胰腺癌MMP-2和TIMP-2表达与预后的关系
作者：贾林 袁世珍 骆福添
单位：贾林 袁世珍，中山医科大学孙逸仙纪念医院消化内科(广州，510120)；骆福添，中山医科大学统计学教研室(广州，510089)
关键词：胰腺肿瘤；金属基质蛋白酶-2；金属基质蛋白酶抑制剂-2；肿瘤转移；预后；免疫组织化学
癌症990516 【摘 要】 目的：探讨胰腺癌组织基质质属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)表达与肿瘤侵袭转移和预后的关系。方法：通过免疫组化方法检测35例胰腺癌病理标本和10正常胰腺标本MMP-2和TIMP-2的半定量表达情况及其与肿瘤临床病理参数和预后的关系，生存分析采用Kaplan-meier方法。结果：胰腺癌MMP-2和TIMP-2表达阳性率明显高于正常对照组，与淋巴结转移和临床分级密切相关，但与胰腺癌的分化程度无关，Kaplan-meier分析发现MMP-2和TIMP-2高表达患者的生存时间明显低于MMP2和TIMP2低表达患者(P<0.001)。结论：胰腺癌MMP-2和TIMP-2表达与肿瘤侵袭转移和预后密切相关，有助于确定术后治疗方案。
, 百拇医药
中图分类号：R735.9 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)05-0541-04
Prognostic values of matrix metalloproteinase-2 and tissue inhibitor of metalloproteinase-2 expression in pancreatic cancer
JIA Lin,YUAN Shi-zhen,LUO Fu-tian
Department of Digestive Disease,Sun Yat-sen Memorial Hospital,Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510120, P.R. China
【Abstract】 Objective：To investigate the roles of matrix metalloproteinase-2(MMP-2) and tissue inhibitor of metalloproteinase-2(TIMP-2) in tumor invasion and metastasis or as a prognostic factor in patients with pancreatic cancer. Methods：Tissues were obtained from 35 patients with pancreatic cancer and 10 patients without pancreatic disease. Expression of MMP-2 and TIMP-2 was examined by immunohistochemical technique and scored semiquantitatively(score 0-3) in carcinoma cells, and the results were correlated with clinicopathological tumor parameters.Survival analyses were done using the Kaplan-Meire method. Results：Expression of MMP-2 and TIMP-2 was significantly higher in patients with pancreatic cancer than that in normal persons. Expression of MMP-2 and TIMP-2 was significantly correlated with lymph node metastasis and TNM clinical staging sysfem,and did not correlate with histologic classification. Kaplan-Meire analysis revealed an association of increasing MMP-2 and TIMP-2 expression with worse prognosis (P<0.001). Conclusion：MMP-2 and TIMP-2 are believed to contribute to the invasive properties of pancreatic cancer,which can be used to evaluate the prognosis of patients and may be helpful in designing treatment protocols.
