促红细胞生成素对尿毒症患者中性粒细胞功能的影响
作者：姚峥 陈秉良
单位：100053 北京宣武医院肾内科
关键词：促红细胞生成素；中性粒细胞；肾功能不全；尿毒症
临床内科杂志/990513 【摘要】 目的 观察促红细胞生成素(EPO)对尿毒症患者中性粒细胞功能的影响。方法 分三组进行中性粒细胞墨汁吞噬试验、粘附试验和硝基兰四唑试验(NBT)。结果 三组吞噬率分别为38.7%±6.4%、16.0%±5.1%和21.9%±6.3%(P<0.05);粘附率分别为67.6%±10.7%、37.4%±15.1%和53.3%±15.9%(P<0.05);NBT阳性率分别为4.3%±2.7%、3.6%±2.9%和5.8%±4.5%(P>0.05)。结论 尿毒症患者中性粒细胞功能受损,接受EPO治疗后,其功能得到改善。
The effect of erythropoietin on function of neutrophils in uremic patients.
, 百拇医药
Yao Zheng,Chen Bingliang.
Beijing Xuanwu Hospital,Beijing 100053
【Abstract】 Objective To study the effect of erythropoietin(EPO)on functions of neutrophils in uremic patients.Methods Subjects were divided into three groups,including normal control,non-EPO-treated and EPO-treated.Phagocytosis,adherence and nitroblue-tetrazolium dye test were performed.Results Phagocytosis rate was 38.7%±6.4%,16.0%±5.1% and 21.9%±6.3%,respectively(P<0.05).adherence rate was 67.6%±10.7%,37.4%±15.1% and 53.3%±15.9%,respectively(P<0.05).NBT reduction was 4.3%±2.7%,3.6%±2.9% and 5.8%±4.5%,respectively(P>0.05).Conclusion Depressed functions of neutrophils in uremic patients were improved by EPO treatment.
, 百拇医药
【Keywords】 Erythropoietin; Neutrophil Renal failure;Uremia
感染是尿毒症患者主要并发症之一,在EPO治疗肾性贫血中,随着病人网织红细胞和血红蛋白升高,生活质量改善,同时感染率降低。本文就EPO对尿毒症患者中性粒细胞功能的影响进行了探讨。
对象与方法
一、对象:(1)正常组26人,男性11人,女性15人,年龄18岁～68岁,平均33岁。(2)未用EPO组:未用EPO治疗的尿毒症患者30例,男性13例,女性17例,年龄29岁～77岁,平均56岁。原发病分别为高血压病13例,糖尿病6例,慢性肾小球肾炎8例,多囊肾3例。临床检验结果见表1。治疗包括保守治疗和血液透析。(3)EPO组:用EPO治疗的尿毒症患者20例,男性10例,女性10例,年龄26岁～74岁,平均48岁。原发病分别为高血压病3例,慢性肾小球肾炎14例,多囊肾2例,紫癜肾1例。临床检验结果见表1。经保守治疗和血液透析,EPO治疗时间3个月至5年,剂量3 000 U皮下注射,每周二次。三组在取血前3周均未发生细菌感染,未使用免疫抑制剂及影响粒细胞功能的药物。
, http://www.100md.com
二、方法
(一)墨汁吞噬试验:肝素抗凝静脉血0.1 ml,加优质过滤墨汁10 μl,混匀,加塞,37℃孵育4小时,推血片,瑞氏染色,镜检。计数100个中性粒细胞,细胞内含墨粒为阳性细胞,计算墨汁吞噬率。
(二)粘附试验:(1)粒细胞分离:肝素抗凝静脉血5 ml,右旋糖酐沉降红细胞,淋巴细胞分离剂分离中性粒细胞,PBS液洗涤,计数,此为粘附前粒细胞数。(2)粒细胞粘附:将粒细胞液1 ml注入装有30个直径4 mm玻璃球的5 ml注射器内,加盖,孵育,计数,此为粘附后的粒细胞数。粘附率=(粘附前粒细胞数-粘附后粒细胞数)/粘附前粒细胞数。
(三)硝基兰四唑(NBT)试验:肝素抗凝静脉血0.1 ml,加0.1%NBT溶液0.1 ml,加塞,37℃孵育10分钟,置室温15分钟推血片,瑞氏染色,镜检。计数100个中性粒细胞,计算NBT阳性率。
, 百拇医药
三、EPO对中性粒细胞功能的影响:三个实验组均做上述三项试验。另外,每一份血样分两组,体外孵育时一组加EPO(1.5u/ml),另一组不加EPO,同时做上述三项试验,观察EPO在体外对中性粒细胞功能的影响。
