细胞周期素D1蛋白在卵巢上皮性浆液性肿瘤中的表达及其临床意义
作者：王 敏 江 森 王 伟 李冠群 陆景明
单位：王 敏 陆景明 中国医科大学第二临床学院妇产科(沈阳110003)；王 伟 李冠群 中国医科大学第二临床学院病理科；江森 山东医科大学附属医院妇产科
关键词：基因，Cyclin D1；卵巢肿瘤
肿瘤990511 细胞周期素D1(Cyclin D1，CD1)是一个G1期细胞进程的细胞周期调节因子(cell cycle regulatory factor)。文献报道CD1在多种人类肿瘤中有扩增和过度表达。CD1作为一种新的癌基因，其表达与卵巢肿瘤的关系目前国内、外研究甚少。本研究应用卵白素-生物素过氧化酶复合物(avidin-biotin peroxidase complex,ABC)免疫组化法(immnohistochemical assay,IHCA)对8份正常卵巢组织、47份卵巢上皮性浆液性肿瘤(以下简称浆液性肿瘤)组织中CD1蛋白(CD1P)进行检测，分析其与卵巢浆液性肿瘤的关系。
, 百拇医药
材料和方法
一、标本来源
收集中国医科大学第一、第二临床医学院1996年4月～1997年9月手术切除的55份新鲜组织标本，病理冰冻切片厚5 μm，正常卵巢组织8份，良性浆液性瘤组织10份，交界性浆液性瘤组织4份，浆液性卵巢癌组织33份。浆液性卵巢癌(ovarian serous carcinoma,OSC)均有完整病理资料，其中Ⅰ期5例，Ⅱ期2例，Ⅲ期22例，Ⅳ期4例。病理分级Ⅰ级8例，Ⅱ级18例，Ⅲ级7例。伴有腹水者17例，伴有癌瘤播散者25例，伴有淋巴结转移者8例。
二、抗体与试剂
ABC试剂盒购自美国Vector Lab,鼠抗人CD1单克隆抗体为美国Santa Cruz生物技术公司产品，购自北京中山生物技术有限公司。
, 百拇医药 三、检测方法与步骤
冰冻切片用预冷丙酮固定5 min后进行常规ABC-IHCA染色。CD1抗体的免疫产物用AEC显色，抗体效价为1∶10。免疫染色阴性对照采用PBS代替一抗，选择2份乳腺癌已知阳性的冰冻组织片作为CD1阳性对照。
四、结果判定及统计学处理
按Shimizu等[1]的方法，在高倍光镜下根据细胞内红色反应的着色范围和程度判定结果。率的比较采用四格表确切概率法。
结果
一、CD1P的表达
CD1的免疫反应产物呈红色细颗粒状，主要位于癌细胞核内，小部分核浆共存。阳性癌细胞多呈灶状分布，少数为散在分布。阳性癌细胞多呈状状分布，少数为散在分布。
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CD1P在卵巢浆液性癌检出率45.5%高于良性瘤0%及正常卵巢0%(P<0.05)，但与交界性瘤25%比较则无统计学意义(P>0.05)。
二、CD1P过度表达与OSC生物学特征
(一)CD1P过度表达与OSC临床分期的关系
Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌CD1P过度表达率50%高于Ⅰ、Ⅱ期28.6%，但无显著差异(P>0.05)。
(二)CD1P过度表达与OSC组织学分级的关系
Ⅰ级及Ⅰ+Ⅱ级CD1P过度表达率12.5%，34.6%，
～
占0～37.5%，与Ⅲ级85.7%，～占100%比较，均有显著性差异(P<0.05)，Ⅱ级与Ⅲ级间无显著性差异(P>0.05)。
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(三)CD1P过度表达与OSC腹水、癌瘤播散和淋巴结转移三项指标的关系
尽管CD1P过度表达率在腹水病例为47.1%，在癌瘤播散病例为52.0%，均稍高于相应无腹水43.8%和无播散病例25%，但无统计学差异(P>0.05)，而CD1P在淋巴结转移病例过度表达率87.5%明显地高于相应无淋巴结转移病例32%，有显著性差异(P<0.05)，且淋巴结转移病例～占71.4%，高于相应无淋巴结转移病例～占50.0%。
, 百拇医药 讨论
细胞周期失控是细胞增殖失控而导致癌变的重要原因，CD1P在细胞周期的调控中起关键作用[2]。目前在高等真核细胞中至少有8种哺乳动物细胞周期素基因被鉴定出来(A、B、C、D1-3、E、H)，并且在细胞不同期表现不同的形式[2、3]。其中，与肿瘤关系最密切者为D型周期蛋白[4]，而CD1是已被公认的一种新癌基因，已有报道，CD1的异常表达可能与瘤形成及癌进展相关[5]。人类CD1基因位于人类染色体11q13上，全长15 kb，编码的CD1P分子量约34 kD。CD1是一个从G1期至S期转换必需的G1期特异蛋白，其过度表达能明显缩短G1期。