, 百拇医药
Key words：Mmatrix metalloproteinase-2;Tissue inhibitor of metalloproteinase-2;Pancreatic cancer;Tumor invasion;Prognosis;Immunohistochemistry
肿瘤从原位增殖到侵袭转移的演变过程中，肿瘤细胞必须具备降解细胞外基质(ECM)的能力，基质金属蛋白酶家族(MMPs)和基质金属蛋白酶抑制剂家族(TIMPs)为调节细胞基底膜和细胞外基质完整性的重要因素，与肿瘤的侵袭转移和预后密切相关〔1～3〕，国内外尚未见胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2研究与预后关系的报告。我们通过免疫组织化学染色观察人胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2的表达情况及其与侵袭转移的关系，旨在探讨MMP-2和TIMP-2表达对胰腺癌患者预后的影响。
1 材料与方法
, http://www.100md.com 1.1 标本
35例胰腺癌石蜡标本来自中山医科大学肿瘤医院和孙逸仙纪念医院1969年10月至1997年12月期间的手术切除或活检标本，男性21例，女性14例，所有标本均经病理证实，并对患者进行密切随访。其中高分化腺癌21例、低分化腺癌14例；TNM分期标准Ⅰ和Ⅱ期有18例，Ⅲ和Ⅳ有17例；发生淋巴结转移有19例，未发生淋巴结转移者占16例。10例正常胰腺标本来自意外死亡者。
术后至少每半年对患者随访检查一次，包括体检，血清标志物检测(如CEA、Ca19-9)，腹部超声或CT检查等，并仔细记录患者病情、治疗情况、死亡原因和生存时间，随访截止时间为1997年12月31日。
1.2 免疫组织化学方法
采用SP方法，DAB染色，加强型SP免疫组化试剂盒购自福州迈新公司，一抗为鼠抗人MMP-2和TIMP-2单克隆抗体(美国Oncogen公司产品)，工作浓度为1∶50，TIMP检测需置标本于0.01mol/L枸椽酸钠缓冲液(pH为6.0±0.1)的不锈钢高压锅内进行抗原修复，而MMP-2检测无须特殊处理，用PBS代替一抗作为阴性对照，乳腺癌标本作为阳性对照。如细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性，阳性计数仅限于肿瘤细胞染色，基质染色则予除外。高倍镜下取4个不同视野各计数200个细胞，按阳性细胞所占的百分比进行半定量：0分(阴性)，1分(1%～29%)，2分(30%～69%)，3分(70%～100%)。
, 百拇医药
1.3 统计学分析
计量和计数资料比较分别采用t检检和χ2检验，生存过程描述采用Kaplan-meier生存曲线法，并行Log-rank检验，当P<0.05，表明显著性差异。全部资料储存于P133 586型微机内，建立SPSS关系型数据库进行整理，应用SPSS统计软件包进行分析。
2 结果
2.1 胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2的表达
研究发现胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2的表达均主要位于肿瘤细胞的胞浆，基质细胞表达较少。35例患者中MMP-2中度和强度阳性(2/3分)、弱阳性(1分)和阴性(0分)者分别有19例(54.29%)、10例(28.57%)和6例(17.14%)；10例正常胰腺组织表达微弱阳性者仅有2例(20%)，余均阴性，两组比较有极显著性差异，P<0.001(见图1)。胰腺癌组织TIMP-2的表达中度和强度阳性、弱阳性和阴性分别为25例(71.42%)、5例(14.29%)和5例(14.29%)，MMP-2和TIMP-2同时有中重度表达的标本有18例(51.43%)；仅10%的正常胰腺组织表达弱阳性的TIMP-2，两组有显著性差异，P<0.001(见图2)，提示大多胰腺癌组织存在MMP-2和TIMP-2过度表达。
, 百拇医药
图1 胰腺高分化腺癌。图示MMP-2染色阳性主
要位于胰腺癌细胞胞浆内，基质和正常胰
腺组织少见阳性，利用MMP-2单抗染色，苏木素复染，SP法×200
图2 胰腺高分化腺癌。(a)图示TIMP-2染色阳性主要位于胰腺癌细胞胞浆内，基质少见阳性，利用TIMP-2单抗染色，苏木素复染，SP法×200。(b)阴性对照，利用PBS代替TIMP-2单抗染色。
2.2 MMP-2和TIMP-2表达与病理类型的关系
表1显示，胰腺高中分化腺癌MMP-2阳性细胞率评分为1.57±1.16，稍低于低分化腺癌的1.71±0.99，两者无显著性差异(P>0.50)；而高化腺癌和低分化腺癌的TIMP-2阳性细胞率评分分别1.71±1.01和2.21±1.05，两者也无显著性差异(P>0.1)，表明胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2表达与病理类型无明显相关。
