肥大细胞在肾移植超急排斥过程中的作用
作者：刘亚革 曹建平 向 军 孟璐露 姜志明 唐谊海
单位：刘亚革 曹建平 孟璐露 姜志明 沈阳军区总医院医学实验科(沈阳，110015)；向 军 泌尿外科；唐谊海 病理科
关键词：超急排斥；肥大细胞；免疫组化
目前认为器官移植的超急性排斥反应
目前认为器官移植的超急性排斥反应(简称超急排斥)，是由于受体内存在有抗供体组织细胞的预成抗体，检测这些抗体的方法为淋巴细胞毒实验。临床上常常发现淋巴细胞毒实验为阴性而术中依然发生超急排斥。是否超急排斥的机制涉及除此之外的其它因素?已有文献报道肥大细胞参与了心肺移植的急慢性排斥反应[1，2]，为了探讨肥大细胞是否在超急排斥反应中起作用，我们对10例因发生超急排斥而行肾切除的标本进行了肥大细胞分析。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 标本 来自本院泌尿外科1990～1997年住院肾移植患者。共10例，男6人，女4人，年龄25～52岁。术中血管吻合开放后发生移植肾张力增加，质地变硬，逐渐变成花斑状，呈暗紫色，出现无尿，诊断为超急排斥，切除移植肾。肾病理改变特征为：肾小球毛细血管扩张充血，或血管腔内淤血，肾小球肿胀。肾小管上皮变性，部分管壁有纤维素样物质渗出，管腔内见各种血细胞，间质淋巴细胞，炎性细胞浸润。超排肾的标本取自保存的石蜡包块，5例正常对照肾标本来自外伤个体。
1.2 免疫组化染色 试剂为抗人Tryptase mAb-biotin(购自美国Promega公司)，avidin-HRP(购自军科院微生物流行病研究所)，DAB(sigma)显色，甲苯胺兰复染。
细胞计数：选择组化染色阳性细胞相对密集区计数5～10个高倍视野(×40HPF)的细胞数并求其平均数(个/HPE)。
, 百拇医药
2 结 果
免疫组化染色的阳性细胞，细胞浆呈棕色，甲苯胺兰染色的阳性细胞，胞浆为深蓝色或紫红色。位于肾实质内的阳性细胞从着色特点看可以分为二种，一种为双重染色均阳性的细胞，一种为仅甲苯胺兰染色阳性细胞，在瘀血部位的阳性细胞具有双重着色特征(有的细胞破碎)。在10例标本中，6例肾被膜内或皮质区可见阳性细胞，2例阳性细胞主要集中于被膜下瘀血部位。有1例在血管内见到较多的棕色颗粒，只有1例偶见着色的阳性细胞。10例的染色阳性细胞数及分布见附表。5例正常肾组织中阳性着色细胞少见。
附表 10例超急排斥肾免疫组化染色结果
病例
性别
年龄
Tryptase阳性细胞/HPF
, 百拇医药
分布
1
男
33
36.10±5.98
被膜内
2
女
38
30.60±4.55
被膜内
3
男
, 百拇医药
40
57.40±11.06
皮质区
4
男
31
较多(嗜碱细胞?)
被膜下瘀血处
5
女
43
-
-
, 百拇医药
6
男
43
10.90±3.98
皮质区被膜内
7
女
2
较多(嗜碱细胞?)