四、统计学分析:对两组尿毒症患者检验结果进行两样平均数t检验,三个实验组的三项试验结果进行方差齐性检验和方差分析。分别对体外孵育加EPO组与不加EPO组的试验结果做配对t检验。
结果
一、未用EPO组与EPO治疗组临床检验结果比较:见表1。两组检验结果比较无显著性差异。
二、EPO对尿毒症患者中性粒细胞功能影响:见表2。尿毒症患者中性粒细胞吞噬率和粘附率低于正常组(P<0.05),EPO治疗的尿毒症患者中性粒细胞吞噬率和粘附率均高于未用EPO治疗组(P<0.05)。三组NBT阳性率比较无显著性差异(P>0.05)。
, 百拇医药
表1 未用EPO组与EPO治疗组临床检测结果(
±s) 项 目
未用EPO组(30例)
EPO治疗组
(20例)
Hb(g/L)
77.9±14.9
80.1±14.1
HCT(%)
21.8±4.7
23.1±3.7
, http://www.100md.com
WBC(×109/L)
4.24±1.47
3.85±1.03
PLT(×1012/L)
152.9±60.8
132.0±37.2
BUN(mmol/L)
25.99±10.14
27.92±6.53
血肌酐(μmol/L)
783.22±450.84
, http://www.100md.com
998.04±197.13
血钙(mg%)
8.49±0.91
8.38±1.56
血磷(mg%)
6.96±1.90
7.30±2.01
表2 中性粒细胞功能检测结果(±s %) 组 别
吞噬率
粘附率
, http://www.100md.com NBT阳性率
正常组
38.7±6.4
67.6±10.7
4.3±2.7
未用EPO组
16.0±5.1
37.4±15.1
3.6±2.9
EPO治疗组
21.9±6.3
53.5±15.9
, 百拇医药
5.8±4.5
表3 EPO在体外对中性粒细胞功能的影响(±s %)
三、EPO在体外对中性粒细胞功能影响:见表3。仅在未用EPO组,体外孵育加EPO,粒细胞吞噬率高于未加EPO(P<0.05),余无显著性差异(P>0.05)。 组 别
吞噬率
粘附率
NBT阳性率
加EPO
未加EPO
加EPO
, 百拇医药
未加EPO
加EPO
未加EPO
未用EPO组
20.0±5.6
16.0±5.1
38.6±15.5
37.4±15.1
4.7±3.6
3.6±2.9
EPO治疗组
22.5±6.8
, 百拇医药
21.9±6.3
50.5±14.9
53.3±15.9
5.4±4.6
5.8±4.5
讨论
感染是尿毒症患者最常见并发症之一。尿毒症中性粒细胞功能改变与机体感染关系密切。表现为粒细胞粘附、趋化、吞噬和杀菌作用下降[1]。其原因可能为,血浆趋化抑制活性上升[1],趋化抑制物对趋化因子直接作用;血浆含有细胞调理活性的抑制因子[2],粘附分子表达改变[3];粒细胞内抗氧化酶活性改变[4];粒细胞呼吸爆炸减弱,自由基产量下降[5]。
, 百拇医药
本实验结果为尿毒症中性粒细胞吞噬与粘附功能低于正常人,与文献报道相符。同时,我们发现长期EPO治疗,随着血红蛋白的升高,粒细胞吞噬率和粘附率虽未达到正常组范围,但均高于未用EPO组的患者。本结果提示长期使用EPO对尿毒症受损的粒细胞功能确有改善。
关于EPO对中性粒细胞功能的详尽作用机理正处于探讨阶段。Nic Vlgs等人[6]研究EPO对血透病人中性粒细胞呼吸爆炸的影响,发现EPO可提高中性粒细胞对1C-葡萄糖的利用,细胞糖酵解活性增加,使降低的CO2产量明显提高,细胞吞噬功能得到改善,并随治疗时间的延长,这种改善更加明显。EPO具有免疫调节作用,由细胞因子介导。体外研究发现EPO可与IL-3、GM-CSF、IL-1α及集落刺激因子(TSF)相互作用。临床观察发现EPO治疗透析病人贫血时,血红蛋白上升同时伴有INF、TNF、IL-2及CSF增加。另外,EPO免疫调节作用与机体铁负荷改善有关。铁负荷时机体对细菌易感,EPO治疗后,新生成的红细胞增多,铁负荷好转,粒细胞吞噬及杀菌功能改善。EPO在体内与细胞及各种体液因子相互作用极其复杂,本实验EPO在体外单独与粒细胞相互作用,对其影响不大。
, 百拇医药
NBT试验用来检测粒细胞活性氧产生能力,间接反映粒细胞杀菌能力。细菌感染时,NBT阳性率大于10%。文献报道部分长期血透患者NBT阳性率增加[7]。尿毒症患者特异性免疫功能低下,推测NBT阳性率增加是一种代偿。但部分患者NBT阳性率正常或下降,机理不清。本实验三组NBT阳性率增多,低于10%,且三组间没有区别。其原因可能为实验对象均无细菌感染,应对比在感染下三组NBT阳性率及EPO对此影响。
参考文献
[1]Simeon E,William P.Host defenses and immunologic alterations associated with chronic hemodialysis.Ann Inter Med,1980,93(4)∶597.
