hospital of Qinhuangdao,Hebei(Qinhuangdao 066001)
ABSTRACT Objective To study the serum nitric oxide (NO) level and its clinical significance in various viral hepatitis.Methods The serum NO level was detected by ultraviolet spetrophotometry.Results The serum NO level in patients,with various viral hepatitis was higher than that in healthy ones.The serum NO level in patients with acute viral hepatitis has no relation to types of virus,and no relatioin to plasma ALT and TBil level.Serum NO level remarkably increased in patients with chronic hepatitis,liver cirrhosis and severe hepatitis in the late time.The serum NO level was positively related with plasma ALT,TBil,PLD,PCⅢ and LN.It was negatively related with plasma prothrombin activity (PTA) or plasma albumin level.Conclusion The serum NO level was increased in patients with acute viral hepatitis,which may be due to reaction to the inflamation.At that time,serum NO level can reflect protective action to liver cells.The serum NO level was greatly increased in patients with chronic hepatitis liver cirrhosis and severe hepatitis.At this time,NO could damage liver cells and induce liver fibrosis.It was a result of hyperdynamic circulation in severe hepatitis and liver cirrhosis.
, 百拇医药
MeSH hepatitis,viral,human;hepatitis A;hepatitis B;hepatitis C;hepatitis E;nitric oxide/diagnostic use
一氧化氮是最近10年来发现的一种新的信息分子和效应分子,大量动物实验表明NO参与肝炎发病的病理和生理过程,我们对各种病原型不同临床阶段的肝炎患者血清进行了NO检测,现报告如下。
1 对象和方法
1.1 研究对象:1996～1998年间我院收治的不同临床类型肝炎病毒感染及不同临床时期的病毒性肝炎患者共218例,对其进行了血清NO检测,其中男性172例,女性46例,年龄20～50岁,平均(32±11.8)岁。另设50例正常人做对照,诊断按1995年北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订标准。急性肝炎87例(其中甲型肝炎22例,乙型肝炎18例,丙型肝炎22例,戊型肝炎25例),慢性肝炎40例,肝炎后肝硬化27例,重症肝炎34例(其中早期18例,中、晚期16例)。乙肝病毒携带者30例。各组患者在年龄、性别方面经统计学处理无显著性差异,具有可比性。
, 百拇医药
1.2 检测方法:抽取患者清晨空腹血为标本,高速离心,留取血清,使用南京建成生物制品研究所研制的NO试剂盒,操作步骤严格按照试剂盒使用说明书进行,用752型紫外分光光度计比色,以吸光度结果自标准曲线得出NO含量,结果采取平均数加标准差表示,假设检验采用t检验。
2 结果
2.1 87例病原型分别为甲、乙、丙、戊型的急性病毒性肝炎患者,对其血清进行NO检测,并与正常人对照,结果见表1。急性肝损伤患者血清NO水平与正常人比较具有显著性差异。但感染不同病原型(甲、乙、丙、戊)之间无明显差异,P>0.05。本组中血清NO水平与谷丙转氨酶(ALT)及总胆红质(TBil)的变化无明显相关性,r分别为0.198和0.236,P>0.05。
表1 不同病原型急性病毒性肝炎患者血清NO变化
Table 1 The changs of serum NO level in various patients
, 百拇医药
with acute viral hepatitis
Virus type
n
NO(μmol/L)
Control
50
31.15±16.84
HAV
22
39.08±18.35△
HBV
18
, 百拇医药
47.94±38.26▲*
HCV
22
46.29±38.99△*
HEV
25
42.29±28.24△*
△ Compared with control P<0.05,▲ Compared with control P<0.02,* Compared with HAV group P<0.05
2.2 对218例不同临床类型的肝炎患者及乙肝病毒携带者进行NO检测,并与正常人对照,结果见表2。无症状乙肝病毒携带者血清NO水平与正常人比较无显著性差异,但急性肝炎,慢性肝炎,肝炎后肝硬化,重症肝炎患者血清NO水平与正常比较具有非常显著性差异,且急性肝炎与慢性肝炎之间,慢性肝炎与肝硬化之间比较也具有显著性差异。重型肝炎早期患者血清NO水平与急性肝炎之间无显著性差异,但中晚期患者与急性肝炎之间具有非常显著差异。
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表2 各种临床类型病毒性肝炎血清NO水平变化
Table 2 The changs of serum NO level in patients with
viral hepatits of various clinical types
Clinical type
n