被膜下瘀血处
8
男
39
, 百拇医药
-
血管内较多棕色颗粒
9
男
25
5.50±2.27
皮质区
10
女
40
31.20±8.16
皮质区
3 讨 论
, 百拇医药
一般认为超急排斥的发生是由于受体内业已存在的抗体与供体组织细胞，血管内皮细胞结合后激活补体所产生的一系列免疫反应及化学反应所致。目前预防发生超急排斥的方法是通过淋巴细胞毒实验检查受体内预成抗体的水平。如前所述，有时尽管淋巴细胞毒实验为阴性，仍不可避免发生超急排斥。近年有研究证明，肥大细胞作为抗原呈递细胞除了参加速发型变态反应外，亦因其可合成许多类型的细胞因子而参与许多免疫性疾病[3]，包括某些器官移植的急慢性排斥反应。为此，我们对超急排斥肾用Tryptase单抗进行了免疫组化染色。目的是想了解肥大细胞在超急排斥肾中是否有异常变化。实验结果如附表所示，在8例中见到Tryptase染色阳性细胞，其中6例数量较多。而令人感兴趣的是发现这些细胞除了分布于肾被膜下及皮质区外，有2例标本(例4与7)的着色细胞主要集中于被膜下瘀血处。已知肥大细胞在循环血中含量极少，且表现为不成熟型。因此设想，出血部位的阳性细胞是否是嗜碱细胞?如果是嗜碱细胞，则表明肥大细胞与嗜碱细胞都具有合成分泌Tryptase的功能，并且可能都在超急排斥反应中发挥了重要作用。有1例(例8)虽未见到可确认的肥大细胞，但在血管内见到大量阳性颗粒，这是否是肥大细胞脱颗粒的结果还有待于研究。正常肾标本中较少见到肥大细胞。
, http://www.100md.com
免疫组化染色，甲苯胺兰复染后在肾组织中可以见到两种类型的肥大细胞。一种与Tryptase单抗起反应，甲苯胺兰染色亦着色；另一种只对甲苯胺兰起作用。因此提示在超急排斥肾中亦可能存在不同种类，承担不同功能的肥大细胞。
参考文献
1 Goldstein P，Ojcius DM，Young J D- E.Cell death mechanisms and the immune system.Immunol Rev，1991，121：29
2 Cohen JJ，Duke RC.Apoptosis and program med cell death in immunity.Annu Rev Immu nol，1992，10：267
3 Kohno T，Yamada Y，Hata T et al.Relati on of oxidative stress and glutathione s ynthesis to CD95 (Fas/APO-1)-mediated ap optosis of adult T cell leukemia.J Immun ol，1996，156：4722
, 百拇医药
4 Ma DC，Sun YH，Chang KZ.Selective induct i on of apoptosis of NB4 cells from G2+M p hase by sodium arsenite at lower doses.E ur J Hematol，1998，61：27
5 Winfineld JB，Shaw M，Yamada A et al.S ubset specificity of antilymphocyte anti bodyies lupus erythematisus Ⅱ preferenti al reactivity with T4+ cell.Arthritis R heum，1987，30：162
6 Miyawaki T，Uehara T，Nibu R et al.Dif ferntial expression of apoptosis-related Fas antigen on lymphocyte subpopulation s in human peripheral blood.J Immunol，199 2，149：3753
, http://www.100md.com
7 Mysler E，Bini P，Drappa J et al.The a poptsis-1/Fas protein in human systemic lupus erythematosus.J Clin Invest，1994，9 3：1029
8 Amasaki Y，Kobayashi S，Takeda T et al. Up-regulation expression of Fas antigen (CD95)by peripheral naive and memory T cell subsets in patients with systemiclu pus erythematosus(SLE)：a possible mechan ism for lymphopenia.Clin Exp Immunol，1995，99：245
(1999-08-16收稿，1999-09-20修回), 百拇医药
单位：刘亚革 曹建平 孟璐露 姜志明 沈阳军区总医院医学实验科(沈阳，110015)；向 军 泌尿外科；唐谊海 病理科
关键词：超急排斥；肥大细胞；免疫组化
目前认为器官移植的超急性排斥反应
目前认为器官移植的超急性排斥反应(简称超急排斥)，是由于受体内存在有抗供体组织细胞的预成抗体，检测这些抗体的方法为淋巴细胞毒实验。临床上常常发现淋巴细胞毒实验为阴性而术中依然发生超急排斥。是否超急排斥的机制涉及除此之外的其它因素?已有文献报道肥大细胞参与了心肺移植的急慢性排斥反应[1，2]，为了探讨肥大细胞是否在超急排斥反应中起作用，我们对10例因发生超急排斥而行肾切除的标本进行了肥大细胞分析。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 标本 来自本院泌尿外科1990～1997年住院肾移植患者。共10例，男6人，女4人，年龄25～52岁。术中血管吻合开放后发生移植肾张力增加，质地变硬，逐渐变成花斑状，呈暗紫色，出现无尿，诊断为超急排斥，切除移植肾。肾病理改变特征为：肾小球毛细血管扩张充血，或血管腔内淤血，肾小球肿胀。肾小管上皮变性，部分管壁有纤维素样物质渗出，管腔内见各种血细胞，间质淋巴细胞，炎性细胞浸润。超排肾的标本取自保存的石蜡包块，5例正常对照肾标本来自外伤个体。
1.2 免疫组化染色 试剂为抗人Tryptase mAb-biotin(购自美国Promega公司)，avidin-HRP(购自军科院微生物流行病研究所)，DAB(sigma)显色，甲苯胺兰复染。
细胞计数：选择组化染色阳性细胞相对密集区计数5～10个高倍视野(×40HPF)的细胞数并求其平均数(个/HPE)。
, 百拇医药
2 结 果
免疫组化染色的阳性细胞，细胞浆呈棕色，甲苯胺兰染色的阳性细胞，胞浆为深蓝色或紫红色。位于肾实质内的阳性细胞从着色特点看可以分为二种，一种为双重染色均阳性的细胞，一种为仅甲苯胺兰染色阳性细胞，在瘀血部位的阳性细胞具有双重着色特征(有的细胞破碎)。在10例标本中，6例肾被膜内或皮质区可见阳性细胞，2例阳性细胞主要集中于被膜下瘀血部位。有1例在血管内见到较多的棕色颗粒，只有1例偶见着色的阳性细胞。10例的染色阳性细胞数及分布见附表。5例正常肾组织中阳性着色细胞少见。
附表 10例超急排斥肾免疫组化染色结果
病例
性别
年龄
Tryptase阳性细胞/HPF
, 百拇医药
分布
1
男
33
36.10±5.98
被膜内
2
女
38
30.60±4.55
被膜内
3
男
, 百拇医药
40
57.40±11.06
皮质区
4
男
31
较多(嗜碱细胞?)
