唾液中NAG酶与肾主生殖的临床实验研究*
作者：张 丽
单位：张 丽(辽宁省计划生育科研院 沈阳 110031)
关键词：唾液；N—乙酰—β—D氨基葡萄糖甘酶；排卵；中医学
摘 要 目的 研究64例月经周期正常妇女的N 摘 要 目的 研究64例月经周期正常妇女的N—乙酰—β—D氨基葡萄糖甘酶(NAG酶)与排卵关系。方法 使用对硝基苯—N—乙酰—β—D氨基葡萄糖甘作底物与唾液中的NAG酶进行酶促反应，然后比色。并以尿样LH(黄体生成素)作为对照观察周期性变化。结果 在排卵前1d～4d和月经前NAG酶活性上升，第一个峰通常在下次月经前13d～16d之间。准确率92%与尿样LH对照符合率95%。结论 NAG酶可作为预测排卵的指标和人工授精时间选择。
中图分类号 R223
肾主生殖是中医基础理论之一。唾为肾液，唾液与生殖功能是否有联系，通过对64例受试者唾液NAG酶的观察，探讨唾液中与生殖有关物质的客观指标与变化规律。
, 百拇医药
临床资料
1 受试者选择
25岁～35岁健康育龄妇女共64例，无传染病及慢性病、月经周期正常。
2 唾液标本采集、运样及保存
受试者起床后，经清水嗽口涎滴法取唾液1.0 ml左右，于无菌容器内，4℃冰箱内暂存，即时送检。整个月经周期逐日采取，逐日测定。
试剂及测定方法
1 枸橼酸缓冲液(0.05M，PH4.6)
称取枸橼酸5.4g，枸橼酸三钠10g，蒸馏水溶解后稀释到1000ml。
对硝基苯N—乙酰—β—D氨基葡萄糖甘(NAG酶底物)溶液(0.01M) 称取对硝基苯N—乙酸—β—D氨基葡萄糖甘342.3 mg，用上述缓冲液稀释到100 mL混匀，4℃冰箱保存。
, 百拇医药
硼酸缓冲液(0.05 M，PH9.8) 称取四硼钠4.77g，适量蒸馏水溶解后加0.2N NaoH170 ml，再用蒸馏水稀释到1000 ml。
对硝基酚标准液(3.0 mm/L) 精确称取对硝基酚41.7 mg，4℃冰箱保存备用[1]。
2 测定法
按表1的顺序及量加入样品及试剂，反应后用751分光光度计(波长400)测定光密度值，从曲线上查取NAG酶对应酶单位(1u表示唾液37℃时与底物反应1 min水解产生对硝基酚1 mm以u/L表示)。
3 标准曲线绘制
按表2加液后将各管混匀，吸出0.1ml加于另一组洁净管内，加PH4.6缓冲液1.0 ml，再加PH9.8缓冲液4.0ml，混匀与比色测定如前，将光密度值与对应酶单位作图备用。
, 百拇医药
表1 唾液NAG酶测定操作表
加入物
测定管
空白管(ml)
唾液
0.1 37℃水溶平衡3 min
0.1
预温底物
0.1 37℃继续保温15分钟
PH9.8缓冲液
4.0
4.0
, http://www.100md.com
预湿底物
1.0
表2 唾液NAG酶标准曲线绘制加样表
管 号
0
1
2
3
4
5
对硝基酚标准液
0
1.0
, 百拇医药
2.0
3.0
4.0
5.0
蒸馏水
5.0
4.0
3.0
2.0
1.0
0
相当于酶单位数
0
, 百拇医药
40
80
120
160
200
4 LH对照检查
为确定月经中期NAG酶上升是否表明真正排卵，受试者从月经第10天起测定尿中LH水平作为对照，使用的检验盒由中国协和医大提供。
结果
1 全部受试者NAG酶活性有59例均在排卵前和月经前出现高峰。排卵前出现的高峰通常在下次月经前13天～16天之间。包括2例月经分别为45天和48天，酶峰值出现在月经前15天，也为排卵日前，且随月经周期的变化而变化。1例酶活性变化不规则，1例受试中途出现意外妊娠，3例未见酶峰值出现，LH显阴性，准确率达92%。
, 百拇医药
2 上述受试者NAG酶活力的基础值在20u/L～50u/L，峰值在60u/L～165u/L活性明显高于基础值，差异非常显著P<0.01。最高酶单位165u/L，最低酶单位为23.4u/L。
3 NAG酶个体差异较大，但在月经周期具有相同的变化趋势，均表现为中期NAG酶活性增高。
4 以尿LH作对照观察，酶活性峰大多出现在LH起始峰前或后24h内，个别在LH峰前48h内，符合率95%。
讨论
《素问.宣明五气》篇：“五脏化液……肾为唾”。中医认为肾主生殖，其液在唾，NAG酶即是反应唾与生殖关系的客观指标之一。其变化规律与人体内分泌水平相呼应，采取唾液标本即可预测排卵。本研究为肾与唾在生殖生理方面的内在联系提供了实验依据。