NO(μmol/L)
Control
50
31.50±16.84
Asymtomatic carriers of HBV(ASC of HBV)
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30
38.65±17.89*
Acute viral hepatitis
87
43.89±21.32**
Chronic viral hepatitis
40
58.16±25.05***
Liver cirrhosis
27
90.52±41.46***
, 百拇医药
Severe hepatitis early stage
18
45.66±19.87▲
medium and later stage
16
78.56±31.28***
* Compared with control, P>0.05,** Compared with control, P>0.01,*** Compared with AVH, P>0.01,▲ Compared with control, P>0.05
2.3 慢性肝炎40例中,血清NO水平与ALT值呈正相关(r=0.428,P<0.05)。与TBiL呈正相关(r=0.527,P<0.01)。血清ALB与NO水平呈负相关(r=0.368,P<0.05)。
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2.4 肝硬化、重型肝炎共61例中,NO水平与PTA呈明显负相关(r=0.683,P<0.01)。与ALB变化呈明显负相关(r=0.721,P<0.01)。(以上P值采用分组资料相关系数计算法,P值采用查表法)。
2.5 血清NO水平与Ⅲ型前胶原肽(PCⅢ),层粘连蛋白(LN),脯氨酸肽酶(PLD)之间呈明显正向线性相关,结果见图1～3。
图1 NO水平与PCⅢ的关系
Figure 1 Relation of NO level and PCⅢ
图2 NO水平与LN的关系
, 百拇医药
Figure 2 Relation of NO level and LN
图3 NO水平与PLD的关系
Figure 3 Relation of NO PLD
2.6 对30例重症肝炎伴肝性脑病患者使用精氨酸后NO值治疗前(68.66±18.07)μmol/L,治疗后为(46.78±15.26)μmol/L(P<0.05),使用后肝性脑病有所缓解。对30例肝硬化伴门脉高压者使用硝酸酯制剂(硝酸甘油)后,NO治疗前(66.78±32.86)μmol/L,治疗后(83.52±23.55)μmol/L,P<0.05。且随着NO的变化升高,门静脉宽度有所减少,并发症有所改善。
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NO是L-精氨酸在一氧化氮合成酶作用下生成的一种嗜脂性物质,其化学性质不稳定,迅速与体内超氧阴离子反应而生成NO-2和NO-3。生物体内有原生型NO合酶(cNOS)和诱生型NO合酶(iNOS)。cNOS主要分布在内皮细胞和中枢神经细胞,在正常生理条件下含量甚微,用来完成神经传递功能。iNOS主要存在于肝细胞、巨噬细胞等许多细胞中,当这些细胞被某些细胞因子及病原微生物刺激后数小时就会产生大量的iNOS,从而合成NO而发挥其生物学特性[1]。NO在人体物质代谢,信息传递,预防疾病中起着十分重要的作用,正常分泌时参与血压调节,神经递质,免疫功能及抗感染作用,在肝炎患者中则起到保护肝细胞及参与炎症破坏作用的双重性。
本文结果表明,肝脏急性炎症期,NO水平与正常对照轻度升高,但与ALT及TBil无明显相关性,重型肝炎早期与急性肝炎比较,NO水平无明显变化。考虑NO在肝炎初期并非介导肝细胞损伤,而是起保护作用,是宿主对炎症的应答反应。机制为:①肝炎时,肠源性内毒素增加,形成肠源性内毒素血症,使NO合成增多,NO作为免疫效应分子,抑制病毒复制[2]。②同时NO可通过清除体内的自由基而起保护作用[3],也可与超氧阴离子反应产生低毒性物质。③增加肝窦内血容量,缓解窦内皮肿胀,纠正肝脏微循环紊乱,防止肝脏因缺血或白细胞粘附所致的氧化损伤。
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慢性肝炎,重症肝炎中晚期、肝硬化患者血清NO水平与急性肝炎比较明显大幅度提高。认为,随着肝脏炎症时间的推移及大量的肝细胞破坏,随之伴有肝细胞基质纤维化过程,此过程中的一些细胞因子如TNF-α、IL-1、SIL-2R和细胞外基质LN、PLD等,是启动胶原纤维增生的因素[4],也是NOS的诱生剂,可促使巨噬细胞和肝细胞产生大量NO,本文中PLD、PCⅢ和LN与NO的正向关系,正说明这一点。如果NO诱生过量,超过机体应激反应的量时,可通过抑制线粒体呼吸链,和免疫机制介导肝损伤。本文中慢性肝炎患者ALT、TBiL的变化与NO的关系正与此相吻合。同时NO可抑制肝细胞蛋白质的合成,并可通过与O-2反应引起质子过氧化同功酶结构蛋白的破坏,是慢性和重症肝炎患者血浆白蛋白及PTA与NO呈负相关的理论依据。
重症肝炎中、晚期和肝硬化患者伴肝性脑病,使用精氨酸治疗后,NO水平明显下降,缓解了NO对肝脏的毒性,使肝病症状得以好转。肝硬化门脉高压者使用硝酸酯类制剂使NO水平增高,由于NO参与血液动力学作用[5],使血管扩张,门静脉压力下降,但是否同时加重肝细胞破坏,有待今后探讨。
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本实验发现:随着TBil上升到171 μmol/L以上,NO值有下降趋势,考虑可能是重症肝炎晚期,肝细胞大量破坏,产生NO量减少的缘故。本实验还发现血浆溶血的患者NO值明显降低,是否机体溶血因素参与NO合成及代谢有关,因例数较少,有待今后探讨。
参考文献
1.王彝康,李定国,边城,等.肝硬化患者血清NO水平变化.上海医学,1997,20(7):396
2.刘银良,高伟良.NO一种新的信息分子与效应分子.免疫学杂志,1996,12(1):1
3.腾书玲,雪玲,武雪润.大鼠急性肝损伤中一氧化氮与自由基的变化.中华肝脏病杂志,1998,6(6):2
4.方建玲,高洁生,吴轰.实验性大鼠肝纤维化NO动态变化及意义.免疫学杂志,1997,13(1):26
5.Vallance P,Moncada S.Hyperdynamic circulation in cirrhosis:a role for nitric oxide.Lancet,1991,337:776
收稿日期：1999-04-01, 百拇医药