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编号:10221296
马尔尼菲青霉的生态学研究
http://www.100md.com 《广西医科大学学报》 1999年第5期
     作者:梁 伶 李菊裳

    单位:广西医科大学第一附属医院皮肤科 南宁 530021

    关键词:马尔尼菲青霉;竹鼠;易感性

    广西医科大学学报990516

    摘要 目的:探讨马尔尼菲青霉(PM)生态情况。方法:①捕捉广西银星竹鼠、疫区家鼠、田鼠、蝙蝠,采集疫区竹根、竹笋、甘蔗、患者家中、周围及其猪舍中的泥土,经处理后将各种标本接种到沙氏琼脂培养基(SDA),分别置25℃及37℃孵育观察并同时将各种试验动物组织做病理学检查;②分别用分离自马尔尼菲青霉病(PSM)患者及分离自银星竹鼠的PM菌悬液接种于小白鼠、家鼠及兔的腹腔中,一个月后解剖,进行肉眼观察及将组织接种到 SDA中培养及组织病理学检查。结果:成年竹鼠自然带菌率高达93.1%,非鼠类自然带菌率为零。动物重复试验中鼠类易感性高。植物、泥土末分离出PM。结论:广西银星竹鼠自然携带PM之高,与其生活环境、习惯及易感性有关。
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    中国图书资料分类法分类号 Q938

    ECOLOGICAL STUDY OF PENICILLIUM MARNEFFEI

    Liang Ling, Li Jushang

    (Dermatological Department of the Affiliated Hospital,GuangXi Medical University, Nanning 530021)

    Abstract Objective:To study ecological distribution of Penicillium Marneffei(PM).Methods:①Catch Rhizomys pruinesus,focus Rattus, Microtus, bats; collect bamboo roots, arrowroots and sugar-cane in the focus, and soil in and around the patient's house and hogpen; then inoculate Sabouraud's dextrose agar (SDA) with the disposed specimens; observe them being incubated at 25℃/37℃and give the tested animals' tissues pathological examination. ②Inoculate abdominal cavities of albino rat, rattus and rabbit with PM suspension separated from PSM and Rhizomys Pruinesus, and one month after the dissect,gross-inspecting them and inoculate SDA with the tissues to be cultured and do pathological examination.Results:The spontaneous carrier-rate of adult Rhizomys is 93.1% high, and that of non-Muridae zero. The susceptibility of the repeatedly-tested Muridae is high, and PM is not separated from the vegetables and soil.Conclusion:A great number of PM are spontaneously carried by the Rhizomys pruincsus to be related to the living surroundings, the rabit and the susceptibility of the carriers.
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    Key words Penicillium Marneffei (PM); Rhizomys;susceptibility

    自1956年Cappont等[1]首次从越南野生的竹鼠肝脏分离出马尔尼菲青霉Penicillium mameffei(PM)。1959年Segretein正式为一新菌种,并报告了1例实验中因刺伤手指致人类PM感染。1973年美国Disalvo报告了人类首例自然感染的马尔尼菲青霉病Penicilliosis marneffei (PSM),此后,泰国、香港、中国大陆、印尼、台湾、缅甸,相继有该病的报告,欧美亦有报告,但均为曾到过东南亚的人患病。为更好地对PSM进行防治,我们对PM进行了生态学的研究。

    1 材料和方法

    1.1 病原菌:分离自PSM患者的PM菌株及分离自广西野生银星竹鼠PM菌株。
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    1.2 试验动物:野生广西银星竹鼠16只,PSM疫区家鼠12只、田鼠9只、蝙蝠73只,患者家中、周围及其猪舍中的泥土、疫区的竹根、竹笋、甘蔗各5份。