, 百拇医药 唾液NAG酶在月经周期中的特异性与女性排卵的关系虽已有注意，但正常月经妇女的平均水平未见有详细报道。本研究报告59例受试者全月测试结果：25岁～35岁组非排卵期平均水平为35u/L；排卵期峰值的平均水平为112.5u/L。受试者于排卵前1天～4天有明显的NAG酶活性峰，这项研究可用于探讨预测排卵和人工授精技术的时间选择[2]。未受孕者多于月经前有一活性峰，怀孕者此峰消失，可为早孕诊断提供一个新的诊断方法[3]。LH测定被认为是最准确的预测排卵指标[4]。尿LH对照观察，显示LH峰和NAG酶活性峰之间有显著的相关性。符合率95%。NAG酶峰值均出现在LH峰前1天～2天。个别受试者全周期NAG未出现峰值，LH同样显阴性，二者相一致。考虑有当月不排卵的可能。唾液酶测定已逐渐取代血液和尿样，被用作监测体液激素水平的非侵入性方法。唾液中酶的含量与血清和尿液中的含量有显著的相关性。唾液标本收集简便、快速，无创伤刺激可多次采样，易为患者接受。如能将酶的比色测定简化为试纸测定，可使排卵预测成为家庭自检，无疑是一种既简便经济、准确，又易为广大妇女所接受的新的自然计划生育方法。
, 百拇医药
* 本项目为国家计划生育委员会科研基金(课题合同号92—F—45)资助项目。
作者简介：张丽，女，42岁，辽宁省计划生育科研院主治医师。研究方向：妇产科及计划生育。
参考文献
[1] 李安域，郭英华.妇女唾液尿液N—乙酰—β—D氨基葡萄糖甘酶活性变化的测定分析.山东医药 1981；(7)：19
[2] 吕懿娟.实用排卵指标的探索.生殖与避孕 1981；1(4)：34
[3] 杨振修.唾液尿液N—乙酰—β—D氨基葡萄糖甘活性变化的测定方法.上海医学 1983；6(4)：143
[4] WHO.Temporal relationships between ovulation and defined changes in the concentration of plasma estradiol-17β,luteinizing hormone,follicle-stimulating hormone,and progesterone.Am J Obstet Gynecol,1980；138(4):383
(收稿日期 1998—12—30 修回日期 1999—03—04), 百拇医药
单位：张 丽(辽宁省计划生育科研院 沈阳 110031)
关键词：唾液；N—乙酰—β—D氨基葡萄糖甘酶；排卵；中医学
摘 要 目的 研究64例月经周期正常妇女的N 摘 要 目的 研究64例月经周期正常妇女的N—乙酰—β—D氨基葡萄糖甘酶(NAG酶)与排卵关系。方法 使用对硝基苯—N—乙酰—β—D氨基葡萄糖甘作底物与唾液中的NAG酶进行酶促反应，然后比色。并以尿样LH(黄体生成素)作为对照观察周期性变化。结果 在排卵前1d～4d和月经前NAG酶活性上升，第一个峰通常在下次月经前13d～16d之间。准确率92%与尿样LH对照符合率95%。结论 NAG酶可作为预测排卵的指标和人工授精时间选择。
中图分类号 R223
肾主生殖是中医基础理论之一。唾为肾液，唾液与生殖功能是否有联系，通过对64例受试者唾液NAG酶的观察，探讨唾液中与生殖有关物质的客观指标与变化规律。
, 百拇医药
临床资料
1 受试者选择
25岁～35岁健康育龄妇女共64例，无传染病及慢性病、月经周期正常。
2 唾液标本采集、运样及保存
受试者起床后，经清水嗽口涎滴法取唾液1.0 ml左右，于无菌容器内，4℃冰箱内暂存，即时送检。整个月经周期逐日采取，逐日测定。
试剂及测定方法
1 枸橼酸缓冲液(0.05M，PH4.6)
称取枸橼酸5.4g，枸橼酸三钠10g，蒸馏水溶解后稀释到1000ml。
对硝基苯N—乙酰—β—D氨基葡萄糖甘(NAG酶底物)溶液(0.01M) 称取对硝基苯N—乙酸—β—D氨基葡萄糖甘342.3 mg，用上述缓冲液稀释到100 mL混匀，4℃冰箱保存。
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硼酸缓冲液(0.05 M，PH9.8) 称取四硼钠4.77g，适量蒸馏水溶解后加0.2N NaoH170 ml，再用蒸馏水稀释到1000 ml。
对硝基酚标准液(3.0 mm/L) 精确称取对硝基酚41.7 mg，4℃冰箱保存备用[1]。
2 测定法
按表1的顺序及量加入样品及试剂，反应后用751分光光度计(波长400)测定光密度值，从曲线上查取NAG酶对应酶单位(1u表示唾液37℃时与底物反应1 min水解产生对硝基酚1 mm以u/L表示)。
3 标准曲线绘制
