沙棘种子油中不皂化物的分离与分析
作者：李玉珑 赵立虹 李和
单位：李玉珑 赵立虹 上海医科大学临床医学系(200032)；李和 北京师范大学化学系
关键词：沙棘；不皂化物；甾醇；三萜醇
990606 摘 要 采用制备型高效液相色谱法，将沙棘种子油不皂化物分离为甾醇、4-甲基甾醇、三萜醇和烃类。采用气相色谱法分析测定甾醇、4-甲基甾醇、三萜醇中各组分的含量。
沙棘 Hippophae rhamnoides L. 开发研究在我国已有十多年历史。沙棘在生态环境治理、医药、食品等方面的开发应用已获得许多成果和效益[1，2]，关于沙棘的化学成分也有不少报道[3，4]，但有关不皂化物的报道甚少，本文采用制备型高效液相色谱法分离沙棘种子油不皂化物为甾醇、4-甲基甾醇、三萜醇、烃类 4 个主要部分，并计算各部分的含量。然后采用气相色谱法对各部分中所含组分进行分析。
, 百拇医药
1 实验部分
1.1 材料与标准样品：沙棘种子由山西省中阳县白名臣同志提供。各种甾醇、4-甲基甾醇、三萜醇的标准样品均由实验室提供，其纯度在 99.5% 以上[5]。
1.2 种子油的提取与皂化：沙棘种子经粉碎后，用大型油脂提取器以乙醚为溶剂提取，提取液经旋转蒸发器除去乙醚得沙棘种子油。
油的皂化采用氢氧化钾的乙醇溶液法。9 g 氢氧化钾溶于 100 mL 乙醇(95%)，可皂化油 30 g。皂化完全后，将皂化液用蒸馏水稀释两倍，用乙醚提取不皂化物 5～6 次，合并醚提取液，用蒸馏水洗 1 次，再用 5% 氢氧化钾水溶液洗 1 次，然后用蒸馏水洗 2～3 次至洗涤液呈中性。醚液用无水硫酸钠干燥，除去乙醚后得不皂化物。
1.3 不皂化物的 HPLC 分离：采用制备型高效液相色谱法分离沙棘种子油不皂化物[6]，分离条件见表1，样品溶剂为乙醚，进样量每次 0.5 g 不皂化物。
, 百拇医药
表1 制备 HPLC 分离条件 仪器
沃特斯 PrepLC500A 型高效液相色谱仪
加压腔压力
3 242.4 kPa
固定相
硅胶
流动相
体系
石油醚-乙酸乙酯(9∶1)
流速
50 mL/min
检测器
, 百拇医药
示差折射检测器(相对响应5)
纸速
2 mm/min
1.4 气相色谱分析：采用气相色谱法分析测定甾醇、4-甲基甾醇和三萜醇中各组分的含量，分析条件见表2。表2 气相色谱分析条件 仪器
岛津 GC-9A 气相色谱仪
色谱柱
玻璃柱长 1.5 m、内径 2 mm
担体
Chromosorb WAW DMCS 80～100 目
固定液
, 百拇医药
OV-17 1.5%
载气
N2 40 mL/min
气化室温度
280℃
柱温
250℃
燃气
H2 50 mL/min 686.07 Pa
助燃气
空气 500 mL/min 686.07 Pa
, http://www.100md.com
FID 温度
280℃
纸速
1 cm/min
2 结果与讨论
2.1 沙棘种子油不皂化的组成：沙棘种子油中不皂化物的含量为 2.1%。
经硅胶薄层层析分析，在展开剂为石油醚-乙醚(7∶3)时，沙棘种子油的不皂化物展开后可显示 6 个斑点(见图1)。经与 β-香树精、柠檬二烯醇、β-谷甾醇等标准样品对照可以确定斑点 A、C、D 分别为甾醇类、4-甲基甾醇类和三萜醇类。
展开剂：石油醚-乙醚 7∶3
, http://www.100md.com
样品：1-β-香树精
2-沙棘油不皂化物
3-柠檬二烯醇
4-β-谷甾醇
图1 沙棘种子油不皂化物的硅胶薄层分析
经制备型 HPLC 分离，得到的各部分样品分段收集，除去溶剂后，用质量归一法计算各部分含量(见表3)。
