自动组织脱水机应用体会
作者：胡闻 顾萍 唐慧
单位：胡闻 顾萍 唐慧(安徽省立医院病理科，合肥 230001)
关键词：组织脱水机；脱水剂；透明剂；浸蜡
临床与实验病理学杂志990535
分类号 R446.8 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)05-0465-02
随着病理技术的发展，组织的人工脱水已逐步被组织脱水机代替，其最大特点是能利用非上班时间进行处理组织，并也能保证组织脱水、透明和浸蜡效果。由于病理标本种类较复杂，组织大小不一等因素，故要使组织处理达到最佳效果，也是不易掌握的。我科近年在使用自动组织脱水机过程中，对脱水剂、透明剂、浸蜡剂更换时间和组织数量处理数量关系进行了改进，从而提高石蜡切片质量。
, 百拇医药
1 试剂
1.1 固定液的选择 为了给组织切片和染色提供有利条件，需根据待固定组织的组织结构或细胞成分，选择不同的固定剂。我们根据固定剂的性质和条件而选择3种固定剂对组织进行固定：①10%福尔马林液，②AAF固定液，③Bouin固定液。一般在取材后固定2 h左右。
1.2 脱水剂的选择 依次为80%乙醇2 h，90%乙醇2 h，95%乙醇2次共3 h。100%乙醇2次共3 h。
1.3 透明 用二甲苯2次共3 h。
1.4 浸蜡 Ⅰ道蜡(二甲苯：石蜡为1∶3)1 h、Ⅱ道蜡(二甲苯：石蜡为1∶8)2 h、Ⅲ道蜡为纯蜡(56℃～58℃)3 h以上。
2 结果
2.1 对淋巴结、鼻咽部及胃镜等活检标本切片染色发现细胞核的染色明显清晰，无白雾现象。
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2.2 对比较硬的组织如皮肤肌腱等，易于切片，特别是骨髓活检无需再用酸进行脱钙。
3 体会
要制作一张高质量的切片，仅有一台好自动组织脱水机是远远不行的，因为在组织处理过程中影响制片质量因素很多，如：组织的固定、脱水机内试剂配制及更换、不同环境温度对组织脱水时间影响等。因此，要使自动脱水机处理组织达到最佳效果，首先必须选择合适的固定剂。理想的固定剂应该使组织和细胞中各种成分或结构完好并保留在原位。事实上，目前还没有任何一种固定剂能适用于各种组织的固定和染色，每种固定剂都有自身的优点和不足。因此，在具体使用时我们根据组织的不同，选用3种不同固定液，取得较满意的固定效果：(1)单纯甲醛固定液，其渗透性强，固定均匀，使组织收缩小，适合大多数组织固定。由于它不与糖的羟基反应，也不与核酸的磷酸酯基反应〔1〕，所以对富含白蛋白及核蛋白、中性脂肪、糖类物质的组织固定较差。(2)AAF固定液对核蛋白及糖原的保存尤为理想，且穿透性较好，醋酸可减轻组织硬化，改善固定后的组织学图像，使细胞核的边界清晰〔2〕，特别是富于细胞的组织，例如：淋巴结、鼻咽部、胃镜等活检组织，具有良好固定作用。(3)Bouin固定液，该固定液特点是渗透力强对组织固定均匀，收缩很少、染色效果好。在组织固定同时苦味酸能软化皮肤和肌腱，减轻组织变硬程度及脱钙作用〔3〕，它适用于骨髓活检组织、含有皮肤的软组织和结缔组织，并且还能对结缔组织的特殊染色起着媒染作用。目前脱水剂仍选择乙醇。乙醇脱水的初始浓度为80%，避免乙醇浓度过低而增加脱水时间或乙醇浓度过高致组织发脆而影响切片。温度对乙醇渗透脱水的影响很大，主要是指无水乙醇。当室内温度>30℃时组织内水分子与乙醇之间运动加快，缩短组织脱水时间。当室内温度<10℃时组织内水分子与乙醇之间运动变慢，组织脱水时间就要延长。为此我们在用自动脱水机对组织脱水时，对最后二缸无水乙醇，应根据温度变化而适当调整脱水时间，即在原来正常脱水时间基础上，在冬季可延长1 h，在夏季可缩短1 h。