, http://www.100md.com
2.3 MMP-2和TIMP-2表达与淋巴结转移和临床分级的关系
发生淋巴结转移的胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2阳性细胞率评分均数分别为2.00±0.94和2.21±0.92，分别显著高于未发生淋巴结转移组的1.19±1.11和1.38±0.89，两组均P<0.05；胰腺癌TNM分期Ⅲ+Ⅳ患者的MMP-2和TIMP-2阳性细胞率评分显著高于Ⅰ+Ⅱ分期患者，两组均P<0.05(见表1)，表明胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2表达升高与患者发生淋巴结转移和临床分级密切相关。
表1 胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2的表达与病理指标的关系 病理指标
例数
MMP-2
TIMP-2
, 百拇医药 阳性细胞评分均数
P值
阳性细胞评分均数
P值
淋巴结转移
无
16
1.19±1.11
0.028
1.38±0.89
0.010
有
19
, 百拇医药
2.00±0.94
2.21±0.92
分化程度
分化高
21
1.57±1.16
0.700
1.71±1.01
0.172
分化差
14
1.71±0.99
, http://www.100md.com 2.21±1.05
TNM分期
Ⅰ+Ⅱ
18
1.11±0.90
0.030
1.33±0.84
0.017
Ⅲ+Ⅳ
17
1.82±0.95
2.12±0.99
2.4 MMP-2和TMP-2表达与患者预后的关系
, 百拇医药
Kplan-Meier分析显示MMP-2低表达患者(评分0/1分)有15例，中位生存时间为1462天(约48.73月)，95%CI为601天(284，2640)；而MMP-2高表达患者评分(2/3分)有20例，中位生存时间为161天(约5.33月)，95%CI为36天(90，232)，两组生存时间比较有极显著性差异，P<0.0001(见图3)。TIMP-2低表达患者(评分0/1分)有10例，中位生存时间为2623天(约87.43月)，95%CI为1602天(0，5762)；而TIMP-2高表达患者(评分2/3分)有25例，其中位生存时间为190天(约6.33月)，95%CI为42天(107，273)，两组生存时间比较有极显著性差异(P<0.01，见图4)，表明胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2的过度表达与患者预后不良明显相关。
图3 MMP-2表达与患者预后的Kaplan-meier
, http://www.100md.com
生存曲线，结果显示胰腺癌组织MMP-2
低表达(分数0/1)患者的中位生存时间
为1462天，明显优于MMP-2高表达(分
数2/3)患者的161天，P<0.0001
图4 TIMP-2表达与患者预后的Kaplan-meier
生存曲线，结果显示胰腺癌组织TIMP-2
低表达(分数0/1)患者的中位生存时间
为2623天，明显优于TIMP-2高表达(分
, 百拇医药
数2/3)患者的190天，P<0.01
3 讨论
MMPs是一组锌离子依赖性内肽酶，几乎能降解细胞外基质的所有成分，参与胎儿发育过程中的组织重构(tissue remodeling)和伤口愈合过程中的胶原重构等生理过程。而在病理情况下，MMPs一方面通过降解基底膜和包绕肿瘤的基质，突破基质屏障，促进肿瘤侵袭转移，另一方面则通过毛细胞血管内生、新生血管生成等促进肿瘤生长和扩散，TIMPs则具有抑制MMPs活性的作用。体内外试验也证实MMP的人工合成抑制剂Batimastat(BB-94)能有效抑制肿瘤的生长和转移〔3〕。Ⅳ型胶原酶包括MMP-2和MMP-9两个亚型，KoshibaT等发现在胰腺癌组织及其肝转移结节和正常胰腺组织中均可表达MMP-9，而MMP-2则仅在所有胰腺癌组织及其转移结节中表达，正常胰腺则未发现，认为MMP-2对胰腺癌的特异性较高〔4〕。而BramhallSR(1997)进一步发现胰腺癌标本MMP-2表达水平明显高于正常胰腺，仅半数胰腺癌标本表达TIMP-2，MMP-2和TIMP-2同时表达的标本仅50%，认为MMP-2的表达与胰腺癌的恶性表型相关〔5〕。本文免疫组化研究显示胰腺癌组织MMP-2和TIMP表达主要位于肿瘤细胞浆和胞膜，其表达阳性率均明显高于正常胰腺组织，MMP-2和TIMP-2同时中重度阳性的标本达51.43%，但分别有20%和10%的正常胰腺组织可表达弱阳性的MMP-2和TIMP-2。
, 百拇医药