表3 沙棘种子油不皂化物的组成 编号
A
B
C
D
, http://www.100md.com
E
F
分类
甾醇
未知
4-甲基甾醇
三萜醇
未知
烃
RRF*
0.63
0.72
0.82
, 百拇医药
1.00
1.16
2.18
含量%
53.6
微**
16.9
16.9
微
12.5
* RF 为硅胶板上相对 Rf 值，从 β-香树精标准样品的 Rf 值为 1.00 计，展开剂石油醚-乙醚(7∶3)
, 百拇医药
** 微——表示含量在 0.1% 以下
2.2 甾醇部分的组成：甾醇是沙棘种子油不皂化物的主要成分，含量占不皂化物的一半以上。在甾醇中，以 △5-甾醇为主。其中 β-谷甾醇含量最高。几种 △7-甾醇的含量很少。
表4 甾醇部分的气相色谱分析 名称
t′R(min)
RRT**
含量(%)
菜油甾醇
7.3
, 百拇医药 0.82
3.7
豆甾醇
8.1
0.91
1.5
β-谷甾醇
8.9
1.00
74.5
α-菠菜甾醇
9.2
1.03
, 百拇医药
微***
△5-燕麦甾醇
10.0
1.12
19.6
△7-豆甾烯醇
10.5
1.18
0.3
△7-燕麦甾醇
11.6
1.30
, 百拇医药
微
* t′R——校正保留时间 to=0.2 min)
** RRT——相对保留时间，以 β-谷甾醇标准样品的 t′R 值为 1.00 计
*** 微——表示含量在 0.1% 以下
2.3 4-甲基甾醇的组成：在沙棘种子油的不皂化物中，4-甲基甾醇的含量较高，在植物油中是少有的。其主要成分为钝叶大戟甾醇，环桉烯醇、芦竹甾醇和柠檬二烯醇，这4种化合物均为常见的几种 4-甲基甾醇。详细结果见表5。
表5 4-甲基甾醇部分的气相色谱分析 名称
t′R*(min)
, 百拇医药
RRT**
含量(%)
钝叶大戟甾醇
8.6
0.93
19.5
环桉烯醇
10.2
1.10
24.4
芦竹甾醇
10.2
1.10
, http://www.100md.com
未知
11.7
1.26
11.1
柠檬二烯醇
13.7
1.47
41.0
* t′R——校正保留时间(to=0.2 min)
** RRT——相对保留时间，以 β-谷甾醇标准样品的 t′R 值为 1.00 计
, 百拇医药
2.4 三萜醇的组成：在三萜醇类中，为以含环丙烷基的环阿屯烷醇类四环三萜醇为主。详细结果见表6。
表6 三萜醇的气相色谱分析 名称
t′R*
RRT**
含量(%)
环阿屯烷醇
9.1
1.02
0.1
环阿屯醇
10.9
, 百拇医药
1.22
20.5
24-亚甲基环阿屯烷醇
12.2
1.37
24.0
未知
13.9
1.56
9.7
24-甲基环阿屯醇
14.9
1.67
, 百拇医药
37.1
*t′R——校正保留时间(to=0.2 min)
**RRT——相对保留时间，以 β-谷甾醇标准样品的t′R 值为 1.00 计
2.5 其它：沙棘种子油的不皂化物为橙红色固体。在沙棘种子油不皂化物中，未发现有不可食用的化合物存在。
致谢：北京师范大学化学系李佩文副教授为本文提出有益的建议。
参 考 文 献
1 王 莹.中国油脂，1996，21(4)：43
2 徐铭渔.沙棘，1994，7(1)：32
3 忻耀年，等.沙棘，1996，9(1)：32
4 忻耀年，等.中国油脂，1995，9(1)：32
5 严梅和，等.北京师范大学学报(自然科学版)，1985，6(1)：53
6 李 和.中国油脂，1997，22(6)：48
(1998-04-27 收稿), http://www.100md.com