[2]Kikuchi T,Nigawara K,Sugawara K,et al.Inhibitory factors of serum opsonic activity in serum from patients with chronic renal failure.Ren Fail,1997,19(1)∶137.
, http://www.100md.com
[3]Seaki A,Kaito K,Kobayashi M.Impaired neutrophil function in chronic renal failure dysregulation of surface adhesion melocule expression and phagocytosis.Nippon Jinzo Gakkai Shi,1996,38(2)∶585.
[4]Shurtz R,Mashiach E,Kristal B,et al.Antioxidant enzymes activity in polymorphonuclear leukocytes in chronic renal failure.Nephron,1995,71(2)∶176.
[5]Vanholder R,De-Smet R,Jacobs V,et al.Uremic toxic retention solutes depress polymorphonuclear respones to phagocytosis.Nephrol Dial Transplant,1994,9(9)∶1271.
, 百拇医药
[6]Nic V,Raymond V,Severin R.Correction of deficient phagocytosis during erythropoietin treatment in maintenance hemodialysis patients.Am J Kid Dis,1992,616(4)∶358.
[7]Sutowicz W,Komorowsha Z,Hawicki Z,et al.The enzymetic activity and NBT reduction test of granulocytes in untreated and dialysed uremic patients.Acta Haemta,1979,61∶144.
(收稿:1999-01-20 修回:1999-05-13), 百拇医药
单位：100053 北京宣武医院肾内科
关键词：促红细胞生成素；中性粒细胞；肾功能不全；尿毒症
临床内科杂志/990513 【摘要】 目的 观察促红细胞生成素(EPO)对尿毒症患者中性粒细胞功能的影响。方法 分三组进行中性粒细胞墨汁吞噬试验、粘附试验和硝基兰四唑试验(NBT)。结果 三组吞噬率分别为38.7%±6.4%、16.0%±5.1%和21.9%±6.3%(P<0.05);粘附率分别为67.6%±10.7%、37.4%±15.1%和53.3%±15.9%(P<0.05);NBT阳性率分别为4.3%±2.7%、3.6%±2.9%和5.8%±4.5%(P>0.05)。结论 尿毒症患者中性粒细胞功能受损,接受EPO治疗后,其功能得到改善。
The effect of erythropoietin on function of neutrophils in uremic patients.
, 百拇医药
Yao Zheng,Chen Bingliang.
Beijing Xuanwu Hospital,Beijing 100053
【Abstract】 Objective To study the effect of erythropoietin(EPO)on functions of neutrophils in uremic patients.Methods Subjects were divided into three groups,including normal control,non-EPO-treated and EPO-treated.Phagocytosis,adherence and nitroblue-tetrazolium dye test were performed.Results Phagocytosis rate was 38.7%±6.4%,16.0%±5.1% and 21.9%±6.3%,respectively(P<0.05).adherence rate was 67.6%±10.7%,37.4%±15.1% and 53.3%±15.9%,respectively(P<0.05).NBT reduction was 4.3%±2.7%,3.6%±2.9% and 5.8%±4.5%,respectively(P>0.05).Conclusion Depressed functions of neutrophils in uremic patients were improved by EPO treatment.