研究发现肿瘤组织MMPs的表达和活性明显高于周围正常组织和良性病变，MMP-2的过度表达与肿瘤的淋巴结转移和血行转移密切相关；酶谱分析显示活性MMP-2的比率与肝癌和胃癌的浸润转移成正相关〔2，6〕。本研究显示胰腺癌淋巴结转移组的MMP-2和TIMP-2阳性细胞率评分显著高于未发生淋巴结转移组，胰腺癌TNM分期Ⅲ+Ⅳ显著高于Ⅰ+Ⅱ分期，但与胰腺癌的分化程度无关，表明胰腺癌组织的MMP-2和TIMP-2表达与患者淋巴结转移和临床分级密切相关。
MMP-2和TIMP-2表达与肿瘤预后关系的研究于近年受到重视，对其预后评估价值尚有争议。胃癌标本免疫组化和生存分析研究发现弥漫型胃癌组织MMP-2高表达组(2/3分)和低表达组0/1分)患者的无病率(disease-free)和总体生存率(cverall survival)有显著性差异(P=0.0056)，MMP-2可作为弥漫型胃癌患者预后的独立预后指标〔2〕。膀胱癌免疫组化研究发现膀胱癌患者MMP-2与患者组织学分级和预后无关，而TIMP-2表达与患者预后密切相关〔7〕。KanayamaHO等(1998)利用RT-PCR方法和Kaplan-Meier分析进一步发现膀胱癌组织MMP-2和TIMP-2的基因均高表达，与膀胱癌肌层浸润密切相关；在膀胱切除组的肌层浸润PT2≤患者中，MMP-2和TIMP-2基因高表达患者的预后明显较低表达患者险恶，并建议用于预后评估和确定术后治疗策略〔1〕。本文首次进行胰腺癌术后标本MMP-2和TIMP-2的表达与预后的关系探讨，Kaplan-Meier分析发现胰癌组织MMP-2和TIMP-2高表达组患者的预后不佳，其生存时间仅为MMP-2低表达组患者生存时间的1/9，提示胰腺组织MMP-2和TIMP-2表达可用于患者的预后评估，对MMP-2和TIMP-2高表达患者应行术后化疗或放疗等辅助治疗措施。
, 百拇医药
总之，本文单因素分析显示胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2表达与胰腺癌的侵袭转移和预后密切相关，MMP-2和TIMP-2高表达患者的预后较差。至于MMP-2和TIMP-2是否为胰腺癌独立的预后评估因素，尚待进一步积累资料和进行COX模型分析。
(致谢中山医科大学孙逸仙纪念医院病理科李海刚医生的指导)
〔参考文献〕
〔1〕 Kanayama HO,Yokota K,Kurokawa Y,et al. Prognostic values of matrix metalloproteinase-2 and tissue inhibitor of metalloproteinase-2 expression in bladder cancer〔J〕. Cancer,1998,82(7)：1359～1366.
〔2〕 Allgayer H,Babic R,Beyer BC,et al. Prognostic relevance of MMP-2(72-kD collagenase Ⅳ) in gastric cancer〔J〕. Oncology,1998,55(2)：152～160.
, 百拇医药
〔3〕 Zervos EE,Norman JG,Gower WR,et al. Matrix metalloproteinase inhibition attenuates human pancreatic cancer growth in vitro and decrease mortality and tumorigenesis in vivo〔J〕. J Surg Res,1997,69(2)：367～371.
〔4〕 Koshiba T,Hosotani R,Wada M,et al. Detection of MMP activity in human pancreatic cancer〔J〕. Surg Today,1997,27(4)：302～304.
〔5〕 Bramhall SR,Neoptolemos JP,Stamp GW,et al. Imbalance of expression of matrix metalloproteinase(MMPs) and tissue inhibition of the matrix metalloproteinase(TIMPs) in human pancreatic carcinoma〔J〕. J Pathol,1997,182(3)：347～355.
〔6〕 卜文、黄晓武、汤钊猷.基质金属白酶-2与肝细胞癌侵袭转移性的关系〔J〕.中华医学杂志，1997，77(9)：661
〔7〕 Grignon DJ,Sakr W,Toth M,et al.High level of tissue inibitor of metalloproteinase-2(TIMP-2)expression associated with poor outcome in invasive bladder cancer〔J〕. Cancer Res, 1996;56(7)：1654～1659.