被膜下瘀血处
5
女
43
-
-
, 百拇医药
6
男
43
10.90±3.98
皮质区被膜内
7
女
2
较多(嗜碱细胞?)
被膜下瘀血处
8
男
39
, 百拇医药
-
血管内较多棕色颗粒
9
男
25
5.50±2.27
皮质区
10
女
40
31.20±8.16
皮质区
3 讨 论
, 百拇医药
一般认为超急排斥的发生是由于受体内业已存在的抗体与供体组织细胞，血管内皮细胞结合后激活补体所产生的一系列免疫反应及化学反应所致。目前预防发生超急排斥的方法是通过淋巴细胞毒实验检查受体内预成抗体的水平。如前所述，有时尽管淋巴细胞毒实验为阴性，仍不可避免发生超急排斥。近年有研究证明，肥大细胞作为抗原呈递细胞除了参加速发型变态反应外，亦因其可合成许多类型的细胞因子而参与许多免疫性疾病[3]，包括某些器官移植的急慢性排斥反应。为此，我们对超急排斥肾用Tryptase单抗进行了免疫组化染色。目的是想了解肥大细胞在超急排斥肾中是否有异常变化。实验结果如附表所示，在8例中见到Tryptase染色阳性细胞，其中6例数量较多。而令人感兴趣的是发现这些细胞除了分布于肾被膜下及皮质区外，有2例标本(例4与7)的着色细胞主要集中于被膜下瘀血处。已知肥大细胞在循环血中含量极少，且表现为不成熟型。因此设想，出血部位的阳性细胞是否是嗜碱细胞?如果是嗜碱细胞，则表明肥大细胞与嗜碱细胞都具有合成分泌Tryptase的功能，并且可能都在超急排斥反应中发挥了重要作用。有1例(例8)虽未见到可确认的肥大细胞，但在血管内见到大量阳性颗粒，这是否是肥大细胞脱颗粒的结果还有待于研究。正常肾标本中较少见到肥大细胞。
, http://www.100md.com
免疫组化染色，甲苯胺兰复染后在肾组织中可以见到两种类型的肥大细胞。一种与Tryptase单抗起反应，甲苯胺兰染色亦着色；另一种只对甲苯胺兰起作用。因此提示在超急排斥肾中亦可能存在不同种类，承担不同功能的肥大细胞。
参考文献
1 Goldstein P，Ojcius DM，Young J D- E.Cell death mechanisms and the immune system.Immunol Rev，1991，121：29
2 Cohen JJ，Duke RC.Apoptosis and program med cell death in immunity.Annu Rev Immu nol，1992，10：267
3 Kohno T，Yamada Y，Hata T et al.Relati on of oxidative stress and glutathione s ynthesis to CD95 (Fas/APO-1)-mediated ap optosis of adult T cell leukemia.J Immun ol，1996，156：4722
, 百拇医药
4 Ma DC，Sun YH，Chang KZ.Selective induct i on of apoptosis of NB4 cells from G2+M p hase by sodium arsenite at lower doses.E ur J Hematol，1998，61：27
5 Winfineld JB，Shaw M，Yamada A et al.S ubset specificity of antilymphocyte anti bodyies lupus erythematisus Ⅱ preferenti al reactivity with T4+ cell.Arthritis R heum，1987，30：162
6 Miyawaki T，Uehara T，Nibu R et al.Dif ferntial expression of apoptosis-related Fas antigen on lymphocyte subpopulation s in human peripheral blood.J Immunol，199 2，149：3753
, http://www.100md.com
7 Mysler E，Bini P，Drappa J et al.The a poptsis-1/Fas protein in human systemic lupus erythematosus.J Clin Invest，1994，9 3：1029
8 Amasaki Y，Kobayashi S，Takeda T et al. Up-regulation expression of Fas antigen (CD95)by peripheral naive and memory T cell subsets in patients with systemiclu pus erythematosus(SLE)：a possible mechan ism for lymphopenia.Clin Exp Immunol，1995，99：245
(1999-08-16收稿，1999-09-20修回), 百拇医药