, 百拇医药
【Keywords】 Erythropoietin; Neutrophil Renal failure;Uremia
感染是尿毒症患者主要并发症之一,在EPO治疗肾性贫血中,随着病人网织红细胞和血红蛋白升高,生活质量改善,同时感染率降低。本文就EPO对尿毒症患者中性粒细胞功能的影响进行了探讨。
对象与方法
一、对象:(1)正常组26人,男性11人,女性15人,年龄18岁～68岁,平均33岁。(2)未用EPO组:未用EPO治疗的尿毒症患者30例,男性13例,女性17例,年龄29岁～77岁,平均56岁。原发病分别为高血压病13例,糖尿病6例,慢性肾小球肾炎8例,多囊肾3例。临床检验结果见表1。治疗包括保守治疗和血液透析。(3)EPO组:用EPO治疗的尿毒症患者20例,男性10例,女性10例,年龄26岁～74岁,平均48岁。原发病分别为高血压病3例,慢性肾小球肾炎14例,多囊肾2例,紫癜肾1例。临床检验结果见表1。经保守治疗和血液透析,EPO治疗时间3个月至5年,剂量3 000 U皮下注射,每周二次。三组在取血前3周均未发生细菌感染,未使用免疫抑制剂及影响粒细胞功能的药物。
, http://www.100md.com
二、方法
(一)墨汁吞噬试验:肝素抗凝静脉血0.1 ml,加优质过滤墨汁10 μl,混匀,加塞,37℃孵育4小时,推血片,瑞氏染色,镜检。计数100个中性粒细胞,细胞内含墨粒为阳性细胞,计算墨汁吞噬率。
(二)粘附试验:(1)粒细胞分离:肝素抗凝静脉血5 ml,右旋糖酐沉降红细胞,淋巴细胞分离剂分离中性粒细胞,PBS液洗涤,计数,此为粘附前粒细胞数。(2)粒细胞粘附:将粒细胞液1 ml注入装有30个直径4 mm玻璃球的5 ml注射器内,加盖,孵育,计数,此为粘附后的粒细胞数。粘附率=(粘附前粒细胞数-粘附后粒细胞数)/粘附前粒细胞数。
(三)硝基兰四唑(NBT)试验:肝素抗凝静脉血0.1 ml,加0.1%NBT溶液0.1 ml,加塞,37℃孵育10分钟,置室温15分钟推血片,瑞氏染色,镜检。计数100个中性粒细胞,计算NBT阳性率。
, 百拇医药
三、EPO对中性粒细胞功能的影响:三个实验组均做上述三项试验。另外,每一份血样分两组,体外孵育时一组加EPO(1.5u/ml),另一组不加EPO,同时做上述三项试验,观察EPO在体外对中性粒细胞功能的影响。
四、统计学分析:对两组尿毒症患者检验结果进行两样平均数t检验,三个实验组的三项试验结果进行方差齐性检验和方差分析。分别对体外孵育加EPO组与不加EPO组的试验结果做配对t检验。
结果
一、未用EPO组与EPO治疗组临床检验结果比较:见表1。两组检验结果比较无显著性差异。
二、EPO对尿毒症患者中性粒细胞功能影响:见表2。尿毒症患者中性粒细胞吞噬率和粘附率低于正常组(P<0.05),EPO治疗的尿毒症患者中性粒细胞吞噬率和粘附率均高于未用EPO治疗组(P<0.05)。三组NBT阳性率比较无显著性差异(P>0.05)。
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表1 未用EPO组与EPO治疗组临床检测结果(
±s) 项 目未用EPO组(30例)
EPO治疗组
(20例)
Hb(g/L)
77.9±14.9
80.1±14.1
HCT(%)
21.8±4.7
23.1±3.7
, http://www.100md.com
WBC(×109/L)
4.24±1.47
3.85±1.03
PLT(×1012/L)
152.9±60.8
132.0±37.2
BUN(mmol/L)
25.99±10.14
27.92±6.53
血肌酐(μmol/L)
783.22±450.84
, http://www.100md.com
998.04±197.13
血钙(mg%)
8.49±0.91
8.38±1.56
血磷(mg%)
6.96±1.90
7.30±2.01
表2 中性粒细胞功能检测结果(
±s %) 组 别吞噬率
粘附率
, http://www.100md.com NBT阳性率
正常组
38.7±6.4
67.6±10.7
4.3±2.7
未用EPO组
16.0±5.1
37.4±15.1
3.6±2.9
EPO治疗组
21.9±6.3
53.5±15.9
, 百拇医药
5.8±4.5
表3 EPO在体外对中性粒细胞功能的影响(
±s %)三、EPO在体外对中性粒细胞功能影响:见表3。仅在未用EPO组,体外孵育加EPO,粒细胞吞噬率高于未加EPO(P<0.05),余无显著性差异(P>0.05)。 组 别
吞噬率
粘附率
NBT阳性率
加EPO
未加EPO
加EPO
, 百拇医药
未加EPO
加EPO
未加EPO
未用EPO组
20.0±5.6
16.0±5.1
38.6±15.5
37.4±15.1
4.7±3.6
3.6±2.9
EPO治疗组
22.5±6.8
, 百拇医药
21.9±6.3
50.5±14.9
53.3±15.9
5.4±4.6
5.8±4.5