收稿日期：1999-03-26；修回日期：1999-06-03, 百拇医药
单位：贾林 袁世珍，中山医科大学孙逸仙纪念医院消化内科(广州，510120)；骆福添，中山医科大学统计学教研室(广州，510089)
关键词：胰腺肿瘤；金属基质蛋白酶-2；金属基质蛋白酶抑制剂-2；肿瘤转移；预后；免疫组织化学
癌症990516 【摘 要】 目的：探讨胰腺癌组织基质质属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)表达与肿瘤侵袭转移和预后的关系。方法：通过免疫组化方法检测35例胰腺癌病理标本和10正常胰腺标本MMP-2和TIMP-2的半定量表达情况及其与肿瘤临床病理参数和预后的关系，生存分析采用Kaplan-meier方法。结果：胰腺癌MMP-2和TIMP-2表达阳性率明显高于正常对照组，与淋巴结转移和临床分级密切相关，但与胰腺癌的分化程度无关，Kaplan-meier分析发现MMP-2和TIMP-2高表达患者的生存时间明显低于MMP2和TIMP2低表达患者(P<0.001)。结论：胰腺癌MMP-2和TIMP-2表达与肿瘤侵袭转移和预后密切相关，有助于确定术后治疗方案。
, 百拇医药
中图分类号：R735.9 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)05-0541-04
Prognostic values of matrix metalloproteinase-2 and tissue inhibitor of metalloproteinase-2 expression in pancreatic cancer
JIA Lin,YUAN Shi-zhen,LUO Fu-tian
Department of Digestive Disease,Sun Yat-sen Memorial Hospital,Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510120, P.R. China
【Abstract】 Objective：To investigate the roles of matrix metalloproteinase-2(MMP-2) and tissue inhibitor of metalloproteinase-2(TIMP-2) in tumor invasion and metastasis or as a prognostic factor in patients with pancreatic cancer. Methods：Tissues were obtained from 35 patients with pancreatic cancer and 10 patients without pancreatic disease. Expression of MMP-2 and TIMP-2 was examined by immunohistochemical technique and scored semiquantitatively(score 0-3) in carcinoma cells, and the results were correlated with clinicopathological tumor parameters.Survival analyses were done using the Kaplan-Meire method. Results：Expression of MMP-2 and TIMP-2 was significantly higher in patients with pancreatic cancer than that in normal persons. Expression of MMP-2 and TIMP-2 was significantly correlated with lymph node metastasis and TNM clinical staging sysfem,and did not correlate with histologic classification. Kaplan-Meire analysis revealed an association of increasing MMP-2 and TIMP-2 expression with worse prognosis (P<0.001). Conclusion：MMP-2 and TIMP-2 are believed to contribute to the invasive properties of pancreatic cancer,which can be used to evaluate the prognosis of patients and may be helpful in designing treatment protocols.