按表2加液后将各管混匀，吸出0.1ml加于另一组洁净管内，加PH4.6缓冲液1.0 ml，再加PH9.8缓冲液4.0ml，混匀与比色测定如前，将光密度值与对应酶单位作图备用。
, 百拇医药
表1 唾液NAG酶测定操作表
加入物
测定管
空白管(ml)
唾液
0.1 37℃水溶平衡3 min
0.1
预温底物
0.1 37℃继续保温15分钟
PH9.8缓冲液
4.0
4.0
, http://www.100md.com
预湿底物
1.0
表2 唾液NAG酶标准曲线绘制加样表
管 号
0
1
2
3
4
5
对硝基酚标准液
0
1.0
, 百拇医药
2.0
3.0
4.0
5.0
蒸馏水
5.0
4.0
3.0
2.0
1.0
0
相当于酶单位数
0
, 百拇医药
40
80
120
160
200
4 LH对照检查
为确定月经中期NAG酶上升是否表明真正排卵，受试者从月经第10天起测定尿中LH水平作为对照，使用的检验盒由中国协和医大提供。
结果
1 全部受试者NAG酶活性有59例均在排卵前和月经前出现高峰。排卵前出现的高峰通常在下次月经前13天～16天之间。包括2例月经分别为45天和48天，酶峰值出现在月经前15天，也为排卵日前，且随月经周期的变化而变化。1例酶活性变化不规则，1例受试中途出现意外妊娠，3例未见酶峰值出现，LH显阴性，准确率达92%。
, 百拇医药
2 上述受试者NAG酶活力的基础值在20u/L～50u/L，峰值在60u/L～165u/L活性明显高于基础值，差异非常显著P<0.01。最高酶单位165u/L，最低酶单位为23.4u/L。
3 NAG酶个体差异较大，但在月经周期具有相同的变化趋势，均表现为中期NAG酶活性增高。
4 以尿LH作对照观察，酶活性峰大多出现在LH起始峰前或后24h内，个别在LH峰前48h内，符合率95%。
讨论
《素问.宣明五气》篇：“五脏化液……肾为唾”。中医认为肾主生殖，其液在唾，NAG酶即是反应唾与生殖关系的客观指标之一。其变化规律与人体内分泌水平相呼应，采取唾液标本即可预测排卵。本研究为肾与唾在生殖生理方面的内在联系提供了实验依据。
, 百拇医药 唾液NAG酶在月经周期中的特异性与女性排卵的关系虽已有注意，但正常月经妇女的平均水平未见有详细报道。本研究报告59例受试者全月测试结果：25岁～35岁组非排卵期平均水平为35u/L；排卵期峰值的平均水平为112.5u/L。受试者于排卵前1天～4天有明显的NAG酶活性峰，这项研究可用于探讨预测排卵和人工授精技术的时间选择[2]。未受孕者多于月经前有一活性峰，怀孕者此峰消失，可为早孕诊断提供一个新的诊断方法[3]。LH测定被认为是最准确的预测排卵指标[4]。尿LH对照观察，显示LH峰和NAG酶活性峰之间有显著的相关性。符合率95%。NAG酶峰值均出现在LH峰前1天～2天。个别受试者全周期NAG未出现峰值，LH同样显阴性，二者相一致。考虑有当月不排卵的可能。唾液酶测定已逐渐取代血液和尿样，被用作监测体液激素水平的非侵入性方法。唾液中酶的含量与血清和尿液中的含量有显著的相关性。唾液标本收集简便、快速，无创伤刺激可多次采样，易为患者接受。如能将酶的比色测定简化为试纸测定，可使排卵预测成为家庭自检，无疑是一种既简便经济、准确，又易为广大妇女所接受的新的自然计划生育方法。
, 百拇医药
* 本项目为国家计划生育委员会科研基金(课题合同号92—F—45)资助项目。
作者简介：张丽，女，42岁，辽宁省计划生育科研院主治医师。研究方向：妇产科及计划生育。
参考文献
[1] 李安域，郭英华.妇女唾液尿液N—乙酰—β—D氨基葡萄糖甘酶活性变化的测定分析.山东医药 1981；(7)：19
[2] 吕懿娟.实用排卵指标的探索.生殖与避孕 1981；1(4)：34
[3] 杨振修.唾液尿液N—乙酰—β—D氨基葡萄糖甘活性变化的测定方法.上海医学 1983；6(4)：143
[4] WHO.Temporal relationships between ovulation and defined changes in the concentration of plasma estradiol-17β,luteinizing hormone,follicle-stimulating hormone,and progesterone.Am J Obstet Gynecol,1980；138(4):383
(收稿日期 1998—12—30 修回日期 1999—03—04), 百拇医药