尿脱落细胞HE、Ao、AgNOR染色联合检查对泌尿系肿瘤诊断价值探讨
作者：罗春丽 蔡晓钟 谢国燕 陈宏础 吴小候
单位：重庆医科大学检验系(罗春丽 蔡晓钟 谢国燕 陈宏础)；重庆医科大学附一院泌尿科(吴小候)
关键词：尿脱落细胞；泌尿系肿瘤
临床检验杂志990537 泌尿系肿瘤是我国常见的恶性肿瘤之一。尿脱落细胞检查对泌尿系肿瘤的早期诊断、术后随访的意义已得到公认，然而传统的HE(苏木素伊红)染色准确性、阳性率不高。本试验旨在探索Ao(吖啶橙荧光染色)，AgNOR(嗜银染色)与HE联合检查对泌尿系肿瘤的诊断价值。
1 材料与方法
1.1 试剂
1.1.1 苏木素伊红(HE)染液。
, 百拇医药 1.1.2 Ao染液(0.01 g/dl吖啶橙磷酸盐缓冲液)[1] 吖啶橙贮存液：称0.1 g吖啶橙溶于100 ml蒸馏水中。0.15 mol/L磷酸盐(pH 6.0)缓冲液：取0.15 mol/L Na2HPO4 70 ml，加入NaH2PO4 430 ml。0.01 g/dl吖啶橙磷酸盐缓冲液：取吖啶橙干液1份加0.15 mol/L磷酸盐(pH 6.0)缓冲液9份配制，冰箱保存。
1.1.3 AgNOR染液[1] 50 g/dl硝酸银水溶液与2 g/dl明胶溶液，按2∶1配成明胶硝酸银工作液。
1.2 临床资料
肿瘤组51例(膀胱癌34例，肾癌12例，前列腺癌5例)均为手术病理证实。
非肿瘤组36例(前列腺增生16例，结石10例，正常10例)。
, 百拇医药
1.3 方法
收集病人晨尿以1 500～2 000(r/min)离心15 min(沉渣少可再次离心)，沉渣涂片3张凉干，用等量乙醚-95%乙醇固定10 min，分别进行HE、Ao、AgNOR染色。
1.3.1 HE染色 将己固定涂片用蒸流水冲洗后浸入苏木素染液4～5(min)，蒸馏水清洗，再浸入0.5%盐酸乙醇数秒。蒸馏水冲洗后再置入稀碳酸锂溶液1～2(min)，取出后放入0.125 g/dl乙醇伊红染液内30 s。浸入95%乙醇及无水乙醇内脱水各5 min，涂片制成后在普通光镜下观察，肿瘤细胞具有核大、畸形、深染等特点。
1.3.2 Ao固定片用0.1 mol/L磷酸盐(pH 6.0)缓冲液滴洗，0.01 g/dl吖啶橙磷酸盐缓冲液染3 min，0.10 mol/L氯化钙滴片分色30 s～1 min，再用0.15 mol/L磷酸盐缓冲液滴洗。涂片制成后即可在荧光显微镜下观察，肿瘤细胞核为黄绿色或黄色荧光，胞质为桔红色荧光，同时具有肿瘤细胞核大、畸形等特点。
, http://www.100md.com
1.3.3 AgNOR 固定片用AgNOR工作染液在避光室温下染色60 min，蒸馏水冲洗，梯度乙醇脱水。普通光镜下观察计数50～100个细胞内棕色颗粒数，以平均>4.4颗判断为阳性。
2 结果
2.1 3种染色方法分别对36例对照组观察，结果每种染色方法均存在不同程度的可疑阳性。我们把两项同时可疑阳性判断为阳性，除1例前列腺增生患者HE+AgNOR同时出现可疑阳性外，其余均无两项同时出现可疑阳性，特异性为97.2%，基本上排除假阳性。
2.2 分别用3种方法染色检查经病理证实的51例肿瘤组，均出现假阴性和假阳性，证实单用某一项染色检查阳性率低，结果见表1。
表1 泌尿系肿瘤组三种染色方法结果 组别
n
, 百拇医药
HE
Ao
AgNOR
+(%)
-(%)
±(%)
+(%)
-(%)
±(%)
+(%)
-(%)
±(%)
膀胱癌
, 百拇医药
34
21(61.7)
9(26.4)
4(11.8)
27(79.4)
5(14.7)
2(5.8)
24(70.6)
8(23.5)
2(5.8)
肾 癌
12
, http://www.100md.com 4(33.3)
6(50.0)
2(16.6)
10(83.3)
1(8.3)
1(8.3)
7(58.3)
5(41.7)
前列腺癌
5
5(40.0)
2(40.0)
, 百拇医药 1(20.2)
2(40.0)
3(60.0)
2(40.0)
3(60.0)
总 计
51
27(52.9)
17(33.3)
7(13.7)
39(76.5)
6(11.8)
, 百拇医药
6(11.8)
31(60.8)
10(19.6)
10(19.6)
2.3 选择了三种组合方式进行联合检查，以寻找一组简便、快速、准确、阳性率高的检测方法。联合检查中某一项阳性或某两项均为可疑阳性判断为阳性，结果见表2。表2 联合检查对肿瘤诊断价值的判断