单位：李玉珑 赵立虹 上海医科大学临床医学系(200032)；李和 北京师范大学化学系
关键词：沙棘；不皂化物；甾醇；三萜醇
990606 摘 要 采用制备型高效液相色谱法，将沙棘种子油不皂化物分离为甾醇、4-甲基甾醇、三萜醇和烃类。采用气相色谱法分析测定甾醇、4-甲基甾醇、三萜醇中各组分的含量。
沙棘 Hippophae rhamnoides L. 开发研究在我国已有十多年历史。沙棘在生态环境治理、医药、食品等方面的开发应用已获得许多成果和效益[1，2]，关于沙棘的化学成分也有不少报道[3，4]，但有关不皂化物的报道甚少，本文采用制备型高效液相色谱法分离沙棘种子油不皂化物为甾醇、4-甲基甾醇、三萜醇、烃类 4 个主要部分，并计算各部分的含量。然后采用气相色谱法对各部分中所含组分进行分析。
, 百拇医药
1 实验部分
1.1 材料与标准样品：沙棘种子由山西省中阳县白名臣同志提供。各种甾醇、4-甲基甾醇、三萜醇的标准样品均由实验室提供，其纯度在 99.5% 以上[5]。
1.2 种子油的提取与皂化：沙棘种子经粉碎后，用大型油脂提取器以乙醚为溶剂提取，提取液经旋转蒸发器除去乙醚得沙棘种子油。
油的皂化采用氢氧化钾的乙醇溶液法。9 g 氢氧化钾溶于 100 mL 乙醇(95%)，可皂化油 30 g。皂化完全后，将皂化液用蒸馏水稀释两倍，用乙醚提取不皂化物 5～6 次，合并醚提取液，用蒸馏水洗 1 次，再用 5% 氢氧化钾水溶液洗 1 次，然后用蒸馏水洗 2～3 次至洗涤液呈中性。醚液用无水硫酸钠干燥，除去乙醚后得不皂化物。
1.3 不皂化物的 HPLC 分离：采用制备型高效液相色谱法分离沙棘种子油不皂化物[6]，分离条件见表1，样品溶剂为乙醚，进样量每次 0.5 g 不皂化物。
, 百拇医药
表1 制备 HPLC 分离条件 仪器
沃特斯 PrepLC500A 型高效液相色谱仪
加压腔压力
3 242.4 kPa
固定相
硅胶
流动相
体系
石油醚-乙酸乙酯(9∶1)
流速
50 mL/min
检测器
, 百拇医药
示差折射检测器(相对响应5)
纸速
2 mm/min
1.4 气相色谱分析：采用气相色谱法分析测定甾醇、4-甲基甾醇和三萜醇中各组分的含量，分析条件见表2。表2 气相色谱分析条件 仪器
岛津 GC-9A 气相色谱仪
色谱柱
玻璃柱长 1.5 m、内径 2 mm
担体
Chromosorb WAW DMCS 80～100 目
固定液
, 百拇医药
OV-17 1.5%
载气
N2 40 mL/min
气化室温度
280℃
柱温
250℃
燃气
H2 50 mL/min 686.07 Pa
助燃气
空气 500 mL/min 686.07 Pa
, http://www.100md.com
FID 温度
280℃
纸速
1 cm/min
2 结果与讨论
2.1 沙棘种子油不皂化的组成：沙棘种子油中不皂化物的含量为 2.1%。
经硅胶薄层层析分析，在展开剂为石油醚-乙醚(7∶3)时，沙棘种子油的不皂化物展开后可显示 6 个斑点(见图1)。经与 β-香树精、柠檬二烯醇、β-谷甾醇等标准样品对照可以确定斑点 A、C、D 分别为甾醇类、4-甲基甾醇类和三萜醇类。
展开剂：石油醚-乙醚 7∶3
, http://www.100md.com
样品：1-β-香树精
2-沙棘油不皂化物
3-柠檬二烯醇
4-β-谷甾醇
图1 沙棘种子油不皂化物的硅胶薄层分析
经制备型 HPLC 分离，得到的各部分样品分段收集，除去溶剂后，用质量归一法计算各部分含量(见表3)。
表3 沙棘种子油不皂化物的组成 编号
A
B
C
D
, http://www.100md.com
