凋亡相关基因P16、bcl-2及nm23与鼻咽癌相关性的研究
作者：李杰恩 黄光武 李佳荃 韦敏怡 徐志文 唐安洲 周 永 谭颂华
单位：广西医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科 南宁 530021; 韦敏怡 病理科
关键词：凋亡；鼻咽肿瘤；P16基因；bcl-2基因；nm23基因
广西医科大学学报990514
摘要 目的：探讨鼻咽癌(NPC)凋亡相关基因 P16、bcl-2及nm23与 NPC的关系。方法:采用免疫组化 S-P法对73例NPC、20例无瘤NP组织的石蜡包埋标本中的P16、bcl-2及nm23蛋白进行检测。结果:NPC组织的P16表达显著低于无瘤NP组织，而bcl-2表达则显著高于无瘤NP组织(P<0.01)；P16及bcl-2蛋白表达与NPC的临床分期相关(P<0.05)；nm23与颈淋巴结转移相关。结论:NPC细胞凋亡的抑制与bcl-2蛋白过度表达及P16基因的部分缺失有关。
, http://www.100md.com
中国图书资料分类法分类号 R730.231
EXPRESSIONS OF p16,bcl2,AND nm23 PROTEIN IN NASOPHARYNGEAL CARCINOMA
Li Jieen,Huang Guangwu,Li Jiaquan et al.
(Department of Otolarynology,the First Affiliated Hospital,Guangxi Medical University,Nanning,530021)
Abstract Objective：To investigate the relationship between apoptosis gene and nasopharyngeal carcinoma(NPC).Methods：Expressions of p16,bcl-2 and nm23 protein were examined by immunohisytochemistory S-P stainning in 73 NPC tissues. Results：P16 protein highly expressed in tumor-free nasopharyngeal mucosa tissues,but bcl-2 protein in NPC tissues. There was relationship between the expressions of p16 and bcl-2 protein and the stage of NPC.Conclusion：Overexpression of bcl-2 and partial defection of p16 gene may explain the inhibition of celluar apoptosis in NPC
, http://www.100md.com
Key words apoptosis；nasopharyngeal carcinoma；p16 gene bcl-2 gene；nm23 gene
近来研究表明，细胞凋亡与肿瘤的发生、发展、治疗及预后关系密切，因而成为肿瘤研究的新热点。细胞凋亡的诱导与抑制是受遗传因素影响的，许多基因参与了这一过程，其中包括多种癌基因与抑癌基因，如bcl-2抑凋亡基因，多肿瘤抑制基因P16，以及转移抑制基因nm23等，为探讨凋亡相关基因在鼻咽癌(NPC)发生发展中的作用，我们采用免疫组化S-P法对NPC组织及正常鼻咽组织石蜡标本进行了观察研究。
1 材料与方法
1.1 收集广西医科大学第一附院1995～1996年收治的73例NPC患者的临床资料及石蜡标本，男54例，女19例，年龄17～73岁，平均42岁。另取20例无瘤鼻咽组织作对照组。
, http://www.100md.com
1.2 试剂:bcl-2，P16及nm23单抗，免疫组化试剂盒等。购自北京中山生物公司。
1.3 染色:采用免疫组化S-P法，P16，bcl-2，nm23等的工作浓度分别为1∶50，1∶40，1∶50。苏木素复染。
1.4 数据处理:使用PEMS(华西医科大学统计学教研室)统计软件包对数据进行统计学处理，χ2、t、t'检验及等级相关分析。
2 结果
2.1 结果判断:阳性细胞的细胞膜及细胞浆呈棕黄色。
2.2 P16、bcl-2及nm23蛋白表达:p16，bcl-2及nm23在NPC组织中的表达分别为28.8%(21/73)，81.2%(59/73)及73.9%(54/73)，在正常粘膜的表达分别为90%，7.5%及75%。
, 百拇医药