组别
膀胱癌
肾 癌
前列腺癌
总 计癌
, http://www.100md.com n
+
病理符合率(%)
n
+
病理符合率(%)
n
+
病理符合率(%)
n
+
病理符合率(%)
HE+Ao
, 百拇医药
HE+AgNOR
HE+Ao+AgNOR
34
34
34
32
29
33
94.1
85.3
97.1
12
12
, http://www.100md.com
12
10
6
10
83.3
50.0
83.3
5
5
5
3
2
3
60.0
, 百拇医药
40.0
60.0
51
51
51
45
37
46
88.2
72.5
90.2
3 讨论
36例对照组分别用3种方法染色，结果前列腺增生患者可疑阳性率较高，估计是炎症引起细胞改变所致。联合检查方法分析可疑阳性涂片，认为两种染色结果同时阳性即判断为阳性，结果除1例前列腺增生患者判为阳性，假阳性率仅为2.7%。在51例肿瘤组中，单项检查阳性率Ao>AgNOR>HE，分别为76.4%、60.8%、52.9%，联合检查阳性率HE+Ao+AgNOR>HE+Ao>HE+AgNOR分别为90.2%、88.2%和72.5%，显然联合检查明显提高了对肿瘤诊断的阳性率与病理诊断符合率，减少了漏诊、误诊及病人的心理负担。
, http://www.100md.com
HE为传统染色方法。简单、快速，肿瘤细胞容易辨认，片子易保存，但敏感度较低。Ao结合了细胞核酸代谢特征(胞质大量RNA显桔红色、胞核较多DNA显黄绿色)与肿瘤细胞学特征，更易识别肿瘤细胞，除此之外还具有简便快速不受血尿影响特点，血红蛋白有抑制荧光作用，但涂片不易保存。AoNOR准确计数细胞内棕色颗粒数较困难，尤其在细胞少时就更难计数。我们认为，从临床实际工作考虑，在敏感、准确、快速的前提下，联合HE+Ao诊断泌尿系肿瘤是一组较好的组合，尤其对膀胱癌的早期诊断、术癌复发的监测更有价值，值得推广。
参考文献
1 刘悦，等.AgNOR在肾盂病中的表达及临床意义.中华泌尿外科杂志，1997，12(1)：42～43
(1999-02-02收稿，1999-06-08修回), 百拇医药
单位：重庆医科大学检验系(罗春丽 蔡晓钟 谢国燕 陈宏础)；重庆医科大学附一院泌尿科(吴小候)
关键词：尿脱落细胞；泌尿系肿瘤
临床检验杂志990537 泌尿系肿瘤是我国常见的恶性肿瘤之一。尿脱落细胞检查对泌尿系肿瘤的早期诊断、术后随访的意义已得到公认，然而传统的HE(苏木素伊红)染色准确性、阳性率不高。本试验旨在探索Ao(吖啶橙荧光染色)，AgNOR(嗜银染色)与HE联合检查对泌尿系肿瘤的诊断价值。
1 材料与方法
1.1 试剂
1.1.1 苏木素伊红(HE)染液。
, 百拇医药 1.1.2 Ao染液(0.01 g/dl吖啶橙磷酸盐缓冲液)[1] 吖啶橙贮存液：称0.1 g吖啶橙溶于100 ml蒸馏水中。0.15 mol/L磷酸盐(pH 6.0)缓冲液：取0.15 mol/L Na2HPO4 70 ml，加入NaH2PO4 430 ml。0.01 g/dl吖啶橙磷酸盐缓冲液：取吖啶橙干液1份加0.15 mol/L磷酸盐(pH 6.0)缓冲液9份配制，冰箱保存。
1.1.3 AgNOR染液[1] 50 g/dl硝酸银水溶液与2 g/dl明胶溶液，按2∶1配成明胶硝酸银工作液。
1.2 临床资料
肿瘤组51例(膀胱癌34例，肾癌12例，前列腺癌5例)均为手术病理证实。
非肿瘤组36例(前列腺增生16例，结石10例，正常10例)。
, 百拇医药
1.3 方法
收集病人晨尿以1 500～2 000(r/min)离心15 min(沉渣少可再次离心)，沉渣涂片3张凉干，用等量乙醚-95%乙醇固定10 min，分别进行HE、Ao、AgNOR染色。
1.3.1 HE染色 将己固定涂片用蒸流水冲洗后浸入苏木素染液4～5(min)，蒸馏水清洗，再浸入0.5%盐酸乙醇数秒。蒸馏水冲洗后再置入稀碳酸锂溶液1～2(min)，取出后放入0.125 g/dl乙醇伊红染液内30 s。浸入95%乙醇及无水乙醇内脱水各5 min，涂片制成后在普通光镜下观察，肿瘤细胞具有核大、畸形、深染等特点。
