反义HER-2/neu寡聚核苷酸对卵巢肿瘤细胞增殖的影响
作者：吴林 严隽鸿 杨有文* 金由辛
单位：吴林 严隽鸿，上海第二医科大学仁济医院妇产科(上海，200001)；杨有文*，首都医科大学北京神经科学研究所(北京，100054)；金由辛，中国科学院上海生物化学研究所 *通讯作者
关键词：反义寡聚核苷酸；HER2/neu；卵巢肿瘤
癌症990535
中图分类号：Q74 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(1999)05-0601-01
在卵巢肿瘤发生、发展过程中HER-2/neu基因呈高水平表达状态〔1，2〕，通过其反义寡聚核苷酸处理卵巢肿瘤细胞株3ao 10/3以探讨靶基因表达水平降低对卵巢肿瘤细胞增殖的影响。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 材料
卵巢肿瘤细胞株3ao 10/3购自中科院细胞所，反义HER-2/neu寡聚核苷酸自行设计合成，序列为5'>CAGCCCTGGTAGAGGTGGC<3'，HER-2/neu兔抗人多抗，羊抗兔IgG-HRP系华美生物工程公司产品。
1.2 细胞计数
100ml的6个培养瓶中接种7.0×105个3ao 10/3卵巢肿瘤细胞，培养过夜后，向其中3个培养瓶加2ml含20μmol反义HER-2/neu寡聚核苷酸和15%小牛血清的RPMI 1640培养液，另3瓶加等量的含15%小牛血清的RPMI 1640培养液。12小时后每瓶均补加4ml培养液。3天后收集细胞计数。统计学检验采用t检验。
1.3 Western印迹法
, 百拇医药
参考文献〔3〕进行。
2 结果
2.1 反义HER-2/neu寡聚核苷酸对卵巢肿瘤细胞增殖的影响
实验至第3天，反义HER-2/neu寡聚核苷酸处理组细胞总数为6.19×106±0.613×106，未处理组为9.23×106±0.66×106。反义HER-2/neu寡聚核苷酸处理组细胞总数显著少于对照组(P<0.05)。
2.2 反义HER-2/neu寡聚核苷酸对HER-2/neu蛋白表达的影响
Western印迹结果表明经反义HER-2/neu寡聚核苷酸作用的卵巢肿瘤细胞，HER-2/neu蛋白表达水平低于未处理组(图1)。
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图1 Westernblot结果
1.分子量标准；2.示处理的卵巢肿瘤细胞；
3.反义HER-2/neu寡聚核苷酸作用的卵巢肿瘤细胞
3 讨论
HER-2/neu基因在卵巢肿瘤发生中的异常表现为过度表达〔2，4〕。近年尽管对其进行了大量的研究，但仍不清楚HER-2/neu基因高水平表达是卵巢肿瘤发生的原因还是其发生的结果。因此有必要寻找一种方法对其进行判别。
反义寡聚核苷酸能与双螺旋DNA结合形成三股螺旋或与局部解链的DNA单链结合而抑制DNA的复制和转录，也可与mRNA靶序列结合而阻断mRNA的加工、成熟、核-浆转移和翻译，从而对靶mRNA的表达实现抑制作用。本研究以HER-2/neu基因的反义寡聚核苷酸处理卵巢肿瘤细胞株3ao 10/3，发现反义HER-2/neu寡聚核苷酸不仅降低HER-2/neu基因的表达水平，而且抑制卵巢肿瘤细胞的增殖(P<0.05)，提示HER-2/neu基因过度表达可能是某些卵巢肿瘤发生的原因之一。
, 百拇医药
〔参考文献〕
〔1〕 Giannios J,Ioannidou-MouzakaL. Molecular aspects of breast and ovarian cancer〔J〕. Eur J Gynaecol Oncol,1997,18(5):387～393.
〔2〕 Bast RC Jr,Boyer CM,Jacobs I,et al. Cell growth regulation in epithelial ovarian cancer〔J〕. Cancer,1993,71(4suppl):1597～1601.
〔3〕 Aosubel FM,Brent R,Kinggstry RE,et al. Short protocols in molecular biology〔M〕. Published by Greene Publishing Associates and Wiley Interscience,1989:304～306.
〔4〕 King BL,Carter D,Foellmer HC,et al. Neu proto-oncogene amplification and expression in ovarian adenocarcinoma cell lines〔J〕. Am J Pathol,1992,140(1):23～31.