乳腺癌、非小细胞肺癌、膀胱癌和食管癌等皆在11q13区域显示扩增的同时，CD1作为此区域亦扩增。然而，CD1过度表达也能够出现在缺乏基因扩增的情况下[6]。虽然11q13部位扩增在卵巢癌中尚未见报道，但同时也定位于11q13上的成人叶酸盐受体基因已表明在培养的卵巢癌细胞株和原发性卵巢癌中有上升表达[7]。本研究中CD1P在45.5%卵巢浆液性癌中过度表达，在25%交界性浆液性瘤中过度表达，正常卵巢及良性瘤中CD1P无表达。癌与良性及正常卵巢组织比较差异具有显著性。随恶性程度的增加、淋巴结转移的出现，其CD1P过度表达率也明显增加，阳性程度增强，差异具有显著性。上述研究结果表明，CD1P过度表达可能与卵巢浆液性癌的恶性程度明显相关，此与Barbieri等[8]和Worsley等[9]的报道一致。CD1的异常过度表达使CD1-CDK复合物增加，细胞分裂增加，从而导致癌变。因此，CD1过度表达与肿瘤的增殖活性明显相关，可作为卵巢浆液性癌的增殖标志。
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作者简介：王 敏，女，博士，副教授，副主任医师。
参考文献
[1]Shimizu M,Saitch Y,Itoh H.Immunohistochemical staining of Ha-ras oncogene product in normal,benign,and malignant human pancreatic tissues.Hum Pathol,1990,21(6):607
[2]Grana X,Reddy EP.Cell cycle control in mammalian cells:Role of cyclins,cyclin dependent kinase(CDKs),growth suppressor of cyclin-dependent kinase inhibitors.Oncogene,1995,11(2):211
, http://www.100md.com
[3]Hunter T,Pines J.Cyclins and cancer II:Cyclin D and CDK inhibitors come of age.Cell,1994,79:573
[4]Hinds PW,Dowdy SF,Eaton EN, et al. Function of a human cyclin gene as an oncogene.Proc Natl Acad Sci USA,1994,91:709
[5]Lovec H,Sewing A,Lucibello FC, et al. Oncogenic activity of Cyclin D1 revealed through cooperation with Ha-ras:Link between cell cycle control and malignant transformation.Oncogene,1994,9:323
, http://www.100md.com
[6]Worsly SD,Jennings BA,Khalil KH, et al. Cyclin D1 amplification and epxression in human breast carcinoma:Correlation with histological prognostic markers and oestrogen receptor expression. J Clin Pathol,1996,49:46
[7]Campbell IG,Jones TA,Foulkes WD, et al. Folate binding protein is a marker for ovarian cancer.Cancer Res,1991,51:5329
[8]Barbieri F,Cagnoli M,Ragni N, et al. Expression of Cyclin D1 Correlates with malignancy in human ovarian tumors. Br J Cancer,1997,75(9):1236
[9]Worsly SD,Ponder BA,Davies BR.Overexpression of Cyclin D1 in epithelial ovarian cancers.Gynecol Oncol,1997,64:189