1.3.2 Ao固定片用0.1 mol/L磷酸盐(pH 6.0)缓冲液滴洗，0.01 g/dl吖啶橙磷酸盐缓冲液染3 min，0.10 mol/L氯化钙滴片分色30 s～1 min，再用0.15 mol/L磷酸盐缓冲液滴洗。涂片制成后即可在荧光显微镜下观察，肿瘤细胞核为黄绿色或黄色荧光，胞质为桔红色荧光，同时具有肿瘤细胞核大、畸形等特点。
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1.3.3 AgNOR 固定片用AgNOR工作染液在避光室温下染色60 min，蒸馏水冲洗，梯度乙醇脱水。普通光镜下观察计数50～100个细胞内棕色颗粒数，以平均>4.4颗判断为阳性。
2 结果
2.1 3种染色方法分别对36例对照组观察，结果每种染色方法均存在不同程度的可疑阳性。我们把两项同时可疑阳性判断为阳性，除1例前列腺增生患者HE+AgNOR同时出现可疑阳性外，其余均无两项同时出现可疑阳性，特异性为97.2%，基本上排除假阳性。
2.2 分别用3种方法染色检查经病理证实的51例肿瘤组，均出现假阴性和假阳性，证实单用某一项染色检查阳性率低，结果见表1。
表1 泌尿系肿瘤组三种染色方法结果 组别
n
, 百拇医药
HE
Ao
AgNOR
+(%)
-(%)
±(%)
+(%)
-(%)
±(%)
+(%)
-(%)
±(%)
膀胱癌
, 百拇医药
34
21(61.7)
9(26.4)
4(11.8)
27(79.4)
5(14.7)
2(5.8)
24(70.6)
8(23.5)
2(5.8)
肾 癌
12
, http://www.100md.com 4(33.3)
6(50.0)
2(16.6)
10(83.3)
1(8.3)
1(8.3)
7(58.3)
5(41.7)
前列腺癌
5
5(40.0)
2(40.0)
, 百拇医药 1(20.2)
2(40.0)
3(60.0)
2(40.0)
3(60.0)
总 计
51
27(52.9)
17(33.3)
7(13.7)
39(76.5)
6(11.8)
, 百拇医药
6(11.8)
31(60.8)
10(19.6)
10(19.6)
2.3 选择了三种组合方式进行联合检查，以寻找一组简便、快速、准确、阳性率高的检测方法。联合检查中某一项阳性或某两项均为可疑阳性判断为阳性，结果见表2。表2 联合检查对肿瘤诊断价值的判断
组别
膀胱癌
肾 癌
前列腺癌
总 计癌
, http://www.100md.com n
+
病理符合率(%)
n
+
病理符合率(%)
n
+
病理符合率(%)
n
+
病理符合率(%)
HE+Ao
, 百拇医药
HE+AgNOR
HE+Ao+AgNOR
34
34
34
32
29
33
94.1
85.3
97.1
12
12
, http://www.100md.com
12
10
6
10
83.3
50.0
83.3
5
5
5
3
2
3
60.0
, 百拇医药
40.0
60.0
51
51
51
45
37
46
88.2
72.5
90.2
3 讨论
36例对照组分别用3种方法染色，结果前列腺增生患者可疑阳性率较高，估计是炎症引起细胞改变所致。联合检查方法分析可疑阳性涂片，认为两种染色结果同时阳性即判断为阳性，结果除1例前列腺增生患者判为阳性，假阳性率仅为2.7%。在51例肿瘤组中，单项检查阳性率Ao>AgNOR>HE，分别为76.4%、60.8%、52.9%，联合检查阳性率HE+Ao+AgNOR>HE+Ao>HE+AgNOR分别为90.2%、88.2%和72.5%，显然联合检查明显提高了对肿瘤诊断的阳性率与病理诊断符合率，减少了漏诊、误诊及病人的心理负担。
, http://www.100md.com
HE为传统染色方法。简单、快速，肿瘤细胞容易辨认，片子易保存，但敏感度较低。Ao结合了细胞核酸代谢特征(胞质大量RNA显桔红色、胞核较多DNA显黄绿色)与肿瘤细胞学特征，更易识别肿瘤细胞，除此之外还具有简便快速不受血尿影响特点，血红蛋白有抑制荧光作用，但涂片不易保存。AoNOR准确计数细胞内棕色颗粒数较困难，尤其在细胞少时就更难计数。我们认为，从临床实际工作考虑，在敏感、准确、快速的前提下，联合HE+Ao诊断泌尿系肿瘤是一组较好的组合，尤其对膀胱癌的早期诊断、术癌复发的监测更有价值，值得推广。
参考文献
1 刘悦，等.AgNOR在肾盂病中的表达及临床意义.中华泌尿外科杂志，1997，12(1)：42～43
(1999-02-02收稿，1999-06-08修回), 百拇医药