    1.3 动物重复实验:小白鼠 9只、家鼠 3只、兔 3只。

    1.4 培养基:沙氏琼脂培养基(SDA),葡萄糖土豆琼脂基(PDA)。

    1.5 染色:HE、PAS、Grocott's染色。

    1.6 方法:①到PSM疫区捕捉野生蝙蝠、家鼠、田鼠、银星竹鼠、分别处死,即用质量浓度为5%石炭酸液消毒,在无菌操作下解剖,分别取肺门组织、肝、脾、肠系膜淋巴结、胰、肾、胃、心、骨髓组织、肠内类便接种于SDA培养基,置25℃及37℃孵育观察;②各种试验动物受试组织作病理学检查,HE、PAS及Grocott's染色寻找组织PM;③分别用分离自PSM患者及分离自银星竹鼠的PM菌悬液(1个麦氏浓度)分别接种于受试动物腹腔,每只动物接种0.2ml饲养观察1个月后解剖,观察有无肉眼可见病变,并分别取肺门组织、肝、脾、心、肾、胰、肠系膜淋巴结、骨髓接种于SDA及PDA培养基上,并同时将上述组织作病理学检查。
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    2 结 果

    2.1 73只蝙蝠、12只家鼠、9只田鼠、患者家中、周围及其猪舍中泥土、疫区内的竹根、竹笋、甘蔗均未分离出PM。组织病理学检查并未发现组织内PM。

    2.2 16只银星竹鼠中、除 1只幼鼠未分离出PM外,其余15只成年竹鼠均分离出PM,自然带菌率为93.1%

    2.2.1 16只受试竹鼠各脏器组织PM分离结果见表1。

    表1 竹鼠各种组织PM培养结果

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    肝

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    肠系膜淋巴结

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    心

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    注:+阳性 -阴性 0未做培养

    2.2.2 从竹鼠体内分离出PM的菌落形态:25℃培养物为黄白色、红黄色、黄绿色绒样菌落,产生可溶性红色色素渗入基质中,使菌落周围呈红色。37℃培养物呈淡灰褐色至奶色有脑回样皱褶放射状沟纹,无色素产生。

    2.2.3 显微结构:25℃培养物显微镜下呈青霉相,见表面光滑分枝分隔菌丝,有典型帚状枝,呈单轮或双轮生,分生孢子梗散开,瓶形小梗顶端狭窄,自顶端生出散乱的分生孢子链,可见孢间连体。37℃培养物显微镜下呈酵母相,表面光滑酵母菌体,并见腊肠形菌体,少许短菌丝。

    2.2.4 组织病理:组织反应很弱,仅于Ⅱ号竹鼠肝见微小化脓灶,于肝小叶内, PAS及Grocott's染色,可见单个酵母菌体位于细胞浆或肝窦中。
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    2.2.5 分离自 PSM患者的PM菌悬液接种于家兔、家鼠、小白鼠腹腔致病性观察结果:接种1个月后解剖,除家兔所有脏器未见肉眼病变外,分别在家鼠、小白鼠的内腹壁、肝、脾及肠系膜见脓肿。各实验动物的致病结果见表2。从表2可以看到家兔对PM无易感性,而家鼠及小白鼠对PM有易感性,动物重复实验100%感染致多发性脓肿。

    2.2.6 分离自竹鼠PM菌悬液接种于3只小白鼠腹腔致病性结果:接种1个月后解剖小白鼠,肉眼观察腹腔内壁、大网膜见针尖至粟粒大小脓肿。其中2只小白鼠肝脾见针尖大小脓肿,分离出PM的组织见表3。

    表2 人PM动物重复实验结果 组织名称

    腹壁组织

    肺

    肝

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    胰

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    肠系膜

    心

    肾

    骨髓

    兔1

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    兔3

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    家鼠1

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    家鼠2

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    家鼠3

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    小白鼠1

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    小白鼠2
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    小白鼠3

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    小白鼠4

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    小白鼠5

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    小白鼠6

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    表3 竹鼠PM动物重复实验结果 组织名称

, http://www.100md.com     腹壁内组织

    肺

    肝

    脾

    大网膜

    肾

    胰

    心

    骨髓

    小白鼠1

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    小白鼠2

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    小白鼠3

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    表3结果表明,分离自竹鼠的PM与分离自人的PM同样有致病性。