, 百拇医药
Key words：Mmatrix metalloproteinase-2;Tissue inhibitor of metalloproteinase-2;Pancreatic cancer;Tumor invasion;Prognosis;Immunohistochemistry
肿瘤从原位增殖到侵袭转移的演变过程中，肿瘤细胞必须具备降解细胞外基质(ECM)的能力，基质金属蛋白酶家族(MMPs)和基质金属蛋白酶抑制剂家族(TIMPs)为调节细胞基底膜和细胞外基质完整性的重要因素，与肿瘤的侵袭转移和预后密切相关〔1～3〕，国内外尚未见胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2研究与预后关系的报告。我们通过免疫组织化学染色观察人胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2的表达情况及其与侵袭转移的关系，旨在探讨MMP-2和TIMP-2表达对胰腺癌患者预后的影响。
1 材料与方法
, http://www.100md.com 1.1 标本
35例胰腺癌石蜡标本来自中山医科大学肿瘤医院和孙逸仙纪念医院1969年10月至1997年12月期间的手术切除或活检标本，男性21例，女性14例，所有标本均经病理证实，并对患者进行密切随访。其中高分化腺癌21例、低分化腺癌14例；TNM分期标准Ⅰ和Ⅱ期有18例，Ⅲ和Ⅳ有17例；发生淋巴结转移有19例，未发生淋巴结转移者占16例。10例正常胰腺标本来自意外死亡者。
术后至少每半年对患者随访检查一次，包括体检，血清标志物检测(如CEA、Ca19-9)，腹部超声或CT检查等，并仔细记录患者病情、治疗情况、死亡原因和生存时间，随访截止时间为1997年12月31日。
1.2 免疫组织化学方法
采用SP方法，DAB染色，加强型SP免疫组化试剂盒购自福州迈新公司，一抗为鼠抗人MMP-2和TIMP-2单克隆抗体(美国Oncogen公司产品)，工作浓度为1∶50，TIMP检测需置标本于0.01mol/L枸椽酸钠缓冲液(pH为6.0±0.1)的不锈钢高压锅内进行抗原修复，而MMP-2检测无须特殊处理，用PBS代替一抗作为阴性对照，乳腺癌标本作为阳性对照。如细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性，阳性计数仅限于肿瘤细胞染色，基质染色则予除外。高倍镜下取4个不同视野各计数200个细胞，按阳性细胞所占的百分比进行半定量：0分(阴性)，1分(1%～29%)，2分(30%～69%)，3分(70%～100%)。
, 百拇医药
1.3 统计学分析
计量和计数资料比较分别采用t检检和χ2检验，生存过程描述采用Kaplan-meier生存曲线法，并行Log-rank检验，当P<0.05，表明显著性差异。全部资料储存于P133 586型微机内，建立SPSS关系型数据库进行整理，应用SPSS统计软件包进行分析。
2 结果
2.1 胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2的表达
研究发现胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2的表达均主要位于肿瘤细胞的胞浆，基质细胞表达较少。35例患者中MMP-2中度和强度阳性(2/3分)、弱阳性(1分)和阴性(0分)者分别有19例(54.29%)、10例(28.57%)和6例(17.14%)；10例正常胰腺组织表达微弱阳性者仅有2例(20%)，余均阴性，两组比较有极显著性差异，P<0.001(见图1)。胰腺癌组织TIMP-2的表达中度和强度阳性、弱阳性和阴性分别为25例(71.42%)、5例(14.29%)和5例(14.29%)，MMP-2和TIMP-2同时有中重度表达的标本有18例(51.43%)；仅10%的正常胰腺组织表达弱阳性的TIMP-2，两组有显著性差异，P<0.001(见图2)，提示大多胰腺癌组织存在MMP-2和TIMP-2过度表达。
, 百拇医药
图1 胰腺高分化腺癌。图示MMP-2染色阳性主
要位于胰腺癌细胞胞浆内，基质和正常胰
腺组织少见阳性，利用MMP-2单抗染色，苏木素复染，SP法×200
图2 胰腺高分化腺癌。(a)图示TIMP-2染色阳性主要位于胰腺癌细胞胞浆内，基质少见阳性，利用TIMP-2单抗染色，苏木素复染，SP法×200。(b)阴性对照，利用PBS代替TIMP-2单抗染色。
2.2 MMP-2和TIMP-2表达与病理类型的关系
表1显示，胰腺高中分化腺癌MMP-2阳性细胞率评分为1.57±1.16，稍低于低分化腺癌的1.71±0.99，两者无显著性差异(P>0.50)；而高化腺癌和低分化腺癌的TIMP-2阳性细胞率评分分别1.71±1.01和2.21±1.05，两者也无显著性差异(P>0.1)，表明胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2表达与病理类型无明显相关。