讨论
感染是尿毒症患者最常见并发症之一。尿毒症中性粒细胞功能改变与机体感染关系密切。表现为粒细胞粘附、趋化、吞噬和杀菌作用下降[1]。其原因可能为,血浆趋化抑制活性上升[1],趋化抑制物对趋化因子直接作用;血浆含有细胞调理活性的抑制因子[2],粘附分子表达改变[3];粒细胞内抗氧化酶活性改变[4];粒细胞呼吸爆炸减弱,自由基产量下降[5]。
, 百拇医药
本实验结果为尿毒症中性粒细胞吞噬与粘附功能低于正常人,与文献报道相符。同时,我们发现长期EPO治疗,随着血红蛋白的升高,粒细胞吞噬率和粘附率虽未达到正常组范围,但均高于未用EPO组的患者。本结果提示长期使用EPO对尿毒症受损的粒细胞功能确有改善。
关于EPO对中性粒细胞功能的详尽作用机理正处于探讨阶段。Nic Vlgs等人[6]研究EPO对血透病人中性粒细胞呼吸爆炸的影响,发现EPO可提高中性粒细胞对1C-葡萄糖的利用,细胞糖酵解活性增加,使降低的CO2产量明显提高,细胞吞噬功能得到改善,并随治疗时间的延长,这种改善更加明显。EPO具有免疫调节作用,由细胞因子介导。体外研究发现EPO可与IL-3、GM-CSF、IL-1α及集落刺激因子(TSF)相互作用。临床观察发现EPO治疗透析病人贫血时,血红蛋白上升同时伴有INF、TNF、IL-2及CSF增加。另外,EPO免疫调节作用与机体铁负荷改善有关。铁负荷时机体对细菌易感,EPO治疗后,新生成的红细胞增多,铁负荷好转,粒细胞吞噬及杀菌功能改善。EPO在体内与细胞及各种体液因子相互作用极其复杂,本实验EPO在体外单独与粒细胞相互作用,对其影响不大。
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NBT试验用来检测粒细胞活性氧产生能力,间接反映粒细胞杀菌能力。细菌感染时,NBT阳性率大于10%。文献报道部分长期血透患者NBT阳性率增加[7]。尿毒症患者特异性免疫功能低下,推测NBT阳性率增加是一种代偿。但部分患者NBT阳性率正常或下降,机理不清。本实验三组NBT阳性率增多,低于10%,且三组间没有区别。其原因可能为实验对象均无细菌感染,应对比在感染下三组NBT阳性率及EPO对此影响。
参考文献
[1]Simeon E,William P.Host defenses and immunologic alterations associated with chronic hemodialysis.Ann Inter Med,1980,93(4)∶597.
[2]Kikuchi T,Nigawara K,Sugawara K,et al.Inhibitory factors of serum opsonic activity in serum from patients with chronic renal failure.Ren Fail,1997,19(1)∶137.
, http://www.100md.com
[3]Seaki A,Kaito K,Kobayashi M.Impaired neutrophil function in chronic renal failure dysregulation of surface adhesion melocule expression and phagocytosis.Nippon Jinzo Gakkai Shi,1996,38(2)∶585.
[4]Shurtz R,Mashiach E,Kristal B,et al.Antioxidant enzymes activity in polymorphonuclear leukocytes in chronic renal failure.Nephron,1995,71(2)∶176.
[5]Vanholder R,De-Smet R,Jacobs V,et al.Uremic toxic retention solutes depress polymorphonuclear respones to phagocytosis.Nephrol Dial Transplant,1994,9(9)∶1271.
, 百拇医药
[6]Nic V,Raymond V,Severin R.Correction of deficient phagocytosis during erythropoietin treatment in maintenance hemodialysis patients.Am J Kid Dis,1992,616(4)∶358.
[7]Sutowicz W,Komorowsha Z,Hawicki Z,et al.The enzymetic activity and NBT reduction test of granulocytes in untreated and dialysed uremic patients.Acta Haemta,1979,61∶144.
(收稿:1999-01-20 修回:1999-05-13), 百拇医药