E
F
分类
甾醇
未知
4-甲基甾醇
三萜醇
未知
烃
RRF*
0.63
0.72
0.82
, 百拇医药
1.00
1.16
2.18
含量%
53.6
微**
16.9
16.9
微
12.5
* RF 为硅胶板上相对 Rf 值，从 β-香树精标准样品的 Rf 值为 1.00 计，展开剂石油醚-乙醚(7∶3)
, 百拇医药
** 微——表示含量在 0.1% 以下
2.2 甾醇部分的组成：甾醇是沙棘种子油不皂化物的主要成分，含量占不皂化物的一半以上。在甾醇中，以 △5-甾醇为主。其中 β-谷甾醇含量最高。几种 △7-甾醇的含量很少。
表4 甾醇部分的气相色谱分析 名称
t′R(min)
RRT**
含量(%)
菜油甾醇
7.3
, 百拇医药 0.82
3.7
豆甾醇
8.1
0.91
1.5
β-谷甾醇
8.9
1.00
74.5
α-菠菜甾醇
9.2
1.03
, 百拇医药
微***
△5-燕麦甾醇
10.0
1.12
19.6
△7-豆甾烯醇
10.5
1.18
0.3
△7-燕麦甾醇
11.6
1.30
, 百拇医药
微
* t′R——校正保留时间 to=0.2 min)
** RRT——相对保留时间，以 β-谷甾醇标准样品的 t′R 值为 1.00 计
*** 微——表示含量在 0.1% 以下
2.3 4-甲基甾醇的组成：在沙棘种子油的不皂化物中，4-甲基甾醇的含量较高，在植物油中是少有的。其主要成分为钝叶大戟甾醇，环桉烯醇、芦竹甾醇和柠檬二烯醇，这4种化合物均为常见的几种 4-甲基甾醇。详细结果见表5。
表5 4-甲基甾醇部分的气相色谱分析 名称
t′R*(min)
, 百拇医药
RRT**
含量(%)
钝叶大戟甾醇
8.6
0.93
19.5
环桉烯醇
10.2
1.10
24.4
芦竹甾醇
10.2
1.10
, http://www.100md.com
未知
11.7
1.26
11.1
柠檬二烯醇
13.7
1.47
41.0
* t′R——校正保留时间(to=0.2 min)
** RRT——相对保留时间，以 β-谷甾醇标准样品的 t′R 值为 1.00 计
, 百拇医药
2.4 三萜醇的组成：在三萜醇类中，为以含环丙烷基的环阿屯烷醇类四环三萜醇为主。详细结果见表6。
表6 三萜醇的气相色谱分析 名称
t′R*
RRT**
含量(%)
环阿屯烷醇
9.1
1.02
0.1
环阿屯醇
10.9
, 百拇医药
1.22
20.5
24-亚甲基环阿屯烷醇
12.2
1.37
24.0
未知
13.9
1.56
9.7
24-甲基环阿屯醇
14.9
1.67
, 百拇医药
37.1
*t′R——校正保留时间(to=0.2 min)
**RRT——相对保留时间，以 β-谷甾醇标准样品的t′R 值为 1.00 计
2.5 其它：沙棘种子油的不皂化物为橙红色固体。在沙棘种子油不皂化物中，未发现有不可食用的化合物存在。
致谢：北京师范大学化学系李佩文副教授为本文提出有益的建议。
参 考 文 献
1 王 莹.中国油脂，1996，21(4)：43
2 徐铭渔.沙棘，1994，7(1)：32
3 忻耀年，等.沙棘，1996，9(1)：32
4 忻耀年，等.中国油脂，1995，9(1)：32
5 严梅和，等.北京师范大学学报(自然科学版)，1985，6(1)：53
6 李 和.中国油脂，1997，22(6)：48
(1998-04-27 收稿), http://www.100md.com
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