, http://www.100md.com
2.3 MMP-2和TIMP-2表达与淋巴结转移和临床分级的关系
发生淋巴结转移的胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2阳性细胞率评分均数分别为2.00±0.94和2.21±0.92，分别显著高于未发生淋巴结转移组的1.19±1.11和1.38±0.89，两组均P<0.05；胰腺癌TNM分期Ⅲ+Ⅳ患者的MMP-2和TIMP-2阳性细胞率评分显著高于Ⅰ+Ⅱ分期患者，两组均P<0.05(见表1)，表明胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2表达升高与患者发生淋巴结转移和临床分级密切相关。
表1 胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2的表达与病理指标的关系 病理指标
例数
MMP-2
TIMP-2
, 百拇医药 阳性细胞评分均数
P值
阳性细胞评分均数
P值
淋巴结转移
无
16
1.19±1.11
0.028
1.38±0.89
0.010
有
19
, 百拇医药
2.00±0.94
2.21±0.92
分化程度
分化高
21
1.57±1.16
0.700
1.71±1.01
0.172
分化差
14
1.71±0.99
, http://www.100md.com 2.21±1.05
TNM分期
Ⅰ+Ⅱ
18
1.11±0.90
0.030
1.33±0.84
0.017
Ⅲ+Ⅳ
17
1.82±0.95
2.12±0.99
2.4 MMP-2和TMP-2表达与患者预后的关系
, 百拇医药
Kplan-Meier分析显示MMP-2低表达患者(评分0/1分)有15例，中位生存时间为1462天(约48.73月)，95%CI为601天(284，2640)；而MMP-2高表达患者评分(2/3分)有20例，中位生存时间为161天(约5.33月)，95%CI为36天(90，232)，两组生存时间比较有极显著性差异，P<0.0001(见图3)。TIMP-2低表达患者(评分0/1分)有10例，中位生存时间为2623天(约87.43月)，95%CI为1602天(0，5762)；而TIMP-2高表达患者(评分2/3分)有25例，其中位生存时间为190天(约6.33月)，95%CI为42天(107，273)，两组生存时间比较有极显著性差异(P<0.01，见图4)，表明胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2的过度表达与患者预后不良明显相关。
图3 MMP-2表达与患者预后的Kaplan-meier
, http://www.100md.com
生存曲线，结果显示胰腺癌组织MMP-2
低表达(分数0/1)患者的中位生存时间
为1462天，明显优于MMP-2高表达(分
数2/3)患者的161天，P<0.0001
图4 TIMP-2表达与患者预后的Kaplan-meier
生存曲线，结果显示胰腺癌组织TIMP-2
低表达(分数0/1)患者的中位生存时间
为2623天，明显优于TIMP-2高表达(分
, 百拇医药
数2/3)患者的190天，P<0.01
3 讨论
MMPs是一组锌离子依赖性内肽酶，几乎能降解细胞外基质的所有成分，参与胎儿发育过程中的组织重构(tissue remodeling)和伤口愈合过程中的胶原重构等生理过程。而在病理情况下，MMPs一方面通过降解基底膜和包绕肿瘤的基质，突破基质屏障，促进肿瘤侵袭转移，另一方面则通过毛细胞血管内生、新生血管生成等促进肿瘤生长和扩散，TIMPs则具有抑制MMPs活性的作用。体内外试验也证实MMP的人工合成抑制剂Batimastat(BB-94)能有效抑制肿瘤的生长和转移〔3〕。Ⅳ型胶原酶包括MMP-2和MMP-9两个亚型，KoshibaT等发现在胰腺癌组织及其肝转移结节和正常胰腺组织中均可表达MMP-9，而MMP-2则仅在所有胰腺癌组织及其转移结节中表达，正常胰腺则未发现，认为MMP-2对胰腺癌的特异性较高〔4〕。而BramhallSR(1997)进一步发现胰腺癌标本MMP-2表达水平明显高于正常胰腺，仅半数胰腺癌标本表达TIMP-2，MMP-2和TIMP-2同时表达的标本仅50%，认为MMP-2的表达与胰腺癌的恶性表型相关〔5〕。本文免疫组化研究显示胰腺癌组织MMP-2和TIMP表达主要位于肿瘤细胞浆和胞膜，其表达阳性率均明显高于正常胰腺组织，MMP-2和TIMP-2同时中重度阳性的标本达51.43%，但分别有20%和10%的正常胰腺组织可表达弱阳性的MMP-2和TIMP-2。
, 百拇医药