2.3 P16、bcl-2及nm23蛋白表达与临床相关性：P16及bcl-2与NPC的病灶大小(T分期)及临床分期相关(P<0.05)，而mn23蛋白表达则与颈淋巴转移相关(P<0.05)。
2.4 P16，bcl-2及nm23之间的相关性：P16与bcl-2表达呈负相关(P<0.05)，P16与nm23表达呈正相关(P<0.05)，而bcl-2与nm23表达无相关性。(等级相关分析，t检验)
3 讨 论
3.1 P16基因[1,2]与NPC的关系：P16基因又称多肿瘤抑制基因(MTS1)。其抑癌机理与细胞周期调控密切相关。体外研究证实，P16蛋白能特异抑制CDK4活性，使之不能解除Rb基因对转录因子的抑制阻止细胞从G1期进入S期，抑制细胞增殖从而达到抑癌目的。而当P16由于突变而不能正常表达，不能竞争结合CDK4阻止细胞分裂时，增生的细胞失去控制向癌变发展。本研究20例正常鼻咽粘膜上皮P16表达18例阳性，而NPC中阳性率仅为28.8%(21/73)，且与T分期，临床分期及颈淋巴结转移相关(P<0.05)。这表明P16基因失活与NPC的发生、发展及浸润转移有关。
, 百拇医药
3.2 bcl-2基因与NPC：bcl-2基因是目前已明确的抑凋亡基因[3]，通过抑制氧化过程及其它基因蛋白产物的作用，阻止细胞凋亡[4,5]。本组资料显示NPC中bcl-2阳性率为81%(59/73)，正常鼻咽粘膜上皮为15%(3/20)，证实bcl-2的抗调亡作用在NPC的发生过程中起重要作用。实验证明与NPC发生有关的EB病毒LMP-1蛋白能使细胞株中BCL-2蛋白表达增强，从而抑制EB病毒感染导致的细胞凋亡而发生肿瘤[6]。
3.3 nm23基因与NPC：现已证明，nm23蛋白通过参与调节细胞内微管系统的状态以及通过影响G蛋白的信号传递发挥负性调节作用，从而达到抑制肿瘤转移[7]，与细胞凋亡可能也有直接或间接的关系。本研究资料表明，nm23与NPC的病灶大小及浸润无关，其表达与正常鼻咽粘膜上皮无差别，推测nm23基因在NPC的发生过程中作用不大，而与颈淋巴转移相关。
, 百拇医药
本研究NPC中bcl-2蛋白出现异常表达，表明其对鼻咽上皮的良恶性诊断有重要的临床参考价值。同样，通过对P16蛋白的检测亦可以作为鼻咽上皮良恶性病变的一个参考。我们认为鼻咽粘膜上皮发生癌变，可能与bcl-2蛋白的过度表达及P16基因的部分缺失而致其细胞凋亡受抑制有关。
参考文献
1 Marx J.New tumor suppressor may rival p53. Science，1994,264(15):344～345
2 Kamb A,Gruis NA,Jane WF，et al. A cell cycel regulator potentially involved in genesis of many tumor types. Science， 1994,264(5):436～440
3 Tusjimoto Y,Cossman J,Jaffe E.Involvement of the bcl-2 gene in human follicular lomphoma. Science，1985,228(4706):1440～1443
, 百拇医药
4 Veis DJ,Sorenson CM,Shutter JR，et al.Bcl-2 deficient mice demonstrate fulminant lymphoid apioptosis,polycystic kidneys,and hypopigmented hair.Cell， 1993,75(2):229～240
5 Miyashita T,Reed TC.Bcl-2 oncoprotein block chemotherapy induced apoptosis in a human leukemia cell line.Blood，1993,81(1):151～157
6 Henderson S, Rowe M,Gregory C et al.Induction of bcl-2 expression by Epstein-Bair virus latent membrane protein 1protects infected β cells from programmed cell death. Cell，1991,65(7):1107～1115
7 Chen WJ,David WK,Michad SB. cDNA cloning and expression of the peptide-binding β subunit of rat p21ras farmesyl transferse,the counterpart of yeast DPR1/RAM1. Cell， 1991,66(2)：327～326