(收稿日期：1998-03-28 修回日期：1998-07-27), 百拇医药
单位：王 敏 陆景明 中国医科大学第二临床学院妇产科(沈阳110003)；王 伟 李冠群 中国医科大学第二临床学院病理科；江森 山东医科大学附属医院妇产科
关键词：基因，Cyclin D1；卵巢肿瘤
肿瘤990511 细胞周期素D1(Cyclin D1，CD1)是一个G1期细胞进程的细胞周期调节因子(cell cycle regulatory factor)。文献报道CD1在多种人类肿瘤中有扩增和过度表达。CD1作为一种新的癌基因，其表达与卵巢肿瘤的关系目前国内、外研究甚少。本研究应用卵白素-生物素过氧化酶复合物(avidin-biotin peroxidase complex,ABC)免疫组化法(immnohistochemical assay,IHCA)对8份正常卵巢组织、47份卵巢上皮性浆液性肿瘤(以下简称浆液性肿瘤)组织中CD1蛋白(CD1P)进行检测，分析其与卵巢浆液性肿瘤的关系。
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材料和方法
一、标本来源
收集中国医科大学第一、第二临床医学院1996年4月～1997年9月手术切除的55份新鲜组织标本，病理冰冻切片厚5 μm，正常卵巢组织8份，良性浆液性瘤组织10份，交界性浆液性瘤组织4份，浆液性卵巢癌组织33份。浆液性卵巢癌(ovarian serous carcinoma,OSC)均有完整病理资料，其中Ⅰ期5例，Ⅱ期2例，Ⅲ期22例，Ⅳ期4例。病理分级Ⅰ级8例，Ⅱ级18例，Ⅲ级7例。伴有腹水者17例，伴有癌瘤播散者25例，伴有淋巴结转移者8例。
二、抗体与试剂
ABC试剂盒购自美国Vector Lab,鼠抗人CD1单克隆抗体为美国Santa Cruz生物技术公司产品，购自北京中山生物技术有限公司。
, 百拇医药 三、检测方法与步骤
冰冻切片用预冷丙酮固定5 min后进行常规ABC-IHCA染色。CD1抗体的免疫产物用AEC显色，抗体效价为1∶10。免疫染色阴性对照采用PBS代替一抗，选择2份乳腺癌已知阳性的冰冻组织片作为CD1阳性对照。
四、结果判定及统计学处理
按Shimizu等[1]的方法，在高倍光镜下根据细胞内红色反应的着色范围和程度判定结果。率的比较采用四格表确切概率法。
结果
一、CD1P的表达
CD1的免疫反应产物呈红色细颗粒状，主要位于癌细胞核内，小部分核浆共存。阳性癌细胞多呈灶状分布，少数为散在分布。阳性癌细胞多呈状状分布，少数为散在分布。
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CD1P在卵巢浆液性癌检出率45.5%高于良性瘤0%及正常卵巢0%(P<0.05)，但与交界性瘤25%比较则无统计学意义(P>0.05)。
二、CD1P过度表达与OSC生物学特征
(一)CD1P过度表达与OSC临床分期的关系
Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌CD1P过度表达率50%高于Ⅰ、Ⅱ期28.6%，但无显著差异(P>0.05)。
(二)CD1P过度表达与OSC组织学分级的关系
Ⅰ级及Ⅰ+Ⅱ级CD1P过度表达率12.5%，34.6%，
～占0～37.5%，与Ⅲ级85.7%，～占100%比较，均有显著性差异(P<0.05)，Ⅱ级与Ⅲ级间无显著性差异(P>0.05)。, http://www.100md.com
(三)CD1P过度表达与OSC腹水、癌瘤播散和淋巴结转移三项指标的关系
尽管CD1P过度表达率在腹水病例为47.1%，在癌瘤播散病例为52.0%，均稍高于相应无腹水43.8%和无播散病例25%，但无统计学差异(P>0.05)，而CD1P在淋巴结转移病例过度表达率87.5%明显地高于相应无淋巴结转移病例32%，有显著性差异(P<0.05)，且淋巴结转移病例
～占71.4%，高于相应无淋巴结转移病例～占50.0%。, 百拇医药 讨论
细胞周期失控是细胞增殖失控而导致癌变的重要原因，CD1P在细胞周期的调控中起关键作用[2]。目前在高等真核细胞中至少有8种哺乳动物细胞周期素基因被鉴定出来(A、B、C、D1-3、E、H)，并且在细胞不同期表现不同的形式[2、3]。其中，与肿瘤关系最密切者为D型周期蛋白[4]，而CD1是已被公认的一种新癌基因，已有报道，CD1的异常表达可能与瘤形成及癌进展相关[5]。人类CD1基因位于人类染色体11q13上，全长15 kb，编码的CD1P分子量约34 kD。CD1是一个从G1期至S期转换必需的G1期特异蛋白，其过度表达能明显缩短G1期。