研究发现肿瘤组织MMPs的表达和活性明显高于周围正常组织和良性病变，MMP-2的过度表达与肿瘤的淋巴结转移和血行转移密切相关；酶谱分析显示活性MMP-2的比率与肝癌和胃癌的浸润转移成正相关〔2，6〕。本研究显示胰腺癌淋巴结转移组的MMP-2和TIMP-2阳性细胞率评分显著高于未发生淋巴结转移组，胰腺癌TNM分期Ⅲ+Ⅳ显著高于Ⅰ+Ⅱ分期，但与胰腺癌的分化程度无关，表明胰腺癌组织的MMP-2和TIMP-2表达与患者淋巴结转移和临床分级密切相关。
MMP-2和TIMP-2表达与肿瘤预后关系的研究于近年受到重视，对其预后评估价值尚有争议。胃癌标本免疫组化和生存分析研究发现弥漫型胃癌组织MMP-2高表达组(2/3分)和低表达组0/1分)患者的无病率(disease-free)和总体生存率(cverall survival)有显著性差异(P=0.0056)，MMP-2可作为弥漫型胃癌患者预后的独立预后指标〔2〕。膀胱癌免疫组化研究发现膀胱癌患者MMP-2与患者组织学分级和预后无关，而TIMP-2表达与患者预后密切相关〔7〕。KanayamaHO等(1998)利用RT-PCR方法和Kaplan-Meier分析进一步发现膀胱癌组织MMP-2和TIMP-2的基因均高表达，与膀胱癌肌层浸润密切相关；在膀胱切除组的肌层浸润PT2≤患者中，MMP-2和TIMP-2基因高表达患者的预后明显较低表达患者险恶，并建议用于预后评估和确定术后治疗策略〔1〕。本文首次进行胰腺癌术后标本MMP-2和TIMP-2的表达与预后的关系探讨，Kaplan-Meier分析发现胰癌组织MMP-2和TIMP-2高表达组患者的预后不佳，其生存时间仅为MMP-2低表达组患者生存时间的1/9，提示胰腺组织MMP-2和TIMP-2表达可用于患者的预后评估，对MMP-2和TIMP-2高表达患者应行术后化疗或放疗等辅助治疗措施。
, 百拇医药
总之，本文单因素分析显示胰腺癌组织MMP-2和TIMP-2表达与胰腺癌的侵袭转移和预后密切相关，MMP-2和TIMP-2高表达患者的预后较差。至于MMP-2和TIMP-2是否为胰腺癌独立的预后评估因素，尚待进一步积累资料和进行COX模型分析。
(致谢中山医科大学孙逸仙纪念医院病理科李海刚医生的指导)
〔参考文献〕
〔1〕 Kanayama HO,Yokota K,Kurokawa Y,et al. Prognostic values of matrix metalloproteinase-2 and tissue inhibitor of metalloproteinase-2 expression in bladder cancer〔J〕. Cancer,1998,82(7)：1359～1366.
〔2〕 Allgayer H,Babic R,Beyer BC,et al. Prognostic relevance of MMP-2(72-kD collagenase Ⅳ) in gastric cancer〔J〕. Oncology,1998,55(2)：152～160.
, 百拇医药
〔3〕 Zervos EE,Norman JG,Gower WR,et al. Matrix metalloproteinase inhibition attenuates human pancreatic cancer growth in vitro and decrease mortality and tumorigenesis in vivo〔J〕. J Surg Res,1997,69(2)：367～371.
〔4〕 Koshiba T,Hosotani R,Wada M,et al. Detection of MMP activity in human pancreatic cancer〔J〕. Surg Today,1997,27(4)：302～304.
〔5〕 Bramhall SR,Neoptolemos JP,Stamp GW,et al. Imbalance of expression of matrix metalloproteinase(MMPs) and tissue inhibition of the matrix metalloproteinase(TIMPs) in human pancreatic carcinoma〔J〕. J Pathol,1997,182(3)：347～355.
〔6〕 卜文、黄晓武、汤钊猷.基质金属白酶-2与肝细胞癌侵袭转移性的关系〔J〕.中华医学杂志，1997，77(9)：661
〔7〕 Grignon DJ,Sakr W,Toth M,et al.High level of tissue inibitor of metalloproteinase-2(TIMP-2)expression associated with poor outcome in invasive bladder cancer〔J〕. Cancer Res, 1996;56(7)：1654～1659.
收稿日期：1999-03-26；修回日期：1999-06-03, 百拇医药