收稿日期：1998-09-30；修回日期：1999-05-20, http://www.100md.com
单位：吴林 严隽鸿，上海第二医科大学仁济医院妇产科(上海，200001)；杨有文*，首都医科大学北京神经科学研究所(北京，100054)；金由辛，中国科学院上海生物化学研究所 *通讯作者
关键词：反义寡聚核苷酸；HER2/neu；卵巢肿瘤
癌症990535
中图分类号：Q74 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(1999)05-0601-01
在卵巢肿瘤发生、发展过程中HER-2/neu基因呈高水平表达状态〔1，2〕，通过其反义寡聚核苷酸处理卵巢肿瘤细胞株3ao 10/3以探讨靶基因表达水平降低对卵巢肿瘤细胞增殖的影响。
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1 材料与方法
1.1 材料
卵巢肿瘤细胞株3ao 10/3购自中科院细胞所，反义HER-2/neu寡聚核苷酸自行设计合成，序列为5'>CAGCCCTGGTAGAGGTGGC<3'，HER-2/neu兔抗人多抗，羊抗兔IgG-HRP系华美生物工程公司产品。
1.2 细胞计数
100ml的6个培养瓶中接种7.0×105个3ao 10/3卵巢肿瘤细胞，培养过夜后，向其中3个培养瓶加2ml含20μmol反义HER-2/neu寡聚核苷酸和15%小牛血清的RPMI 1640培养液，另3瓶加等量的含15%小牛血清的RPMI 1640培养液。12小时后每瓶均补加4ml培养液。3天后收集细胞计数。统计学检验采用t检验。
1.3 Western印迹法
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参考文献〔3〕进行。
2 结果
2.1 反义HER-2/neu寡聚核苷酸对卵巢肿瘤细胞增殖的影响
实验至第3天，反义HER-2/neu寡聚核苷酸处理组细胞总数为6.19×106±0.613×106，未处理组为9.23×106±0.66×106。反义HER-2/neu寡聚核苷酸处理组细胞总数显著少于对照组(P<0.05)。
2.2 反义HER-2/neu寡聚核苷酸对HER-2/neu蛋白表达的影响
Western印迹结果表明经反义HER-2/neu寡聚核苷酸作用的卵巢肿瘤细胞，HER-2/neu蛋白表达水平低于未处理组(图1)。
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图1 Westernblot结果
1.分子量标准；2.示处理的卵巢肿瘤细胞；
3.反义HER-2/neu寡聚核苷酸作用的卵巢肿瘤细胞
3 讨论
HER-2/neu基因在卵巢肿瘤发生中的异常表现为过度表达〔2，4〕。近年尽管对其进行了大量的研究，但仍不清楚HER-2/neu基因高水平表达是卵巢肿瘤发生的原因还是其发生的结果。因此有必要寻找一种方法对其进行判别。
反义寡聚核苷酸能与双螺旋DNA结合形成三股螺旋或与局部解链的DNA单链结合而抑制DNA的复制和转录，也可与mRNA靶序列结合而阻断mRNA的加工、成熟、核-浆转移和翻译，从而对靶mRNA的表达实现抑制作用。本研究以HER-2/neu基因的反义寡聚核苷酸处理卵巢肿瘤细胞株3ao 10/3，发现反义HER-2/neu寡聚核苷酸不仅降低HER-2/neu基因的表达水平，而且抑制卵巢肿瘤细胞的增殖(P<0.05)，提示HER-2/neu基因过度表达可能是某些卵巢肿瘤发生的原因之一。
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〔参考文献〕
〔1〕 Giannios J,Ioannidou-MouzakaL. Molecular aspects of breast and ovarian cancer〔J〕. Eur J Gynaecol Oncol,1997,18(5):387～393.
〔2〕 Bast RC Jr,Boyer CM,Jacobs I,et al. Cell growth regulation in epithelial ovarian cancer〔J〕. Cancer,1993,71(4suppl):1597～1601.
〔3〕 Aosubel FM,Brent R,Kinggstry RE,et al. Short protocols in molecular biology〔M〕. Published by Greene Publishing Associates and Wiley Interscience,1989:304～306.
〔4〕 King BL,Carter D,Foellmer HC,et al. Neu proto-oncogene amplification and expression in ovarian adenocarcinoma cell lines〔J〕. Am J Pathol,1992,140(1):23～31.
收稿日期：1998-09-30；修回日期：1999-05-20, http://www.100md.com