乳腺癌、非小细胞肺癌、膀胱癌和食管癌等皆在11q13区域显示扩增的同时，CD1作为此区域亦扩增。然而，CD1过度表达也能够出现在缺乏基因扩增的情况下[6]。虽然11q13部位扩增在卵巢癌中尚未见报道，但同时也定位于11q13上的成人叶酸盐受体基因已表明在培养的卵巢癌细胞株和原发性卵巢癌中有上升表达[7]。本研究中CD1P在45.5%卵巢浆液性癌中过度表达，在25%交界性浆液性瘤中过度表达，正常卵巢及良性瘤中CD1P无表达。癌与良性及正常卵巢组织比较差异具有显著性。随恶性程度的增加、淋巴结转移的出现，其CD1P过度表达率也明显增加，阳性程度增强，差异具有显著性。上述研究结果表明，CD1P过度表达可能与卵巢浆液性癌的恶性程度明显相关，此与Barbieri等[8]和Worsley等[9]的报道一致。CD1的异常过度表达使CD1-CDK复合物增加，细胞分裂增加，从而导致癌变。因此，CD1过度表达与肿瘤的增殖活性明显相关，可作为卵巢浆液性癌的增殖标志。
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作者简介：王 敏，女，博士，副教授，副主任医师。
参考文献
[1]Shimizu M,Saitch Y,Itoh H.Immunohistochemical staining of Ha-ras oncogene product in normal,benign,and malignant human pancreatic tissues.Hum Pathol,1990,21(6):607
[2]Grana X,Reddy EP.Cell cycle control in mammalian cells:Role of cyclins,cyclin dependent kinase(CDKs),growth suppressor of cyclin-dependent kinase inhibitors.Oncogene,1995,11(2):211
, http://www.100md.com
[3]Hunter T,Pines J.Cyclins and cancer II:Cyclin D and CDK inhibitors come of age.Cell,1994,79:573
[4]Hinds PW,Dowdy SF,Eaton EN, et al. Function of a human cyclin gene as an oncogene.Proc Natl Acad Sci USA,1994,91:709
[5]Lovec H,Sewing A,Lucibello FC, et al. Oncogenic activity of Cyclin D1 revealed through cooperation with Ha-ras:Link between cell cycle control and malignant transformation.Oncogene,1994,9:323
, http://www.100md.com
[6]Worsly SD,Jennings BA,Khalil KH, et al. Cyclin D1 amplification and epxression in human breast carcinoma:Correlation with histological prognostic markers and oestrogen receptor expression. J Clin Pathol,1996,49:46
[7]Campbell IG,Jones TA,Foulkes WD, et al. Folate binding protein is a marker for ovarian cancer.Cancer Res,1991,51:5329
[8]Barbieri F,Cagnoli M,Ragni N, et al. Expression of Cyclin D1 Correlates with malignancy in human ovarian tumors. Br J Cancer,1997,75(9):1236
[9]Worsly SD,Ponder BA,Davies BR.Overexpression of Cyclin D1 in epithelial ovarian cancers.Gynecol Oncol,1997,64:189
(收稿日期：1998-03-28 修回日期：1998-07-27), 百拇医药