自动脱水机对组织脱水时间控制在10 h左右为佳。要确定乙醇更换时间就必须统一组织大小标准。我们以胃镜标本为例，5例胃镜标本可折换成1例，标准标本大小2 cm×1.5 cm×0.5 cm，算出脱水机中乙醇对组织脱水的数量，并确定乙醇的更换时间。最后透明和浸蜡，组织透明以二甲苯为佳，因为它与脱水剂和石蜡兼容性较好，对组织染色影响小，特别在免疫组织化学酶标记中对抗原的破坏较小。透明剂在脱水机上用二缸试剂，总的透明时间控制在2～3 h。透明剂二甲苯的更换可与乙醇的更换同步进行。浸蜡，在脱水机上一般用三缸蜡，第一缸蜡必须含有一定比例二甲苯(指新配制石蜡时用)，以便石蜡能渐进地置换出透明剂，时间可控制在1 h左右。第二缸蜡和第三缸蜡可用纯蜡以便把组织中二甲苯全部置换出，总时间可在4 h以上，浸蜡温度应与蜡的熔点相同。为了保持第三缸石蜡纯度可1～2月调换1次，更换时可将第一缸石蜡倒掉，把第二、第三缸分别移做第一、第二缸石蜡，只更新第三缸石蜡即可。另外，要注意第三缸石蜡熔点必须与包埋的石蜡熔点相同。
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总之，我们在使用自动组织脱水机时，一定要对脱水机内试剂使用情况有所了解，做到定期更换试剂，以确保组织制片质量，使脱水机处理组织达到最佳状态。
作者简介：胡 闻，男，42岁，主管技师
参考文献
1，AGE皮尔斯著(马仲魁译).组织化学理论和实用—制备与光镜技术.北京：人民卫生出版社，1985：122
2，汪 谦主编.现代医学实验方法.北京：人民卫生出版社，1997：109
3，张 哲，陈辉主编.实用病理组织染色技术.沈阳：辽宁科学技术出版社，1988：25
收稿日期：1999-04-26
修回日期：1999-06-11, 百拇医药
单位：胡闻 顾萍 唐慧(安徽省立医院病理科，合肥 230001)
关键词：组织脱水机；脱水剂；透明剂；浸蜡
临床与实验病理学杂志990535
分类号 R446.8 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)05-0465-02
随着病理技术的发展，组织的人工脱水已逐步被组织脱水机代替，其最大特点是能利用非上班时间进行处理组织，并也能保证组织脱水、透明和浸蜡效果。由于病理标本种类较复杂，组织大小不一等因素，故要使组织处理达到最佳效果，也是不易掌握的。我科近年在使用自动组织脱水机过程中，对脱水剂、透明剂、浸蜡剂更换时间和组织数量处理数量关系进行了改进，从而提高石蜡切片质量。
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1 试剂
1.1 固定液的选择 为了给组织切片和染色提供有利条件，需根据待固定组织的组织结构或细胞成分，选择不同的固定剂。我们根据固定剂的性质和条件而选择3种固定剂对组织进行固定：①10%福尔马林液，②AAF固定液，③Bouin固定液。一般在取材后固定2 h左右。
1.2 脱水剂的选择 依次为80%乙醇2 h，90%乙醇2 h，95%乙醇2次共3 h。100%乙醇2次共3 h。
1.3 透明 用二甲苯2次共3 h。
1.4 浸蜡 Ⅰ道蜡(二甲苯：石蜡为1∶3)1 h、Ⅱ道蜡(二甲苯：石蜡为1∶8)2 h、Ⅲ道蜡为纯蜡(56℃～58℃)3 h以上。
2 结果
2.1 对淋巴结、鼻咽部及胃镜等活检标本切片染色发现细胞核的染色明显清晰，无白雾现象。
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2.2 对比较硬的组织如皮肤肌腱等，易于切片，特别是骨髓活检无需再用酸进行脱钙。