收稿日期：1999-03-10, http://www.100md.com
单位：广西医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科 南宁 530021; 韦敏怡 病理科
关键词：凋亡；鼻咽肿瘤；P16基因；bcl-2基因；nm23基因
广西医科大学学报990514
摘要 目的：探讨鼻咽癌(NPC)凋亡相关基因 P16、bcl-2及nm23与 NPC的关系。方法:采用免疫组化 S-P法对73例NPC、20例无瘤NP组织的石蜡包埋标本中的P16、bcl-2及nm23蛋白进行检测。结果:NPC组织的P16表达显著低于无瘤NP组织，而bcl-2表达则显著高于无瘤NP组织(P<0.01)；P16及bcl-2蛋白表达与NPC的临床分期相关(P<0.05)；nm23与颈淋巴结转移相关。结论:NPC细胞凋亡的抑制与bcl-2蛋白过度表达及P16基因的部分缺失有关。
, http://www.100md.com
中国图书资料分类法分类号 R730.231
EXPRESSIONS OF p16,bcl2,AND nm23 PROTEIN IN NASOPHARYNGEAL CARCINOMA
Li Jieen,Huang Guangwu,Li Jiaquan et al.
(Department of Otolarynology,the First Affiliated Hospital,Guangxi Medical University,Nanning,530021)
Abstract Objective：To investigate the relationship between apoptosis gene and nasopharyngeal carcinoma(NPC).Methods：Expressions of p16,bcl-2 and nm23 protein were examined by immunohisytochemistory S-P stainning in 73 NPC tissues. Results：P16 protein highly expressed in tumor-free nasopharyngeal mucosa tissues,but bcl-2 protein in NPC tissues. There was relationship between the expressions of p16 and bcl-2 protein and the stage of NPC.Conclusion：Overexpression of bcl-2 and partial defection of p16 gene may explain the inhibition of celluar apoptosis in NPC
, http://www.100md.com
Key words apoptosis；nasopharyngeal carcinoma；p16 gene bcl-2 gene；nm23 gene
近来研究表明，细胞凋亡与肿瘤的发生、发展、治疗及预后关系密切，因而成为肿瘤研究的新热点。细胞凋亡的诱导与抑制是受遗传因素影响的，许多基因参与了这一过程，其中包括多种癌基因与抑癌基因，如bcl-2抑凋亡基因，多肿瘤抑制基因P16，以及转移抑制基因nm23等，为探讨凋亡相关基因在鼻咽癌(NPC)发生发展中的作用，我们采用免疫组化S-P法对NPC组织及正常鼻咽组织石蜡标本进行了观察研究。
1 材料与方法
1.1 收集广西医科大学第一附院1995～1996年收治的73例NPC患者的临床资料及石蜡标本，男54例，女19例，年龄17～73岁，平均42岁。另取20例无瘤鼻咽组织作对照组。
, http://www.100md.com
1.2 试剂:bcl-2，P16及nm23单抗，免疫组化试剂盒等。购自北京中山生物公司。
1.3 染色:采用免疫组化S-P法，P16，bcl-2，nm23等的工作浓度分别为1∶50，1∶40，1∶50。苏木素复染。
1.4 数据处理:使用PEMS(华西医科大学统计学教研室)统计软件包对数据进行统计学处理，χ2、t、t'检验及等级相关分析。
2 结果
2.1 结果判断:阳性细胞的细胞膜及细胞浆呈棕黄色。
2.2 P16、bcl-2及nm23蛋白表达:p16，bcl-2及nm23在NPC组织中的表达分别为28.8%(21/73)，81.2%(59/73)及73.9%(54/73)，在正常粘膜的表达分别为90%，7.5%及75%。
, 百拇医药
2.3 P16、bcl-2及nm23蛋白表达与临床相关性：P16及bcl-2与NPC的病灶大小(T分期)及临床分期相关(P<0.05)，而mn23蛋白表达则与颈淋巴转移相关(P<0.05)。