    3 讨 论
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    据报道,东南亚PSM发病率高,在我国主要为南方的广西。自从Capponi(1956年)首先从越南野生中华竹鼠的肝脏中分离出PM,李菊裳[2]邓卓霖等[3]认为遍布广西的竹鼠是PM的自然储库。为了探讨PM的生态学,我们对广西银星竹鼠等动、植物自然带PM的情况进行了研究。

    3.1 环境特点:广西地区与东南亚均处于亚热带、热带地区,终年气温偏高,湿润多雨,潮湿炎热,是真菌生长繁殖的最适宜环境,我们认为是 PSM好发地区的重要原因之一。

    3.2 实验动物的生活习惯因素:从实验结果来看,受试动物中15只成年广西银星竹鼠全部健康携带PM,而1只幼年竹鼠、12只家鼠、9只田鼠、73只蝙蝠、患者家中及其周围猪舍中的泥土、实验植物均未分离出PM,组织病理亦未发现PM。竹子及甘蔗含糖量高,易被霉菌所污染。而野生竹鼠穴居竹根下,喜食竹笋、竹根、甘蔗,可能竹鼠吃了带菌的竹根及甘蔗后,而造成感染。PM随竹鼠粪便、分泌物排到野地里,造成环境污染。广西银星竹鼠带菌率之高,可能与其生活习惯有关。邓卓霖等[4]将PM接种在竹笋和甘蔗上发现极易生长和蔓延,而接种在竹鼠不爱食的红薯、马铃薯等食物该菌则不生长,亦未能在自然界的甘蔗和竹笋、竹根中分离出PM,与我们报道一致。邓卓霖等[5]报告从竹鼠洞土中分离出PM,而我们未能从泥土中分离出PM的原因可为①取材不良;②从泥土中分离PM的方法要讲究,采用生物过滤法为好;③泥土中杂菌多而影响PM的生长。
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    3.3 发病情况:本实验结果表明竹鼠自然携带PM高达93.1%而未致病,我们推测除了邓卓霖等[4]认为可能是因为竹鼠体内不易产生抗PM抗体及竹鼠体内体温偏低(平均35℃)适宜于储存该菌外,竹鼠体内很可能存在一种天然抗PM因子,使入侵的PM持久地以一种寄生的形式长期储存于竹鼠体内而不发病,而竹鼠的分泌物排泄物污染土壤草木可作为播散PM的途径之一,使人类被感染。

    3.4 重复试验动物菌种分离结果:实验结果表明家兔对PM无易感性,而家鼠及小白鼠对PM有易感性,动物重复试验100%感染致多发性脓肿,这可能为家鼠与小白鼠均与竹鼠同属于鼠类动物,都对PM有着易感性。田鼠、家鼠与小白鼠的自然感染情况与竹鼠不同,可能与其各自生活环境、饮食习惯不同有关。另外,我们还认为在树上栖息的和地上栖息的野生动物、饲养动物及动物的种类不同对PM的易感性亦不同。

    *广西区科技厅自然科学基金资助项目(9532028)
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    参考文献

    1 Capponi M, Segretein G,Sureau. Penicillose de Rhizomyssinesis. Bull de la societ de path Exot, 1956,49:418

    2 李菊裳,邓卓霖,潘乐泉,等.广西银星竹鼠自然带马内青霉菌的真菌学研究报告.中国人兽共患病杂志,1986,2(2):5~7

    3 Deng ZL,Ma Y,Ajello L.Human penicilliosis marneffei and itsrelationto the bamboo rat(Rhizomys pruinosus), J Med Vet Mycol, 1986,24:3834

    4 邓卓霖,马韵,李菊裳.人类马内青霉菌病与竹鼠的关系.广西医学院学报,1985,2(3):18

    5 邓卓霖,叶琼玉,李山,等.竹鼠穴泥土分离出马内青霉菌.广西医学,1987,9(1):3~4

    收稿日期:1999-03-11, http://www.100md.com