3 体会
要制作一张高质量的切片，仅有一台好自动组织脱水机是远远不行的，因为在组织处理过程中影响制片质量因素很多，如：组织的固定、脱水机内试剂配制及更换、不同环境温度对组织脱水时间影响等。因此，要使自动脱水机处理组织达到最佳效果，首先必须选择合适的固定剂。理想的固定剂应该使组织和细胞中各种成分或结构完好并保留在原位。事实上，目前还没有任何一种固定剂能适用于各种组织的固定和染色，每种固定剂都有自身的优点和不足。因此，在具体使用时我们根据组织的不同，选用3种不同固定液，取得较满意的固定效果：(1)单纯甲醛固定液，其渗透性强，固定均匀，使组织收缩小，适合大多数组织固定。由于它不与糖的羟基反应，也不与核酸的磷酸酯基反应〔1〕，所以对富含白蛋白及核蛋白、中性脂肪、糖类物质的组织固定较差。(2)AAF固定液对核蛋白及糖原的保存尤为理想，且穿透性较好，醋酸可减轻组织硬化，改善固定后的组织学图像，使细胞核的边界清晰〔2〕，特别是富于细胞的组织，例如：淋巴结、鼻咽部、胃镜等活检组织，具有良好固定作用。(3)Bouin固定液，该固定液特点是渗透力强对组织固定均匀，收缩很少、染色效果好。在组织固定同时苦味酸能软化皮肤和肌腱，减轻组织变硬程度及脱钙作用〔3〕，它适用于骨髓活检组织、含有皮肤的软组织和结缔组织，并且还能对结缔组织的特殊染色起着媒染作用。目前脱水剂仍选择乙醇。乙醇脱水的初始浓度为80%，避免乙醇浓度过低而增加脱水时间或乙醇浓度过高致组织发脆而影响切片。温度对乙醇渗透脱水的影响很大，主要是指无水乙醇。当室内温度>30℃时组织内水分子与乙醇之间运动加快，缩短组织脱水时间。当室内温度<10℃时组织内水分子与乙醇之间运动变慢，组织脱水时间就要延长。为此我们在用自动脱水机对组织脱水时，对最后二缸无水乙醇，应根据温度变化而适当调整脱水时间，即在原来正常脱水时间基础上，在冬季可延长1 h，在夏季可缩短1 h。自动脱水机对组织脱水时间控制在10 h左右为佳。要确定乙醇更换时间就必须统一组织大小标准。我们以胃镜标本为例，5例胃镜标本可折换成1例，标准标本大小2 cm×1.5 cm×0.5 cm，算出脱水机中乙醇对组织脱水的数量，并确定乙醇的更换时间。最后透明和浸蜡，组织透明以二甲苯为佳，因为它与脱水剂和石蜡兼容性较好，对组织染色影响小，特别在免疫组织化学酶标记中对抗原的破坏较小。透明剂在脱水机上用二缸试剂，总的透明时间控制在2～3 h。透明剂二甲苯的更换可与乙醇的更换同步进行。浸蜡，在脱水机上一般用三缸蜡，第一缸蜡必须含有一定比例二甲苯(指新配制石蜡时用)，以便石蜡能渐进地置换出透明剂，时间可控制在1 h左右。第二缸蜡和第三缸蜡可用纯蜡以便把组织中二甲苯全部置换出，总时间可在4 h以上，浸蜡温度应与蜡的熔点相同。为了保持第三缸石蜡纯度可1～2月调换1次，更换时可将第一缸石蜡倒掉，把第二、第三缸分别移做第一、第二缸石蜡，只更新第三缸石蜡即可。另外，要注意第三缸石蜡熔点必须与包埋的石蜡熔点相同。
, 百拇医药
总之，我们在使用自动组织脱水机时，一定要对脱水机内试剂使用情况有所了解，做到定期更换试剂，以确保组织制片质量，使脱水机处理组织达到最佳状态。
作者简介：胡 闻，男，42岁，主管技师
参考文献
1，AGE皮尔斯著(马仲魁译).组织化学理论和实用—制备与光镜技术.北京：人民卫生出版社，1985：122
2，汪 谦主编.现代医学实验方法.北京：人民卫生出版社，1997：109
3，张 哲，陈辉主编.实用病理组织染色技术.沈阳：辽宁科学技术出版社，1988：25
收稿日期：1999-04-26
修回日期：1999-06-11, 百拇医药