2.4 P16，bcl-2及nm23之间的相关性：P16与bcl-2表达呈负相关(P<0.05)，P16与nm23表达呈正相关(P<0.05)，而bcl-2与nm23表达无相关性。(等级相关分析，t检验)
3 讨 论
3.1 P16基因[1,2]与NPC的关系：P16基因又称多肿瘤抑制基因(MTS1)。其抑癌机理与细胞周期调控密切相关。体外研究证实，P16蛋白能特异抑制CDK4活性，使之不能解除Rb基因对转录因子的抑制阻止细胞从G1期进入S期，抑制细胞增殖从而达到抑癌目的。而当P16由于突变而不能正常表达，不能竞争结合CDK4阻止细胞分裂时，增生的细胞失去控制向癌变发展。本研究20例正常鼻咽粘膜上皮P16表达18例阳性，而NPC中阳性率仅为28.8%(21/73)，且与T分期，临床分期及颈淋巴结转移相关(P<0.05)。这表明P16基因失活与NPC的发生、发展及浸润转移有关。
, 百拇医药
3.2 bcl-2基因与NPC：bcl-2基因是目前已明确的抑凋亡基因[3]，通过抑制氧化过程及其它基因蛋白产物的作用，阻止细胞凋亡[4,5]。本组资料显示NPC中bcl-2阳性率为81%(59/73)，正常鼻咽粘膜上皮为15%(3/20)，证实bcl-2的抗调亡作用在NPC的发生过程中起重要作用。实验证明与NPC发生有关的EB病毒LMP-1蛋白能使细胞株中BCL-2蛋白表达增强，从而抑制EB病毒感染导致的细胞凋亡而发生肿瘤[6]。
3.3 nm23基因与NPC：现已证明，nm23蛋白通过参与调节细胞内微管系统的状态以及通过影响G蛋白的信号传递发挥负性调节作用，从而达到抑制肿瘤转移[7]，与细胞凋亡可能也有直接或间接的关系。本研究资料表明，nm23与NPC的病灶大小及浸润无关，其表达与正常鼻咽粘膜上皮无差别，推测nm23基因在NPC的发生过程中作用不大，而与颈淋巴转移相关。
, 百拇医药
本研究NPC中bcl-2蛋白出现异常表达，表明其对鼻咽上皮的良恶性诊断有重要的临床参考价值。同样，通过对P16蛋白的检测亦可以作为鼻咽上皮良恶性病变的一个参考。我们认为鼻咽粘膜上皮发生癌变，可能与bcl-2蛋白的过度表达及P16基因的部分缺失而致其细胞凋亡受抑制有关。
参考文献
1 Marx J.New tumor suppressor may rival p53. Science，1994,264(15):344～345
2 Kamb A,Gruis NA,Jane WF，et al. A cell cycel regulator potentially involved in genesis of many tumor types. Science， 1994,264(5):436～440
3 Tusjimoto Y,Cossman J,Jaffe E.Involvement of the bcl-2 gene in human follicular lomphoma. Science，1985,228(4706):1440～1443
, 百拇医药
4 Veis DJ,Sorenson CM,Shutter JR，et al.Bcl-2 deficient mice demonstrate fulminant lymphoid apioptosis,polycystic kidneys,and hypopigmented hair.Cell， 1993,75(2):229～240
5 Miyashita T,Reed TC.Bcl-2 oncoprotein block chemotherapy induced apoptosis in a human leukemia cell line.Blood，1993,81(1):151～157
6 Henderson S, Rowe M,Gregory C et al.Induction of bcl-2 expression by Epstein-Bair virus latent membrane protein 1protects infected β cells from programmed cell death. Cell，1991,65(7):1107～1115
7 Chen WJ,David WK,Michad SB. cDNA cloning and expression of the peptide-binding β subunit of rat p21ras farmesyl transferse,the counterpart of yeast DPR1/RAM1. Cell， 1991,66(2)：327～326
收稿日期：1999-03-10, http://www.100md.com